CN101711504B - 荻的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了荻的快速繁殖方法，选用荻优良单株，切取带1-2个腋芽的茎段为外植体，消毒后，接种在MS+6-BA0～2.0mg/L培养基中培养3-5天左右，腋芽开始萌发，7-9天左右形成带叶的小苗；将小苗切下接种在MS+6-BA 2.0-6.0mg/L+IAA0.1-0.5mg/L+NAA0-0.5mg/L增殖培养基中，保持高速度递增，增殖系数为4以上；在添加NAA的增殖培养基上能同步诱导芽和根，生根率达85％以上，只需35天左右形成完整植株；试管苗移栽到天然泥土中，移栽成活率达到90％以上，建立了一套高频稳定再生体系。本发明方法大大简化了操作过程，缩短了培养时间，节省了生产成本，为荻的大规模种植提供一种周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及植物组织培养技术，具体地说是荻和南荻的组织培养方法。
背景技术
获[Miscamhus sacchariflorus(Maxim)Benthet Hook。]属于禾本科、禾亚科、黍系、高粱族、甘蔗亚族、芒属。荻是长江蓄洪湖区多年生的水陆两生植物，是我国重要的造纸纤维原料，其纤维质量和产量均优于芦苇(Phragmites australis L.)，还能防汛、同坝、编蓆，地下茎及蜡粉可作药材。目前，国际上已将获纳入到有利用价殖和开发前景的“新经济作物”，由国家资助列项加以研究，中国是世界获类植物资源的分布中心，通过多年的研究，证明荻属是一类兼具生态效益和经济效益的植物资源。获与甘蔗、水稻都是高光效的C4植物，植株高大，植物茎秆纤维细胞含量高，是一种可持续利用的高生物量资源。此外，荻生长快，产量高，易繁殖，能迅速覆盖地面，适宜于荒坡、湖洲发展的先锋植物，有固土保水，防止冲刷，改善周边生态环境，具有多种用途的资源植物。特产我国的南获新种，但长期以来，只有少数科研工作者开展了荻类的研究，目前，荻类组织培养已有少量报道，顾振惠等人曾用荻茎尖培养再生植株(农业现代化研究，1988(4))，茎尖需在实体显微镜下剥取，操作复杂，而且外植体供体有限。何丽珍等人曾用无菌小苗、下胚轴、根、芽鞘及幼穗等不同外植体的愈伤组织诱导及植株再生作以报道(西北植物学报，1995，15(4))，有一个首先培养无菌小苗的过程，然后取小苗的下胚轴、根、芽鞘等部位诱导愈伤组织，再以愈伤组织诱导再生苗，周期长，无法很快得到再生植株；而以幼穗作为外植体，受植株孕穗的时间限制，外植体的供体有限，同样它也需经过诱导愈伤组织，再以愈伤组织诱导再生苗的过程，同样存在培养周期长的缺点。但本发明专利提供的荻茎段为外植体快速繁殖方法及其使用的培养基与目前已有报道不同，试管苗培养时间短，出苗快，增殖率高，变异小，方法更简单，应用价殖高等优点。目前还没有专利申请的报道。
发明内容
本发明的目的是提供荻的快速繁殖方法，该方法非常适合工业化生产，配方效果佳，出芽快，培养时间短，植株生长旺盛，可操作性强，应用价值高的优点。具有投入少，产出高的特点。
本发明所述荻的快速繁殖方法，其具体操作步骤如下：
1、外植体的选择与灭菌：选用荻(M.sacchariflorus)优良单株，切取带1-2个腋芽的茎段为外植体进行培养；首先将腋芽外部包裹的黄叶清除干净，再用无菌水清洗3～4次后，在无菌操作台上用70％酒精处理30秒左右，再用0.1％的升汞消毒18-20分钟，用无菌水冲洗6-7次备用；
2、腋芽的萌发：将灭菌处理后带1-2个腋芽的茎段接种在MS+6-BA0～2.0mg/L培养基中，接种瓶内每瓶接种2-4个茎段，在250-300lux光照下培养，保持温度24+2℃，培养3-5天左右，腋芽开始萌发，7-9天左右形成带叶的小苗；
3、丛生芽诱导及增殖：将小苗切下接种在MS+6-BA2.0-6.0mg/L+IAA0.1-0.5mg/L培养基中，直至形成丛生芽，28-35天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为4以上；在添加不超过0.5mg/L的NAA增殖培养基上能同步诱导芽和根，生根率达85％以上，只需32-38天左右形成完整植株；
4、试管苗的移栽：选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽1个月后，移栽成活率达到90％以上。
本发明提出的荻的组织培养方法，利用荻带腋芽茎段为外植体，使得外植体取材容易，一年四季均可取材，而且数量大；采用成熟的茎段做外植体，保证了遗传稳定性；同时克服了组织培养中，愈伤组织在分化培养基上随着芽的分化而逐渐停止生长，失去增殖能力的弱点；可防止愈伤组织继代培养过程中，随着培养代数的增加，分化出来的苗出现变异的现象。本发明方法利用外植体建立，增殖生根同步化这一技术路线，仅需35天左右形成完整植株，3～5个月内可获得大量完整植株，实现荻的大规模工厂化育苗。本发明方法获得的试管苗无需转至生根培养基，即可形成完整植株；因此在培养过程中随着根的出现，即可出瓶移栽，简化繁殖程序。移栽基质利用天然泥土，方法简单，而且大大降低了移栽成本。本培养方法出芽快，增殖率高，方法简单，生产成本低，可批量生产，应用价值高。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。
实施例1
取材：荻(M.sacchariflorus)带腋芽茎段为外植体、
1、外植体的选择与灭菌：选用荻优良单株，切取带1个腋芽的茎段为外植体进行培养。首先将腋芽外部包裹的黄叶清除干净，再用无菌水清洗3～4次后，在无菌操作台上用70％酒精处理30秒左右，再用0.1％的升汞消毒18-20分钟，用无菌水冲洗6-7次备用；
2、腋芽的萌发：将灭菌处理后带1个腋芽的茎段接种在MS培养基中，接种瓶内每瓶接种3个茎段，在培养室下300lux光照，保持温度24+2℃，培养3天左右腋芽开始萌发，7天左右形成带叶的小苗；
3、丛生芽诱导及增殖：将小苗切下接种在MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L培养基中，直至形成丛生芽，30天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为4以上；在添加NAA的增殖培养基上能同步诱导芽和根，生根率达85％以上，只需35天左右形成完整植株；
4、试管苗的移栽：选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽1个月后，移栽成活率达到90％以上。
实施例2
取材：荻(M.sacchariflorus)带腋芽茎段为外植体
1、外植体的选择与灭菌：选用荻优良单株，切取带1个腋芽的茎段为外植体进行培养。首先将腋芽外部包裹的黄叶清除干净，再用无菌水清洗3～4次后，在无菌操作台上用70％酒精处理30秒左右，再用0.1％的升汞消毒18-20分钟，用无菌水冲洗6-7次备用；
2、腋芽的萌发：将灭菌处理后带1个腋芽的茎段接种在MS+6BA 1.0mg/L培养基，接种瓶内每瓶接种3个茎段，在培养室300lux光照，保持温度24+2℃，培养5天左右腋芽开始萌发，9天左右形成带叶的小苗；
3、丛生芽诱导及增殖：将小苗切下接种在MS+6-BA4.0mg/L+IAA0.5mg/L+NAA0.2mg/L培养基中，直至形成丛生芽，30天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为4.5，同步生根率达85％以上，只需35天左右形成完整植株；
4、试管苗的移栽：选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽1个月后，移栽成活率达到90％以上。
实施例3
取材：荻(M.sacchariflorus)带腋芽茎段为外植体、
1、外植体的选择与灭菌：选用荻优良单株为，切取带1个腋芽的茎段为外植体进行培养。首先将腋芽外部包裹的黄叶清除干净，再用无菌水清洗3～4次后，在无菌操作台上用70％酒精处理30秒左右，再用0.1％的升汞消毒18-20分钟，用无菌水冲洗6-7次备用；
2、腋芽的萌发：将灭菌处理后带1个腋芽的茎段接种在MS培养基中，接种瓶内每瓶接种3个茎段，在培养室300lux光照，保持温度24+2℃，培养3天左右腋芽开始萌发，7天左右形成带叶的小苗；
3、丛生芽诱导及增殖：将小苗切下接种在MS+6-BA6.0mg/L+IAA0.5mg/L+NAA0.5mg/L培养基中，直至形成丛生芽，30天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为3.5以上；在添加NAA的增殖培养基上能同步诱导芽和根，生根率达85％以上，只需35天左右形成完整植株；
4、试管苗的移栽：选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽1个月后，移栽成活率达到90％以上。
本发明所提供的荻和南荻组织培养繁殖方法，茎段为外植体，取材容易，数量大，出苗快，芽诱导率高，遗传稳定性高，生长良好等优势。在继代增殖过程中，可以根据需要在培养基中添加生长素NAA，促进根的形成；或在培养基不添加NAA，抑制根的形成，促进丛生芽形成。
Claims (4)
1.荻的快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括如下步聚：
1)外植体的选择与灭菌：切取带1-2个腋芽的荻单株茎段为外植体，并将外植体灭菌消毒；
2)腋芽的萌发：将灭菌消毒处理后带1-2个腋芽的茎段接种在MS+6-BA 0～2.0mg/L培养基中，在250-300lux光照条件下培养，保持温度24±2℃，萌发出小苗；
3)丛生芽诱导及增殖：将小苗切下接种在MS+6-BA 2.0～6.0mg/L+IAA0.1～0.5mg/L增殖培养基中，直至形成丛生芽，28-35天为一个增殖周期，然后继代培养。
2.根据权利要求1所述的荻的快速繁殖方法，其特征在于，在增殖培养基中添加不超过0.5mg/L的NAA，同步诱导芽和根，32-38天形成完整植株；再选取根系生长良好的试管苗，移栽。
3.根据权利要求1所述的荻的快速繁殖方法，其特征在于，所述的外植体的选择与灭菌具体过程如下：选用荻优良单株，切取带1-2个腋芽的茎段为外植体；首先将腋芽外部包裹的黄叶清除干净，再用无菌水清洗3～4次后，在无菌操作台上用70％酒精处理30秒，再用0.1％的升汞消毒18～20分钟，无菌水冲洗6～7次备用。
4.根据权利要求1所述的荻的快速繁殖方法，其特征在于，所述的腋芽的萌发过程具体如下：接种瓶内每瓶接种2-4个茎段，培养3-5天，腋芽开始萌发，7-9天形成带叶的小苗。
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