CN101406157B - 一种花叶夹竹桃的组织培养方法 - Google Patents

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一种花叶夹竹桃的组织培养方法，采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段为外植体，经消毒后，接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，长成的芽苗，剪切，转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，剪切后接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，取出清洗，移栽到含有泥炭:黄心土＝1:1(体积比)的基质中，25天后生根成活，生根率达86％以上。

Description

一种花叶夹竹桃的组织培养方法
技术领域
本发明涉及植物的组织培养法，具体地说，是花叶夹竹桃的组织培养法。
背景技术
花叶夹竹桃(Nerium indicum cv.Variegata)是夹竹桃科夹竹桃属常绿直立大灌木。原产于伊朗、印度、尼泊尔，我国长江以南各省区广为栽植的常用彩叶树种。整个植株，黄绿相间，有的叶片全黄，有的叶片黄、绿交错。植株高达4-5米，萌蘖性强，极耐修剪。叶革质，较原种叶片略薄，花冠粉红色，径约5厘米，有特殊香气，单瓣或重瓣，果长圆形，花期6-10月，常植于公园、庭院、街头、绿地等供观赏。为了保持植株原有性状，必需采用无性繁殖方法繁殖，传统的繁殖方法是扦插、压条，但繁殖速度慢。由于种质资源少，传统方法很难在短期内获得大量植株。在现有技术中，没有有关花叶夹竹桃组织培养方法的报道。
发明内容
一种花叶夹竹桃的组织培养方法，它基本上由下列步骤组成：
步骤1：采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(一般8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；
步骤2：在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，所述的启动培养基为：每升基本培养基加：噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-苄基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；
步骤3：将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步，所述的增殖培养基为：每升基本培养基加：玉米素(ZT)0.5-1.5毫克、6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；
步骤4：将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步，所述的壮苗培养基为：每升基本培养基加：玉米素(ZT)0.2-1.0毫克、6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；
步骤5：将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，所述的生根处理产生根原基培养基为：每升基本培养基加：α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；
步骤6：将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭:黄心土＝1:1(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86％以上，40-50天，全光照。
上述的花叶夹竹桃的组织培养方法，所述的基本培养基的配方见表1：
表1：每升基本培养基中含有如下物质种类和质量：
 
化学名称 中文名称 mg/L 备注
Ca(NO3)2·4H2O 硝酸钙 371-445 大量元素
NH4NO3 硝酸铵 268-320
KNO3 硫酸钾 600-720
MgSO4·7H2O 硫酸镁 248-333
KH2PO4 磷酸二氢钾 115-136
CaCl2·2H2O 氯化钙 70-77
MnSO4·4H2O 硫酸锰 22.5 微量元素
ZnSO4·7H2O 硫酸锌 8.6
H3BO3 硼酸 6.2
CuSO4·5H2O 硫酸铜 0.25
Na2MoO4·2H2O 钼酸钠 0.25
FeSO4·7H2O 硫酸亚铁 27.3 铁盐
Na2-EDTA 乙二胺四乙酸钠 37.3
thiamine·HCl(维生素B1) 盐酸硫胺素VB1 1.0 有机附加物
pyridoxin·HCl(维生素B6) 盐酸吡哆辛VB6 0.5
nicotinic acid(Vit B5) 烟酸VB5 0.5
Glycine 甘氨酸 2.0
myo-inositol 肌醇 100
普通食糖 20000
 
卡拉胶 6000
本发明的花叶夹竹桃的组织培养方法，通过组织培养方法，能保持原植株的优良性状，而且繁殖速度快，能在短期内生产大量优质种苗，满足园林绿化市场的需要。
具体实施方式
实施例1.花叶夹竹桃的组织培养
所用的基本培养基配方如表2
   表2 每升基本培养基中含有如下物质种类和质量：
 
中文名称 mg/L 备注
硝酸钙 371 大量元素
硝酸铵 400
硫酸钾 600
硫酸镁 370
磷酸二氢钾 170
氯化钙 96
硫酸锰 22.5 微量元素
硫酸锌 8.6
硼酸 6.2
硫酸铜 0.25
钼酸钠 0.25
 
硫酸亚铁 27.3 铁盐
乙二胺四乙酸钠 37.3
盐酸硫胺素VB1 1.0 有机附加物
盐酸吡哆辛VB6 0.5
 
烟酸VB5 0.5
甘氨酸 2.0
肌醇 100
普通食糖 20000
卡拉胶 6000
启动培养基：每升基本培养基+TDZ 0.1mg+BA 1.0mg+IBA 0.02mg；
增殖培养基：每升基本培养基+ZT 0.5mg+BA 1.0mg+IBA 0.05mg+Charcoal 1000mg；
壮苗培养：每升基本培养基+ZT 0.2mg+BA 0.5mg+IBA 0.1mg+Charcoa1 1000mg；
生根处理产生根原基培养：每升基本培养基+NAA 0.2mg+IBA 0.4mg+Charcoal 2000mg。
将上述启动培养基注入玻璃瓶中，经高温高压消毒(120-125℃，1.1KG/CM2)20分钟，待用。
1、采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；
2、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗；
3、将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，一个周期30天的繁殖倍数为4.0，生长高度达3.5cm，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步；
4、将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步；
5、将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天；
6、将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭:黄心土＝1:1(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86％以上，40-50天，全光照，可实现花叶夹竹桃的工厂化生产。
实施例2.花叶夹竹桃的组织培养
所用的基本培养基配方如表3
  表3 每升基本培养基中含有如下物质种类和质量：
 
中文名称 mg/L 备注
硝酸钙 445 大量元素
 
硝酸铵 320
硫酸钾 720
硫酸镁 333
磷酸二氢钾 136
氯化钙 77
硫酸锰 22.5 微量元素
硫酸锌 8.6
 
硼酸 6.2
硫酸铜 0.25
钼酸钠 0.25
硫酸亚铁 27.3 铁盐
乙二胺四乙酸钠 37.3
盐酸硫胺素VB1 1.0 有机附加物
盐酸吡哆辛VB6 0.5
烟酸VB5 0.5
甘氨酸 2.0
肌醇 100
普通食糖 20000
卡拉胶 6000
启动培养基：每升基本培养基+TDZ 0.5mg+BA 1.5mg+IBA 0.1mg；
增殖培养基：每升基本培养基+ZT 1.5mg+BA 2.0mg+IBA 0.2mg+Charcoal 2000mg；
壮苗培养：每升基本培养基+ZT 1.0mg+BA 1.0mg+IBA 0.3mg+Charcoal 2000mg；
生根处理产生根原基培养：每升基本培养基+NAA 0.5mg+IBA 0.5mg+Charcoal 3000mg。
其它步骤同实施例1.

Claims (1)

1.一种花叶夹竹桃的组织培养方法，其特征是它由下列步骤组成：
步骤1：采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒8-10分钟，用无菌水冲洗3-5次；
步骤2：在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，所述的启动培养基为：每升基本培养基加：噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-苄基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；
步骤3：将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步，所述的增殖培养基为：每升基本培养基加：玉米素0.5-1.5毫克、6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；
步骤4：将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步，所述的壮苗培养基为：每升基本培养基加：玉米素0.2-1.0毫克、6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；
步骤5：将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，所述的生根处理产生根原基培养的培养基为：每升基本培养基加：α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；
步骤6：将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有体积比为泥炭∶黄心土＝1∶1的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，前10天遮光75％，后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86％以上，40-50天，全光照，所述的基本培养基的配方如下：
硝酸钙：371-445mg/L；硝酸铵：268-320mg/L；硫酸钾：600-720mg/L；硫酸镁：248-333mg/L；磷酸二氢钾：115-136mg/L；氯化钙：70-77mg/L；硫酸锰：22.5mg/L；硫酸锌：8.6mg/L；硼酸：6.2mg/L；硫酸铜：0.25mg/L；钼酸钠：0.25mg/L；硫酸亚铁：27.3mg/L；乙二胺四乙酸钠：37.3mg/L；盐酸硫胺素VB1：1.0mg/L；盐酸吡哆辛VB6：0.5mg/L；烟酸VB5：0.5mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；肌醇：100mg/L；普通食糖：20000mg/L；卡拉胶：6000mg/L。
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