CN105900834B - 一种黄樟离体植株再生的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。所述的黄樟离体植株再生的方法包含如下步骤：(1)外植体采集，(2)腋芽诱导，(3)增殖培养，(4)生根培养，(5)炼苗与移栽，(6)移栽幼苗管理。本发明以生长速度快、干型通直、材性优良、樟脑樟油含量高及抗逆性强的成年优良单株为母本，以基部萌枝为外植体，通过基本培养基选择、激素种类、浓度及其配比的筛选，建立其高效的离体植株再生快繁技术，达到增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。

Description

一种黄樟离体植株再生的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。
背景技术
黄樟(Cinnamomum porrectum(Roxb.)Kosterm.)隶属樟科(Lauraceae)樟属(Cinnamomum)，成年树高可达20m，胸径40cm以上。黄樟产自我国广州、广西、福建、江西、湖南、贵州、四川、云南等地。巴基斯坦、印度经马来西亚至印度尼西亚也有黄樟分布。
黄樟为常绿乔木，其树姿秀丽，主干明显而通直光滑，生长快速，其胸径年平均生长量比香樟大50％，材积大100％，是优良的速生树种。黄樟木材纹理通直，结构均匀细致，稍重而韧，易于加工，纵切面平滑，干燥后少开裂，且不变性，含油或粘液很丰富，各切面均极油润，耐腐防蛀，且富有香气，是一种贵重木材，也是造船、家具和工艺美术品的绝佳用材。黄樟枝繁叶茂，四季常青，耐修剪，可造型；叶片较大，叶色浓绿，有光泽，秋末时分有部分老叶呈桔红色，较为美观，是优良的园林造景树种，亦可作行道树。黄樟树冠高大，能遮阳蔽日，可滞尘吸音，净化空气，具有优良的生态价值。黄樟的枝叶富含樟脑、樟油，是提制樟脑和蒸取樟油原材料。樟脑有兴奋、强心、消炎、镇痛、抗菌、止咳、促渗等药理作用，多用于医药上，樟油被广泛应用于香料工业、医药卫生等领域，随着现代化工、医药工业的发展进步，人们对天然樟脑、樟油的需求越来越大。
黄樟具有良好的材用、观赏、生态和经济价值，近年栽培和造林面积不断扩大。但目前黄樟人工栽培所用苗木都是采用种子苗造林，来自不同种源、家系种子的遗传变异，导致黄樟苗木及其造林后的林分的生长速度、木材质量、精油含量等相差很大，从而影响到林地经营的产量及经济效益。选择优良母本进行组培规模化育苗，实现良种无性化推广是黄樟这一优良树种产业化开发的重要途径。
目前，黄樟的组织培养技术未见报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种黄樟离体植株再生的方法，该方法具有不定芽诱导快、增殖倍率高、芽粗壮伸长快、生根率高、生根苗根系发达健壮、移栽成活率高等特点。
本发明的另一目的在于提供上述方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种黄樟离体植株再生的方法，包含如下步骤：
(1)外植体采集：取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；
(2)腋芽诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；
(3)增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；
(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；
(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；
(6)移栽幼苗管理；
步骤(1)中所述的黄樟优选为：干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害的优良黄樟单株为母本；
步骤(1)中所述的黄樟优选为种植时间不小于15年的黄樟；
步骤(1)中优选对黄樟进行基部环割以促进基部萌枝；
步骤(1)中外植体采集前，优选每隔7～10d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4～5次；
步骤(1)中所述的外植体采集的时间优选为秋季(9～11月)；
步骤(1)中所述的外植体优选为：半木质化萌枝去叶后切成带1～2个叶腋的茎段；
所述的茎段的长度优选为2～4cm；
步骤(1)中所述的消毒的方式优选为：将外植体清洗后，依次用新洁尔灭溶液、乙醇溶液和升汞溶液浸泡消毒并再次清洗；
步骤(1)中所述的消毒的方式进一步优选为：
①将外植体用水清洗后，用体积分数为0.1％的新洁尔灭溶液刷洗3～7min，再用无菌水冲洗1～2次；
②将步骤①中冲洗后的外植体用体积分数为70～75％的乙醇溶液浸泡20～30s，再用无菌水冲洗1～2次；
③将步骤②中冲洗后的外植体加入质量分数为0.05％～0.1％的升汞溶液中浸泡3～10min，其间不断摇动，再用无菌水冲洗5～6次；具体浸泡时间，依据外植体幼嫩程度确定；
步骤(2)中所述的消毒后的外植体优选切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再接种到诱导培养基中；
步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.1～1.0mg/L、NAA0.01～0.1mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶7～8g/L，诱导培养基的pH为5.8～6.0；
步骤(2)中所述的诱导培养的条件优选为温度为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；
步骤(2)中所述的诱导培养的条件进一步优选为温度为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；
步骤(2)中所述的诱导培养的时间优选为20～30d；
步骤(3)中所述的腋芽的高度为不小于2cm；
步骤(3)中所述的腋芽优选截成1.0～1.5cm的茎段再转接到增殖培养基上；
步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5～2mg/L、KT 0.3～1mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和琼脂5～6g/L，增殖培养基的pH为5.8～6.0；
步骤(3)中所述的增殖培养的条件优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；
步骤(3)中所述的增殖培养的条件进一步优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；
步骤(3)中所述的增殖培养的的时间优选为20～30d；
步骤(4)中所述的顶芽的长度优选为2.0～3.0cm；
步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖15～20g/L、琼脂5～6g/L，生根培养基的pH为5.8～6.0；
步骤(4)中所述的生根培养的条件优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；
步骤(4)中所述的生根培养的条件进一步优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；
步骤(4)中所述的生根培养的时间优选为15～20d；
所述1/2MH基本培养基为将MH基本培养基中所含大量元素，包括NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4的用量减半，其余成分不变；
所述的MH基本培养基包含如下组分：
720mg/L NH4NO3、1800mg/L KNO3、340mg/L CaCl2·2H2O、200mg/L Ca(NO3)2、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2·EDTA·H2O、100mg/L Myo-Insitol(肌醇)、2.0mg/L Glycine(甘氨酸)、0.1mg/L Thiamine·HCl(维生素B1)、0.5mg/L Nicotinic·acid(烟酸)、0.5mg/L Pyridoxine·HCl(维生素B6)，MH基本培养基的pH为5.8；
步骤(5)所述的炼苗移栽的方式优选为：将组培生根苗移到温室中适应外界环境5～7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1～2d，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到混合基质中，移栽完后淋透定根水；
所述的混合基质优选为：泥炭土与珍珠岩按照体积比为3：1混合；
所述的混合基质使用前优选用质量分数为1～2‰的高锰酸钾灭菌；
步骤(6)中所述的移栽幼苗管理的方式优选为：移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，控制培养温度15～30℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1％的百菌清或多菌灵溶液喷施小苗，之后每隔7～10天喷雾一次；移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1～2‰的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7～10天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理；
本发明的原理：本发明以生长速度快、干型通直、材性优良、樟脑樟油含量高及抗逆性强的成年优良单株为母本，以基部萌枝为外植体，通过基本培养基选择、激素种类、浓度及其配比的筛选，建立其高效的离体植株再生快繁技术，达到增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。上述黄樟成年优树的高效离体植株再生方法，外植体的腋芽诱导率高达100％；增殖系数达10.5以上，增殖芽伸长生长快，培养20～30d芽高达3～4cm；生根率可达96％，平均根数为3.4根/株；组培生根苗健壮、移栽成活率高达93％。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明提供的黄樟离体植株再生的方法诱导速度快、诱导率高；殖系数大、丛芽粗壮、伸长生长快；生根率高，根系发达，生根苗粗壮、移栽成活率高，苗木生长健壮整齐。
(2)本发明操作简单，陈本低，易于大规模推广使用，通过规模化育苗，将为我国黄樟优良单株的无性化推广提供技术支持，为提升黄樟人工林经济效益提供优质种苗保障，有着极其重大的意义。
附图说明
图1是实施例1优树无菌材料的腋芽诱导的结果图。
图2是实施例1诱导腋芽形成的芽丛的形态图。
图3是实施例1增殖培养基中的增殖苗的形态图。
图4是实施例1生根培养基中的组培生根苗的形态图。
图5是实施例1生根培养基中的组培生根苗的根系形态图。
图6是实施例1生根移栽苗的形态图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
根据黄樟优树嫩枝的生理状态、离体培养的营养需求设计MH基本培养基，以下实施例中涉及到的MH基本培养基的配方如下：
720mg/L NH4NO3、1800mg/L KNO3、340mg/L CaCl2·2H2O、200mg/L Ca(NO3)2、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2·EDTA·H2O、100mg/L Myo-Insitol(肌醇)、2.0mg/L Glycine(甘氨酸)、0.1mg/L Thiamine·HCl(维生素B1)、0.5mg/L Nicotinic·acid(烟酸)、0.5mg/L Pyridoxine·HCl(维生素B6)；其pH值为5.8；
所述的1/2MH基本培养基为将MH基本培养基中所含大量元素(NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4)的用量减半，其余成分不变。
实施例1一种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
(1)外植体采集和消毒：选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔7d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝5次；10月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4℃冰箱保存备用；然后将枝条剪成4cm长、带2个叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数0.1％的新洁尔灭溶液轻轻刷洗7min，随后用无菌水冲洗2次；在体积分数为70％的酒精中浸泡20s，倒掉酒精后无菌水冲洗2次；然后加入质量分数0.1％的升汞溶液，浸泡5min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
(2)腋芽诱导培养：将步骤(1)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，随后接种到诱导培养基(MH+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+蔗糖30g/L+卡拉胶8g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为5.8)中进行诱导培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体；诱导培养4～5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养25d后一个叶腋能萌出多个腋芽(图1、图2)，腋芽平均高度为3.5cm，诱导率为100％；
(3)丛芽增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8)中进行增殖培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，增殖培养30d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高≧2cm)分别高达10.5和9.61个/丛(图3)；
(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为2cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA 0.3mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，pH为5.8)中进行生根培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，生根培养20d后，得到组培生根苗；其中，不定根的诱导率为96％，平均根数3.4条/株(图4、图5)；
(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1d，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为1‰的高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3：1的混合基质中，该移栽成活率为93％(图6)；
(6)移栽幼苗管理：移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，控制培养温度30℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1％的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次；移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1‰的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
实施例2一种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
(1)外植体采集和消毒：选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔8d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝5次；9月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4℃冰箱保存备用；然后将枝条剪成3cm长、2个带叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数为0.1％的新洁尔灭溶液轻轻刷洗5min，随后用无菌水冲洗1次；在体积分数为70％的酒精中浸泡30s，倒掉酒精后无菌水冲洗1次，然后加入质量分数为0.05％的升汞溶液，浸泡3min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
(2)腋芽诱导培养：将步骤(1)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，然后接种到诱导培养基(MH+0.1mg/L 6-BA+0.01mg/L NAA+蔗糖25g/L+卡拉胶7.5g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为5.9)中进行诱导培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m- 2.s-1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体；诱导培养5～6d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养20d后一个叶腋能萌出多个腋芽，腋芽平均高度为2.9cm，诱导率为95％；
(3)丛芽增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 0.5mg/L+KT 0.3mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂5g/L，pH为5.9)中进行增殖培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，增殖培养20d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高≧2cm)分别高达7.82和6.3个/丛；
(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为3cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA 0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH为6.0)中进行生根培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，生根培养15d后，得到组培生根苗；其中，不定根的诱导率为90％，平均根数2.8条/株；
(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境5d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1d，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为1‰的高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3：1的混合基质中，该移栽成活率为93％；
(6)移栽幼苗管理：移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，控制培养温度25℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1％的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次；移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度2‰的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
实施例3一种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
(1)外植体采集和消毒：选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔10d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4次；11月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4℃冰箱保存备用；然后将枝条剪成2cm长、1个带叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数为0.1％的新洁尔灭溶液轻轻刷洗3min，随后用无菌水冲洗1次；在体积分数为75％的酒精中浸泡30s，倒掉酒精后无菌水冲洗1次；然后加入质量分数为0.1％的升汞溶液，浸泡8min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗6次，无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
(2)腋芽诱导培养：将步骤(1)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，然后接种到诱导培养基(MH+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+蔗糖40g/L+卡拉胶7g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为6.0)中进行诱导培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体；诱导培养4～5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养30d后一个叶腋能萌出多个腋芽，腋芽平均高度为3.7cm，诱导率为91％；
(3)丛芽增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 2.0mg/L+KT 1mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH为6.0)中进行增殖培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，增殖培养25d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高≧2cm)分别达9.7和8.64个/丛；
(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为2cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA0.5mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，pH为5.9)中进行生根培养(培养温度为25℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d)，生根培养20d后，得到组培生根苗；不定根的诱导率为98％，平均根数2.3条/株；
(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境5d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1d，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为2‰高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3：1的混合基质中，该移栽成活率为93％；
(6)移栽幼苗管理：移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，控制培养温度20℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1％的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次；移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1‰的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种黄樟离体植株再生的方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)外植体采集：取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；
(2)腋芽诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；
(3)增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；
(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；
(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；
(6)移栽幼苗管理；
步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA0.1～1.0mg/L、NAA0.01～0.1mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶7～8g/L，诱导培养基的pH为5.8～6.0；
步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5～2mg/L、KT 0.3～1mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和琼脂5～6g/L，增殖培养基的pH为5.8～6.0；
步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖15～20g/L、琼脂5～6g/L，生根培养基的pH为5.8～6.0；
所述的MH基本培养基包含如下组分：
720mg/L NH4NO3、1800mg/L KNO3、340mg/L CaCl2·2H2O、200mg/L Ca(NO3)2、370mg/LMgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/LH3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2·EDTA·H2O、100mg/L Myo-Insitol、2.0mg/LGlycine、0.1mg/L Thiamine·HCl、0.5mg/L Nicotinic·acid、0.5mg/L Pyridoxine·HCl，MH基本培养基的pH为5.8。
2.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的外植体采集的时间为9～11月。
3.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的外植体为：半木质化萌枝去叶后切成带1～2个叶腋的茎段。
4.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的诱导培养的条件为温度为25±2℃，光照时间为8～12h/d；
步骤(3)中所述的增殖培养的条件为25±2℃，光照时间为8～12h/d；
步骤(4)中所述的生根培养的条件为25±2℃，光照时间为8～12h/d。
5.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：
步骤(5)所述的炼苗移栽的方式为：将组培生根苗移到温室中适应外界环境5～7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1～2d，将组培苗取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到混合基质中，移栽完后淋透定根水。
6.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：
步骤(6)中所述的移栽幼苗管理的方式为：移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，控制培养温度15～30℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1％的百菌清或多菌灵溶液喷施小苗，之后每隔7～10天喷雾一次；移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1～2‰的复合肥。
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