CN109275572A - 一种老鹳草离体培养技术 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种老鹳草离体培养技术，老鹳草主产河北、山东。夏秋二季果实近成熟时采割，晒干。无臭，味淡。具有祛风，活血，清热解毒。用于风湿痹痛，拘挛麻木，痈疽肿毒，跌打损伤。老鹳草通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法，以老鹳草为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了老鹳草离体培养技术体系，为开展老鹳草新品种选育提供新材料。

Description

一种老鹳草离体培养技术

技术领域

本发明涉及植物生物技术中单倍体育种方法，具体地说，涉及一种老鹳草离体培养技术。

背景技术

老鹳草主产河北、山东。夏秋二季果实近成熟时采割，晒干。无臭，味淡。具有祛风，活血，清热解毒。用于风湿痹痛，拘挛麻木，痈疽肿毒，跌打损伤。目前我国广泛栽培的老鹳草主要是通过种子繁殖的，性状分离严重。另外，老鹳草为异花授粉植物，由于长期的异花授粉，导致其基因型混杂。而利用花药离体培养技术可在短时间内获得性状丰富的单倍体或纯合的二倍体植株，从而缩短育种周期，提高选择效率，为进一步开展老鹳草育种工作提供新材料。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种老鹳草离体培养技术，本发明以老鹳草为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了老鹳草离体培养技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种老鹳草离体培养技术，包括以下的步骤：

步骤1，花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体,花蕾采摘后先在6℃条件下进行低温预处理5天后备用；

步骤2，花愈伤组织诱导：将步骤1处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡10min，然后用自来水冲洗30min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒20min，再用无菌水清洗6次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照14小时，光照强度为1800lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成愈伤组织；花诱导培养基为：MS+0.9～1mg/L6-BA+1～5mg/L2,4-D+2.9%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.5;

步骤3，不定芽分化：将步骤2形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导,接种后先在27℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成不定芽；分化培养基为：MS+9mg/L KT+4mg/L NAA+23mg/L AgNO₃+2.9%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.5;

步骤4，生根培养：将步骤3所获得的高度约为2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+2mg/L NAA+3mg/LIBA+4.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.5;

步骤5，炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗9天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法。以老鹳草为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了老鹳草离体培养技术体系，为开展白老鹳草新品种选育提供新材料。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在2℃条件下进行低温预处理2天后备用。

（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡10min，然后用自来水冲洗15min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%乙醇浸泡8s，0.1%升汞溶液消毒8min，再用无菌水清洗3次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照8小时，光照强度为1000lx，培养温度为23℃的条件下培养25天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达58%。所述花药诱导培养基为MS+0.9mg/L6-BA+1mg/L2,4-D+3.5%蔗糖+0.1%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.6。

（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2200lx，培养温度为23℃的条件下培养28天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+2mg/L KT+0.9mg/L NAA+6mg/L AgNO₃+2.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.6。

（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为6cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2100lx，培养温度为24℃的条件下培养42天即可生根，生根率可达88%。所述生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+0.6mg/LIBA+2.8%蔗糖+0.2%琼脂+0.5%活性炭，pH值为5.6。

（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:2:2混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达89%。

实施例2：

（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在5℃条件下进行低温预处理4天后备用。

（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡10min，然后用自来水冲洗10min，擦干表面水分后在超净工作台中以75%乙醇浸泡5s，0.1%升汞溶液消毒10min，再用无菌水清洗4次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照10小时，光照强度为1600lx，培养温度为24℃的条件下培养25天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达63%。所述花药诱导培养基为MS+0.6mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+3.8%蔗糖+0.15%琼脂+0.04%活性炭，pH值为5.7。

（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃的条件下培养26天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+1.6mg/L KT+0.8mg/L NAA+9mg/L AgNO₃+2.8%蔗糖+0.25%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.7。

（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为3cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照111小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养38天即可生根，生根率可过85%。所述生根培养基为1/2MS+0.8mg/L NAA+0.8mg/LIBA+3.0%蔗糖+0.3%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.7。

（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗6天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石＝2:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达90%。

Claims (1)

1.一种老鹳草离体培养技术，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体,花蕾采摘后先在6℃条件下进行低温预处理5天后备用；

步骤2，花愈伤组织诱导：将步骤1处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡10min，然后用自来水冲洗30min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒20min，再用无菌水清洗6次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照14小时，光照强度为1800lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成愈伤组织；花诱导培养基为：MS+0.9～1mg/L6-BA+1～5mg/L2,4-D+2.9%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.5;

步骤3，不定芽分化：将步骤2形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导,接种后先在27℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成不定芽；分化培养基为：MS+9mg/L KT+4mg/L NAA+23mg/L AgNO₃+2.9%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.5;

步骤4，生根培养：将步骤3所获得的高度约为2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+2mg/L NAA+3mg/LIBA+4.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.5;

步骤5，炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗9天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。