CN107549018B - 蕲艾组培育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种蕲艾组培育苗方法。所述方法包括：制备无菌外植体；将无菌外植体接种于愈伤组织培养基中，培养后得到蕲艾愈伤组织；将蕲艾愈伤组织接种于愈伤组织分化培养基中，培养后愈伤组织分化出不定芽；将不定芽切下接种于生根培养基中，培养后得到蕲艾生根组培苗；将生根组培苗炼苗后移栽至混合基质上定植。本发明所述方法具有繁殖系数高、成本低廉、操作简单的优点，本发明方法可适用于工厂化生产蕲艾组培苗，采用本发明所述方法可建立蕲艾组培育苗工厂，实现长年规模化生产蕲艾组培苗。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种蕲艾组培育苗方法。
背景技术
蕲艾(Artemisia argyi Levl.et Van.var.argyi cv.Qiai)属桔梗目、菊科多年生草本植物，又名大叶艾、祁艾，因其原产于医圣李时珍故里湖北省蕲春县而得名，蕲艾与蕲竹、蕲蛇、蕲龟等特产中药材并称“蕲春四宝”，为《本草纲目》所推崇，2013年入选中国国家地理标志产品保护名录。近几年来，蕲艾产业发展迅猛。据不完全统计，2015年仅蕲春县蕲艾产业净产值达到13.7亿元，利税2亿多元；2016年，种植面积达到7万亩，生产加工企业超过 200家，产值过1000万元的企业25家，实体店600多家，网店1000余家，带动当地就业和经济快速增长，2016年国家中医药管理局和中药协会授予蕲春“中国艾都”称号。
生产上蕲艾的繁殖方法主要有三种，即种子繁殖、根状茎繁殖和分株繁殖。在上述三种繁殖方法中，种子繁殖因出芽率低(仅为5％)、且苗期长达2年，一般不采用；根状茎繁殖，成活率较高，但存在苗期较长(2个月)、占用后期生长时间，影响蕲艾品质的不足；分株繁殖成活率高且无幼苗生长期，是一种较好的繁殖方式，但分株需要消耗大量的人工，生产成本较高。
植物组织培养技术在农作物离体块方面应用十分广泛，已经发展成为一种常规的种苗繁育技术，但至今未见有关蕲艾组培育苗的成功报道，一个重要的原因是蕲艾富含多种有机化合物，如乙酸乙酯、1.8-桉叶油素、水合莰烯、樟脑、2-松油醇、葛缕酮等，并且其精油的出油率为一般艾草的两倍以上；同时，蕲艾富含侧柏酮和异侧柏酮，而一般植物并不含有此类成份；上述有机物的存在增加了蕲艾组织培养的难度。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种操作简便、成本低廉、繁殖系数高的蕲艾组培育苗方法。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种蕲艾组培育苗方法，包括如下步骤：
(1)制备外植体：选择蕲艾离体叶片为外植体；消毒处理后制备成无菌外植体；
(2)诱导愈伤组织：将步骤(1)制备所得无菌外植体接种于愈伤组织培养基中，置于一定条件下培养后，得到蕲艾愈伤组织；
(3)愈伤组织不定芽分化：将步骤(2)制备所得蕲艾愈伤组织接种于愈伤组织分化培养基中，置于一定条件下培养后，愈伤组织分化出不定芽；
(4)不定芽生根培养：将步骤(3)制备所得不定芽切下，接种于生根培养基中，置于一定条件下培养后，得到蕲艾生根组培苗；
(5)将生根组培苗置于遮阳网下炼苗后，移栽至混合基质上定植。
上述方案中，步骤(2)所述愈伤组织培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25～30g/L、 2，4-二氯苯氧乙酸0.1～0.5mg/L、细胞分裂素KT 0.5～1.5mg/L和琼脂6.0～7.0g/L。
上述方案中，步骤(2)所述培养条件为：温度25～27℃、光照强度2500～3000lux、相对湿度75～85％、pH值5.6～5.8、光照时数14～16h/d。
上述方案中，步骤(3)所述愈伤组织分化培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25～30 g/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.01～0.05mg/L、细胞分裂素KT 0.01～0.05mg/L、活性炭0.25g/L 和琼脂6.0～7.0g/L。
上述方案中，步骤(3)所述培养条件为：温度25～27℃、光照强度2500～3000lux、相对湿度75～85％、pH值5.6～5.8、光照时数14～16h/d。
上述方案中，步骤(4)所述生根培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25～30g/L、 2，4-二氯苯氧乙酸0.01～0.05mg/L和琼脂6.0～7.0g/L。
上述方案中，步骤(4)所述培养条件为：温度25～27℃、光照强度2500～3000lux、相对湿度75～85％、pH值5.6～5.8、光照时数14～16h/d。
上述方案中，步骤(5)所述基质的组成为：山沙、泥炭、腐熟鸡粪的质量比为5～7:2～3:1～2。
本发明的有益效果如下：
(1)繁殖系数高：采用本发明可实现周年生产蕲艾组培苗，单个叶片外植体单茬可分化不定芽4～6个，每年可收获15～20茬，繁殖效率极高；
(2)成本低廉：采用本发明生产蕲艾组培苗成本约0.02元/株，按栽植密度150株/m计算，每亩比人工挖苗节约成本30％以上；
(3)操作简单：采用本发明生产蕲艾组培苗，所需的生产设备都是常规的仪器设备，使用的耗材均为普通试剂，没有特别的要求；一般人员经过简单的培训都能上岗，没有高的学历要求；
(4)本发明方法可适用于工厂化生产蕲艾组培苗，采用本发明所述方法可建立蕲艾组培育苗工厂，实现长年规模化生产蕲艾组培苗。
附图说明
图1为蕲艾叶片诱导的愈伤组织照片。
图2为蕲艾愈伤组织分化的不定芽照片。
图3为蕲艾生根苗照片。
图4为盆栽的蕲艾组培苗。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例1
一种蕲艾组培育苗方法，包括如下步骤：
(1)选择外植体：夏初(5月中旬)选择当年生蕲艾植株，取植株上倒数第4至第5片叶(从植株顶端往下数)为外植体；
(2)外植体消毒：将外植体放入150mL烧杯内，烧杯用纱布盖住并用橡皮筋固定后，置于水龙头下自流水冲洗30min，然后将外植体放入无菌烧杯内，先用无菌水冲洗5次，接着放入0.1％升汞溶液中浸泡15min左右，再用无菌水冲洗3次，最后用灭菌的滤纸吸去多余的水份晾干，放入无菌培养皿后置于超净工作台内备用；
(3)诱导愈伤组织：将制备好的蕲艾叶片外植体接种于愈伤组织培养基中，愈伤组织培养基的配方为：MS培养基+2,4-D 0.1mg/L+细胞分裂素KT 0.5mg/L+蔗糖25g/L+ 琼脂6.5g/L，培养条件：温度25℃、光照强度2500lux、相对湿度85％、pH值5.7、光照时数14～16h/d，培养15d后即可获得蕲艾愈伤组织(附图1)；
(4)愈伤组织分化不定芽：将培养15～20d的蕲艾愈伤组织接种于愈伤组织分化培养基，所述愈伤组织分化培养基的配方为：MS培养基+2,4-D 0.02mg/L+细胞分裂素KT0.02mg/L +活性炭0.25g/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L，培养条件：温度27℃、光照强度3000lux、相对温度80％、pH值5.7、光照时数16h/d，培养15d后愈伤组织即可分化出不定芽(附图2)；
(5)不定芽生根培养：将培养25～30d、长度大于5cm的蕲艾不定芽切下，接种于生根培养基中，所述生根培养基的配方为：MS培养基+2,4-D 0.01mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，培养条件：温度27℃、光照强度3000lux、相对温度75％、pH值5.7、光照时数14h/d，培养10～15d后即可获得蕲艾生根组培苗(附图3)；
(6)生根苗炼苗移栽：将生根苗置于50％遮阳网下炼苗7d后，移栽至混合基质上定植 (附图4)，基质组成为山沙:泥炭:腐熟鸡粪的质量比为7:2:1。
从本实施例可以看出，本发明所述方法具有：(1)繁殖系数高，可实现周年生产蕲艾组培苗，单个叶片外植体单茬可分化不定芽4～6个，每年可收获15～20茬，繁殖效率极高；(2) 成本低廉：采用本发明生产蕲艾组培苗成本约0.02元/株，按栽植密度150株/m计算，每亩比人工挖苗节约成本30％以上；(3)操作简单：采用本发明生产蕲艾组培苗，所需的生产设备都是常规的仪器设备，使用的耗材均为普通试剂，没有特别的要求；一般人员经过简单的培训都能上岗，没有高的学历要求；(4)本发明方法可适用于工厂化生产蕲艾组培苗，采用本发明所述方法可建立蕲艾组培育苗工厂，实现长年规模化生产蕲艾组培苗。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种蕲艾组培育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）制备外植体：选择蕲艾离体叶片为外植体；消毒处理后制备成无菌外植体；
（2）诱导愈伤组织：将步骤（1）制备所得无菌外植体接种于愈伤组织培养基中，置于一定条件下培养后，得到蕲艾愈伤组织，所述愈伤组织培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25~30 g/L、 2,4-二氯苯氧乙酸0.1~0.5 mg/L、细胞分裂素KT 0.5~1.5 mg/L和琼脂6.0~7.0 g/L；所述培养的条件为：温度25~27℃、光照强度2500~3000 lux、相对湿度75~85 %、pH值5.6~5.8、光照时数14~16 h/d，培养时间为15~20天；
（3）愈伤组织不定芽分化：将步骤（2）制备所得蕲艾愈伤组织接种于愈伤组织分化培养基中，置于一定条件下培养后，愈伤组织分化出不定芽，所述愈伤组织分化培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25~30 g/L、 2,4-二氯苯氧乙酸0.01~0.05 mg/L、细胞分裂素KT0.01~0.05 mg/L、活性碳0.25 g/L和琼脂6.0~7.0 g/L；所述培养的条件为：温度25~27 ℃、光照强度2500~3000 lux、相对湿度75~85 %、pH值5.6~5.8、光照时数14~16 h/d，培养时间为25~30天；
（4）不定芽生根培养：将步骤（3）制备所得不定芽切下，接种于生根培养基中，置于一定条件下培养后，得到蕲艾生根组培苗，所述生根培养基的配方为：在MS培养基中加入蔗糖25~30 g/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.01~0.05 mg/L和琼脂6.0~7.0 g/L；所述培养的条件为：温度25~27 ℃、光照强度2500~3000 lux、相对湿度75~85 %、pH值5.6~5.8、光照时数14~16 h/d，培养时间为10~15天；
（5）将生根组培苗置于遮阳网下炼苗后，移栽至混合基质上定植。
2.根据权利要求1所述的蕲艾组培育苗方法，其特征在于，步骤（5）所述基质的组成为：山沙、泥炭、腐熟鸡粪的质量比为5~7:2~3:1~2。
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| Title |
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| Production of artemisinin from cell suspension culture of Artemisia annua L;Chan Lai Keng、Nallammai Singaram和Boey Peng Lim;《AsPac J. Mol. Biol. Biotechnol.》;20100131;第18卷(第1期);139-141 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107549018A (zh) | 2018-01-09 |
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