CN104365484A - 蝶花杜鹃的组培繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
提供蝶花杜鹃的组培繁殖方法，包括选取蝶花杜鹃的种子为外植体，消毒，经种子萌发、丛生芽诱导、壮苗并生根培养和试管苗移栽步骤。培养的温度均为20-23℃，湿度30-50％。光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。使用该方法可达到一个无菌苗诱导4-5或者更多的丛生芽，生根率达76％，移栽成活率94％，极大地提高了蝶花杜鹃的繁殖能力，为蝶花杜鹃的保存和规模化生产提供了技术支撑。
Description
技术领域：
本发明属于植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及杜鹃花蝶花杜鹃的组织培养快繁方法。
背景技术：
蝶花杜鹃Rhododendron aberconwayi为云南省野生杜鹃花，属于杜鹃花科(Erieaceae)，杜鹃花属(Rhododendron)常绿杜鹃亚属，为常绿小灌木，高约1-1.5米。花冠开展成蝶形，白色或粉红色。植株丰满，低矮紧凑，具有较高的观赏价值。但在野外分布区域较窄，生长环境受到严重破坏，已被《The Red List of Rhododendrons》(2011版)列为易危VU(Vulnerable species)杜鹃花种类。经申请人的多年试验，蝶花杜鹃的种子成苗和扦插较为困难。迄今，蝶花杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道，为了使蝶花杜鹃优良的特性能够保存和可持续利用，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。
发明内容：
本发明的目的是提供蝶花杜鹃的组织培养方法，使之在种苗成苗和扦插生根困难的情况下能够繁衍，使该物种的保存能够得到保障，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽率，为蝶花杜鹃的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。
为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：
蝶花杜鹃的组培繁殖方法，包括选择外植体，消毒，经种子萌发、丛生芽诱导、壮苗并生根培养，试管苗移栽步骤，外植体取蝶花杜鹃的种子，种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA，丛生芽诱导培养基为1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/L IAA+1.0mg/L KT，pH5.4-5.6；壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA，生根培养基为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述外植体消毒先用5％洗衣粉水浸泡清洗10min，再用无菌水冲洗3-5遍至无泡沫，然后采用75％的酒精消毒40s，无菌水冲洗3遍后再用0.1％升汞溶液进行表面消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度均为20-23℃，湿度30-50％。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件均为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述的试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养40天，炼苗7天后，移栽于温室大棚。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述的试管苗移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.6。
根据所述的组培繁殖方法，其中所述的试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25℃下进行。
本发明的蝶花杜鹃的组培繁殖方法可以具体地描述为：选取蝶花杜鹃种子为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡10分钟后，反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75％酒精消毒40s，再用0.1％升汞溶液消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/l NAA，pH5.4-5.6，温度20-23℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入丛生芽诱导培养基1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/L IAA+1.0mg/L KT中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，40天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.6，湿度50-60％的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础：蝶花杜鹃为云南野生杜鹃花，为常绿小灌木，高约1-1.5米，花冠展开成蝶形，白色或粉红色，花淡雅美丽，株形紧凑美观，但蝶花杜鹃的生根难度较大，扦插几乎不生根，为了解决其大量繁殖、保存和可持续利用，故此发明蝶花杜鹃组织培养的技术。组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且移栽生长良好且能保持其优良性状不变。试管苗移栽的温度控制在18-23℃，最好在早上8-11点进行移栽，组培苗虽然在生长过程中很少受病虫害的侵染，但为了预防病虫害的发生，在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果2-3次为宜。夏季要注意通风。
本发明蝶花杜鹃的组培繁殖方法的优点在于：
1、建立了有效的蝶花杜鹃组培快繁方法，解决了其生根困难，繁殖受阻的状况。
2、通过组培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性强，生长健壮，叶色浓绿，很少病虫害，易于管理。
3、利用组培快繁方法繁殖的蝶花杜鹃不受季节限制，任何时候都可以进行组培。
4、利用组培快繁的方法繁殖的蝶花杜鹃可以保持物种特性，使该新种能够延续和可持续利用。
5、通过本发明的组培快繁方法繁育的蝶花杜鹃在1个月内增殖系数为4-5，生根率为76％，移栽成活率为94％，极大地提高了蝶花杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
具体实施方式:
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
品种来源：蝶花杜鹃是云南省野生杜鹃花，蝶花杜鹃(R.aberconwayi)属于杜鹃花科(Erieaceae)，杜鹃花属(Rhododendron L.)，常绿杜鹃组(Sect.Ponticum G.Don)，露珠杜鹃亚组(Subsect.Irrorata Sleumer)，常绿小灌木，高约1-1.5米。蝶花杜鹃的花白色或粉红色，花冠展开成蝶形。植株丰满，低矮紧凑，株形美观，具有较高的观赏价值。但在野外分布区域较窄，生长环境受到严重破坏，已被《The Red List of Rhododendrons》(2011版)列为易危VU(Vulnerable species)杜鹃花种类。
选取蝶花杜鹃的种子(采自于云南省云南楚雄州禄丰县，经纬度N25°10′，E102°01′，2012年12月)为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70％的酒精消毒40s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/lNAA，pH5.4，温度20℃，湿度30％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/L IAA+1.0mg/LKT中进行增殖，再将长到2cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4湿度50％的大棚内，每天早晚各喷水一次。
所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
通过上述的组培快繁方法繁育的蝶花杜鹃在1个月内增殖系数为4，生根率为75％，移栽成活率为93％，极大地提高了蝶花杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
实施例2：
选取蝶花杜鹃的种子(采自于云南省云南楚雄州禄丰县，经纬度N25°10′，E102°01′，2012年12月)为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70％的酒精消毒40s，无菌水冲洗5遍后，用0.1％升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗5遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/lNAA，pH5.6，温度23℃，湿度50％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/L IAA+1.0mg/LKT中进行增殖，再将长到2-3cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.6湿度60％的大棚内，每天早晚各喷水一次。
所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
通过上述的组培快繁方法繁育的蝶花杜鹃在1个月内增殖系数为5，生根率为77％，移栽成活率为95％，极大地提高了蝶花杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
Claims (8)
1.蝶花杜鹃的组培繁殖方法，包括选择外植体，消毒，经种子萌发、丛生芽诱导、壮苗并生根培养，试管苗移栽步骤，其特征在于外植体取蝶花杜鹃的种子，种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA，丛生芽诱导培养基为1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/LIAA+1.0mg/L KT，pH5.4-5.6；壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA，生根培养基为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
2.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述外植体消毒先用5％洗衣粉水浸泡清洗10min，再用无菌水冲洗3-5遍至无泡沫，然后采用75％的酒精消毒40s，无菌水冲洗3遍后再用0.1％升汞溶液进行表面消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。
3.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度均为20-23℃，湿度30-50％。
4.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件均为自然光2000‐2500LUX+人工辅助光1500‐2000LUX。
5.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述的试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养40天，炼苗7天后，移栽于温室大棚。
6.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述的试管苗移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.6。
7.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述的试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25℃下进行。
8.根据权利要求书1-7中的任意一项所述的组培繁殖方法，其特征在于选取蝶花杜鹃种子为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡10分钟后，反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75％酒精消毒40s，再用0.1％升汞溶液消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/lNAA，pH5.4-5.6，温度20-23℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000‐2500LUX+人工辅助光1500‐2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入丛生芽诱导培养基1/4MS+3.5mg/L ZT+0.2mg/L IAA+1.0mg/L KT中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.2mg/L ZT+1mg/l NAA+0.5g/L AC，40天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.6，湿度50-60％的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
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| CN108575730A (zh) * | 2018-05-02 | 2018-09-28 | 武汉市农业科学院 | 一种结合远缘杂交和组织培养高效创制杜鹃新种质的方法 |
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