CN102792893A - 迷人杜鹃的组培繁殖方法 - Google Patents

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提供迷人杜鹃的组培快繁方法。选取迷人杜鹃的种子为外植体，经丛生芽诱导、壮苗并生根培养和试管苗移栽。培养的温度为20-23℃，湿度为30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。使用该方法可达到一个无菌苗诱导4-5或者更多的丛生芽，生根率达77%，移栽成活率达99%以上，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖能力，为迷人杜鹃的保存和规模化生产提供了技术支撑。

Description

迷人杜鹃的组培繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物生物技术领域，具体地说，涉及杜鹃花迷人杜鹃的组织培养快繁方法。
背景技术：
迷人杜鹃Rhododendron agastum是云南野生杜鹃花的自然杂交种。迷人杜鹃隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron)常绿杜鹃亚属，常绿灌木至小乔木。迷人杜鹃的花粉红至深粉红色，花筒内有或多或少的斑点，花色鲜艳，具有较高的观赏价值，经申请人多年的研究，已证明迷人杜鹃为马缨杜鹃和大白花杜鹃的自然杂交种，见文章“Natural hybridization origin of Rhododendronagastum(Ericaceae)in Yunnan,China:inferred frommorphological and molecular evidence”发表于《Journal of PlantResearch》(2007)120:457–463。由于迷人杜鹃为马缨杜鹃和大白花杜鹃的自然杂交种，且经过申请人多年试验，迷人杜鹃的种子成苗和扦插较为困难。迄今，迷人杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的报道，为了使迷人杜鹃优良的特性能够保存和可持续利用，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。
发明内容：
本发明的目的是提供迷人杜鹃的组织培养方法，使之在生根扦插困难的情况下能够繁衍，使该品种的优良性状的保存能够得到保障，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽率，为迷人杜鹃的可持续利用提供组培种苗繁育技术。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
迷人杜鹃的组培繁殖方法，包括外植体消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，其特征在于取迷人杜鹃的种子进行丛生芽诱导、壮苗、生根培养，培养的温度为20-23℃，湿度为30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX；所述的种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA，丛生芽诱导培养基为改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，pH5.7，壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/L NAA，其中改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
所述外植体消毒先用5%的洗衣粉水，浸泡清洗10min，用无菌水冲洗至无泡沫，后用70%的酒精消毒40s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。
所述移栽是组培苗在培养瓶内生根培养45天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚中。
所述移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.5。
所述移栽在上午8-11点，温度为18-25℃下进行。
本发明的方法可具体描述为：取迷人杜鹃种子为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75%酒精消毒40s，后用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/L NAA，pH5.7，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，其中改良Anderson培养基为NH4NO3减半，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/LNAA，45天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，在上午8-11点，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.7，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础：迷人杜鹃为杜鹃花自然杂交种，色彩艳丽丰富，但迷人杜鹃的生根难度较大，扦插几乎不生根，为了解决其大量繁殖、保存和可持续利用，故此发明迷人杜鹃组织培养的技术。组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且移栽生长良好且能保持其优良性状不变。试管苗移栽的温度控制在18-23℃，最好在早上8-11点进行移栽，组培苗虽然在生长过程中很少受病虫害的浸染，但为了预防病虫害的发生，在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果2-3次为宜。夏季要注意通风。
本发明的组培方法优点在于：
1、建立了有效的迷人杜鹃组培快繁方法，解决了其生根困难，繁殖受阻的状况。
2、通过组培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性强，生长健壮,叶色浓绿，很少病虫害，易于管理。
3、利用组培快繁方法繁殖的迷人杜鹃不受季节限制，任何时候都可以进行组培。
4、利用组培快繁的方法繁殖的迷人杜鹃可以保持物种特性，使该自然杂交种能够延续和可持续利用。
5、通过本发明的组培快繁方法繁育的迷人杜鹃在1个月内增殖系数为4-5，生根率达70%，移栽成活率达99%以上，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
具体实施方式：
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
选取迷人杜鹃Rhododendron agastum(Ericaceae)的种子（采自于云南省师宗县菌子山）为外植体，用5%的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70%的酒精消毒40s，无菌水冲洗3遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/L NAA，pH5.7，温度20℃，湿度30%，光照条件为自然光2000LUX+人工辅助光1500LUX下培养，长出无菌苗后转接入改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/LNAA中进行增殖，再将长到3cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良1/2Anderson+1mg/L NAA，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗一周后，在早上11点，温度为18℃下进行移栽，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.7，湿度50%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
通过上述的组培快繁方法繁育的迷人杜鹃在1个月内增殖系数为4，生根率为71%，移栽成活率为99%，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
实施例2：
选取迷人杜鹃Rhododendron agastum(Ericaceae)的种子（采自于云南省师宗县菌子山）为外植体，用5%的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70%的酒精消毒40s，无菌水冲洗5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗5遍，用无菌滤纸吸干种子表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/L NAA，pH5.7，温度23℃，湿度45%，光照条件为自然光2500LUX+人工辅助光2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行增殖，再将长到2cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良1/2Anderson+1mg/L NAA，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗一周后，组培苗炼苗一周后，在早上10点，温度为25℃下进行移栽，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.5，湿度60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
通过上述的组培快繁方法繁育的迷人杜鹃在1个月内增殖系数为5，生根率为77%，移栽成活率为99%，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。

Claims (6)

1.迷人杜鹃的组培繁殖方法，包括外植体消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，其特征在于取迷人杜鹃的种子，进行丛生芽诱导、壮苗、生根培养，培养的温度为20-23℃，湿度为30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX；所述的种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/LNAA，丛生芽诱导培养基为改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，pH5.7，壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/L NAA，其中改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
2.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述外植体消毒是迷人杜鹃种子，先用5%洗衣粉水浸泡清洗10min，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75%的酒精消毒40s，无菌水冲洗3遍后再用0.1%升汞溶液进行表面消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。
3.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述移栽是生根组培苗在培养瓶内培养45天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚。
4.根据权利要求1所述组培繁殖方法，其特征在于所述移栽的移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.7。
5.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述移栽在早上8-11点，温度为18-25℃下进行。
6.根据权利要求书1-5中的任意一项所述的组培繁殖方法，其特征在于取迷人杜鹃种子为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75%酒精消毒40s，后用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/L NAA，pH5.7，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，其中改良Anderson培养基为NH4NO3减半，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/L NAA，45天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，于上午8-11点移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.7，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
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