CN103392599B - 岩白菜嫩叶组培快繁方法 - Google Patents

岩白菜嫩叶组培快繁方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103392599B
CN103392599B CN201310319683.2A CN201310319683A CN103392599B CN 103392599 B CN103392599 B CN 103392599B CN 201310319683 A CN201310319683 A CN 201310319683A CN 103392599 B CN103392599 B CN 103392599B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
thoms
engl
hook
callus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201310319683.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103392599A (zh
Inventor
王仕玉
郭凤根
李文春
龙雯虹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Agricultural University
Original Assignee
Yunnan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Agricultural University filed Critical Yunnan Agricultural University
Priority to CN201310319683.2A priority Critical patent/CN103392599B/zh
Publication of CN103392599A publication Critical patent/CN103392599A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103392599B publication Critical patent/CN103392599B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明涉及一种岩白菜嫩叶组培快繁方法。岩白菜于自然野生条件下出苗率低和根状茎繁殖系数低；而播种育苗出苗率低，繁殖系数低；扦插育苗会消耗掉部分产品器官，造成生产效率下降。本方法包括以下步骤：外植体的取材和消毒灭菌、愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、芽增殖培养、生根培养、炼苗移栽。本发明还提供了本方法所使用的培养基的组分配比。本发明将岩白菜嫩叶组培成苗，不仅比种子和根状茎易获取，且繁殖系数高，不受季节气候限制，可随时满足生产用苗；同时，嫩叶愈伤组织诱导可适用于各种叶用药物成分的工厂化生产；另外，本方法结合人工诱变和转基因技术，可创新种质，为岩白菜新品种培育奠定基础。

Description

岩白菜嫩叶组培快繁方法
技术领域
本发明涉及一种岩白菜嫩叶组培快繁方法，属于植物组织培养领域，具体为植物器官快繁培养。
背景技术
岩白菜[Bergenia purpurascens(Hook.f.et Thoms.)Engl.]为虎耳草科（Saxifragaceae）岩白菜属（Bergenia）的多年生草本植物，具有药用、提取化妆品增白剂和观赏等开发利用价值。单独依靠大量野生采挖已不能满足其原材料供给和可持续发展需求，因此岩白菜的驯化栽培近年已逐渐引起重视。目前，岩白菜的种苗繁育多采用播种育苗和扦插育苗两种方法。岩白菜种子为明发种子，无后熟休眠性，比较细小，千粒重仅为0.13g，自然播种出苗率低，仅为22.5％，而实际自然野生条件下更低，因为岩白菜自然分布都在海拔较高的冷凉山区，9-10月种子成熟撒落时萌发的种子幼苗很难在较恶劣的自然野生环境下存活，故野生实生种子苗较少，主要靠匍匐根状茎长出新的植株来扩繁后代。根状茎扦插易成活，可达97.2％，但繁殖系数低且消耗大量主要产品器官。
组织培养技术具有外植体来源广泛，繁殖系数高等优点，可以解决岩白菜种子繁殖成苗率低和扦插繁殖需要大量根状茎的难题。
岩白菜属植物共有十种，目前仅厚叶岩白菜[B.crassifolia(L.)Fritsch]一个种有组培快繁的报道，即新疆维吾尔自治区中药民族药研究所以其茎尖（朱军等，2012）、中国科学院新疆理化技术研究所以其叶片（刘敏等，2009）建立了离体快繁再生体系。其他有关岩白菜的组培研究未见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何克服岩白菜种子出苗率低和根状茎繁殖系数低等均不利于种苗快速大量繁育的缺陷，提供一种岩白菜嫩叶组培快繁方法。
为解决上述技术问题，本岩白菜嫩叶组培快繁方法包括以下步骤，
步骤1）：外植体的取材和消毒灭菌
选取健康、新鲜的未展或初展开嫩叶，用自来水冲洗干净，先用70%酒精消毒30s，再用0.1%升汞溶液灭菌6～7min，最后用无菌水冲洗3～4次，在超净台无菌条件下将叶片切成约1.0cm2的方块作为待接种用外植体；
步骤2）：愈伤组织诱导培养
将由步骤1）得到的大小约1.0cm2的叶块接种到愈伤组织诱导培养基上，在23℃恒温培养箱中，1500～2500Lx，光照12h/d培养，25～30d形成愈伤组织；
步骤3）：不定芽诱导培养
将由步骤2）得到的愈伤组织块转接至不定芽诱导培养基上，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15-20d形成不定芽；
步骤4）：芽增殖培养
将由步骤3）得到的丛生不定芽转接至芽增殖培养基中，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15～25d形成继代丛生芽，依丛生芽数量的需求，每隔20～25d依同法进行转接再增殖；
步骤5）：生根培养
将由步骤4）得到的、苗高2～3cm的无根苗转接至生根培养基上，在22±2℃，1500Lx，每天10～12h光照条件下培养25～30d，基部形成10条根以上，即成为生根组培苗；
步骤6）：炼苗移栽
瓶内炼苗：将由步骤5）得到的生根组培苗带瓶移出培养室外，在普通大棚内自然光照和温度条件下放置1周，然后打开瓶盖炼苗2～3d；
移栽炼苗：自来水洗净组培苗根部培养基，用灭菌和生根混合溶液浸泡根部30s至1min，稍沥干后移栽至珍珠岩和蛭石对半混合的基质中，注意喷雾保湿和避免强光照射，两周后进入常规管理，组培苗移栽成活率90%以上，继续培养1～2个月后即得岩白菜种苗。
作为优化，上述步骤2）中所述的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L+活性炭3g/L。
作为优化，上述步骤3）中所述的不定芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+活性炭3g/L。
作为优化，上述步骤4）中所述的芽增殖培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT2.0mg/L+活性炭3g/L。
作为优化，上述步骤5）中所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭3g/L。
作为优化，上述MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
本发明岩白菜嫩叶组培快繁方法将岩白菜嫩叶组培成苗，不仅比种子和根状茎易获取，且繁殖系数高，不受季节气候限制，可随时满足生产用苗；同时，嫩叶愈伤组织诱导可适用于各种叶用药物成分的工厂化生产；另外，本方法结合人工诱变和转基因技术，可创新种质，为岩白菜新品种培育奠定基础。
具体实施方式
步骤1）：外植体的取材和消毒灭菌
选取健康、新鲜的未展或初展开嫩叶，用自来水冲洗干净，先用70%酒精消毒30s，再用0.1%升汞溶液灭菌6～7min，最后用无菌水冲洗3～4次，在超净台无菌条件下将叶片切成约1.0cm2的方块作为待接种用外植体；
步骤2）：愈伤组织诱导培养
将由步骤1）得到的大小约1.0cm2的叶块接种到愈伤组织诱导培养基上，在23℃恒温培养箱中，1500～2500Lx，光照12h/d培养，25～30d形成愈伤组织；
所述的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L+活性炭3g/L；其中MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
步骤3）：不定芽诱导培养
将由步骤2）得到的愈伤组织块转接至不定芽诱导培养基上，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15-20d形成不定芽；
所述的不定芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+活性炭3g/L；其中MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
步骤4）：芽增殖培养
将由步骤3）得到的丛生不定芽转接至芽增殖培养基中，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15～25d形成继代丛生芽，依丛生芽数量的需求，每隔20～25d依同法进行转接再增殖；
所述的芽增殖培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT2.0mg/L+活性炭3g/L；其中MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
步骤5）：生根培养
将由步骤4）得到的、苗高2～3cm的无根苗转接至生根培养基上，在22±2℃，1500Lx，每天10～12h光照条件下培养25～30d，基部形成10条根以上，即成为生根组培苗；
所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭3g/L；其中MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
步骤6）：炼苗移栽
瓶内炼苗：将由步骤5）得到的生根组培苗带瓶移出培养室外，在普通大棚内自然光照和温度条件下放置1周，然后打开瓶盖炼苗2～3d；
移栽炼苗：自来水洗净组培苗根部培养基，用灭菌和生根混合溶液浸泡根部30s至1min，稍沥干后移栽至珍珠岩和蛭石对半混合的基质中，注意喷雾保湿和避免强光照射，两周后进入常规管理，组培苗移栽成活率90%以上，继续培养1～2个月后即得岩白菜种苗。
对比实验
1、嫩叶愈伤组织诱导：以MS基本培养基加入活性炭3g/L、蔗糖30g/L、琼脂条8g/L，pH5.5～6.0，添加下列不同激素配比，可诱导形成部分愈伤组织。
2、不定芽诱导培养基：添加蔗糖30g/L、琼脂条8g/L，pH5.5～6.0。
3、生根培养基配方：添加蔗糖30g/L、琼脂条8g/L，pH5.5-6.0。
由对比实验结构：本发明中的各培养基组分配比为最优方案。
上述实施方式旨在举例说明本发明可为本领域专业技术人员实现或使用，对上述实施方式进行修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，故本发明包括但不限于上述实施方式，任何符合本权利要求书或说明书描述，符合与本文所公开的原理和新颖性、创造性特点的方法、工艺、产品，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种岩白菜嫩叶组培快繁方法，其特征是：该方法包括以下步骤，
步骤1)：外植体的取材和消毒灭菌
选取健康、新鲜的未展或初展开嫩叶，用自来水冲洗干净，先用70％酒精消毒30s，再用0.1％升汞溶液灭菌6～7min，最后用无菌水冲洗3～4次，在超净台无菌条件下将叶片切成约1.0cm2的方块作为待接种用外植体；
步骤2)：愈伤组织诱导培养
将由步骤1)得到的大小约1.0cm2的叶块接种到愈伤组织诱导培养基上，在23℃恒温培养箱中，1500～2500Lx，光照12h/d培养，25～30d形成愈伤组织；
步骤3)：不定芽诱导培养
将由步骤2)得到的愈伤组织块转接至不定芽诱导培养基上，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15-20d形成不定芽；
步骤4)：芽增殖培养
将由步骤3)得到的丛生不定芽转接至芽增殖培养基中，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15～25d形成继代丛生芽，依丛生芽数量的需求，每隔20～25d依同法进行转接再增殖；
步骤5)：生根培养
将由步骤4)得到的、苗高2～3cm的无根苗转接至生根培养基上，在22±2℃，1500Lx，每天10～12h光照条件下培养25～30d，基部形成10条根以上，即成为生根组培苗；
步骤6)：炼苗移栽
瓶内炼苗：将由步骤5)得到的生根组培苗带瓶移出培养室外，在普通大棚内自然光照和温度条件下放置1周，然后打开瓶盖炼苗2～3d；
移栽炼苗：自来水洗净组培苗根部培养基，用灭菌和生根混合溶液浸泡根部30s至1min，稍沥干后移栽至珍珠岩和蛭石对半混合的基质中，注意喷雾保湿和避免强光照射，两周后进入常规管理，组培苗移栽成活率90％以上，继续培养1～2个月后即得岩白菜种苗；
步骤2)中所述的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA 0.4mg/L+活性炭3g/L；
步骤3)中所述的不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+活性炭3g/L；
步骤4)中所述的芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT 2.0mg/L+活性炭3g/L；
步骤5)中所述的生根培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭3g/L；
所述MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。
CN201310319683.2A 2013-07-26 2013-07-26 岩白菜嫩叶组培快繁方法 Expired - Fee Related CN103392599B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310319683.2A CN103392599B (zh) 2013-07-26 2013-07-26 岩白菜嫩叶组培快繁方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310319683.2A CN103392599B (zh) 2013-07-26 2013-07-26 岩白菜嫩叶组培快繁方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103392599A CN103392599A (zh) 2013-11-20
CN103392599B true CN103392599B (zh) 2015-03-25

Family

ID=49556514

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310319683.2A Expired - Fee Related CN103392599B (zh) 2013-07-26 2013-07-26 岩白菜嫩叶组培快繁方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103392599B (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105165621B (zh) * 2015-10-10 2017-04-26 内蒙古农业大学 香茶藨子茎尖再生扩繁的方法
CN106973795A (zh) * 2017-05-11 2017-07-25 上海市园林科学规划研究院 一种诱导厚叶岩白菜体细胞胚胎的方法
CN106962203B (zh) * 2017-05-23 2019-03-29 上海市园林科学规划研究院 一种生物组织培养制备秦岭岩白菜的方法
CN108243958A (zh) * 2018-01-08 2018-07-06 安康学院 一种鬼灯檠植株的培育方法
CN110432152A (zh) * 2019-09-12 2019-11-12 云南农业大学 一种冰菜组织快速繁育的方法
CN110972941A (zh) * 2019-12-07 2020-04-10 平顶山学院 一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法
CN111149674A (zh) * 2020-02-28 2020-05-15 科稷达隆生物技术有限公司 一种提高植物组培苗移栽成活率的培养方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101116425B (zh) * 2007-09-19 2010-08-18 中国科学院新疆理化技术研究所 一种用生物组织培养法制备厚叶岩白菜的方法
CN102524071B (zh) * 2012-01-16 2013-11-06 中国科学院新疆理化技术研究所 厚叶岩白菜组培苗低温保存方法
CN102948367B (zh) * 2012-03-16 2013-09-18 上海市园林科学研究所 厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103392599A (zh) 2013-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103392599B (zh) 岩白菜嫩叶组培快繁方法
CN102301951B (zh) 一种广豆根组织培养快速繁殖方法
Zeng et al. Asymbiotic seed germination, induction of calli and protocorm-like bodies, and in vitro seedling development of the rare and endangered Nothodoritis zhejiangensis Chinese orchid
Scherwinski-Pereira et al. Double-phase culture system for large scale production of pineapple
CN101965796B (zh) 一种岩生报春组织培养与快速繁殖方法
CN101946703A (zh) 以叶片为外植体的月季再生植株的方法
CN102907326B (zh) 德钦野生紫花苜蓿组培繁殖方法
CN107027627B (zh) 一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法
CN101103702A (zh) 花楸离体繁殖的方法
CN101810144B (zh) 瓜叶菊的快速繁殖方法
CN102893872A (zh) 一种香根鸢尾驯化苗的组培方法
CN106818468A (zh) 一种艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法
CN106165648B (zh) 一种紫荆组培培养基及培养方法
CN101564009B (zh) 一种保持甘蓝rgms雄性不育系的繁殖方法
CN101015280B (zh) 滇北球花报春的组培快繁方法
CN109122312A (zh) 一种使报春石斛种子快速繁殖成苗的培养基及方法
CN105900837B (zh) 一种通过悬浮培养快速繁育铁兰种苗的方法
CN101743908A (zh) 红花银桦组培快繁及栽培方法
CN1918972B (zh) 羌活组织培养繁殖方法
CN102228006B (zh) 金荞麦组织培养快速育苗方法
CN109757231A (zh) 一种山药种质资源快速繁殖与保存的方法
CN108668901A (zh) 蒙药贺兰山丁香茎尖再生扩繁的方法
CN104521754A (zh) 高山卵叶韭快速繁殖方法
CN105746349A (zh) 一种光果姜种子无菌萌发与增殖的方法
CN104365484A (zh) 蝶花杜鹃的组培繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150325

Termination date: 20150726

EXPY Termination of patent right or utility model