CN103548692A

CN103548692A - 一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法

Info

Publication number: CN103548692A
Application number: CN201310536914.5A
Authority: CN
Inventors: 金剑平; 徐红; 姚慧芬; 文方德
Original assignee: ZHUHAI HORTICULTURAL INSTITUTE
Current assignee: ZHUHAI HORTICULTURAL INSTITUTE; Zhuhai Institute of Horticulture
Priority date: 2013-11-04
Filing date: 2013-11-04
Publication date: 2014-02-05
Anticipated expiration: 2033-11-04
Also published as: CN103548692B

Abstract

本发明公开了一种繁殖速度快、成本低且能保持波叶鸟巢蕨叶片整齐统一波浪形状的组培方法。本发明包括以下步骤：（1）从波叶鸟巢蕨根状茎上诱导并分化出小颗粒状的原球茎；（2）取上述原球茎置于MS培养基中进行培养，每个原球茎分化出3～4个新的原球茎，进行无菌苗的增殖培养；（3）将原球茎置于MS培养

Description

一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及一种植物培养方法，尤其涉及一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法。

背景技术

鸟巢蕨是一种附生的蕨类植物，原生于亚洲东南部、澳大利亚东部、印度尼西亚、印度和非洲东部，又称巢蕨、山苏花、王冠蕨，为铁角蕨科，属多年生阴生草本观叶植物。近年来鸟巢蕨在观叶植物的应用中深受人们的喜爱。除了自然盆栽作为鲜切叶用于插花中供人们观赏外,鸟巢蕨还可以人工加工形成各种各样的形态,根据需要配置在不同位置形成不同的景观效应。这表明人们对鸟巢蕨的观赏要求越来越高。而波叶鸟巢维多利亚作为鸟巢蕨家族中的一员，其叶边缘优美的波浪形状，更是深受人们的喜爱。

在鸟巢蕨培植方面，以前大多是采用分株进行繁殖的方法。一棵鸟巢蕨一年只能繁殖出3～4棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场的需要。因此，目前鸟巢蕨的繁殖方法多采用孢子播种法以及组织培养法。而目前鸟巢蕨的组织培养法也是利用孢子为原材料进行快繁，具体工艺是：把经过消毒灭菌的孢子囊从孢子叶上切下,破碎取出孢子后接种到培养基上,孢子萌发较快,萌发率高。萌发后的原叶体接种到不添加激素的MS培养基上能得到较大的增殖系数。无论是孢子播种法还是利用孢子为原材料进行的组织培养法，都能快速的得到大量鸟巢蕨苗。但是对于波叶鸟巢蕨，孢子繁殖和利用孢子为原材料进行的快繁苗都有30%左右无法继承波叶鸟巢叶片本身的漂亮的波浪纹，剩下的70%波浪纹也不是很统一，有大波浪，小波浪，因此种植过程中需要进行筛选才能得到整齐统一的波叶鸟巢。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本低且能保持波叶鸟巢蕨叶片整齐统一波浪形状的组培方法。

本发明所采用的技术方案是，该方法包括以下步骤：

（1）诱导与分化：取波叶鸟巢蕨根状茎为外植体并进行无菌处理，取经过无菌处理的根状茎切成若干块状并放入MS培养基中进行培养，培养温度为24～26℃，光照1800～2000lux，光照时间为每天12h，培养16～18周时间，可见切口处分化出小颗粒状的原球茎；

（2）无菌苗的增殖培养：取上述原球茎置于MS培养基中，培养3～4周，培养温度为24～26℃，光照2200～2600lux，光照时间为每天12h，每个原球茎分化出3～4个新的原球茎；

（3）无菌苗的移栽驯化：将原球茎置于MS培养基

中培养3～4周，每颗原球茎长出1～3棵小苗，再将长出的每棵小苗置于MS培养基

中培养3～4周，即进行移栽驯化，洗净无菌苗根部的培养液并移栽进泥炭土和珍珠岩组成的基质内，保持温度为18～28℃，光照5000～7000Lux。

进一步地，在所述步骤（1）中，对波叶鸟巢蕨根状茎进行无菌处理的步骤为：剥干净根状茎外面的叶鞘和毛鳞，用75％的酒精处理10秒，再在0.1％的升汞溶液中浸泡8～10分钟后取出，最后用无菌水冲洗4～5次。

进一步地，在所述步骤（1）中的MS培养基中加入有BA和IAA，MS培养基中的BA的浓度为 0.5～1.5mg/L，IAA的浓度为 1～3mg/L，所述鸟巢蕨根状茎切成的块状长度为0.3cm。

进一步地，在所述步骤（2）中，在所述MS培养基中加入有BA、KT和糖，MS培养基中的BA浓度为 0.2～1.0mg/L、KT的浓度为 0.1～0.5mg/L，糖的浓度为3％。

进一步地，在所述步骤（3）中，在所述MS培养基

中加入有活性炭和糖，MS培养基

中的活性炭的浓度为2g/L，糖的浓度为3％。

进一步地，在所述步骤（3）中，在所述MS培养基

中加入有IBA和糖，MS培养基

中的IBA的浓度为1mg/L，糖的浓度为3％。

进一步地，经过所述MS培养基

培养后，每颗原球茎长出的小苗高0.5厘米，在经过所述MS培养基

培养后，每颗小苗长成1～1.5厘米高，并有二至三条黑色小须根。

更进一步地，该方法还包括以下步骤：在移栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件。

更进一步地，所述步骤（3）中的泥炭土和珍珠岩的质量比为4:1。

更进一步地，该方法还包括以下步骤：移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85～95％，保持叶表面水雾不干。

本发明的有益效果是：本发明先采用加入有BA和IAA的MS培养基，可以有效促进波叶鸟巢蕨的根状茎分化出原球茎；采用BA、KT和糖为的MS作为增殖培养基，原球茎能旺盛增殖；最后原球茎置于无激素，含有糖和活性炭的MS培养基中培养四周即可快速长出小苗，小苗置于含有IBA和糖的MS培养基中培养可快速生根。本发明通过利用根状茎直接诱导出原球茎，原球茎又直接快速增殖长出小苗，简化培养条件和培养工艺，可以降低生产成本，保持苗的整体叶子波浪形状的统一性，因此本发明的波叶鸟巢蕨的快繁方法繁殖速度快，成本低，保持形状统一，减少后期的筛选工作。

具体实施方式

本发明公开了一种波叶鸟巢蕨的组培快繁方法。以下列出三个试验过程对本发明方法作进一步的说明。

试验一：

（一）诱导和分化

（1）取波叶鸟巢根状茎作为外植体；

（2）将所述根状茎剥干净外面的叶鞘及毛鳞，先用75%的酒精处理10秒，再在0.1%的升汞溶液中浸泡8～10分钟取出，然后用无菌水冲洗4～5次；

（3）取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块，放入加有BA 0.5mg/L和IAA 1.0mg/L的MS培养基中，培养温度为24～26度，光照1800～2000lux，光照时间每天12小时，培养16～18周后，可见切口处分化出小颗粒的原球茎。

（二）无菌苗的增殖培养

取一颗一颗的原球茎置于BA 0.2mg/L和KT 0.1mg/L，糖为3%的MS培养基中，培养4周后，每个原球茎可多分化出3～4个新的原球茎；培养温度要求：24～26度，光照2500lux，每天光照12小时。

（三）无菌苗的移栽驯化

（1）所述原球茎置于无激素，糖3%，活性炭2g/L的MS培养基中培养4周后，每颗原球茎开始长出1～3棵0.5厘米小苗，再将小苗置于IBA 1mg/L，糖3%的MS培养基中培养4周，每棵苗长成1～1.5厘米的小苗，并有两三条黑色的小须根，可进行移栽驯化；

（2）栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件；

（3）洗净所述无菌苗根部的培养基液并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:1的基质内；

（4）保持温度为18～28度，光照5000～7000Lux，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85～95%，保持叶表面水雾不干。

试验二：

（一）诱导和分化

（1）取波叶鸟巢根状茎作为外植体；

（3）取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块，放入加有BA 1.0mg/L和IAA 2.0mg/L的MS培养基中，培养温度为24～26度，光照1800～2000lux，光照时间每天12小时，培养16～18周后，可见切口处分化出小颗粒的原球茎。

（二）无菌苗的增殖培养

取一颗一颗的原球茎置于BA 0.6mg/L和KT 0.3mg/L，糖为3%的MS培养基中，培养4周后，每个原球茎可多分化出3～4个新的原球茎；培养温度要求：24～26度，光照2500lux，每天光照12小时。

（三）无菌苗的移栽驯化

（2）栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件；

试验三：

（一）诱导和分化

（1）取波叶鸟巢根状茎作为外植体；

（3）取经升汞消毒后的所述根状茎切成约0.3cm长的小块，放入加有BA 1.5mg/L和IAA 3.0mg/L的MS培养基中，培养温度为24～86度，光照1800～2000lux，光照时间每天12小时，培养16～18周后，可见切口处分化出小颗粒的原球茎。

（二）无菌苗的增殖培养

取一颗一颗的原球茎置于BA 1.0mg/L和KT 0.5mg/L，糖为3%的MS培养基中，培养4周后，每个原球茎可多分化出3～4个新的原球茎；培养温度要求：24～26度，光照2500lux，每天光照12小时。

（三）无菌苗的移栽驯化

（2）栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件；

对照组：孢子播种

1、选取形状优美，无异形叶片的波叶鸟巢，收集孢子；

2、将所收集的孢子播种在装有湿润的泥炭土的穴盘表面，并用玻璃盖子盖好或薄膜包好播种了孢子的穴盘，保持整个孢子萌发期间的湿度；

3、将播种好的孢子穴盘放入冷库，保持温度在18～22度之间，光照2000～5000LUX；

4、大约12周后，孢子开始萌发；

5、16周后，孢子基本萌发完全。放入温室，保持温度18～25度之间，光照5000～7000Lux,保持湿度85～95%；

6、18～20周左右，萌发的孢子开始长出小叶，这个时候可以去掉玻璃盖子或包着的薄膜；

7、当长出3片左右的小叶时，可以开始分出波叶鸟巢蕨苗，进行移栽；

8、苗期是无法分出哪些苗具有波叶特征，哪些苗没有的。只能在上盆到更大盆后，才能发现，然后逐步筛选出来。

表1列出了上述试验一至三和对照组中波叶鸟巢蕨生长的情况对照。

表1

Figure 2013105369145100002DEST_PATH_IMAGE003

结果分析：由上表可知，采用本发明方法进行波叶鸟巢蕨进行培养时，和现有的孢子播种方法进行波叶鸟巢蕨进行培养相比，在小苗繁殖时间上大为缩短；长成后得到的整齐波叶数量比例由60％上升到94％以上；在出现变异苗方面则比采用孢子播种法大为减少，由29％下降到6％以下。所以，本发明方法解决了现有的孢子播种波叶鸟巢，在苗期完全无法预知哪些苗具有变异或不整齐波叶特征的问题。对规模化种植者及种苗生产商来说，本发明有利于生产出整齐统一的波叶鸟巢，促使生产完全按照生产计划进行变成可能。

本发明可应用于鸟巢蕨培育领域。

Claims

1.一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（3）无菌苗的移栽驯化：将原球茎置于MS培养基

Figure 2013105369145100001DEST_PATH_IMAGE004

2.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（1）中，对波叶鸟巢蕨根状茎进行无菌处理的步骤为：剥干净根状茎外面的叶鞘和毛鳞，用75％的酒精处理10秒，再在0.1％的升汞溶液中浸泡8～10分钟后取出，最后用无菌水冲洗4～5次。

3.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（1）中的MS培养基中加入有BA和IAA，MS培养基中的BA的浓度为 0.5～1.5mg/L，IAA的浓度为 1～3mg/L，所述鸟巢蕨根状茎切成的块状长度为0.3cm。

4.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（2）中，在所述MS培养基中加入有BA、KT和糖，MS培养基中的BA浓度为 0.2～1.0mg/L、KT的浓度为 0.1～0.5mg/L，糖的浓度为3％。

5.根据权利要求1所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（3）中，在所述MS培养基

中加入有活性炭和糖，MS培养基

中的活性炭的浓度为2g/L，糖的浓度为3％。

6.根据权利要求5所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（3）中，在所述MS培养基

中加入有IBA和糖，MS培养基

中的IBA的浓度为1mg/L，糖的浓度为3％。

7.根据权利要求6所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，经过所述MS培养基

8.根据权利要求7所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：在移栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件。

9.根据权利要求8所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（3）中的泥炭土和珍珠岩的质量比为4:1。

10.根据权利要求8所述的一种波叶鸟巢蕨种苗的组培快繁方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85～95％，保持叶表面水雾不干。