CN104082151A - 一种多倍体毛茛铁线莲的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种多倍体毛茛铁线莲的培育方法，对种子筛选、处理，接入生长培养基进行培养催芽，再用秋水仙碱溶液浸泡种子，然后用无菌水冲洗干净，再接种于上述生长培养基中，然后将形态上明显变异的幼苗转入生长培养基中继续培养诱导出新的芽苗，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖，再进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基进行生根培养，待幼苗基部长出根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株。本发明利用组织培养和秋水仙碱诱变相结合的方式，可以有效降低嵌合体的比例，改变毛茛铁线莲花朵较小的特性，选育出大花型的新品种，同时保持母本优良性状，能有效提高毛茛铁线莲多倍体诱导效率，实现多倍体比率达23.6%。
Description
技术领域
本发明涉及一种诱导植物多倍体的方法，尤其是一种利用化学药剂诱导培育多倍体毛茛铁线莲的方法，属于植物育种技术领域。
背景技术
毛茛铁线莲（Clematis ranunculoides Franch.）为毛茛科草质藤本植物，分布于我国西南地区。花朵密集，紫红色，花期9月至10月，正值国庆中秋开放，具有较高观赏性，可作为盆栽花卉或攀援绿化植物。同时，全草入药，可治疗多种疾病。因此，毛茛铁线莲是极具开发价值的药用观赏植物。
然而，毛茛铁线莲花朵较小，如能通过遗传改良手段选育出大花型的新品种，则可大大提高其观赏价值和商业价值。现有技术中多倍体植物具有巨大性等特点，因此，多倍体育种已成为观赏植物育种的一种常用手段。对毛茛铁线莲进行多倍体诱导，可为其遗传改良提供科学依据和中间材料。而有关毛茛铁线莲多倍体诱导的方法尚未见到公开报道。
发明内容
为选育出大花型的毛茛铁线莲园艺品种，获得更高的观赏价值和商业价值，本发明的目的在于提供一种多倍体毛茛铁线莲的培育方法。
本发明通过下列技术方案完成：一种多倍体毛茛铁线莲的培育方法，其特征在于经过下列各步骤：
（1）对毛茛铁线莲种子进行筛选，再对种子进行处理，然后将处理过的种子接入生长培养基：MS+6-BA 2mg/L+ NAA 0.5mg/L+AgNO3 3mg/L，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行培养催芽；
（2）待步骤（1）的种子长出4～6mm的胚根或胚芽时，用质量浓度为0.05%～0.15%无菌的秋水仙碱溶液浸泡种子6～18h，然后用无菌水冲洗干净，再吸掉水分后接种于上述生长培养基中，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行培养30～35天，然后将形态上明显变异的幼苗转入上述生长培养基中以相同的条件继续培养30～35天，诱导出新的芽苗，对变异的幼苗再继续转入上述生长培养基中以相同的条件进行培养，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖；
（3）将步骤（3）经过5代繁殖的幼苗按常规进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L+AC 0.25g/L中，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行生根培养，待幼苗基部长出0.5～1.0cm的根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株。
所述步骤（1）的筛选是去除空瘪种子和杂质，留饱满种子备用，以确保种子质量，提高种子发芽率。
所述步骤（1）的对种子进行处理是将毛茛铁线莲种子用质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒6h，再用水冲洗干净后，用浓度为1%升汞处理3～5min。
本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：利用组织培养和秋水仙碱诱变相结合的方式，可以有效降低嵌合体的比例，改变毛茛铁线莲花朵较小的特性，选育出大花型的新品种，同时保持母本优良性状，本发明提供的方法能有效提高毛茛铁线莲多倍体诱导效率，实现多倍体比率达23.6%，大大提高了毛茛铁线莲的观赏价值和商业价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
（1）对毛茛铁线莲种子进行筛选，去除空瘪种子和杂质，留饱满种子备用，以确保种子质量，提高种子发芽率，再将毛茛铁线莲种子用质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒6h，再用水冲洗干净后，用浓度为1%升汞处理4min，然后将处理过的种子接入生长培养基：MS+6-BA 2mg/L+ NAA 0.5mg/L+AgNO3 3mg/L，在温度为25℃、光照强度为1700Lx、相对湿度为70％的条件下进行培养催芽；
（2）待步骤（1）的种子长出4mm的胚根或胚芽时，用质量浓度为0.05%无菌的秋水仙碱溶液浸泡种子18h，然后用无菌水冲洗干净，再吸掉水分后接种于上述生长培养基中，在温度为26℃、光照强度为1500Lx、相对湿度为75％的条件下进行培养32天，然后将形态上明显变异的幼苗转入上述生长培养基中以相同的条件继续培养30天，诱导出新的芽苗，对变异的幼苗再继续转入上述生长培养基中以相同的条件进行培养，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖；
（3）将步骤（3）经过5代繁殖的幼苗按常规进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L+AC 0.25g/L中，在温度为26℃、光照强度为1700Lx、相对湿度为70％的条件下进行生根培养，待幼苗基部长出0.8cm的根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株，成活率为96%。
实施例2
（1）对当年收获的饱满且无破损的毛茛铁线莲种子进行筛选，去除空瘪种子和杂质，留饱满种子备用，以确保种子质量，提高种子发芽率，再将毛茛铁线莲种子用质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒6h，再用水冲洗干净后，用浓度为1%升汞处理5min，然后将处理过的种子接入生长培养基：MS+6-BA 2mg/L+ NAA 0.5mg/L+AgNO3 3mg/L，在温度为22℃、光照强度为1300Lx、相对湿度为75％的条件下进行培养催芽；
（2）待步骤（1）的种子长出5mm的胚根或胚芽时，用质量浓度为0.1%无菌的秋水仙碱溶液浸泡种子12h，然后用无菌水冲洗干净，再吸掉水分后接种于上述生长培养基中，在温度为24℃、光照强度为1300Lx、相对湿度为65％的条件下进行培养35天，然后将形态上明显变异的幼苗转入上述生长培养基中以相同的条件继续培养32天，诱导出新的芽苗，对变异的幼苗再继续转入上述生长培养基中以相同的条件进行培养，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖；
（3）将步骤（3）经过5代繁殖的幼苗按常规进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L+AC 0.25g/L中，在温度为24℃、光照强度为1500Lx、相对湿度为65％的条件下进行生根培养，待幼苗基部长出1.0cm的根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株，成活率为93%。
实施例3
（1）对毛茛铁线莲种子进行筛选，去除空瘪种子和杂质，留饱满种子备用，以确保种子质量，提高种子发芽率，再将毛茛铁线莲种子用质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒6h，再用水冲洗干净后，用浓度为1%升汞处理3min，然后将处理过的种子接入生长培养基：MS+6-BA 2mg/L+ NAA 0.5mg/L+AgNO3 3mg/L，在温度为26℃、光照强度为1500Lx、相对湿度为65％的条件下进行培养催芽；
（2）待步骤（1）的种子长出6mm的胚根或胚芽时，用质量浓度为0.15%无菌的秋水仙碱溶液浸泡种子6h，然后用无菌水冲洗干净，再吸掉水分后接种于上述生长培养基中，在温度为22℃、光照强度为1700Lx、相对湿度为70％的条件下进行培养30天，然后将形态上明显变异的幼苗转入上述生长培养基中以相同的条件继续培养35天，诱导出新的芽苗，对变异的幼苗再继续转入上述生长培养基中以相同的条件进行培养，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖；
（3）将步骤（3）经过5代繁殖的幼苗按常规进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L+AC 0.25g/L中，在温度为22℃、光照强度为1300Lx、相对湿度为75％的条件下进行生根培养，待幼苗基部长出0.5cm的根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株，成活率为91%。
Claims (3)
1.一种多倍体毛茛铁线莲的培育方法，其特征在于经过下列各步骤：
（1）对毛茛铁线莲种子进行筛选，再对种子进行处理，然后将处理过的种子接入生长培养基：MS+6-BA 2mg/L+ NAA 0.5mg/L+AgNO3 3mg/L，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行培养催芽；
（2）待步骤（1）的种子长出4～6mm的胚根或胚芽时，用质量浓度为0.05%～0.15%无菌的秋水仙碱溶液浸泡种子6～18h，然后用无菌水冲洗干净，再吸掉水分后接种于上述生长培养基中，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行培养30～35天，然后将形态上明显变异的幼苗转入上述生长培养基中以相同的条件继续培养30～35天，诱导出新的芽苗，对变异的幼苗再继续转入上述生长培养基中以相同的条件进行培养，如此循环，使变异幼苗经过5代繁殖；
（3）将步骤（3）经过5代繁殖的幼苗按常规进行多倍体检测，将鉴定为多倍体的幼苗转接于生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L+AC 0.25g/L中，在温度为22～26℃、光照强度为1500±200Lx、相对湿度为70％±5％的条件下进行生根培养，待幼苗基部长出0.5～1.0cm的根后进行移栽，即得到毛茛铁线莲多倍体植株。
2.根据权利要求1所述的多倍体毛茛铁线莲的培育方法，其特征在于：所述步骤（1）的筛选是去除空瘪种子和杂质，留饱满种子备用，以确保种子质量，提高种子发芽率。
3.根据权利要求1所述的多倍体毛茛铁线莲的培育方法，其特征在于：所述步骤（1）的对种子进行处理是将毛茛铁线莲种子用质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒6h，再用水冲洗干净后，用浓度为1%升汞处理3～5min。
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