CN105165621B - 香茶藨子茎尖再生扩繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明为香茶藨子茎尖再生扩繁的方法，属于植物组织培养领域，具体涉及到对香茶藨子茎尖诱导丛生芽植物组织培养技术扩繁的研究。本发明包括：（1）取材、（2）培养基的配制、（3）材料处理、（4）丛生芽诱导培养、（5）增殖培养、（6）诱导生根、（7）小苗移栽。本发明的有益效果在于：本发明可以使香茶藨子在短时间内建立无菌株系 进行大量产业化生产，并可以周年生产，繁殖速度快，为园林建设提供大量优质苗木；由于本发明的外植体选取的是茎尖，后代可保持母系稳定的遗传性状，为企业提供技术含量高的生产技术，使其植株大小一致，便于产业化统一管理。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及到对香茶藨子茎尖诱导丛生芽植物组织培养技术扩繁的研究。
背景技术
香茶藨子为虎耳草科茶藨子属植物，又名黄花茶藨子、野芹菜、黄丁香，原产美国，现东北、华北多有栽培。香茶藨子为直立丛生落叶灌木，高1～2.5m；小枝圆柱形，淡黄褐色；叶近圆形，掌状3裂，叶缘疏生粗锯齿；花黄色，味芳香，故名香茶藨子，浆果黑色球形；花期4～5月；果熟期6～7月。茶藨子属植物果实为多汁浆果，可直接食用或用于食品、饮料、酿酒及添加调料，对风湿性关节炎、肠胃炎等有一定疗效。该属植物全世界约有160种，主要分布于北半球温带和较寒冷地区，少数延伸到亚热带和热带山地。中国是世界茶藨子属植物的分布中心之一，原产59种、30变种，主要分布在西南、西北至东北。该属植物在欧洲作为温带观赏灌木和小果类果树资源具有很长的栽培历史，栽培面积和产量均居世界首位。香茶藨子花色鲜艳，花开时一片金黄，香气四溢，是良好的园林观赏品种，宜丛植于草坪、林缘、坡地、角隅、岩石旁，也可作花篱栽植。它喜光，也耐荫，耐寒力强，适于生长在深厚肥沃的土壤中，有一定耐旱能力。但因其种子繁殖周期较长，不能在短时间内满足生产需要，而且目前苗圃商品苗的存量少，远远不能满足市场的需要。植物组织培养是建立高频率植株再生实验体系和工厂化育苗的基础，也为种质保存、人工种子制作以及抗旱、抗寒和抗逆性等基因的转化、树种改良等方面开拓了新途径，应用组织培养技术种质保存和繁育优良、珍稀、濒危植物品种、工厂化育苗是当今世界林业科技发展的趋势，研究香茶藨子组织培养快繁技术具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种香茶藨子茎尖再生扩繁的方法，采用无菌茎尖诱导丛生芽增殖得到大量的芽丛对香茶藨子进行扩繁。对香茶藨子茎尖进行初代培养出芽丛后，再次将芽丛切割接种在继代培养基上培养，为了得到大量的丛生芽对培养基进行筛选；为了减轻培养过程中褐化现象而加入抗褐化物（如柠檬酸、pvp、维生素c或者活性炭）；通过茎尖诱导丛生芽，再将丛生芽进行扩繁，为香茶藨子组织培养扩繁提供指导，并实现工厂化育苗。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
具体包括以下步骤：
（1）取材方法：
选取无病虫害健壮的香茶藨子植株上切取带芽茎段，剥取茎尖为外植体材料；
（2）培养基的配制：
①茎尖诱导丛生芽初代培养基:MS +0.5-2.0mg/L KT+0.1-0.9mg/LIBA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 琼脂 +500-800mg/L PVP，pH值调至5.8-5.9之间；
②单个丛生芽诱导腋芽增殖培养基：MS +0.1-0.9mg/L 6-BA +0.1-0.9 IBA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 琼脂 +800mg/L PVP， pH值调至5.8-5.9之间；
生根培养基：1/4-1/2MS +0.1-1.0mg/LNAA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 琼脂 ，pH值调至5.8-5.9之间；
（3）材料处理：
①将香茶藨子带有侧芽或顶芽的茎段放在烧杯里加入几滴吐温-20，在自来水下冲洗30-50min，转移至超净工作台内以质量浓度为70-75%的酒精消毒摇荡28-32s．后倒出酒精，用无菌水冲洗2-3次，加入质量分数为0.1%升汞溶液处理8-12min，将升汞倒出用无菌水冲洗6~8遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；剥取2mm-4mm的茎尖，接种至初代培养基中培养。
②把初代培养基上培养出来的丛生芽转移至超净工作台上，放在无菌滤纸上，切开丛生芽使其成为单芽，单芽既可以用来继代增殖培养又可以进行生根培养。
（4）丛生芽诱导培养：
将剥取的2mm-4mm左右的茎尖，接种至初代培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照时间10-12h/d,光照强度2000-3000lux。
（5）增殖培养：
把初代培养基培养出来的丛生芽切开，使其成为单芽，单芽接种在增殖培养基中。培养温度为25±2℃，光照时间10-12h/d,光照强度2000-3000lux。
（6）诱导生根：
当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中，培养温度为25±2℃暗培养。
（7）小苗移栽：
当试管苗长至3-4cm高，有3-5条根，3-4片叶片，叶片长度1-2cm时，进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5d，后打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2d，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，然后栽于基质中定植,基质配方为腐殖土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，待40d后达到移栽苗。保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。
本发明的有益效果在于：本发明可以使香茶藨子在短时间内建立无菌株系 进行大量产业化生产，并可以周年生产，繁殖速度快，为园林建设提供大量优质苗木；由于本发明的外植体选取的是茎尖，后代可保持母系稳定的遗传性状，为企业提供技术含量高的生产技术，使其植株大小一致，便于产业化统一管理，为降低企业生产成本和提供产品品质，并站稳市场提高销售量而带来了巨大的经济效益。
实施例1：
本发明选取香茶藨子健壮母树，从健壮母株上切取带芽茎段，剥取茎尖为外植体材料；茎尖经过一个月初代培养，长出翠绿的丛生芽，切下单个丛生芽后对其进行继代增殖培养，2周后丛生芽不断长出腋芽，待腋芽长至1.5-3cm时切下，再次将腋芽接种在继代培养基上培养，周而复始直到腋芽活性下降为止，这样培养可以在一个茎尖上获得大量的丛生芽，得到的丛生芽可以一部分以芽繁芽的方法继续继代培养，一部分可以接种至生根培养基上进行生根。
具体包括以下步骤：
（1）取材方法：
选取从呼和浩特市良种繁育中心引进的无病虫害的香茶藨子植株，从健壮母株上切取带芽茎段，剥取茎尖为外植体材料；
（2）培养基的配制：
茎尖初代诱导丛生芽培养基:MS +1.0mg/L KT+0.3mg/LIBA +30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +800mg/L PVP pH值调至5.8；
单个丛生芽诱导腋芽增殖培养基：MS +0.5mg/L 6-BA +0.3 IBA +30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +800mg/L PVP pH值调至5.8；
生根培养基：1/2MS +0.5mg/LNAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 pH值调至5.8；
（3）材料处理：
①、将香茶藨子带有侧芽或顶芽的茎段放在烧杯里加入2滴吐温-20在自来水下冲洗半个小时，转移至超净工作台内以质量浓度为75%的酒精消毒摇荡30s．后倒出酒精，用无菌水处理3次，加入质量分数为0.1%升汞溶液处理10min，将升汞倒出用无菌水冲洗6遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；剥取2mm的茎尖，接种至初代培养基中培养。
②、待茎尖初代培养出来的丛生芽转移至超净工作台上，取出外植体放在无菌滤纸上，切开丛生芽使其成为单芽，单芽既可以用来继代增殖培养又可以进行生根培养。
（4）丛生芽诱导培养：
将剥取的2mm的茎尖，接种至初代培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux；
（5）增殖培养：
将待茎尖初代培养出来的丛生芽切开使其成为单芽，单芽接种在继代增殖培养基中，培养温度为25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux；
（6）诱导生根：
当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中；培养温度为25±2℃下暗培养；
（7）小苗移栽：
当试管苗长至3~4cm高，有3~5条根，3~4片叶片，叶片长度1～2cm时，就可进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5d，打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2d，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，然后栽于基质中定植：腐殖土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，待40d后达到移栽苗。保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。成活率可达90%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (1)
1.一种香茶藨子茎尖再生扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）取材：
选取无病虫害健壮的香茶藨子植株上切取带芽茎段，剥取茎尖为外植体材料；
（2）培养基的配制：
①茎尖诱导丛生芽初代培养基:MS +0.5-2.0mg/L KT+0.1-0.9mg/LIBA +20-30g/L ，蔗糖 +3-6 g/L ，琼脂 +500-800mg/L PVP ，pH值调至5.8-5.9之间；
②单个丛生芽诱导腋芽增殖培养基：MS +0.1-0.9mg/L 6-BA +0.1-0.9 IBA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 琼脂 +800mg/L PVP，pH值调至5.8-5.9之间；
生根培养基：1/4-1/2MS+0.1-1.0mg/LNAA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 琼脂 ，pH值调至5.8-5.9之间；
（3）材料处理：
①将香茶藨子带有侧芽或顶芽的茎段放在烧杯里加入几滴吐温-20，在自来水下冲洗30-50min，转移至超净工作台内以质量浓度为70-75%的酒精消毒摇荡28-32s．后倒出酒精，用无菌水冲洗2-3次，加入质量分数为0.1%升汞溶液处理8-12min，将升汞倒出用无菌水冲洗6~8遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；剥取2mm-4mm的茎尖，接种至初代培养基中培养；
②把初代培养基上培养出来的丛生芽转移至超净工作台上，放在无菌滤纸上，切开丛生芽使其成为单芽，单芽既可以用来继代增殖培养又可以进行生根培养；
（4）丛生芽诱导培养：
将剥取的2mm-4mm的茎尖，接种至初代培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照时间10-12h/d，光照强度2000-3000lux；
（5）增殖培养：
把初代培养基上培养出来的丛生芽切开，使其成为单芽，单芽接种在增殖培养基中；
培养温度为25±2℃，光照时间10-12h/d,光照强度2000-3000lux；
（6）诱导生根：
当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中，培养温度为25±2℃，暗培养；
（7）小苗移栽：
当试管苗长至3-4cm高，有3-5条根，3-4片叶片，叶片长度1-2cm时，进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5d，后打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2d，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力，然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，然后栽于基质中定植,基质配方为腐殖土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，待40d后达到移栽苗；保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。
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