CN102754599B

CN102754599B - 利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法

Info

Publication number: CN102754599B
Application number: CN 201210244814
Authority: CN
Inventors: 周音; 张建军; 殷丽青; 谢纪红
Original assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2012-07-16
Filing date: 2012-07-16
Publication date: 2013-09-18
Anticipated expiration: 2032-07-16
Also published as: CN102754599A

Abstract

本发明公开了一种利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法，采用改良后含有特殊成分（6-BA、PIC和水解酪蛋白）的MS培养基进行原球茎的诱导，针对大花蕙兰根外植体，采用特定培养方法，使大花蕙兰根诱导原球茎，诱导率达100%，培养45天后每段根外植体原球茎数达50个，原球茎成活率95%，植株生长健壮，直接生根。

Description

利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法

技术领域

本发明属植物细胞工程技术领域，涉及一种利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法。

背景技术

大花蕙兰（Cymbidium hybridium）为兰科兰属多年生草本植物，是近几年在国际花卉市场上流行的高档室内盆栽花卉及高档切花，因其花色艳美，花期较长（2-3月），又在冬春节日期间开放，所以具有极高的观赏价值。大花蕙兰多为杂交品种，种子繁殖无法保持其品种特性，且结实率也相对较低。故传统栽培靠分株繁殖，因而周期长，繁殖系数低，繁殖速度慢，远远不能满足商品化生产的要求。目前，国外已将组织培养技术应用于大花蕙兰的繁殖与生产。国内也有许多研究者对大花蕙兰的组织培养技术进行了大量的研究，并用于商品化生产。

大花蕙兰的组织培养始于20世纪60年代，Morel采用大花蕙兰的茎尖，在含有细胞分裂素的KC培养基上进行培养，茎尖分生组织膨大形成类原球茎，并分化出根和叶，首次获得兰花无病毒小植株【Morel G.Producing virus freeCymbidium.Am[J].Orchid Soc Bull，1990(9):495-497】。Wimber对Morel的方法进行了改进，采用液体振荡培养的方法大大加快了原球茎的增殖速度，短期内可以获得大量再生植株【Whimber D D.Clonalmultiplicatication ofCymbidium through t issueculture of the shoot meristem.Am[J].Orchid SocBull，1963，32:105-107】，此后组织培养技术在兰花生产上得到了广泛的应用。在我国，大花蕙兰的组织培养快繁技术研究起步较晚。

一般来说，大花蕙兰组织培养过程包括以下两种方法：⑴原球茎途径：外植体的导入体胚诱导，原球茎形成原球茎，增殖芽的诱导分化，根的诱导分化，出苗。该方法的优点是增殖系数高，但易产生变异，植株生长弱。⑵直接诱导丛生芽途径：外植体的导入，直接诱导丛生芽，丛生芽增殖，根的诱导分化，出苗。该方法缩短了培养时间，降低了成本，植株生长健壮，但其增殖系数不高。

迄今为止，大花蕙兰组织培养的过程均存在比较繁琐，成本高等缺点，要想提高效率，降低成本并进行快速繁殖，今后的研究重点应该是简化繁殖过程，尽量避免诱导、继代、育苗和生根4个阶段用不同的培养基，探讨能减少变异又能提高增殖系数，且再生植株生长健壮的大花蕙兰组织培养方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法。本发明通过采用改良后含有特殊成分（6-BA、PIC和水解酪蛋白）的MS培养基进行原球茎的诱导，针对大花蕙兰根外植体，采用特定培养方法，使大花蕙兰根诱导原球茎，诱导率达100%，培养45天后每个根外植体原球茎数达50个，原球茎成活率95%，植株生长健壮，可直接生根。

所述的利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法，包括以下步骤：

1）选取大花蕙兰无菌苗的根，接种于培养基中，进行暗培养，培养室温度为25±2℃。

2）将暗培养获得的原球茎转到光下进行培养，每天10-16小时光照，温度为25±2℃。

3）原球茎变绿，转接到上述不含特殊成分的培养基中，逐渐发育成正常植株，同时生根。

4）室温，打开瓶盖炼苗，1周后种植于温室穴盘中。

所述的培养基组分用量为：MS基本培养基1L；蔗糖30000mg/L；琼脂粉5000mg/L；以及由6-BA 0.5mg/L，PIC 0.5mg/L和水解酪蛋白500mg/L组成的特殊成分。

其中，所述的MS基本培养基配方如下表1所示，mg/L表示每升MS培养基中含各成分的毫克数。

表1

相对于现有技术，本发明具有以下特点：

⑴根作为外植体获得容易，诱导启动早，15天根膨大，30天产生原球茎。

⑵诱导原球茎频率高，平均每段2cm长的根产生50个原球茎，诱导率100%。

⑶诱导与成苗只需两步培养过程，诱导培养基简单，第一步原球茎诱导培养只加6-BA、PIC和水解酪蛋白等特殊成分，不需添加香蕉泥、活性炭等添加物，减少了费用，这一步只需黑暗培养，又节约能源；第二步在不加特殊成分的培养基上光照培养，直接生根，得到完整再生植株，成本低。

⑷由于植物生长调节物质用量低，诱导过程没有褐化产生，加快了培养进程。

⑸得到的再生植株来自于根，其生根能力极强，不用生根剂就可产生许多粗壮的根，植株生长健壮。种于温室穴盘，100%成活。

⑹培养过程简单，减少了污染机会。

⑺可大量、快速、持续的获得原球茎，此体系建立后在无菌条件下实现了原球茎的循环增殖。

⑻培养步骤简单，诱导率高，成本低，种植成活率高，利于工厂化生产。

附图说明

图1为从大花蕙兰根诱导的原球茎。

图2为原球茎在光照条件下逐渐变绿并生长。

图3为分割后的芽苗接种在不含特殊成分的培养基上。

图4为再生植株生根长成的完整植株。

图5为种植于穴盘的大花蕙兰。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但所述实施例不限制本发明的保护范围。

实施例1

⑴配制培养基：MS基本培养基1L+蔗糖30000mg/L+琼脂粉5000mg/L+特殊成分（6-BA 0.5mg/L+PIC 0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L）。配制后，调整pH=5.4-5.6，121±2℃，15-20磅灭菌20分钟。

⑵选取大花蕙兰无菌苗的根，接种于步骤⑴配制的培养基中进行暗培养，温度25±2℃，15天根膨大，1个月左右产生原球茎（如图1所示），将其放在光下培养，温度25±2℃，每天光照16小时，逐渐变绿（如图2所示）。

⑶切下原球茎（平均每段2cm长的根产生50个原球茎，诱导率100%，原球茎成活率95%）转接种于步骤⑴不含特殊成分的培养基中（如图3所示），经1个月培养长成生根的正常植株（如图4所示）。

⑷打开瓶盖，练苗，一周后，洗去琼脂，种植于温室穴盘中（如图5所示），生长健壮，成活率100%。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims

1.一种利用根诱导原球茎快速繁殖大花蕙兰的方法，其特征在于，

1）选取大花蕙兰无菌苗的根，接种于培养基中，进行暗培养，培养室温度为25±2℃；

2）将暗培养获得的原球茎转到光下进行培养，每天10-16小时光照，温度为25±2℃；

3）原球茎变绿，转接到步骤1）不含特殊成分的培养基中，逐渐发育成正常植株，同时生根；

4）室温，打开瓶盖炼苗，1周后种植于温室穴盘中；

所述的培养基组分用量为：MS基本培养基1L，蔗糖30000mg/L，琼脂粉5000mg/L，以及由6-BA0.5mg/L，PIC0.5mg/L和水解酪蛋白500mg/L组成的特殊成分。