CN110972948A - 一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法 - Google Patents

一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法。本发明花叶锦带组织培养的培养基，包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中所述腋芽诱导培养基包括MS+6‑BA1~2mg/L+2、4‑D0.5 mg/L，所述增殖培养基包括MS+6‑BA1.0~2.0mg/L+IBA0.05mg/L，所述生根培养基包括1/2MS+IBA0.1~0.5 mg/L，本发明的组织培养方法包括无菌材料的获得、芽的诱导、增殖培养、生根培养和炼苗，扩繁增殖率高，良品率高，组培方法易于操作，能够大大降低生产成本，实现大量规模化生产，打破季节限制，高杆园艺造型简单。

Description

一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法。
技术背景
花叶锦带是属于忍冬科锦带花属的一种植物，是落叶灌木，株丛紧密，喜光，耐寒的植物。植株紧密，单叶对生，椭圆形或卵圆形，叶缘为白色至黄色，花1~4朵组成聚成花序生于叶腋及枝端，花冠钟形，紫红至淡粉色，花期4~5月，蒴果柱形。花叶锦带春、夏、秋三季观叶，初夏赏花。叶黄、绿相间，花初开时呈白色，而后逐渐变为粉红色；可孤植、丛植于庭院、水景处搭配点缀，也可群植于林缘及草坪、花境处，形成壮观的整体景观。同时，对二氧化硫、氯化氢有较强的抗性，并能吸附粉尘，净化空气。因此，花叶锦带不但是美丽的花灌木，而且也是优良的环境保护植物。花叶锦带扦插苗优质，商品苗质量低，高杆园艺造型难，大量繁殖比较难，季节性强。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供了一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法。本发明的组培方法易于操作，增殖扩繁比例高，能够大大降低生产成本，实现大量规模化生产，打破季节限制，高杆园艺造型简单。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种花叶锦带组织培养的培养基及培养方法，其特征在于，该花叶锦带组织培养的培养基及培养方法具有以下特征：
一种花叶锦带组织培养的培养基，包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1~2mg/L+2、4-D0.3~0.7mg/L，所述增殖培养基包括MS+6-BA1.0~2.0mg/L+IBA0.03~0.07mg/L，所述生根培养基包括1/2MS+IBA0.1~0.5 mg/L。
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的氯化汞和吐温的混合溶液消毒6~10分钟后，用无菌水冲洗4~6次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5~9天；所述氯化汞和吐温的混合溶液中含有0.08%~0.12%的氯化汞，单位为质量分数；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基上7~15天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，15~25天后芽分生组织，再培养15~25天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基上，培养25~30天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数3~8；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基上，7~15天苗长出根原基，13~17根3~4cm长，生根率95%~100%；
（5）炼苗：生根培养13~17天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩的混合基质上，用遮阳率40%~75%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每20~40分钟喷水8~12秒钟，连续5~9天，以后每天早上浇水一次，每次8~12分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1~2mg/L+2、4-D0.3~0.7mg/L。
所述增殖培养基包括MS+6-BA1.0~2.0mg/L+IBA0.03~0.07mg/L。
所述生根培养基包括1/2MS+IBA0.1~0.5 mg/L。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中还分别包括蔗糖25~35g/L、琼脂粉3~7g/L，培养基pH为5.7~5.9，培养温度22~26℃，光照2300~2700lx。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明的组培方法易于操作，增殖扩繁比例高，能够大大降低生产成本，实现大量规模化生产，打破季节限制，高杆园艺造型简单。
具体实施方式
实施例 1
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的0.08%氯化汞和吐温的混合溶液消毒10分钟后，用无菌水冲洗4次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养9天；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+6-BA1mg/L+2，4-D0.5mg/L上 7天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，15天后芽分生组织，再培养15天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基MS+6-BA1.0mg/L上，培养25天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数3；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基1/2MS+IBA0.1mg/L上，15天苗长出根原基，17天根3~4cm长，生根率95%；
（5）炼苗：生根培养17天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩2:1的混合基质上，用遮阳率40%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每半个小时喷水10秒钟，连续7天，以后每天早上浇水一次，每次10分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖25g/L、琼脂粉3g/L，培养基pH为5.7，培养温度22℃，光照2300lx。
实施例2
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的0.09%氯化汞和吐温的混合溶液消毒9分钟后，用无菌水冲洗4次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养8天；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+6-BA1.25mg/L+2，4-D 0.5mg/L上 9天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，18天后芽分生组织，再培养18天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基MS+6-BA1.25mg/L上，培养26天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数5；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基1/2MS+IBA0.2mg/L上，13天苗长出根原基，16天根3~4cm长，生根率97%；
（5）炼苗：生根培养16天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩2:1的混合基质上，用遮阳率45%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每半个小时喷水10秒钟，连续7天，以后每天早上浇水一次，每次10分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖28g/L、琼脂粉4g/L，培养基pH为5.7，培养温度23℃，光照2400lx。
实施例3
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的0.1%氯化汞和吐温的混合溶液消毒8分钟后，用无菌水冲洗5次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养7天；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+6-BA1.5mg/L+2，4-D0.3mg/L上 10天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，20天后芽分生组织，再培养20天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基MS+6-BA1.5mg/L上，培养27天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数8；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基1/2MS+IBA0.3mg/L上，10天苗长出根原基，15天根3~4cm长，生根率100%；
（5）炼苗：生根培养15天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩2:1的混合基质上，用遮阳率55%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每半个小时喷水10秒钟，连续7天，以后每天早上浇水一次，每次10分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉5g/L，培养基pH为5.8，培养温度24℃，光照2500lx。
实施例4
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的0.11%氯化汞和吐温的混合溶液消毒7分钟后，用无菌水冲洗5次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养6天；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+6-BA2mg/L+2，4-D0.7mg/L上 13天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，23天后芽分生组织，再培养23天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基MS+6-BA1.75mg/L上，培养28天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数6；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基1/2MS+IBA0.4mg/L上，9天苗长出根原基，14天根3~4cm长，生根率100%；
（5）炼苗：生根培养14天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩2:1的混合基质上，用遮阳率65%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每半个小时喷水10秒钟，连续7天，以后每天早上浇水一次，每次10分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖23g/L、琼脂粉6g/L，培养基pH为5.9，培养温度25℃，光照2600lx。
实施例5
一种花叶锦带组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的0.12%氯化汞和吐温的混合溶液消毒6分钟后，用无菌水冲洗6次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5天；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+6-BA2mg/L+2，4-D0.3mg/L上 15天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，25天后芽分生组织，再培养25天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基MS+6-BA2.0mg/L上，培养30天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数在5；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基1/2MS+IBA0.5mg/L上，7天苗长出根原基，13天根3~4cm长，生根率99%；
（5）炼苗：生根培养13天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩2:1的混合基质上，用遮阳率75%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每半个小时喷水10秒钟，连续7天，以后每天早上浇水一次，每次10分钟，一直到商品苗出售。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖35g/L、琼脂粉7g/L，培养基pH为5.9，培养温度26℃，光照2700lx。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据本发明实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (6)

1.一种花叶锦带组织培养的培养基，其特征在于，包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1~2mg/L+2、4-D0.3~0.7mg/L，所述增殖培养基包括MS+6-BA1.0~2.0mg/L+IBA0.03~0.07mg/L，所述生根培养基包括1/2MS+IBA0.1~0.5 mg/L。
2.一种花叶锦带组织培养的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取新长出的嫩枝条为外植体，去除外植体的叶片，洗去表面杂质，切去伤口位置，用配制好的氯化汞和吐温的混合溶液消毒6~10分钟后，用无菌水冲洗4~6次，将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5~9天；所述氯化汞和吐温的混合溶液中含有0.08%~0.12%的氯化汞，单位为质量分数；
（2）芽的诱导：将外植体接种到腋芽诱导培养基上7~15天后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，15~25天后芽分生组织，再培养15~25天，小的嫩枝条长到2~3cm，将嫩枝条切下转入嫩枝条增殖培养基中进行增殖培养，确保嫩枝条生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；
（3）增殖培养：以MS培养基为基础培养基，将诱导的嫩枝条接种到增殖培养基上，培养25~30天后筛选出无根、侧枝多增殖系数较高的增殖母苗，扩繁增殖系数3~8；
（4）生根培养：将增殖苗分成单株，高矮分开转接到生根培养基上，7~15天苗长出根原基，13~17根3~4cm长，生根率95%~100%；
（5）炼苗：生根培养13~17天后，洗苗移栽，栽种在泥炭和珍珠岩的混合基质上，用遮阳率40%~75%的遮阳网遮阳一周，一周后撤去遮阳网，从早上8:00到下午18:00，每20~40分钟喷水8~12秒钟，连续5~9天，以后每天早上浇水一次，每次8~12分钟，一直到商品苗出售。
3.根据权利要求2所述的花叶锦带组织培养的培养方法，其特征在于，所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1~2mg/L+2、4-D0.3~0.7mg/L。
4.根据权利要求2所述的花叶锦带组织培养的培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括 MS+6-BA1.0~2.0mg/L+IBA0.03~0.07mg/L。
5.根据权利要求2所述的花叶锦带组织培养的培养方法，其特征在于，所述生根培养基包括1/2MS+IBA0.1~0.5 mg/L。
6.根据权利要求2所述的花叶锦带组织培养的培养方法，其特征在于，所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中还分别包括蔗糖25~35g/L、琼脂粉3~7g/L，培养基pH为5.7~5.9，培养温度22~26℃，光照2300~2700lx。
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王进茂等: "红王子锦带花组培微繁的研究 ", 《河北林果研究》, no. 03, 30 September 2000 (2000-09-30), pages 236 *

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