CN101869062B - 金晃常绿大花萱草的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及金晃常绿大花萱草的组织培养方法，包括无菌材料的获得，芽的分化和增殖，不定芽壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明大大提高了“金晃”常绿大花萱草的繁殖速度和苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可实现育苗的工厂化大批量生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及金晃常绿大花萱草的组织培养方法。
背景技术
“金晃”常绿大花萱草为百合科萱草属植物，原产于自欧洲南部经亚洲北部直至日本长江流域，为多年生常绿草本，具有短根状茎和粗壮的纺锤形肉质根，叶基生、宽线形、嫩绿色。初夏开花，花大，漏斗形，直径10cm左右，花被裂片长圆形的多重瓣，呈金黄色。“金晃”常绿大花萱草的花期为6月上旬至7月中旬，花色鲜艳，栽培容易，且常绿，绿叶成丛，极为美观，多丛植于园林中或栽植于花境和路旁。“金晃”常绿大花萱草耐半荫，又可做疏林地被植物，是良好的花镜与庭院材料。但是，作为国外引进的品种，该花引种数量较少，分株慢，种苗供应受限制。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速度和苗的整齐度，并保持原有母本性状的金晃常绿大花萱草的组织培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
金晃常绿大花萱草的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)无菌材料的获得
在“金晃”常绿大花萱草开花时摘取花苞，用自来水冲洗1-3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞基部切成0.5-2cm长的节段，接种于花苞诱导培养基上；
(2)芽的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1-3周后开始膨大，出现黄绿色突起，3-5周后可见愈伤组织，再培养1-2个月，将愈伤组织进行分割，切下接入到不定芽增殖培养基进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化等不良现象，生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养
在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2-4株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛或单芽后，转至壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，15-30天后可以长至2-3cm；
(4)生根培养
取2-3cm的不定芽的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，20-35天后可以长至4-6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养20-30天，根系长至1-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-4天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30-45天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-95％。
所述的花苞诱导培养基包括MS+KT0.1-1.0mg/L+NAA1.0-5.0mg/L。
所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA0.5-4.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L。
所述的不定芽增殖培养基优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。
所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L。
所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.2mg/L。
所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。
与现有技术相比，本发明通过组织培养技术，极大提高了“金晃”常绿大花萱草的繁殖速度和苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可以实现育苗的工厂化大批量生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
(1)无菌材料的获得
在“金晃”常绿大花萱草开花时摘取花苞，用自来水冲洗1h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60％的乙醇浸泡10s，体积浓度为0.5‰的汞浸泡10min，再用无菌水冲洗4次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞基部切成0.5cm长的节段，接种于包括MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L的花苞诱导培养基上；
(2)芽的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1周后开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见愈伤组织，再培养1个月，将愈伤组织进行分割，切下接入到包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的不定芽增殖培养基进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养
在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛或单芽后，转至包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，15天后可以长至2cm；
(4)生根培养
取2cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，5天后幼苗基部分化出白色的根原基，20天后可以长至4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90％；
(5)炼苗与移栽
生根培养20天，根系长至1cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉4g/L，培养基pH＝5.5，培养温度24℃，光照1500lx。
实施例2
(1)无菌材料的获得
在“金晃”常绿大花萱草开花时摘取花苞，用自来水冲洗2h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡30s，体积浓度为1‰的汞浸泡15min，再用无菌水冲洗5次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞基部切成1cm长的节段，接种于包括MS+KT0.5mg/L+NAA3.0mg/L的花苞诱导培养基上；
(2)芽的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，2周后开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见愈伤组织，再培养1个月，将愈伤组织进行分割，切下接入到包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的不定芽增殖培养基进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养
在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有4株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛或单芽后，转至包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，20天后可以长至3cm；
(4)生根培养
取3cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.2mg/L的生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以长至6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养25天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化40天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为100％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，培养基pH＝5.8， 培养温度25℃，光照2000lx。
实施例3
(1)无菌材料的获得
在“金晃”常绿大花萱草开花时摘取花苞，用自来水冲洗3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡50s，体积浓度为2‰的汞浸泡30min，再用无菌水冲洗6次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞基部切成2cm长的节段，接种于包括MS+KT1.0mg/L+NAA5.0mg/L的花苞诱导培养基上；
(2)芽的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，3周后开始膨大，出现黄绿色突起，5周后可见愈伤组织，再培养2个月，将愈伤组织进行分割，切下接入到包括MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L的不定芽增殖培养基进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养
在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有3株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛或单芽后，转至包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，30天后可以长至3cm；
(4)生根培养
取3cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.2mg/L的生根培养基中诱导生根，15天后幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以长至5cm，根系粗壮，须根众多，生根率为94％；
(5)炼苗与移栽
生根培养30天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗4天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化45天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为96％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖40g/L、琼脂粉8g/L，培养基pH＝6.0，培养温度26℃，光照2500lx。
Claims (3)
1.金晃常绿大花萱草的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)无菌材料的获得
在“金晃”常绿大花萱草开花时摘取花苞，用自来水冲洗1-3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞基部切成0.5-2cm长的节段，接种于花苞诱导培养基上；
(2)芽的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1-3周后开始膨大，出现黄绿色突起，3-5周后见愈伤组织，再培养1-2个月，将愈伤组织进行分割，切下接入到不定芽增殖培养基进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化的不良现象，生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养
在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2-4株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成单芽或小丛后，转至壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，15-30天后长至2-3cm；
(4)生根培养
取2-3cm的不定芽的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，20-35天后长至4-6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养20-30天，根系长至1-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-4天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30-45天，即移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-95％；
所述的花苞诱导培养基包括MS+KT0.1-1.0mg/L+NAA1.0-5.0mg/L；
所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA0.5-4.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L；
所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L；
所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.2mg/L。
2.根据权利要求1所述的金晃常绿大花萱草的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。
3.根据权利要求1所述的金晃常绿大花萱草的组织培养方法，其特征在于，各培养基还分别包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。
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