CN102273404B - 斑点吴风草的植株培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及斑点吴风草的植株培养方法，该方法通过组织培养技术获得斑点吴风草植株，具体步骤包括无菌处理、分化增殖、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽。与现有技术相比，本发明通过组织培养技术，提高了植株的繁殖速度，从而能够满足市场需求，另外，本方法可以保持原有的母本性状，植株的整齐度也较高。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组培方法，尤其是涉及一种斑点吴风草的植株培养方法。
背景技术
斑点大吴风草为常绿多年生草本，根茎粗大，茎高30～70cm，叶多为基生，亮绿色，叶上密布星点状黄斑，肾形，边缘波角状，头状花序组成松散复伞状，黄色，晚秋开花，喜半阴和湿润环境；耐寒，在江南地区能露地越冬；怕阳光直射；对土壤适应度较好，以肥沃疏松、排水好的壤土为宜。本品种在园林中广泛应用，多片植做林下地被，或丛植于花境或庭院，是优秀的疏林地被植物，也是良好的花镜与庭院材料。由于其为国外引进的品种，引种数量较少，而且分株慢，导致种苗供应受限制，无法满足市场的需求。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种提高繁殖速度、保持母本性状的斑点吴风草的植株培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
斑点吴风草的植株培养方法，其特征在于，该组织培养方法包括无菌处理、分化增殖、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽五个步骤，具体步骤如下所示：
(1)无菌处理：将斑点吴风草小芽用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次采用浓度为75％的乙醇浸泡20-30s、1‰的升汞浸泡10-15min、无菌水冲洗5-6次并用无菌滤纸吸干表面水分，将小芽基部切成1cm长度后接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24-26℃，光照为70-90μmol/ms，进行芽诱导培养；
(2)分化增殖：小芽接种于芽诱导培养基上3周后开始膨大并出现黄绿色突起，再培养2周后小芽长势明显，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于增殖培养基中，控制培养温度为24-26℃，光照为70-90μmol/ms，进行增殖培养；
(3)壮苗培养：在增殖培养基中诱导出丛生芽，每丛有2-3株可以伸长，将其分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，控制培养温度为24-26℃，光照为70-90μmol/ms，进行壮苗培养，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养：将壮苗培养基中的植株转接入生根培养基中控制培养温度为24-26℃，光照为70-90μmol/ms，进行生根培养，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基20天后出现众多须根；
(5)炼苗移栽：生根培养25-30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂并在温室中继续驯化40-50天，将其可移栽室外即可。
所述步骤(1)中芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA1.0～5.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L。
所述芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
所述步骤(2)中增殖培养基的营养成分为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L。
所述增殖培养基的营养成分优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。
所述步骤(3)中壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5～2.0mg/L+NAA0.1～0.2mg/L。
所述壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
所述步骤(4)中生根培养基的营养成分为MS+NAA0.05～0.2mg/L。
所述生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.1mg/L。
所述的培养基的基准成分包括蔗糖30g/L及琼脂6g/L。
与现有技术相比，本发明通过使用组织培养技术，提高了植株的繁殖速度，从而能够满足市场需求，另外，本方法可以保持原有的母本性状，植株的整齐度也较高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
斑点吴风草的植株培养方法，该组织培养方法包括无菌处理、分化增殖、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽五个步骤，具体步骤如下所示：
(1)无菌处理：将斑点吴风草小芽用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次采用浓度为75％的乙醇浸泡20s、1‰的升汞浸泡10min、无菌水冲洗5次并用无菌滤纸吸干表面水分，将小芽基部切成1cm长度后接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24℃，光照条件为70μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，培养基的pH值为5.6；
(2)分化增殖：小芽接种于芽诱导培养基上3周后开始膨大并出现黄绿色突起，再培养2周后小芽长势明显，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于增殖培养基中，控制培养温度为24℃，光照条件为70μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，培养基的pH值为5.6，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养基中生长发育良好；
(3)壮苗培养：在增殖培养基中诱导出丛生芽，每丛有2株可以伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，控制培养温度为24℃，光照条件为70μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，培养基的pH值为5.6，20天后植株可以长到2cm；
(4)生根培养：将壮苗培养基中的植株转接入生根培养基中进行诱导生根，控制培养温度为24℃，光照条件为70μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+NAA0.05mg/L，培养基的pH值为5.6，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基20天后出现众多须根，根系粗壮，生根率接近100％；
(5)炼苗移栽：生根培养25天，根系长至1cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂并在温室中继续驯化40天，将其可移栽室外即可，移栽成活率接近95％。
实施例2
斑点吴风草的植株培养方法，该组织培养方法包括无菌处理、分化增殖、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽五个步骤，具体步骤如下所示：
(1)无菌处理：将斑点吴风草小芽用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次采用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s、1wt‰的升汞浸泡15min、无菌水冲洗6次并用无菌滤纸吸干表面水分，将小芽基部切成1cm长度后接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为25℃，光照条件为80μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L，培养基的pH值为5.8；
(2)分化增殖：小芽接种于芽诱导培养基上3周后开始膨大并出现黄绿色突起，再培养2周后小芽长势明显，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于增殖培养基中，控制培养温度为25℃，光照条件为80μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，培养基的pH值为5.8，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养基中生长发育良好；
(3)壮苗培养：在增殖培养基中诱导出丛生芽，每丛有3株可以伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，控制培养温度为25℃，光照条件为80μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，培养基的pH值为5.8，20天后植株可以长到3cm；
(4)生根培养：将壮苗培养基中的植株转接入生根培养基中进行诱导生根，控制培养温度为25℃，光照条件为80μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+NAA0.1mg/L，培养基的pH值为5.8，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基20天后出现众多须根，根系粗壮，生根率接近100％；
(5)炼苗移栽：生根培养30天，根系长至2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂并在温室中继续驯化50天，将其可移栽室外即可，移栽成活率接近95％。
实施例3
斑点吴风草的植株培养方法，该组织培养方法包括无菌处理、分化增殖、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽五个步骤，具体步骤如下所示：
(1)无菌处理：将斑点吴风草小芽用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次采用浓度为75％的乙醇浸泡30s、1‰的升汞浸泡15min、无菌水冲洗6次并用无菌滤纸吸干表面水分，将小芽基部切成1cm长度后接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为26℃，光照条件为100μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，培养基的pH值为5.9；
(2)分化增殖：小芽接种于芽诱导培养基上3周后开始膨大并出现黄绿色突起，再培养2周后小芽长势明显，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于增殖培养基中，控制培养温度为26℃，光照条件为100μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L，培养基的pH值为5.9，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养基中生长发育良好；
(3)壮苗培养：在增殖培养基中诱导出丛生芽，每丛有3株可以伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，控制培养温度为26℃，光照条件为100μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，培养基的pH值为5.9，20天后植株可以长到3cm；
(4)生根培养：将壮苗培养基中的植株转接入生根培养基中进行诱导生根，控制培养温度为26℃，光照条件为100μmol/ms，培养基的基准成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，主要营养成分为MS+NAA0.2mg/L，培养基的pH值为5.9，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基20天后出现众多须根，根系粗壮，生根率接近100％；
(5)炼苗移栽：生根培养30天，根系长至2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂并在温室中继续驯化50天，将其可移栽室外即可，移栽成活率接近95％。
Claims (1)
1.一种用于斑点吴风草组织培养的培养基，其特征在于，包括芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基，其中，所述的芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L；所述的增殖培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；所述的壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；所述的生根培养基的营养成分为MS+NAA0.2mg/L。
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