CN116034873B - 一种柽柳组织快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种柽柳组织快繁方法，包括以下步骤：S1.外植体消毒：将切段后的柽柳外植体依次采用酒精、氯化汞消毒；S2.接种：然后将消毒后的外植体接入培养基上，薄膜封口，于24～26℃、光暗交替条件下培养至少60d，获得无菌苗；S3.炼苗移栽：将所述无菌苗置于带有小拱棚的日光温室中炼苗3～5d，然后去掉封口膜，加入适量无菌水，再炼苗3～5d，移栽于沙土苗床上，保持在温度为23～26℃、湿度70～80％下培养，待长出新根后，去掉小拱棚，正常管理，翌年移栽至苗圃地。本申请大大简化了组织培养步骤，同时通过延长无菌苗培养时间，大大提高了移栽成活率，适宜用于柽柳大规模生产育苗。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及了一种柽柳组织快繁方法。
背景技术
柽柳(Tamarix chinensis)，是柽柳科、柽柳属植物，花为两性花，花小密集，春、夏、秋三季均可开花。花色为红色、粉红色，少白色。全世界共存有约90种，多分布于干旱盐碱地区，具有抗干旱、耐盐碱的特性，在干旱、半干旱的沙荒地和盐碱地区作为优势物种分布广泛，是防止水土流失及改良盐碱地的优良树种。
生产上柽柳的育苗主要采用扦插育苗和种子繁殖技术，除此之外，有关柽柳组织培养的方法也有少量报道，如王方琳等公开的“长穗柽柳组织培养即植株再生研究”，但是研究重点集中在组织培养阶段，未解决从组培到田间移栽的问题，采用传统方法移栽成活率不到40％，而且其涉及的组织培养包括愈伤组织诱导、不定芽诱导和增殖培养三个阶段，工序复杂，所需时间相对较长。
因此，本申请针对上述技术问题，提出一种柽柳组织培养时间短、田间移栽成活率高的快繁方法。
发明内容
本发明的目的就在于为解决现有技术的不足，而提供一种柽柳组织快繁方法。
本发明的目的是以下述技术方案实现的：
一种柽柳组织快繁方法，包括以下步骤：
S1.外植体消毒：将切段后的柽柳外植体依次采用酒精、氯化汞消毒；
S2.接种：然后将消毒后的外植体接入培养基上，薄膜封口，于24～26℃、光暗交替条件下培养至少60d，获得无菌苗；所述培养基为添加了吲哚乙酸的1/2MS培养基，所述吲哚乙酸添加量为0.08～0.12mg/L培养基；
S3.炼苗移栽：将所述无菌苗置于带有小拱棚的日光温室中炼苗3～5d，然后去掉封口膜，加入适量无菌水，加水量以没过培养基为宜，再炼苗3～5d，移栽于沙土苗床上，保持在温度为23～26℃、湿度70～80％下培养，待长出新根后，去掉小拱棚，正常管理，翌年移栽至苗圃地。
优选的，所述外植体通过下述方式采集获得：采集野外柽柳无病虫害、健康的成熟枝条，剪成10～15cm插穗，于营养钵中扦插，以其生长出的嫩枝作为外植体。
优选的，步骤S1所述切段长度为1.5～2.5cm。
优选的，步骤S1采用所述酒精消毒的浓度以体积分数计为70～75％，时间为20～40s。
优选的，采用所述氯化汞消毒的浓度以质量分数计为0.08～0.12％，消毒时间为2～3min。
优选的，步骤S2所述光暗交替培养周期为12h/12h。
优选的，步骤S2所述光暗交替培养过程中光照培养光强为1500～2500Lx。
优选的，步骤S2所述无菌苗培养时间为60～90d。
优选的，步骤S3所述沙土苗床中的沙土预先采用质量百分含量为0.15～0.25％的高锰酸钾消毒。
因此，本申请通过选用适宜的培养基及生长因子，大大简化了组织培养步骤，同时通过延长无菌苗培养时间，大大提高了移栽成活率，适宜用于柽柳大规模生产育苗。
附图说明
图1是获得的外植体照片示意图；
图2是外植体切段和消毒过程示意图；
图3是外植体接种培养初始示意图；
图4是外植体在1/2MS培养基上获得的无菌苗示意图(左图培养25d左右，右图培养40d左右)；
图5是图4右图中无菌苗底部生根示意图；
图6是炼苗过程示意图；
图7是移栽过程示意图；
图8是移栽后60d左右无菌苗成活情况图(其中，左图是培养40d无菌苗移栽后的图片，右图是培养90d无菌苗移栽后的图片)。
具体实施方式
本发明提供了一种柽柳组织快繁方法，包括以下步骤：
S1.外植体消毒：将切段后的柽柳外植体依次采用酒精、氯化汞消毒。
优选采用采集野外柽柳无病虫害、健康的成熟枝条，剪成10～15cm插穗，于营养钵中扦插，以其生长出的嫩枝作为外植体，经研究，该方式得到的外植体萌芽率高，且容易消毒；切段长度优选为1.5～2.5cm。
消毒对外植体出芽率有重要影响，消毒不彻底，将导致培养过程中出现污染，消毒过度，虽然能抑制污染，但是将对外植体组织产生较大伤害，影响发芽率，经过优选，本申请采用酒精和氯化汞结合消毒的方式，首先采用毒性较低浸润性强的酒精对外植体进行短时间消毒，酒精消毒浓度为70～75％(体积分数)，时间为20～40s，可以对组织表面进行消毒，并降低后续毒性较强的氯化汞消毒时间，以达到尽可能消毒彻底同时又减轻对组织损伤的目的，氯化汞消毒浓度优选为0.08～0.12％(质量分数)，消毒时间为2～3min，消毒时间过长，将导致对植物组织损伤过大。
S2.接种：然后将消毒后的外植体接入培养基上，薄膜封口，于24～26℃、光暗交替条件下培养至少60d(从接种日开始计算)，获得无菌苗；培养基为添加了吲哚乙酸的1/2MS培养基，吲哚乙酸添加量为0.08～0.12mg/L培养基。光暗交替培养周期优选为12h/12h，光暗交替培养过程中光照培养光强为1500～2500Lx。
经研究发现，柽柳具有产生不定芽的特性，组织培养相对比较容易，结合适宜培养基和生长因子刺激，可以将愈伤组织诱导、不定芽诱导和增殖培养三步骤合在一个步骤完成，大大了简化组织培养步骤。经过优化，1/2MS培养基比较适合柽柳组培，且在加入0.08～0.12mg/L吲哚乙酸时其愈伤组织、生根及无菌苗的生长均比较好。
S3.炼苗移栽：将培养至少60d的无菌苗置于带有小拱棚的日光温室中炼苗3～5d，然后去掉封口膜，加入适量无菌水，加水量以没过培养基为宜，再炼苗3～5d，移栽于沙土苗床上，沙土预先采用质量百分含量为0.15～0.25％的高锰酸钾消毒，防止污染，保持在温度为23～26℃、湿度70～80％下培养，待长出新根后，去掉小拱棚，正常管理，翌年移栽至苗圃地。
由于柽柳的容易产生不定芽的特性，组织培养相对比较容易，但是由无菌苗到大田移栽的过程却是制约柽柳组培的关键环节。申请人经过研究发现无菌苗的生长时间对移栽成活率具有关键作用，发现培养60d以上相比常规的30～40d成活率可显著提高，推测延长无菌苗培养时间，其根系发育比较完整，可更好对抗移栽后的环境变化，提高成活率。日光温室中搭建小拱棚也可以进一步保障炼苗移栽前后的温湿度适宜，提高移栽成活率。去掉封口膜后加入无菌水再进行炼苗，可降低炼苗污染、改善生根效果，进一步提高移栽成活率。
因此，本申请通过选用适宜的培养基及生长因子，大大简化了组织培养步骤，同时通过提高无菌苗培养时间，大大提高了移栽成活率，适宜用于柽柳大规模生产育苗。
实施例1
1.材料和方法
1.1材料
组织快繁材料采集于武威市林业科学研究院柽柳种质资源圃成熟枝条，剪成10～15cm插穗于花盆中扦插，以其生长出的嫩枝为外植体进行组织培养，获得的外植体照片如图1所示。
1.2方法
实验于2021年8月～2022年4月，在甘肃省酿酒葡萄苗木快繁工程技术研究中心组培实验室和武威市林业科学研究院智能温室中进行。
1.2.1组织培养过程
(1)外植体消毒：将灭菌室和超净工作台用紫外灯消毒灭菌备用，培养皿、镊子等仪器、蒸馏水、滤纸等用高压灭菌锅灭菌备用。选择1.1获得外植体于烧杯中，用1层纱布盖住杯口置于自来水下冲洗4～6h，倒掉自来水，用蒸馏水冲洗3～5遍，置于超净工作台，用灭菌好的剪刀将外植体剪成小段，长度1.5～2.5cm，置于灭菌瓶子中用75％酒精给外植体消毒30s左右，再用0.1％的氯化汞(HgCl2)消毒约2min，用蒸馏水洗3～5次，洗涤后放在灭菌滤纸上，吸干外植体表面的水分备用；切段和消毒过程如图2所示。
(2)接种：将消毒后晾干的外植体接入提前准备好的不同的固体培养基上(具体见表1所示)，每瓶培养基接3～5个外植体，培养基接50瓶，编号后送入组培室进行培养，如图3所示。
表1
| 名称 | 激素 | 激素浓度 | 备注 |
| MS培养基 | IAA | 0.2mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| GS培养基 | IAA | 0.2mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/2MS培养基 | IAA | 0.1mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/2MS培养基 | IAA | 0.2mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/2MS培养基 | IAA | 0.4mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/2MS培养基 | / | 0 | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/4MS培养基 | IAA | 0.2mg/L | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
| 1/4MS培养基 | / | 0 | 培养基含25g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH为5.8 |
(3)培养条件：培养温度为24～26℃左右，光/暗周期为12/12h，光强2000Lx左右。
1.2.2炼苗移栽
分别将组培40d、50d、60d、90d的无菌苗进行移栽。将组培苗带培养瓶放入带有小拱棚的日光温室中炼苗4d，然后去掉组培瓶封口膜，加入适量无菌水(加水量以没过培养基为宜)，再炼苗4d。炼苗过程如图6所示。将组培苗移出培养瓶，用清水将组培苗根部培养基清洗干净，及时移栽。移栽过程如图7所示。移栽时，将上述苗木栽植于提前准备好的带有4cm厚度沙子的苗床上(其中沙子用0.2％的高锰酸钾进行消毒)，及时喷透水，遮荫保湿，保持温度在23～26℃，湿度70～80％。之后加强管理，待长出新根后，逐渐放风，将日光温室中的小拱棚逐渐去掉，正常管理，翌年移栽至苗圃地。
1.2.3数据观测
主要观测记录柽柳外植体在各个培养基上愈伤组织产生情况、生根情况以及移栽后苗木成活情况。
2.结果
2.1不同培养基无菌苗生长状况
为提高柽柳组织培养效率，本申请采用“一步成苗法”进行组织培养，在组培过程中对适宜培养基进行了试验研究，结果如表2所示。结果显示，柽柳无菌苗在1/2MS培养基(0.1mg/L吲哚乙酸)上生长最好，其愈伤组织及生根都比其他培养基快，且根壮，愈伤组织质地松散生长较好，无菌苗健壮，如图4和5所示。1/2MS培养基(0.2mg/L吲哚乙酸)相对其他培养基，柽柳外植体生长相对较好，但是其根比1/2MS培养基(0.1mg/L吲哚乙酸)上的数量少且比较弱，生根相对较慢。1/2MS培养基(无吲哚乙酸)上柽柳外植体能够正常生长，且生根较快，愈伤组织和生根几乎同时进行，但是后期无菌苗生长较弱，根弱数量较少。1/2MS培养基(0.4mg/L吲哚乙酸)上柽柳外植体无愈伤组织和根的产生，可以说高浓度的激素严重抑制了其生长。
1/4MS培养基(0.2mg/L吲哚乙酸)上柽柳外植体能正常生长，但是愈伤组织质地坚硬，生根慢且根较细，无菌苗较弱；1/4MS培养基(无吲哚乙酸)上柽柳外植体能够较快产生愈伤组织并生根，但是后期无菌苗根细且少。GS培养基(0.2mg/L吲哚乙酸)上柽柳无愈伤组织产生，直接生根，其生长特征类似于扦插育苗，但其根较细，无菌苗生长较弱。MS培养基(0.2mg/L吲哚乙酸)愈伤组织、生根及无菌苗生长均比较慢，且无菌苗较弱，根细且弱。
结论：柽柳组培时培养基及激素种类和浓度对其愈伤组织产生、生根及无菌苗的生长均有一定的影响，本申请中采用的1/2MS培养基比较适合柽柳组织快速组培，且在加入0.1mg/L吲哚乙酸时其愈伤组织、生根及无菌苗的生长均比较好。
表2不同培养基无菌苗生长状况
2.2无菌苗不同生长时间对炼苗成活率的影响
根据文献报道及本试验研究，柽柳组培相对比较容易，由无菌苗到大田移栽的过程却是制约柽柳组培的关键环节，申请人通过调整炼苗方式、组培培养基等过程中发现无菌苗的生长时间对移栽成活率具有关键作用，故设计了无菌苗的不同生长时间进行炼苗移栽，统计成活率及生长情况。结果如表3，结果显示，柽柳无菌苗生长40～50d左右移栽时苗木成活率都比较低，60d以上苗木成活率显著提高，但是以90d以上苗木成活率最高，如图8所示。
表3柽柳无菌苗不同生长时间对移栽成活率的影响
| 无菌苗生长时间(d) | 成活率(％) |
| 40 | 35.83 |
| 50 | 54.17 |
| 60 | 77.5 |
| 90 | 95.8 |
实施例2
(1)外植体消毒：将灭菌室和超净工作台用紫外灯消毒灭菌备用，培养皿、镊子等仪器、蒸馏水、滤纸等用高压灭菌锅灭菌备用。选择1.1获得外植体于烧杯中，用1层纱布盖住杯口置于自来水下冲洗5h，倒掉自来水，用蒸馏水冲洗3～5遍，置于超净工作台，用灭菌好的剪刀将柽柳外植体(采集武威市林业科学研究院柽柳种质资源圃成熟枝条，剪成10～15cm插穗于花盆中扦插，以其生长出的嫩枝为外植体)剪成小段，长度1.5～2.5cm，置于灭菌瓶子中用75％酒精给外植体消毒30s左右，再用0.1％的氯化汞(HgCl2)消毒约2min，用蒸馏水洗4次，洗涤后放在灭菌滤纸上，吸干外植体表面的水分备用。
(2)接种：将消毒后晾干的外植体接入提前准备好的1/2MS固体培养基(添加0.1mg/L吲哚乙酸)上，每瓶培养基接3～5个外植体，送入组培室进行培养，培养温度为24～26℃左右，光/暗周期为12/12h，光强2000Lx左右。经测定，生根率为95％，萌芽率为95％。
(3)炼苗移栽：将组培90d的无菌苗带培养瓶放入带有小拱棚的日光温室中炼苗4d，然后去掉组培瓶封口膜，加入适量无菌水(加水量以没过培养基为宜)，再炼苗4d。将组培苗移出培养瓶，用清水将组培苗根部培养基清洗干净，及时移栽。移栽时，将上述苗木栽植于提前准备好的带有4cm厚度沙子的苗床上(其中沙子用0.2％的高锰酸钾进行消毒)，及时喷透水，遮荫保湿，保持温度在23～26℃，湿度70～80％。之后加强管理，待长出新根后，逐渐放风，将日光温室中的小拱棚逐渐去掉，正常管理，翌年移栽至苗圃地，移栽成活率为95.8％。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (4)
1.一种柽柳组织快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.外植体消毒：将切段后的柽柳外植体依次采用酒精、氯化汞消毒；所述切段长度为1.5～2.5cm；采用所述酒精消毒的浓度以体积分数计为70～75％，时间为20～40s；采用所述氯化汞消毒的浓度以质量分数计为0.08～0.12％，消毒时间为2～3min；
S2.接种：然后将消毒后的外植体接入培养基上，薄膜封口，于24～26℃、光暗交替条件下培养至少60d，获得无菌苗；所述培养基为添加了吲哚乙酸的1/2MS培养基，所述吲哚乙酸添加量为0.08～0.12mg/L培养基；所述光暗交替培养周期为12h/12h，所述光暗交替培养过程中光照培养光强为1500～2500Lx；
S3.炼苗移栽：将所述无菌苗置于带有小拱棚的日光温室中炼苗3～5d，然后去掉封口膜，加入适量无菌水，加水量没过培养基，再炼苗3～5d，移栽于沙土苗床上，保持在温度为23～26℃、湿度70～80％下培养，待长出新根后，去掉小拱棚，正常管理，翌年移栽至苗圃地。
2.如权利要求1所述的柽柳组织快繁方法，其特征在于，
所述外植体通过下述方式采集获得：采集野外柽柳无病虫害、健康的成熟枝条，剪成10～15cm插穗，于营养钵中扦插，以其生长出的嫩枝作为外植体。
3.如权利要求1所述的柽柳组织快繁方法，其特征在于，
步骤S2所述无菌苗培养时间为60～90d。
4.如权利要求1所述的柽柳组织快繁方法，其特征在于，
步骤S3所述沙土苗床中的沙土预先采用质量百分含量为0.15～0.25％的高锰酸钾消毒。
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Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4612725A (en) * | 1985-06-03 | 1986-09-23 | Plant Research Laboratories | Method for acclimatizing and propagating plant tissue culture shoots |
| JP2006055054A (ja) * | 2004-08-19 | 2006-03-02 | Taisei Corp | タマリクス属植物の培養苗生産方法 |
| JP2006061059A (ja) * | 2004-08-26 | 2006-03-09 | Taisei Corp | タマリクス属植物への遺伝子導入方法 |
| AU2009201231A1 (en) * | 2009-03-30 | 2010-10-14 | University Of Queensland | Control of weeds |
| CN104542294A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-29 | 上海杉一植物科技有限公司 | 柽柳组培苗生根培养的方法 |
| CN105052738A (zh) * | 2015-07-31 | 2015-11-18 | 青岛正杰实业有限公司 | 一种柽柳组织培养快速繁殖的方法 |
| CN106508678A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-22 | 甘肃省治沙研究所 | 一种沙生柽柳组织培养生根方法 |
| CN106550872A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-04-05 | 甘肃省治沙研究所 | 一种柽柳快速生根培养基及柽柳组织培养方法 |
| CN107278895A (zh) * | 2017-07-12 | 2017-10-24 | 山东师范大学 | 柽柳的工业化组培快繁技术 |
| CN107410031A (zh) * | 2017-09-25 | 2017-12-01 | 东北林业大学 | 一种基于愈伤组织分化的柽柳组培分化体系 |
| CN107548941A (zh) * | 2017-09-15 | 2018-01-09 | 甘肃省治沙研究所 | 一种沙生柽柳硬枝扦插育苗方法 |
| AU2021105606A4 (en) * | 2021-08-16 | 2021-10-28 | Xinjiang Institute Of Ecology And Geography，Chinese Academy Of Sciences | Planting method of oasis economic protection forest in front of sandstorm |
| KR20220019939A (ko) * | 2020-08-11 | 2022-02-18 | 대한민국(산림청 국립산림과학원장) | 찰피나무 조직배양 묘목의 대량 생산 방법 |
| JP2022160084A (ja) * | 2021-04-06 | 2022-10-19 | 懐化学院 | 黄精の急速繁殖方法 |
| CN116058281A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-05-05 | 甘肃农业大学 | 一种沙木蓼组织快繁方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110558233B (zh) * | 2019-10-23 | 2021-01-12 | 中南林业科技大学 | 一种黑老虎带芽茎段外植体消毒方法及其直接诱导无菌芽快速增殖的方法 |
-
2022
- 2022-12-02 CN CN202211542517.4A patent/CN116034873B/zh active Active
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4612725A (en) * | 1985-06-03 | 1986-09-23 | Plant Research Laboratories | Method for acclimatizing and propagating plant tissue culture shoots |
| JP2006055054A (ja) * | 2004-08-19 | 2006-03-02 | Taisei Corp | タマリクス属植物の培養苗生産方法 |
| JP2006061059A (ja) * | 2004-08-26 | 2006-03-09 | Taisei Corp | タマリクス属植物への遺伝子導入方法 |
| AU2009201231A1 (en) * | 2009-03-30 | 2010-10-14 | University Of Queensland | Control of weeds |
| CN104542294A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-29 | 上海杉一植物科技有限公司 | 柽柳组培苗生根培养的方法 |
| CN105052738A (zh) * | 2015-07-31 | 2015-11-18 | 青岛正杰实业有限公司 | 一种柽柳组织培养快速繁殖的方法 |
| CN106508678A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-22 | 甘肃省治沙研究所 | 一种沙生柽柳组织培养生根方法 |
| CN106550872A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-04-05 | 甘肃省治沙研究所 | 一种柽柳快速生根培养基及柽柳组织培养方法 |
| CN107278895A (zh) * | 2017-07-12 | 2017-10-24 | 山东师范大学 | 柽柳的工业化组培快繁技术 |
| CN107548941A (zh) * | 2017-09-15 | 2018-01-09 | 甘肃省治沙研究所 | 一种沙生柽柳硬枝扦插育苗方法 |
| CN107410031A (zh) * | 2017-09-25 | 2017-12-01 | 东北林业大学 | 一种基于愈伤组织分化的柽柳组培分化体系 |
| KR20220019939A (ko) * | 2020-08-11 | 2022-02-18 | 대한민국(산림청 국립산림과학원장) | 찰피나무 조직배양 묘목의 대량 생산 방법 |
| JP2022160084A (ja) * | 2021-04-06 | 2022-10-19 | 懐化学院 | 黄精の急速繁殖方法 |
| AU2021105606A4 (en) * | 2021-08-16 | 2021-10-28 | Xinjiang Institute Of Ecology And Geography，Chinese Academy Of Sciences | Planting method of oasis economic protection forest in front of sandstorm |
| CN116058281A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-05-05 | 甘肃农业大学 | 一种沙木蓼组织快繁方法 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| Episodic defoliation rapidly reduces starch but not soluble sugars in an invasive shrub, Tamarix spp.;Kevin R. Hultine等;《American Journal of Botany》;第108卷(第08期);第1343-1353页 * |
| Hydrolyzable tannins of tamaricaceous plants. IV: Micropropagation and ellagitannin production in shoot cultures of Tamarix tetrandra;Mohamed A A Orabi等;《Phytochemistry》;第72卷(第16期);第1978-1989页 * |
| 中国柽柳组培快繁技术研究;魏海霞等;《中国农学通报》;第36卷(第02期);第48-52页 * |
| 利用组织培养快速繁殖柽柳;韦小敏等;《北方园艺》;2007年(第01期);第168-169页 * |
| 柽柳一步成苗离体培养技术;韩琳娜、周凤琴;《湖北农业科学》;第49卷(第11期);第2629-2631页 * |
| 柽柳的组织培养与快速繁殖;程磊、周根余;《上海师范大学学报(自然科学版)》;第30卷(第02期);第67-71页 * |
| 柽柳的组织培养研究;宿炳林;《山西农业科学》;第43卷(第12期);第1589-1590页 * |
| 柽柳耐盐优良无性系的选育;徐天宇;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;农业科技专辑(2019年第08期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116034873A (zh) | 2023-05-02 |
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