CN103548692A - 一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种繁殖速度快、成本低且能保持波叶鸟巢蕨叶片整齐统一波浪形状的组培方法。本发明包括以下步骤:(1)从波叶鸟巢蕨根状茎上诱导并分化出小颗粒状的原球茎;(2)取上述原球茎置于MS培养基中进行培养,每个原球茎分化出3~4个新的原球茎,进行无菌苗的增殖培养;(3)将原球茎置于MS培养

Description

一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种植物培养方法,尤其涉及一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法。背景技术
[0002] 鸟巢蕨是一种附生的蕨类植物,原生于亚洲东南部、澳大利亚东部、印度尼西亚、印度和非洲东部,又称巢蕨、山苏花、王冠蕨,为铁角蕨科,属多年生阴生草本观叶植物。近年来鸟巢蕨在观叶植物的应用中深受人们的喜爱。除了自然盆栽作为鲜切叶用于插花中供人们观赏外,鸟巢蕨还可以人工加工形成各种各样的形态,根据需要配置在不同位置形成不同的景观效应。这表明人们对鸟巢蕨的观赏要求越来越高。而波叶鸟巢维多利亚作为鸟巢蕨家族中的一员,其叶边缘优美的波浪形状,更是深受人们的喜爱。
[0003] 在鸟巢蕨培植方面,以前大多是采用分株进行繁殖的方法。一棵鸟巢蕨一年只能繁殖出3~4棵,因其繁殖系数低,远不能满足市场的需要。因此,目前鸟巢蕨的繁殖方法多采用孢子播种法以及组织培养法。而目前鸟巢蕨的组织培养法也是利用孢子为原材料进行快繁,具体工艺是:把经过消毒灭菌的孢子囊从孢子叶上切下,破碎取出孢子后接种到培养基上,孢子萌发较快,萌发率高。萌发后的原叶体接种到不添加激素的MS培养基上能得到较大的增殖系数。无论是孢子播种法还是利用孢子为原材料进行的组织培养法,都能快速的得到大量鸟巢蕨苗。但是对于波叶鸟巢蕨,孢子繁殖和利用孢子为原材料进行的快繁苗都有30%左右无法继承波叶鸟巢叶片本身的漂亮的波浪纹,剩下的70%波浪纹也不是很统一,有大波浪,小波浪,因此种植过程中需要进行筛选才能得到整齐统一的波叶鸟巢。
发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种繁殖速度快、成本低且能保持波叶鸟巢蕨叶片整齐统一波浪形状的组培方法。
`[0005] 本发明所采用的技术方案是,该方法包括以下步骤:
(O诱导与分化:取波叶鸟巢蕨根状茎为外植体并进行无菌处理,取经过无菌处理的根状茎切成若干块状并放入MS培养基中进行培养,培养温度为24~26°C,光照1800~20001ux,光照时间为每天12h,培养16~18周时间,可见切口处分化出小颗粒状的原球茎;
(2)无菌苗的增殖培养:取上述原球茎置于MS培养基中,培养3~4周,培养温度为24~26°C,光照2200~26001ux,光照时间为每天12h,每个原球茎分化出3~4个新的原球茎;
(3)无菌苗的移栽驯化:将原球茎置于MS培养基I中培养3~4周,每颗原球茎长出
I~3棵小苗,再将长出的每棵小苗置于MS培养基II中培养3~4周,即进行移栽驯化,洗净无菌苗根部的培养液并移栽进泥炭土和珍珠岩组成的基质内,保持温度为18~28°C,光照 5000 ~7000Lux。
[0006] 进一步地,在所述步骤(1)中,对波叶鸟巢蕨根状茎进行无菌处理的步骤为:剥干净根状茎外面的叶鞘和毛鳞,用75%的酒精处理10秒,再在0.1 %的升汞溶液中浸泡8~10分钟后取出,最后用无菌水冲洗4~5次。
[0007] 进一步地,在所述步骤(1)中的MS培养基中加入有BA和IAA,MS培养基中的BA的浓度为0.5~1.5mg/L, IAA的浓度为I~3mg/L,所述鸟巢蕨根状茎切成的块状长度为
0.3cm0
[0008] 进一步地,在所述步骤(2)中,在所述MS培养基中加入有BA、KT和糖,MS培养基中的BA浓度为0.2~1.0mg/L、KT的浓度为0.1~0.5mg/L,糖的浓度为3%。
[0009] 进一步地,在所述步骤(3)中,在所述MS培养基I中加入有活性炭和糖,MS培养基I中的活性炭的浓度为2g/L,糖的浓度为3%。
[0010] 进一步地,在所述步骤(3)中,在所述MS培养基II中加入有IBA和糖,MS培养基II中的IBA的浓度为lmg/L,糖的浓度为3%。
[0011] 进一步地,经过所述MS培养基I培养后,每颗原球茎长出的小苗高0.5厘米,在经
过所述MS培养基II培养后,每颗小苗长成I~1.5厘米高,并有二至三条黑色小须根。
[0012] 更进一步地,该方法还包括以下步骤:在移栽前3~4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件。
[0013] 更进一步地,所述步骤(3)中的`泥炭土和珍珠岩的质量比为4:1。
[0014] 更进一步地,该方法还包括以下步骤:移栽后的第一周用无纺布覆盖,控制湿度85~95%,保持叶表面水雾不干。
[0015] 本发明的有益效果是:本发明先采用加入有BA和IAA的MS培养基,可以有效促进波叶鸟巢蕨的根状茎分化出原球茎;采用BA、KT和糖为的MS作为增殖培养基,原球茎能旺盛增殖;最后原球茎置于无激素,含有糖和活性炭的MS培养基中培养四周即可快速长出小苗,小苗置于含有IBA和糖的MS培养基中培养可快速生根。本发明通过利用根状茎直接诱导出原球茎,原球茎又直接快速增殖长出小苗,简化培养条件和培养工艺,可以降低生产成本,保持苗的整体叶子波浪形状的统一性,因此本发明的波叶鸟巢蕨的快繁方法繁殖速度快,成本低,保持形状统一,减少后期的筛选工作。
具体实施方式
[0016] 本发明公开了一种波叶鸟巢蕨的组培快繁方法。以下列出三个试验过程对本发明方法作进一步的说明。
[0017]试验一:
(一)诱导和分化(1)取波叶鸟巢根状莖作为外植体;
(2)将所述根状茎剥干净外面的叶鞘及毛鳞,先用75%的酒精处理10秒,再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分钟取出,然后用无菌水冲洗4~5次;
(3)取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块,放入加有BA 0.5mg/L和IAA1.0mg/L的MS培养基中,培养温度为24~26度,光照1800~20001ux,光照时间每天12小时,培养16~18周后,可见切口处分化出小颗粒的原球茎。
[0018] (二)无菌苗的增殖培养
取一颗一颗的原球茎置于BA 0.2mg/L和KT 0.lmg/L,糖为3%的MS培养基中,培养4周后,每个原球茎可多分化出3~4个新的原球茎;培养温度要求:24~26度,光照25001UX,每天光照12小时。
[0019](三)无菌苗的移栽驯化
(1)所述原球茎置于无激素,糖3%,活性炭2g/L的MS培养基中培养4周后,每颗原球茎开始长出I~3棵0.5厘米小苗,再将小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培养基中培养4周,每棵苗长成I~1.5厘米的小苗,并有两三条黑色的小须根,可进行移栽驯化;
(2)栽前3~4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部的培养基液并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:1的基质内;
(4)保持温度为18~28度,光照5000~7000Lux,移栽后的第一周用无纺布覆盖,控制湿度85~95%,保持叶表面水雾不干。
[0020]试验二:
(一)诱导和分化
(1)取波叶鸟巢根状莖作为外植体;
(2)将所述根状茎剥干净外面的叶鞘及毛鳞,先用75%的酒精处理10秒,再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分钟取出,然后用无菌水冲洗4~5次;
(3)取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块,放入加有BA 1.0mg/L和IAA
2.0mg/L的MS培养基中,培养温度为24~26度,光照1800~20001ux,光照时间每天12小时,培养16~18周后,可见切口处分化出小颗粒的原球茎。
[0021] (二)无菌苗的增殖培养
取一颗一颗的原球茎置于BA 0.6mg/L和KT 0.3mg/L,糖为3%的MS培养基中,培养4周后,每个原球茎可多分化出3~4个新的原球茎;培养温度要求:24~26度,光照25001UX,每天光照12小时。
[0022](三)无菌苗的移栽驯化
(1)所述原球茎置于无激素,糖3%,活性炭2g/L的MS培养基中培养4周后,每颗原球茎开始长出I~3棵0.5厘米小苗,再将小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培养基中培养4周,每棵苗长成I~1.5厘米的小苗,并有两三条黑色的小须根,可进行移栽驯化;
(2)栽前3~4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部的培养基液并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:1的基质内;
(4)保持温度为18~28度,光照5000~7000Lux,移栽后的第一周用无纺布覆盖,控制湿度85~95%,保持叶表面水雾不干。
[0023] 试验三:(一)诱导和分化
(1)取波叶鸟巢根状莖作为外植体;
(2)将所述根状茎剥干净外面的叶鞘及毛鳞,先用75%的酒精处理10秒,再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分钟取出,然后用无菌水冲洗4~5次;
(3)取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块,放入加有BA 1.5mg/L和IAA3.0mg/L的MS培养基中,培养温度为24~86度,光照1800~20001ux,光照时间每天12小时,培养16~18周后,可见切口处分化出小颗粒的原球茎。
[0024] (二)无菌苗的增殖培养
取一颗一颗的原球茎置于BA 1.0mg/L和KT 0.5mg/L,糖为3%的MS培养基中,培养4周后,每个原球茎可多分化出3~4个新的原球茎;培养温度要求:24~26度,光照25001UX,每天光照12小时。
[0025](三)无菌苗的移栽驯化
(1)所述原球茎置于无激素,糖3%,活性炭2g/L的MS培养基中培养4周后,每颗原球茎开始长出I~3棵0.5厘米小苗,再将小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培养基中培养4周,每棵苗长成I~1.5厘米的小苗,并有两三条黑色的小须根,可进行移栽驯化;
(2)栽前3~4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部的培养基液并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:1的基质内;
(4)保持温度为18~28度,光照5000~7000Lux,移栽后的第一周用无纺布覆盖,控制湿度85~95%,保持叶表面水雾不干。
[0026] 对照组:孢子播种
1、选取形状优美,无异形叶片的波叶鸟巢,收集孢子;
2、将所收集的孢子播种在装有湿润的泥炭土的穴盘表面,并用玻璃盖子盖好或薄膜包好播种了孢子的穴盘,保持整个孢子萌发期间的湿度;
3、将播种好的孢子穴盘放入冷库,保持温度在18~22度之间,光照2000~5000LUX ;
4、大约12周后,孢子开始萌发;
5、16周后,孢子基本萌发完全。放入温室,保持温度18~25度之间,光照5000~7000Lux,保持湿度85~95% ;
6、18~20周左右,萌发的孢子开始长出小叶,这个时候可以去掉玻璃盖子或包着的薄
膜;
7、当长出3片左右的小叶时,可以开始分出波叶鸟巢蕨苗,进行移栽;
8、苗期是无法分出哪些苗具有波叶特征,哪些苗没有的。只能在上盆到更大盆后,才能发现,然后逐步筛选出来。
[0027] 表1列出了上述试验一至三和对照组中波叶鸟巢蕨生长的情况对照。
[0028]表1
Figure CN103548692AD00081
结果分析:由上表可知,采用本发明方法进行波叶鸟巢蕨进行培养时,和现有的孢子播种方法进行波叶鸟巢蕨进行培养相比,在小苗繁殖时间上大为缩短;长成后得到的整齐波叶数量比例由60%上升到94%以上;在出现变异苗方面则比采用孢子播种法大为减少,由29%下降到6%以下。所以,本发明方法解决了现有的孢子播种波叶鸟巢,在苗期完全无法预知哪些苗具有变异或不整齐波叶特征的问题。对规模化种植者及种苗生产商来说,本发明有利于生产出整齐统一的波叶鸟巢,促使生产完全按照生产计划进行变成可能。
[0029] 本发明可应用于鸟巢蕨培育领域。

Claims (10)

1.一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,该方法包括以下步骤: (1)诱导与分化:取波叶鸟巢蕨根状茎为外植体并进行无菌处理,取经过无菌处理的根状茎切成若干块状并放入MS培养基中进行培养,培养温度为24~26°C,光照1800~20001ux,光照时间为每天12h,培养16~18周时间,可见切口处分化出小颗粒状的原球茎; (2)无菌苗的增殖培养:取上述原球茎置于MS培养基中,培养3~4周,培养温度为24~26°C,光照2200~26001ux,光照时间为每天12h,每个原球茎分化出3~4个新的原球茎; (3)无菌苗的移栽驯化:将原球茎置于MS培养基I中培养3~4周,每颗原球茎长出I~3棵小苗,再将长出的每棵小苗置于MS培养基II中培养3~4周,即进行移栽驯化,洗净无菌苗根部的培养液并移栽进泥炭土和珍珠岩组成的基质内,保持温度为18~28°C,光照 5000 ~7000Lux。
2.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(I)中,对波叶鸟巢蕨根状茎进行无菌处理的步骤为:剥干净根状茎外面的叶鞘和毛鳞,用75%的酒精处理10秒,再在0.1 %的升汞溶液中浸泡8~10分钟后取出,最后用无菌水冲洗4~5次。
3.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(I)中的MS培养基中加入有BA和IAA,MS培养基中的BA的浓度为0.5~1.5mg/L, IAA的浓度为I~3mg/L,所述鸟巢蕨根状茎切成的块状长度为0.3cm。
4.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(2)中,在所述MS培养基中加入有BA、KT和糖,MS培养基中的BA浓度为0.2~1.0mg/L、KT的浓度为0.1~0.5mg/L,糖的浓度为3%。
5.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(3)中,在所述MS培养基I中加入有活性炭和糖,MS培养基I中的活性炭的浓度为2g/L,糖的浓度为3%。
6.根据权利要求5所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(3)中,在所述MS培养基II中加入有IBA和糖,MS培养基II中的IBA的浓度为lmg/L,糖的浓度为3%。
7.根据权利要求6所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,经过所述MS培养基I培养后,每颗原球茎长出的小苗高0.5厘米,在经过所述MS培养基II培养后,每颗小苗长成I~1.5厘米高,并有二至三条黑色小须根。
8.根据权利要求7所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,该方法还包括以下步骤:在移栽前3~4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件。
9.根据权利要求8所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,所述步骤(3)中的泥炭土和珍珠岩的质量比为4:1。
10.根据权利要求8所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法,其特征在于,该方法还包括以下步骤:移栽 后的第一周用无纺布覆盖,控制湿度85~95%,保持叶表面水雾不干。
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