CN102119656A - 鸟巢蕨孢子萌发育种方法 - Google Patents

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鸟巢蕨孢子萌发育种方法，将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加0.2～1.0mg GA3，蔗糖20～60g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为3～5mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成。

Description

鸟巢蕨孢子萌发育种方法
技术领域
本发明属于花卉栽培技术领域，特别是蕨类植物繁殖技术领域。
背景技术
鸟巢蕨(Neottopteris nidus)多年生常绿大型附生植物。叶丛生于根状茎顶部外缘，向四周辐射状排列，叶丛中心空如鸟巢。其孢子囊群生于侧脉的上侧，向叶边伸达1/2。原产热带、亚热带地区。喜温暖、阴湿，不耐寒，宜疏松、排水及保水皆好的土壤。鸟巢蕨通常用分株法和孢子播种繁殖，分株繁殖简单易行，但易损坏株形，恢复很慢并且受季节限制；孢子播种时孢子萌发率很低，很难分化出苗，不容易得到大量种苗。目前，也有使用组织培养技术进行繁殖的，但是成本高，培养程序繁锁。探索一个快速有效的鸟巢蕨孢子萌发育种技术势在必行。
发明内容
本发明旨在解决现有技术的缺陷，提供一种鸟巢蕨孢子萌发技术。
鸟巢蕨孢子萌发育种方法，其特征在于：将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加0.2～1.0mg GA3，蔗糖20～60g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为3～5mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到装有移栽基质的穴盘中炼苗，栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
所述的初培养基中蔗糖的添加量为30g/L。
所述的无菌处理是将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来浸泡于2％次氯酸钠水溶液中消毒15分钟后，用无菌水冲洗。
所述的移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。
本发明的有益效果是：本发明采用液体浅层静置培养法，将孢子播种技术和组织培养技术相结合，大大提高了孢子萌发率、孢子体萌发率及鸟巢蕨小苗的成活率，缩短了培养时间，为鸟巢蕨的规模化生产提供了一条有效的途径。
具体实施方式
用本发明方法为试验组，以固体培养基培养方法作对照组。
例1(试验组)
将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加0.2mg GA3，蔗糖20g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为3mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到穴盘中炼苗，移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
例2(试验组)
将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水，配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加0.5mg GA3，蔗糖60g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为5mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到穴盘中炼苗，移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
例3(试验组)
将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水，配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加1.0mg GA3，蔗糖30g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为4mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到穴盘中炼苗，移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
对照组(固体培养基培养方法)
将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水，配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液。将0.5ml上述无菌孢子悬浊液均匀洒在培养基表面上进行培养。培养基为每升添加蔗糖30g，琼脂6g，pH值为5.8～6.0的MS固体培养基。培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到穴盘中炼苗，移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
结果分析
采用试验组方法孢子萌发时间较对照组短，其中以例3最短，为8天，比对照组缩短了5天，并且萌发率提高了12.92％。同时，片状体及孢子体形成时间也缩短了。虽然孢子体百分率相近，但是孢子体苗的品质差异很大。采用试验组方法培养的孢子体苗生长势强，转接后25天左右形成大量整齐、健壮的带有根系的鸟巢蕨小苗，小苗根系根棕褐色，不定根丰富；而采用对照组方法培养的孢子体苗转接后，35天左右才形成鸟巢蕨小苗，鸟巢蕨小苗长势不一致，根系褐色偏黑。
表1  鸟巢蕨孢子萌发和生长情况
Figure BSA00000339834500021
鸟巢蕨小苗炼苗移栽后，试验组的小苗成活率达95.7％，对照组的小苗成活率为89.3％，提高了近7个百分点。

Claims (4)

1.鸟巢蕨孢子萌发育种方法，其特征在于：将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来，进行无菌处理，加入无菌水配成密度为1500～2000个/毫升的无菌孢子悬浊液；将上述无菌孢子悬浊液与初培养基按1∶4比例混合，初培养基为每升添加0.2～1.0mg GA3，蔗糖20～60g，琼脂6g，pH为5.8～6.0的MS培养基；混合均匀后倒平板，平板厚度为3～5mm，凝固后，切成每份含600～800个孢子的薄片；将上述薄片放入加入MS液体培养基的培养皿中培养，培养条件为温度23～25℃，光照强度1500～2000Lx，每天16小时光照，直到孢子体苗形成；待孢子体苗形成后，将孢子体苗转移到每升添加30g蔗糖，pH为5.8～6.0的MS液体培养基中继续培养，每10天换一次培养基；当小苗长出3～6片叶子且根系发达时，移栽到装有移栽基质的穴盘中炼苗，栽培条件为温度22～25℃，相对湿度70％以上。
2.根据权利要求1所述的鸟巢蕨孢子萌发育种方法，其特征在于：所述的初培养基中蔗糖的添加量为30g/L。
3.根据权利要求1所述的鸟巢蕨孢子萌发育种方法，其特征在于：所述的无菌处理是将收集的鸟巢蕨孢子用沙布包起来浸泡于2％次氯酸钠水溶液中消毒15分钟后，用无菌水冲洗。
4.根据权利要求1所述的鸟巢蕨孢子萌发育种方法，其特征在于：所述的移栽基质为草炭土和河沙的混合基质，体积比为2∶1。
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