CN112772420A - 一种梦香文心兰的组织培养方法 - Google Patents

一种梦香文心兰的组织培养方法 Download PDF

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Abstract

本申请涉及植物组织培养的技术领域，具体公开了一种梦香文心兰的组织培养方法。包括以下步骤：S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于酒精中浸泡，捞出后切取茎尖置于诱导培养基中进行诱导培养，得到原球茎；控制培养温度和湿度，诱导培养期间，使用LED光对茎尖照射；S2、将原球茎转入增殖培养基中培养，得到幼芽；控制培养温度和湿度，增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射；S3、将幼芽转入壮苗培养基中培养，直至文心兰幼芽达到6‑8cm长，得到高芽苗；控制培养温度和湿度，壮苗培养期间，使用LED光对幼苗照射。本申请的方法能够提高对文心兰组培的成功率。

Description

一种梦香文心兰的组织培养方法
技术领域
本申请涉及植物组织培养的技术领域，更具体地说，它涉及一种梦香文心兰的组织培养方法。
背景技术
文心兰属兰科文心兰属，又名瘤唇兰属，全属由原生种400多个。它花小而繁多，颜色艳丽多彩，形态变化多样，花朵连续不断开放，可持续1-3个月，是上等的盆栽观赏和切花材料。
文心兰传统的分株繁殖速度慢，一年仅2-3个芽，繁殖系数低。通过组培技术，可加快繁殖速度，进行工厂化生产。文心兰组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保持其原有的优良性状的基础上，实现文心兰的种质资源保存和转基因研究等。文心兰组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。
常规的文心兰组织培养方法为，选取文心兰基部萌发的嫩芽作为外植体，用70％酒精进行表面消毒，灭菌后用无菌水洗净，切成1-1.5mm厚的茎尖薄片，接种在准备的培养基上，保持温度在24-28℃之间，光照强度500Lux，照射16h，在MS培养基中添加1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤的培养基上，将形成的原球茎继续在增殖培养基中采用固体培养，20多天后原球茎顶端形成芽，在芽基部分分化根。约100天后，分化出的植株长出叶片，成为完整幼苗。
然而常规的文心兰组培方法，对文心兰进行组培的成功率不高，难以大规模加快文心兰的繁育速度。
发明内容
为了提高对文心兰组培的成功率，本申请提供一种梦香文心兰的组织培养方法及培养基。
本申请提供一种梦香文心兰的组织培养方法，采用如下的技术方案：
一种梦香文心兰的组织培养方法，包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比70-75％的酒精中浸泡30-40秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖置于诱导培养基中进行诱导培养25-27天，得到原球茎；控制培养温度25-27℃，湿度70-75％，诱导培养期间，使用LED光对茎尖照射，照射时长10-12小时/天；
S2、将原球茎转入增殖培养基中培养28-30天，得到幼芽；控制培养温度25-27℃，湿度75-80％，增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射，照射时长14-16小时/天；
S3、将幼芽转入壮苗培养基中培养，直至文心兰幼芽达到6-8cm长，得到高芽苗；控制培养温度24-26℃，湿度70-75％，壮苗培养期间，使用LED光对幼苗照射，照射时长14-16小时/天。
通过采用上述技术方案，在S1中，将从幼芽上切除的顶芽置于酒精中，以对顶芽进行消毒，减少顶芽携带的细菌等杂质对后续培养造成影响，消毒后切取顶芽上的芽尖进行诱导培养，从而对其进行诱导培养，在诱导培养期间，使用LED光对茎尖进行照射，促进茎尖的培养；在S2中，将S1对茎尖诱导培养出的原球茎转移至增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养，在增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射，促进原球茎的增殖分化得到幼芽；在S3中，将幼芽转接入壮苗培养基中，使得幼苗在壮苗培养基中生长，直至得到高芽苗，在幼苗的生长期间，使用LED光对幼苗进行照射，促进幼苗的生长。
优选的，所述S1中，诱导培养期间，LED光为波长范围625-630nm的红光，且所述红光的光照强度为1400lx。
优选的，所述S2中，增殖培养期间，LED光为波长范围460-470nm的蓝光，且所述蓝光的光照强度为1400lx。
优选的，所述S3中，壮苗培养期间，LED光为红光和蓝光的混合光，且所述红光的波长为625-630nm，蓝光的波长为450-460nm。
优选的，所述S1中，在体积比70-75％的酒精中加入1mol/L的次氯酸钠溶液，且所述酒精和次氯酸钠的体积比为10：(1-2)。
通过采用上述技术方案，在酒精中加入次氯酸钠，提高对顶芽的消毒杀菌能力。
优选的，所述诱导培养基中包含MS、4.3-5.1mg/L的6-BA、0.1-1mg/L的NAA和50-60mg/L的次氯酸钠。
通过采用上述技术方案，次氯酸钠加入诱导培养基中，能够对诱导培养基起到抑菌作用，从而提高幼芽的诱导率。
优选的，所述增殖培养基中包含MS、1.3-3.1mg/L的6-BA、0.7-1.2mg/L的NAA和5-10mg/L的乳酸链球菌素。
通过采用上述技术方案，乳酸链球菌素加入增殖培养基中，能够对增殖培养起到抑菌作用，从而提高原球茎的增殖率。
优选的，所述壮苗培养基中包含MS、0.1-0.5mg/L的6-BA、0.5-0.8mg/L的NAA和50-100mg/L的丙酸钙。
通过采用上述技术方案，丙酸钙加入壮苗培养基中，对幼芽生长培养起到抑菌作用，且能够提供钙离子，提高了幼芽的生长率。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于本申请的方法包括以下步骤：S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比70-75％的酒精中浸泡30-40秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖置于诱导培养基中进行诱导培养25-27天，得到原球茎；控制培养温度25-27℃，湿度70-75％，诱导培养期间，使用LED光对茎尖照射，照射时长10-12小时/天；S2、将原球茎转入增殖培养基中培养28-30天，得到幼芽；控制培养温度25-27℃，湿度75-80％，增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射，照射时长14-16小时/天；S3、将幼芽转入壮苗培养基中培养，直至文心兰幼芽达到6-8cm长，得到高芽苗；控制培养温度24-26℃，湿度70-75％，壮苗培养期间，使用LED光对幼苗照射，照射时长14-16小时/天；在S1中，将从幼芽上切除的顶芽置于酒精中，以对顶芽进行消毒，减少顶芽携带的细菌等杂质对后续培养造成影响，消毒后切取顶芽上的芽尖进行诱导培养，从而对其进行诱导培养，在诱导培养期间，使用LED光对茎尖进行照射，促进茎尖的培养；在S2中，将S1对茎尖诱导培养出的原球茎转移至增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养，在增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射，促进原球茎的增殖分化得到幼芽；在S3中，将幼芽转接入壮苗培养基中，使得幼苗在壮苗培养基中生长，直至得到高芽苗，在幼苗的生长期间，使用LED光对幼苗进行照射，促进幼苗的生长。
具体实施方式
以下结合实施例和对比例对本申请作进一步详细说明。
实施例
实施例1
本实施例1中对梦香文心兰的组织培养方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比70％的酒精中浸泡40秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖，将茎尖置于培养箱中的诱导培养基内，对茎尖进行诱导培养25天得到原球茎；控制培养箱中的温度为27℃，湿度75％，在诱导培养期间，使用波长范围625-630nm的红光对茎尖进行照射，且红光的光强为1400lx，红光每天照射16小时；诱导培养基包含MS、4.3mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和50mg/L的次氯酸钠；
S2、将原球茎转入培养箱中的增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养28天，得到幼芽；控制培养箱中的温度为27℃，湿度80％，在增殖培养期间，使用波长范围450-455nm的蓝光对原球茎进行照射，且蓝光的光强为1400lx，蓝光每天照射16小时；增殖培养基中包含MS、3.1mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA和10mg/L的乳酸链球菌素；
S3、将幼芽转入培养箱中的壮苗培养基中，使得幼芽在壮苗培养基中进行生长，直至苗长达到6-8cm；控制培养箱中的温度为24℃，湿度为70％，在幼芽进行生长时，使用波长范围625-630nm的红光和波长范围450-455nm的蓝光同时对幼芽进行照射，且每天照射16小时；壮苗培养基包含MS、0.1mg/L的6-BA、0.5mg/L的NAA和50mg/L的丙酸钙。
实施例2
本实施例2中对梦香文心兰的组织培养方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比75％的酒精中浸泡30秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖，将茎尖置于培养箱中的诱导培养基内，对茎尖进行诱导培养27天得到原球茎；控制培养箱中的温度为25℃，湿度70％，在诱导培养期间，使用波长范围625-630nm的红光对茎尖进行照射，且红光的光强为1400lx，红光每天照射14小时；诱导培养基包含MS、5.1mg/L的6-BA、1mg/L的NAA和60mg/L的次氯酸钠；
S2、将原球茎转入培养箱中的增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养30天，得到幼芽；控制培养箱中的温度为25℃，湿度75％，在增殖培养期间，使用波长范围455-460nm的蓝光对原球茎进行照射，且蓝光的光强为1400lx，蓝光每天照射14小时；增殖培养基中包含MS、1.3mg/L的6-BA、0.7mg/L的NAA和5mg/L的乳酸链球菌素；
S3、将幼芽转入培养箱中的壮苗培养基中，使得幼芽在壮苗培养基中进行生长，直至苗长达到6-8cm；控制培养箱中的温度为26℃，湿度为75％，在幼芽进行生长时，使用波长范围625-630nm的红光和波长范围455-460nm的蓝光同时对幼芽进行照射，且每天照射16小时；壮苗培养基包含MS、0.5mg/L的6-BA、0.8mg/L的NAA和100mg/L的丙酸钙。
实施例3
本实施例3中对梦香文心兰的组织培养方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比73％的酒精中浸泡30秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖，将茎尖置于培养箱中的诱导培养基内，对茎尖进行诱导培养28天得到原球茎；控制培养箱中的温度为25℃，湿度72％，在诱导培养期间，使用波长范围625-630nm的红光对茎尖进行照射，且红光的光强为1400lx，红光每天照射14小时；诱导培养基包含MS、4.6mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和55mg/L的次氯酸钠；
S2、将原球茎转入培养箱中的增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养30天，得到幼芽；控制培养箱中的温度为25℃，湿度77％，在增殖培养期间，使用波长范围455-460nm的蓝光对原球茎进行照射，且蓝光的光强为1400lx，蓝光每天照射14小时；增殖培养基中包含MS、2.2mg/L的6-BA、0.9mg/L的NAA和7mg/L的乳酸链球菌素；
S3、将幼芽转入培养箱中的壮苗培养基中，使得幼芽在壮苗培养基中进行生长，直至苗长达到6-8cm；控制培养箱中的温度为26℃，湿度为75％，在幼芽进行生长时，使用波长范围625-630nm的红光和波长范围455-460nm的蓝光同时对幼芽进行照射，且每天照射16小时；壮苗培养基包含MS、0.3mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和70mg/L的丙酸钙。
实施例4
本实施例4中对梦香文心兰的组织培养方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比73％的酒精中浸泡30秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖，将茎尖置于培养箱中的诱导培养基内，对茎尖进行诱导培养28天得到原球茎；控制培养箱中的温度为25℃，湿度72％，在诱导培养期间，使用波长范围625-630nm的红光对茎尖进行照射，且红光的光强为1400lx，红光每天照射14小时；诱导培养基包含MS、4.6mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和55mg/L的次氯酸钠；酒精中加入1mol/L的次氯酸钠，且酒精与次氯酸钠的体积比为10：1；
S2、将原球茎转入培养箱中的增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养30天，得到幼芽；控制培养箱中的温度为25℃，湿度77％，在增殖培养期间，使用波长范围455-460nm的蓝光对原球茎进行照射，且蓝光的光强为1400lx，蓝光每天照射14小时；增殖培养基中包含MS、2.2mg/L的6-BA、0.9mg/L的NAA和7mg/L的乳酸链球菌素；
S3、将幼芽转入培养箱中的壮苗培养基中，使得幼芽在壮苗培养基中进行生长，直至苗长达到6-8cm；控制培养箱中的温度为26℃，湿度为75％，在幼芽进行生长时，使用波长范围625-630nm的红光和波长范围455-460nm的蓝光同时对幼芽进行照射，且每天照射16小时；壮苗培养基包含MS、0.3mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和70mg/L的丙酸钙。
实施例5
本实施例5中对梦香文心兰的组织培养方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比73％的酒精中浸泡30秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖，将茎尖置于培养箱中的诱导培养基内，对茎尖进行诱导培养28天得到原球茎；控制培养箱中的温度为25℃，湿度72％，在诱导培养期间，使用波长范围625-630nm的红光对茎尖进行照射，且红光的光强为1400lx，红光每天照射14小时；诱导培养基包含MS、4.6mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和55mg/L的次氯酸钠；酒精中加入1mol/L的次氯酸钠，且酒精与次氯酸钠的体积比为5：1；
S2、将原球茎转入培养箱中的增殖培养基中，对原球茎进行增殖培养30天，得到幼芽；控制培养箱中的温度为25℃，湿度77％，在增殖培养期间，使用波长范围455-460nm的蓝光对原球茎进行照射，且蓝光的光强为1400lx，蓝光每天照射14小时；增殖培养基中包含MS、2.2mg/L的6-BA、0.9mg/L的NAA和7mg/L的乳酸链球菌素；
S3、将幼芽转入培养箱中的壮苗培养基中，使得幼芽在壮苗培养基中进行生长，直至苗长达到6-8cm；控制培养箱中的温度为26℃，湿度为75％，在幼芽进行生长时，使用波长范围625-630nm的红光和波长范围455-460nm的蓝光同时对幼芽进行照射，且每天照射16小时；壮苗培养基包含MS、0.3mg/L的6-BA、0.6mg/L的NAA和70mg/L的丙酸钙。
对比例
对比例1
本对比例1使用背景技术中，对文心兰进行组织培养的常规方法。
性能检测试验
试验方法
对实施例1-5和对比例1中对文心兰进行组织培养的方法分别进行100组实验，计算实施例1-5和对比例1的增殖率、成苗率。
表1对文心兰进行组织培养的增殖率和成苗率
增殖率/％ 成苗率/％
实施例1 83 67
实施例2 82 67
实施例3 83 68
实施例4 85 73
实施例5 86 72
对比例1 62 37
结合实施例1-5和对比例1，并结合表1可以看出，本申请的方法对文心兰进行组织培养的增殖率和成苗率明显增高。
结合实施例1-5并结合表1可以看出，在酒精中加入次氯酸钠，能够提高对文心兰进行组织培养的增殖率，进而提高成苗率。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1、从梦香文心兰母株上切取叶片尚未展开的幼苗，切取顶芽，将顶芽置于体积比70-75％的酒精中浸泡30-40秒，捞出后切取0.5-1mm的茎尖置于诱导培养基中进行诱导培养25-27天，得到原球茎；控制培养温度25-27℃，湿度70-75％，诱导培养期间，使用LED光对茎尖照射，照射时长10-12小时/天；
S2、将原球茎转入增殖培养基中培养28-30天，得到幼芽；控制培养温度25-27℃，湿度75-80％，增殖培养期间，使用LED光对原球茎进行照射，照射时长14-16小时/天；
S3、将幼芽转入壮苗培养基中培养，直至文心兰幼芽达到6-8cm长，得到高芽苗；控制培养温度24-26℃，湿度70-75％，壮苗培养期间，使用LED光对幼苗照射，照射时长14-16小时/天。
2.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述S1中，诱导培养期间，LED光为波长范围625-630nm的红光，且所述红光的光照强度为1400lx。
3.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述S2中，增殖培养期间，LED光为波长范围460-470nm的蓝光，且所述蓝光的光照强度为1400lx。
4.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述S3中，壮苗培养期间，LED光为红光和蓝光的混合光，且所述红光的波长为625-630nm，蓝光的波长为450-460nm。
5.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述S1中，在体积比70-75％的酒精中加入1mol/L的次氯酸钠溶液，且所述酒精和次氯酸钠的体积比为10：(1-2)。
6.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述诱导培养基中包含MS、4.3-5.1mg/L的6-BA、0.1-1mg/L的NAA和50-60mg/L的次氯酸钠。
7.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述增殖培养基中包含MS、1.3-3.1mg/L的6-BA、0.7-1.2mg/L的NAA和5-10mg/L的乳酸链球菌素。
8.根据权利要求1所述的一种梦香文心兰的组织培养方法，其特征在于：所述壮苗培养基中包含MS、0.1-0.5mg/L的6-BA、0.5-0.8mg/L的NAA和50-100mg/L的丙酸钙。
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李金玉等: "兰花组培LED照明特种光源及其精准调控方法", 《深圳信息职业技术学院学报》 *

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