CN111919750A - 一种温蒂椒草的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种温蒂椒草的组织培养方法，所述该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。该温蒂椒草的组织培养方法，选用带腋芽茎段作为外植体，经诱导培养基分化出芽，将得到的小芽接种到调配的芽增殖培养基中进行芽增殖，再将得到的增殖芽接种到调配的生根培养基中进行生根培养，生根培养后的幼苗即可进行后续的移植和栽培，提高育苗的繁殖系数，通过小芽的切断和增值培养，有利于后续获得更多的幼苗，使温蒂椒草实现芽分化、芽增殖和生根，形成合格的组培苗，并能实现较高种苗繁殖系数，能够获得一致性高的种苗，利于大规模生产，为温蒂椒草的繁殖育苗工作提供了技术依据。
Description
技术领域
本发明涉及花卉植物育苗技术领域，具体为一种温蒂椒草的组织培养方法。
背景技术
温蒂椒草，科属天南星科，隐棒花属，原产地在斯里兰卡，是一种丛生水草植物，具有一定的观赏价值，园林造景主要用于前景造景，粗生粗长，养殖难度低，作为观赏植物养殖在鱼缸和水池中，提高它们的观赏性，由于温蒂椒草属于水生观赏植物，在现代园林水景建设中得到广泛应用；温蒂椒草生长速度中等，要求低光照，适宜水温在22-28℃，适合生长的环境酸碱度(pH)在6.2-7.2之间，温蒂椒草适应力相当强的水草，叶柄呈棕色或红色，在水族箱中叶片会变得狭长，约12-15cm，呈翠绿色，受到水质及光线的影响，叶片由亮绿色转变至红棕色，不同的资料说法不一，有称“温蒂椒草在任何水质条件下都不会变成咖啡色或褐色”，温蒂属于栽培容易的水草，喜好非量充足的基质（比如带有泥质的砂床），但过多的铁质会使叶片凋落；
椒草种子难以获得，以无性繁殖为主，主要方法是扦插和组织培养，基本培养基无法满足温蒂椒草的组织培养快速繁殖的需求，并且传统的分株和扦插繁殖等无性繁殖手段繁殖效率低，温蒂椒草作为一种具有观赏和药用价值的植物，需要一种能对其快速繁殖并可进行稳定和大量生产的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种温蒂椒草的组织培养方法，以解决上述背景技术中提出椒草种子难以获得，以无性繁殖为主，主要方法是扦插和组织培养，基本培养基无法满足温蒂椒草的组织培养快速繁殖的需求，并且传统的分株和扦插繁殖等无性繁殖手段繁殖效率低的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种温蒂椒草的组织培养方法，所述该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。
优选的，所述该温蒂椒草的组织培养方法如下：
步骤一：外植体的选择和处理
将处在生长旺季的温蒂椒草腋芽茎段作为外植体，先用自来水冲洗表面的泥土，再用洗洁精清洗干净，然后在超净台上用酒精溶液进行消毒，再将其浸入0.1%升汞溶液2内，最后用无菌水进行冲洗冲洗，切成小段后存放备用；
步骤二：分化出芽
将步骤一种处理好的外植体接种于配方为MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L的芽诱导培养基中，在设定环境下培养15d左右长出小芽，并在此培养基上进行继代培养1-2次；
步骤三：增殖培养
将步骤二中得到的在小芽在无菌条件下进行处理，将芽诱导培养基中生长的分化芽在无菌环境中切下，转接到配方为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L的芽增殖培养基上进行增殖培养；
步骤四：生根培养
当步骤三中的丛生苗长至3-4cm高时，在无菌条件下将其切成3-5株为一丛的苗，然后转入配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L生根培养基中进行生根培养，经过14d左右幼苗长出白色不定根，30d后能长出超过2.0cm的根，可满足移栽要求。
优选的，所述步骤一中采用的酒精浓度为70%，且消毒时间为30s，在0.1%升汞溶液中的浸泡时间在20-30min之间，并且最后用无菌水冲洗次数为5次，同时切成小段长度范围在0.4-0.6cm之间。
优选的，所述步骤二中培养基的外界环境温度保持在23-27℃之间，光照时间在8-10h之间，且光照度在1000-2000Lux之间。
优选的，所述步骤一、步骤三和步骤四中对外植体和幼苗进行切断时均在无菌条件下进行，且在选取外植体时应保证所选取的植物生长状态和颜色相同，不同种类的外植体应做有标记。
优选的，所述按要求调配完成的培养液在培养基内需要放到培养室中预培养3d，没有污染反应，则可以使用，暂时不用的培养基需要置于10℃下进行保存。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该温蒂椒草的组织培养方法；
1.选用带腋芽茎段作为外植体，经诱导培养基分化出芽，将得到的小芽接种到调配的芽增殖培养基中进行芽增殖，再将得到的增殖芽接种到调配的生根培养基中进行生根培养，生根培养后的幼苗即可进行后续的移植和栽培，提高育苗的繁殖系数；
2.通过小芽的切断和增值培养，有利于后续获得更多的幼苗，使温蒂椒草实现芽分化、芽增殖和生根，形成合格的组培苗，并能实现较高种苗繁殖系数，能够获得一致性高的种苗，利于大规模生产，为温蒂椒草的繁殖育苗工作提供了技术依据。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实例提供一种温蒂椒草的组织培养方法，以下对上述方法进行详细介绍。
一种温蒂椒草的组织培养方法，该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。
在进行培养前可先对外植体进行选取，外植体的选取应符合如下选取标准：
（1）选择优良的种质及母株；
（2）应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高，若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应；
（3）外植体要易于消毒，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率；
可选用选用带腋芽茎段作为外植体，先用自来水冲洗表面的泥土，再用洗洁精清洗干净，然后在超净台上用70%的酒精溶液消毒30s，再浸入0.1%升汞溶液30min，最后用无菌水冲洗5次，切成0.5cm长的小段，同时在切断时要保持无菌条件；然后将切分后的外植体接种于配方为MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L的芽诱导培养基中，保持环境温度在23℃之间，光照时间在8h之间，同时光照度在1000Lux之间的条件下进行培养，15d左右长出小芽，并在此培养基上进行继代培养1-2次；将得到的在小芽在无菌条件下进行处理，将芽诱导培养基中生长的分化芽在无菌环境中切下，转接到配方为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L的芽增殖培养基上进行增殖培养当分化芽生长至成丛生苗且长至3-4cm高时，在无菌条件下将其切成5株为一丛的苗，然后转入配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L生根培养基中进行生根培养，经过14d左右幼苗长出白色不定根，30d后能长出超过2.0cm的根，可满足移栽要求，将培育完成的幼苗移栽到外界环境中即可进行正常的生长；
在对外植体和幼苗进行切断时均在无菌条件下进行，且在选取外植体时应保证所选取的植物生长状态和颜色相同，不同种类的外植体应做有标记；
按要求调配完成的培养液在培养基内需要放到培养室中预培养3d，没有污染反应，则可以使用，暂时不用的培养基需要置于10℃下进行保存。
实施例2
本实例提供一种温蒂椒草的组织培养方法，以下对上述方法进行详细介绍。
一种温蒂椒草的组织培养方法，该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。
在进行培养前可先对外植体进行选取，外植体的选取应符合如下选取标准：
（1）选择优良的种质及母株；
（2）应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高，若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应；
（3）外植体要易于消毒，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率；
可选用选用带腋芽茎段作为外植体，先用自来水冲洗表面的泥土，再用洗洁精清洗干净，然后在超净台上用70%的酒精溶液消毒30s，再浸入0.1%升汞溶液30min，最后用无菌水冲洗5次，切成0.5cm长的小段，同时在切断时要保持无菌条件；然后将切分后的外植体接种于配方为MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L的芽诱导培养基中，保持环境温度在27℃之间，光照时间在10h之间，同时光照度在2000Lux之间的条件下进行培养，记录小芽长出所需时间，然后在此培养基上进行继代培养1-2次；将得到的在小芽在无菌条件下进行处理，将芽诱导培养基中生长的分化芽在无菌环境中切下，转接到配方为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L的芽增殖培养基上进行增殖培养当分化芽生长至成丛生苗且长至3-4cm高时，在无菌条件下将其切成5株为一丛的苗，然后转入配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L生根培养基中进行生根培养，记录幼苗长出白色不定根所需时间和长出超过2.0cm的根所需时间，此后可满足移栽要求，将培育完成的幼苗移栽到外界环境中即可进行正常的生长；
在对外植体和幼苗进行切断时均在无菌条件下进行，且在选取外植体时应保证所选取的植物生长状态和颜色相同，不同种类的外植体应做有标记；
按要求调配完成的培养液在培养基内需要放到培养室中预培养3d，没有污染反应，则可以使用，暂时不用的培养基需要置于10℃下进行保存。
实施例3
本实例提供一种温蒂椒草的组织培养方法，以下对上述方法进行详细介绍。
一种温蒂椒草的组织培养方法，该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。
在进行培养前可先对外植体进行选取，外植体的选取应符合如下选取标准：
（1）选择优良的种质及母株；
（2）应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高，若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应；
（3）外植体要易于消毒，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率；
可选用选用带腋芽茎段作为外植体，先用自来水冲洗表面的泥土，再用洗洁精清洗干净，然后在超净台上用70%的酒精溶液消毒30s，再浸入0.1%升汞溶液30min，最后用无菌水冲洗5次，切成0.5cm长的小段，同时在切断时要保持无菌条件；然后将切分后的外植体接种于配方为MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L的芽诱导培养基中，保持环境温度在23℃之间，光照时间在8h之间，同时光照度在1000Lux之间的条件下进行培养，15d左右长出小芽，并在此培养基上进行继代培养1-2次；将得到的在小芽在无菌条件下进行处理，将芽诱导培养基中生长的分化芽在无菌环境中切下，转接到配方为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L的芽增殖培养基上进行增殖培养当分化芽生长至成丛生苗且长至3-4cm高时，在无菌条件下将其切成3株为一丛的苗，然后转入配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L生根培养基中进行生根培养，记录幼苗长出白色不定根所需时间和长出超过2.0cm的根所需时间，此后可满足移栽要求，将培育完成的幼苗移栽到外界环境中即可进行正常的生长；
在对外植体和幼苗进行切断时均在无菌条件下进行，且在选取外植体时应保证所选取的植物生长状态和颜色相同，不同种类的外植体应做有标记；
按要求调配完成的培养液在培养基内需要放到培养室中预培养3d，没有污染反应，则可以使用，暂时不用的培养基需要置于10℃下进行保存。
通过实施例1和实施例2中的小芽生长所需时间的对比可判断所选外植体的增值培养的适宜环境，判断外界温度、光线强度和光照时间对外植体所产生的催生效果；通过实施例1和实施例3中幼苗生根时间的对比和生根率的对比方便后续对幼苗的最小生长株丛数量和最佳生长株丛数量进行判断。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述该温蒂椒草的组织培养方法包括外植体的选择和处理、芽诱导培养基配方、丛芽生长培养基配方和生根培养基。
2.根据权利要求1所述的一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述温蒂椒草的组织培养方法如下：
步骤一：外植体的选择和处理
将处在生长旺季的温蒂椒草腋芽茎段作为外植体，先用自来水冲洗表面的泥土，再用洗洁精清洗干净，然后在超净台上用酒精溶液进行消毒，再将其浸入0.1%升汞溶液2内，最后用无菌水进行冲洗冲洗，切成小段后存放备用；
步骤二：分化出芽
将步骤一种处理好的外植体接种于配方为MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L的芽诱导培养基中，在设定环境下培养15d左右长出小芽，并在此培养基上进行继代培养1-2次；
步骤三：增殖培养
将步骤二中得到的在小芽在无菌条件下进行处理，将芽诱导培养基中生长的分化芽在无菌环境中切下，转接到配方为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L的芽增殖培养基上进行增殖培养；
步骤四：生根培养
当步骤三中的丛生苗长至3-4cm高时，在无菌条件下将其切成3-5株为一丛的苗，然后转入配方为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L生根培养基中进行生根培养，经过14d左右幼苗长出白色不定根，30d后能长出超过2.0cm的根，可满足移栽要求。
3.根据权利要求2所述的一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述步骤一中采用的酒精浓度为70%，且消毒时间为30s，在0.1%升汞溶液中的浸泡时间在20-30min之间，并且最后用无菌水冲洗次数为5次，同时切成小段长度范围在0.4-0.6cm之间。
4.根据权利要求2所述的一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述步骤二中培养基的外界环境温度保持在23-27℃之间，光照时间在8-10h之间，且光照度在1000-2000Lux之间。
5.根据权利要求2所述的一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述步骤一、步骤三和步骤四中对外植体和幼苗进行切断时均在无菌条件下进行，且在选取外植体时应保证所选取的植物生长状态和颜色相同，不同种类的外植体应做有标记。
6.根据权利要求2所述的一种温蒂椒草的组织培养方法，其特征在于：所述按要求调配完成的培养液在培养基内需要放到培养室中预培养3d，没有污染反应，则可以使用，暂时不用的培养基需要置于10℃下进行保存。
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