CN112868527B - 一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，具体地，涉及一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，所述方法包括如下步骤：步骤一：外植体的采集与消毒；步骤二：不定芽的诱导；步骤三：增殖培养；步骤四：生根培养；步骤五：入缸栽培；本发明方法生产出的组培生根苗还具有健壮、叶片展开、颜色深红、根系发达的优点，且成活率高，可以直接在草缸内栽培，将为火烈鸟椒草的规模化生产提供技术支持，具有广阔应用前景。

Description

一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体地，涉及一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法。
背景技术
火烈鸟椒草(Cryptcoryne flamingo)是天南星科隐棒花属植物，其叶片呈披针形，叶面凹凸不平，叶缘褶皱，叶脉纹理隐约可见，叶背偏粉红色，由于其如火烈鸟亮粉红色羽毛的叶色而闻名，有″椒草皇后″之美称，在水草缸造景中一般作为前景或后景草。
火烈鸟椒草是由德国Dennerle公司选育而成，由于其叶片呈红色，光合作用能力弱，对水质要求较高，栽培较为困难，目前主要依靠分株进行繁殖，繁殖系数低，繁殖速度慢，远远无法满足市场需求。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，该方法不仅可以在短时间内获得植株健壮、叶片展开、颜色深红、根系发达的组培生根苗，且其生根苗可以直接在草缸内入水栽培。此外，本发明的另一目的在于提供上述方法的应用。
本发明的目的通过如下技术方案予以实现：
一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤一：外植体的采集与消毒：选取芽体饱满，叶片尚未展开的长度为0.5～1.0cm的匍匐茎尖，用自来水清洗掉表面杂质后置于超净工作台中进行消毒；
步骤二：不定芽的诱导：将消毒完成后的外植体，接种至不定芽诱导培养基中，所述不定芽诱导培养基以LM为基本培养基，所述不定芽诱导培养基中还添加了6-BA、NAA、肌醇、蔗糖和卡拉胶；培养条件为：温度25±2℃，前3天暗培养，第4天开始每日光照10h，光照强度为10001ux；
步骤三：增殖培养：将诱导出的不定芽在诱导培养基中接种2次后，切掉上部叶片，按3～4个芽一丛接种至增殖培养基中，所述增殖培养基以LM为基本培养基，所述增殖培养基中还添加了6-BA、NAA、蔗糖和卡拉胶，培养条件为：温度25±2℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d；
步骤四：生根培养：将长势良好、颜色鲜艳的增殖芽按3～4个芽一丛接种至生根培养基中，所述生根培养基以1/2LM培养基为基本培养基，所述生根培养基中还添加了NAA、蔗糖和卡拉胶，培养条件为：温度25±2℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d；
步骤五：入缸栽培：将长势良好、颜色深红、根系粗壮的生根苗，清洗掉根部培养基，照生根接种时切好的芽丛大小，栽培于水草缸基质中，每日光照10h，光照强度为3000lux，温度为25±2℃。
进一步的，所述步骤二和步骤三中的LM培养基包括以下成分：1200mg/L NH4NO3、1500mg/L KNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、200mg/L KH2PO4、22.3mg/LMnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl、37.13mg/L FeSO4·7H2O、49.6mg/L Na2·EDTA、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.1mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.5mg/L盐酸毗哆醇，所述LM培养基的pH为5.8～6.0，溶剂为水。
进一步的，所述步骤四中1/2LM培养基为将LM培养基中1200mg/L NH4NO3、1500mg/L KNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、200mg/L KH2PO4的用量减半，其余成分不变，所述1/2LM培养基的pH为5.8～6.0，溶剂为水。
进一步的，所述步骤一中消毒步骤为：先用75％酒精消毒30s，然后用无菌水清洗3次，再用添加了2滴吐温-20的0.1％升汞消毒10min，期间不断振荡，最后用无菌水清洗5次。
优选的，所述步骤二中6-BA、NAA、肌醇、蔗糖和卡拉胶的含量分别为3mg/L、0.05mg/L、2mg/L、30g/L和6g/L。
优选的，所述步骤三中6-BA、NAA、蔗糖和卡拉胶的含量分别为1mg/L、0.1mg/L、30g/L和6g/L。
优选的，所述步骤四中NAA、蔗糖和卡拉胶的含量分别为0.3mg/L、45g/L和6g/L。
优选的，所述步骤五中水草缸基质为已使用4个月以上的水草泥。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明方法具有诱导率高、增殖系数大、丛芽粗壮、生根率高的优点。本发明方法生产出的组培生根苗还具有健壮、叶片展开、颜色深红、根系发达的优点，且成活率高，可以直接在草缸内栽培，将为火烈鸟椒草的规模化生产提供技术支持，具有广阔应用前景。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式，对本发明火烈鸟椒草快速繁殖的方法以及有益效果进行详细说明。
其中，图1为本发明增殖瓶苗图；
图2为本发明草缸水下栽培图。
具体实施方式
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
以下实施例中所用LM培养基包括以下成分：1200mg/L NH4NO3、1500mg/L KNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、200mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.25mg/LCuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl、37.13mg/L FeSO4·7H2O、49.6mg/L Na2·EDTA、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.1mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.5mg/L盐酸毗哆醇，所述LM培养基的pH为5.8～6.0，溶剂为水。
以下实施例中所用1/2LM培养基为将LM培养基中1200mg/L NH4NO3、1500mg/LKNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、200mg/L KH2PO4的用量减半，其余成分不变，所述1/2LM培养基的pH为5.8～6.0，溶剂为水。
实施例1：
本发明实施例1一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，包括如下步骤：
1、外植体的采集与消毒：选取芽体饱满，叶片尚未展开的长度为0.5cm的匍匐茎尖，用自来水清洗掉表面杂质后置于超净工作台中进行消毒，先用75％酒精消毒30s，然后用无菌水清洗3次，再用添加了2滴吐温-20的0.1％升汞消毒10min，期间不断振荡，最后用无菌水清洗5次。
2、不定芽的诱导：将消毒完成后的外植体，接种至不定芽诱导培养基中，所述不定芽诱导培养基以LM为基本培养基，所述不定芽诱导培养基中还添加了3mg/L 6-BA、0.05mg/L NAA、2mg/L肌醇、30g/L蔗糖和6g/L卡拉胶，培养条件为：温度25℃，前3天暗培养，第4天开始每日光照10h，光照强度为1000lux。
3、增殖培养：将诱导出的不定芽在诱导培养基中接种2次后，切掉上部叶片，按3～4个芽一丛接种至增殖培养基中，所述增殖培养基以LM为基本培养基，所述增殖培养基中还添加了1mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖和6g/L卡拉胶，培养条件为：温度25℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d。
4、生根培养：将长势良好、颜色鲜艳的增殖芽按3～4个芽一丛接种至生根培养基中，所述生根培养基以1/2LM培养基为基本培养基，所述生根培养基中还添加了0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖和6g/L卡拉胶，培养条件为：温度25℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d。
5、入缸栽培：将长势良好、颜色深红、根系粗壮的生根苗，清洗掉根部培养基，照生根接种时切好的芽丛大小，栽培于水草缸基质中，水草缸基质为已使用4个月以上的水草泥，每日光照10h，光照强度为3000lux，温度为25℃。
实施例2
本发明实施例2一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，具体步骤与实施例1相同，不同之处在于：步骤4中生根培养基添加的NAA浓度为0.2mg/L。
实施例3
本发明实施例3一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，具体步骤与实施例1相同，不同之处在于：步骤4中生根培养基添加的NAA浓度为0.3mg/L。
实施例4
本发明实施例4一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，具体步骤与实施例1相同，不同之处在于：步骤4中生根培养基添加的NAA浓度为0.3mg/L，蔗糖浓度为40g/L。
实施例5
本发明实施例5一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，具体步骤与实施例1相同，不同之处在于：步骤4中生根培养基添加的NAA浓度为0.3mg/L，蔗糖浓度为45g/L。
实施例6
本发明实施例6一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，具体步骤与实施例1相同，不同之处在于：步骤4中生根培养基添加的NAA浓度为0.3mg/L，蔗糖浓度为45g/L。
步骤5中水草缸基质为未使用过的水草泥。
使用本发明实施例1-6方法栽培的火烈鸟椒草的生长情况如下表：
表1实施例1-6火烈鸟椒草的生长情况
Figure BDA0002919641820000051
以火烈鸟椒草匍匐茎尖为外植体，在诱导培养基中培养15d即可长出不定芽，转接至LM+1mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L卡拉胶的增殖培养基中培养20d后，增殖系数可达3.2，增殖苗植株粗壮、叶片展开、颜色深红；将增殖苗转接至0.3mg/L NAA+45g/L蔗糖+6g/L卡拉胶的生根培养基中，15d后的生根率可达100％，生根后的组培苗植株粗壮、叶片展开、颜色深红、根系粗壮，入缸栽培于已使用4个月以上的水草泥中栽培成活率可达85％。
由此可见，在添加了0.3mg/L NAA、45g/L蔗糖和6g/L卡拉胶的生根培养基中生根培养以及在已使用4个以上的水草泥中栽培，可以使火烈鸟椒草的生根率和栽培成活率达到最高，生产出的组培生根苗健壮、叶片展开、颜色深红且根系发达。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种火烈鸟椒草快速繁殖的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
步骤一：外植体的采集与消毒：选取芽体饱满，叶片尚未展开的长度为0.5~1.0cm的匍匐茎尖，用自来水清洗掉表面杂质后置于超净工作台中进行消毒；
步骤二：不定芽的诱导：将消毒完成后的外植体，接种至不定芽诱导培养基中，所述不定芽诱导培养基以LM为基本培养基，所述不定芽诱导培养基中还添加了6-BA、NAA、肌醇、蔗糖和卡拉胶；培养条件为：温度25±2℃，前3天暗培养，第4天开始每日光照10h，光照强度为1000lux；
步骤三：增殖培养：将诱导出的不定芽在诱导培养基中接种2次后，切掉上部叶片，按3~4个芽一丛接种至增殖培养基中，所述增殖培养基以LM为基本培养基，所述增殖培养基中还添加了6-BA、NAA、蔗糖和卡拉胶，培养条件为：温度25±2℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d；
步骤四：生根培养：将长势良好、颜色鲜艳的增殖芽按3~4个芽一丛接种至生根培养基中，所述生根培养基以1/2LM培养基为基本培养基，所述生根培养基中还添加了NAA、蔗糖和卡拉胶，培养条件为：温度25±2℃，光照强度2000lux，光照时间12h/d；
步骤五：入缸栽培：将长势良好、颜色深红、根系粗壮的生根苗，清洗掉根部培养基，照生根接种时切好的芽丛大小，栽培于水草缸基质中，每日光照10h，光照强度为3000lux，温度为25±2℃；
所述步骤二和步骤三中的LM培养基的成分为：1200mg/L NH4NO3、1500mg/L KNO3、220mg/L CaCl2•2H2O、370mg/L MgSO4•7H2O、200mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4•4H2O、8.6mg/L ZnSO4•7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4•2H2O、0.25mg/LCuSO4•5H2O、0.025mg/L CoCl、37.13mg/L FeSO4•7H2O、49.6mg/L Na2•EDTA、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.1mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.5mg/L盐酸毗哆醇，所述LM培养基的pH为5.8~6.0，溶剂为水；
所述步骤四中1/2LM培养基为将LM培养基中1200mg/L NH4NO3、1500mg/L KNO3 、220mg/L CaCl2•2H2O 、370mg/L MgSO4•7H2O、200mg/L KH2PO4的用量减半，其余成分不变，所述1/2LM培养基的pH为5.8~6.0，溶剂为水；
所述步骤一中消毒步骤为：先用75%酒精消毒30s，然后用无菌水清洗3次，再用添加了2滴吐温-20的0.1%升汞消毒10min，期间不断振荡，最后用无菌水清洗5次；
所述步骤二中6-BA、NAA、肌醇、蔗糖和卡拉胶的含量分别为3mg/L、0.05 mg/L、2 mg/L、30g/L和6g/L；
所述步骤三中6-BA、NAA、蔗糖和卡拉胶的含量分别为1 mg/L、0.1 mg/L、30g/L和6g/L；
所述步骤四中NAA、蔗糖和卡拉胶的含量分别为0.3 mg/L、45 g/L和6g/L； 所述步骤五中水草缸基质为已使用4个月以上的水草泥。
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