CN104782490A - 一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，‘森林火焰’加拿大紫荆（Cercis Canadensis ‘Forest Pansy’）为豆科紫荆属落叶小乔木或灌木，原产美国，为加拿大紫荆(Cercis canadensis)的一个品种。其春季先开花后展叶，花色艳丽，新叶紫红光亮，叶色观赏价值高，观赏期长，目前己成为国际上非常流行的商业化绿化彩叶树种，在美国、欧洲等地应用广泛，深受人们的喜爱。本发明以‘森林火焰’加拿大紫荆为外植体，通过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了‘森林火焰’加拿大紫荆离体再植株，建立了其组培快繁殖技术体系。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法。
背景技术
‘森林火焰’加拿大紫荆（Cercis Canadensis ‘Forest Pansy’）为豆科紫荆属落叶小乔木或灌木，原产美国，为加拿大紫荆(Cercis canadensis)的一个品种。其春季先开花后展叶，花色艳丽，新叶紫红光亮，叶色观赏价值高，观赏期长，目前己成为国际上非常流行的商业化绿化彩叶树种，在美国、欧洲等地应用广泛，深受人们的喜爱。
随着现代园林的快速发展，园林彩叶树种在园林景观植物配置中已成为不可缺少的元素，彩叶树种由于能弥补常绿植物的不足，从而丰富园林环境色彩，具有极大的应用前景和市场价值。作为从国外引入的新优彩叶树种，‘森林火焰’加拿大紫荆在我国的应用还处于刚刚起步阶段，在市场上的占有率特别小，苗圃存苗量低，不能满足市场的需求，大大限制了‘森林火焰’加拿大紫荆在我国的应用以及彩叶苗木市场的发展。靠常规嫁接、扦插等方法来繁殖，培育周期长，不利于工厂化育苗，不能满足当前日益增长的市场需求。本发明以森林火焰’加拿大紫荆为外植体，通过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了‘森林火焰’加拿大紫荆离体再植株，建立了其组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，降低生产成本，有利加快其繁育及推广。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，本发明以‘森林火焰’加拿大紫荆为外植体，通过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了‘森林火焰’加拿大紫荆离体再植株，建立了其组培快繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，包括以下的步骤：
（1）外植体消毒：‘森林火焰’加拿大紫荆茎段→用软刷刷去表面污垢后洗衣粉液浸泡10～30min→自来水冲洗30～60min→超净台上用70%～80%酒精30～45s→0.1%升汞溶液浸泡5～15min→无菌水冲洗5～8次→将茎段两端切去0.5cm→接种。
（2）启动培养：将步骤（1）处理好的茎段接种于诱导培养基中进行启动培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到不定芽从基部切下并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况。
（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖得到的不定芽切割成单个芽体并转入壮苗培养基进行壮苗培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养。
（5）生根培养：将经步骤（4）壮苗后的不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况。
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,5～7天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,10～15天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽30天后统计成活率。
上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/L NAA+1～3mg/L 6-BA+0.5～1mg/L AC+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上 述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.01～0.05mg/L TDZ+0.1～0.5mg/LNAA+0.1～0.5mg/L PVP+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的壮苗培养基为：DKW+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.0mg/L IBA+1.0～2.0mg/L AC+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：本发明以‘森林火焰’加拿大紫荆为外植体，通过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了‘森林火焰’加拿大紫荆离体再植株，建立了其组培快繁殖技术体系。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）外植体消毒：‘森林火焰’加拿大紫荆茎段→用软刷刷去表面污垢后洗衣粉液浸泡10min→自来水冲洗30min→超净台上用70%酒精30s→0.1%升汞溶液浸泡5min→无菌水冲洗5次→将茎段两端切去0.5cm→接种。
（2）启动培养：将步骤（1）处理好的茎段接种于诱导培养基中进行启动培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为1000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养25天即可诱导得到不定芽，诱导率为83.5%。所述的诱导培养基为：MS+0.1mg/L NAA+1mg/L 6-BA+0.5mg/L AC+18g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到不定芽从基部切下并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数为4.25。所述的增殖培养基为：MS+0.01mg/L TDZ+0.1mg/LNAA+0.1mg/L PVP+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖得到的不定芽切割成单个芽体并转入壮苗培养基进行壮苗培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养。所述的壮苗培养基为：DKW+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（5）生根培养：将经步骤（4）壮苗后的不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到91.5%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L IBA+1.0mg/L AC+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,10天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽30天后成活率为89.7%。
实施例2
（1）外植体消毒：‘森林火焰’加拿大紫荆茎段→用软刷刷去表面污垢后洗衣粉液浸泡15min→自来水冲洗40min→超净台上用75%酒精30s→0.1%升汞溶液浸泡7min→无菌水冲洗6次→将茎段两端切去0.5cm→接种。
（2）启动培养：将步骤（1）处理好的茎段接种于诱导培养基中进行启动培养。接种后置于每天光照14小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养28天即可诱导得到不定芽，诱导率为90%。所述的诱导培养基为：MS+0.5mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.8mg/L AC+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到不定芽从基部切下并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数为5.03。所述的增殖培养基为：MS+0.03mg/L TDZ+0.5mg/LNAA+0.2mg/L PVP+23g/L蔗糖5.0g/L琼脂，pH为5.4。
（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖得到的不定芽切割成单个芽体并转入壮苗培养基进行壮苗培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养。所述的壮苗培养基为：DKW+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.4。
（5）生根培养：将经步骤（4）壮苗后的不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到92.8%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.8mg/L IBA+1.2mg/L AC+17g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,6天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,14天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽30天后成活率为94.2%。
Claims (5)
1.一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体消毒：‘森林火焰’加拿大紫荆茎段→用软刷刷去表面污垢后洗衣粉液浸泡10～30min→自来水冲洗30～60min→超净台上用70%～80%酒精30～45s→0.1%升汞溶液浸泡5～15min→无菌水冲洗5～8次→将茎段两端切去0.5cm→接种；
（2）启动培养：将步骤（1）处理好的茎段接种于诱导培养基中进行启动培养，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率；
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到不定芽从基部切下并转入增殖培养基进行扩繁，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况；
（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖得到的不定芽切割成单个芽体并转入壮苗培养基进行壮苗培养，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养；
（5）生根培养：将经步骤（4）壮苗后的不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况；
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,5～7天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,10～15天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽30天后统计成活率。
2. 根据权利要求1所述的一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/L NAA+1～3mg/L 6-BA+0.5～1mg/L AC+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.01～0.05mg/L TDZ+0.1～0.5mg/LNAA+0.1～0.5mg/L PVP+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，其特征在于步骤（4）所述的壮苗培养基为：DKW+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
5. 根据权利要求1所述的一种‘森林火焰’加拿大紫荆组培快繁殖技术体系的构建方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.0mg/L IBA+1.0～2.0mg/L AC+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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