CN105993942A - 一种加拿大紫荆组织培养的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种加拿大紫荆组织培养的方法，所述的方法包括：1)外植体的选取，2)外植体消毒，3)初始诱导培养，4)增殖培养，5)生根培养，6)炼苗和移栽。采用本方法繁育加拿大紫荆，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。

Description

一种加拿大紫荆组织培养的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是一种加拿大紫荆组织培养的方法技术领域。
背景技术
加拿大紫荆(Cercis canadensis)为豆科紫荆属小乔木。原产美国，分部于美国东部、中西部和加拿大安大略省。木材密度大，坚硬，条纹细密，树高7-11m，冠幅7.5-10.5米，主树干短，有几个主要分枝；花期长，4-5月开花，先花后叶，花有玫瑰粉红色，淡红紫色，少有白色；叶片蜡质；荚果7-8月成熟。长5cm，中间宽1.4cm，两端渐尖，荚内有4-5粒种子。加拿大紫荆耐寒性强。喜充足的阳光，略耐阴，冬春阳光充足时开花良好，夏季高温时则需适当蔽荫。对土壤要求不严，酸性土、碱性土或稍黏重的土壤都能生长。耐一定程度的干旱和水湿，但以湿润而排水良好的土壤为好。
目前，加拿大紫荆多采用种子繁育来进行生产栽培，这繁育技术提高品种的纯度，保持了品种特性，但繁殖速度较慢，制约了加拿大紫荆产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性，也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。
现有技术中，尚无加拿大紫荆的组织培养方法的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种加拿大紫荆组织培养的方法，可实现加拿大紫荆快速大量繁殖。
为了解决上述技术问题，本发明提出下列技术方案：
一种加拿大紫荆组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：
1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体，剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用；
2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30-35℃处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台上用75％的酒精消毒25-45秒，0.1％升汞溶液中处理7-12min,然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用；
3)初始诱导培养：将灭菌后的外植体各剪去2-3mm，外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养6-8d后将其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0.8-1.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L；
4)增殖培养：将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.3-0.8mg/L+KT0.5-1.2mg/L；
5)生根培养：将步骤4)的培养出的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.2-0.5mg/L+PVP0.8-2mg/L；
6)炼苗和移栽：将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽至装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可；
所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO3 1900mg/L，硝酸铵NH4NO31650mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3 170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O 370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O4 40mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H3BO 36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O2 2.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O 0.025mg/L，氯化钴CoCl2·6H2O 0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA 37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.8；
所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO3 950mg/L，硝酸铵NH4NO3825mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3 85mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O 185mg/L；余同上述MS培养基；
所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；
所述的NAA为α-萘乙酸；
所述的IBA为吲哚-3-丁酸；
所述的KT为激动素；
所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。
优选的，所述步骤3)中初始诱导培养基组成为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。
优选的，所述步骤4)中新芽伸长和增殖培养用培养基为：MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+KT1.0mg/L。
优选的，所述步骤5)中生根培养基为：1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+PVP1mg/L。
采用本发明繁殖加拿大紫荆，可实现加拿大紫荆组培苗的大量组织培养，为加拿大紫荆生产栽培和品种改良奠定基础。
为了更好的阐述技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。
具体实施方式
实施例1
1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体，剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段茎段剪成2-3cm长以备用；
2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗中保持温度30℃处理30min，然后以自来水冲洗10min；随后在超净工作台上以75％的酒精消毒25秒，0.1％升汞溶液中处理7min,然后以无菌水冲洗4遍，置于无菌培养皿备用；
3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养8d后将其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L；
4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的培养基组成MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.3mg/L+KT0.5mg/L；
5)生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA0.2mg/L+PVP0.8mg/L；
6)炼苗和移栽：将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可。
经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为88.6％。
实施例2
1)外植体的选取：1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体，剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用；
2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35℃处理45min，然后以自来水冲洗20min；随后在超净工作台上用75％的酒精消毒45秒，0.1％升汞溶液中处理12min,，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；
3)初始诱导培养：将灭菌后的外植体各剪去2-3mm，外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.3mg/L；
4)增殖培养：将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.3mg/L+IBA1.2mg/L+KT1.2mg/L；
5)生根培养：将步骤4)的培养出的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+PVP2mg/L；
6)炼苗和移栽：将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽至装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可；
经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为90.7％。
实施例3
1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体，剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用；
2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35℃处理35min，然后以自来水冲洗15min；随后在超净工作台上用75％的酒精消毒35秒，0.1％升汞溶液中处理10min，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；
3)初始诱导培养：将灭菌后的外植体各剪去2-3mm，外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养7d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养15d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；
4)增殖培养：将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+KT1.0mg/L；
5)生根培养：将步骤4)的培养出的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+PVP1mg/L；
6)炼苗和移栽：将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽至装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可；
经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为94.5％。

Claims (4)

1.一种加拿大紫荆组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：
1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的加拿大紫荆幼嫩茎尖或至少带一个单芽的茎段为外植体，剪去叶片后将茎尖或至少带一个单芽的茎段剪成2-3cm长以备用；
2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30-35℃处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台上用75％的酒精消毒25-45秒，0.1％升汞溶液中处理7-12min,然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用；
3)初始诱导培养：将灭菌后的外植体各剪去2-3mm，外植体基部向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养6-8d后将其中未污染的外植体转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为:MS+6-BA0.8-1.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L；
4)增殖培养：将步骤3)培养出的新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的新芽伸长和增殖培养基组成为MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.3-0.8mg/L+KT0.5-1.2mg/L；
5)生根培养：将步骤4)的培养出的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强1500-2000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为:1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.2-0.5mg/L+PVP0.8-2mg/L；
6)炼苗和移栽：将有生根的加拿大紫荆幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽至装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可；
所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；
所述的NAA为α-萘乙酸；
所述的IBA为吲哚-3-丁酸；
所述的KT为激动素；
所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。
2.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法，其特征在于所述步骤3)中初始诱导培养基组成为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。
3.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法，其特征在于所述步骤4)中新芽伸长和增殖培养用培养基为：MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+KT1.0mg/L。
4.根据权利要求1所述一种加拿大紫荆组织培养的方法，其特征在于所述步骤5)中生根培养基为：1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+PVP1mg/L。
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