CN105210863A - 一种天麻的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种天麻的组培快繁方法，属于植物细胞工程技术领域。该方法的具体步骤包括：培养基配置、外植体选择及处理、诱导愈伤组织、分化培养、增殖培养、生根培养和移栽。本发明可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
Description
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，具体地涉及一种天麻的组培快繁方法。
背景技术
天麻，据《神农本草经》记载，原名叫“赤箭”，最早见于《开宝本草》，在《本草纲目》里称为“定风草”，是著名的中药材。富含天麻素，香荚兰素，蛋白质，氨基酸，微量元素。其性辛、温、无毒，有抗癫痫，抗悸厥，抗风湿；镇静，镇痉，镇痛，补虚，平肝息风的功效。临床应用证明，对血管性神经性头痛、脑震荡后遗症等有显著疗效。
近年来，天麻属药材的市场需求量大幅度增长，但由于土地开发、环境污染及过度采挖等原因，野生天麻属药材资源日益枯竭。人工栽培天麻属药材目前普遍存在产量低、有效成分含量低等问题，严重制约了天麻属药材的产业化发展。
天麻正常的繁殖方式是块茎繁殖、种子繁殖，但由于天麻的种子体积小，采集不便，所以生产上一般采用块茎繁殖。但块茎繁殖效率很低，块茎、种子、珠芽的总繁殖效率约为1:15-1:20。采用传统的块茎繁殖越来越难以满足天麻植物规模化生产的需求。
通过组培快繁，利用优良单株作为扩繁的材料，可获得遗传基础和外观品质形状等重要性状均一的繁殖体，并进一步获得品质均一的原药材，同时通过无性繁殖可有效解决野生变家种过程中的种苗基数问题，保证规模化种植中的优质种苗批量生产问题。
天麻自身缺乏同化外界元素和获得矿质营养的能力。外界矿质营养大部分靠蜜环菌获得，蜜环菌可提供天麻全生育期的营养，天麻吸收矿质营养的关键就是蜜环菌的“泵”作用。经研究，蜜环菌起“泵”作用的物质是带负电荷的氨基酸，且主要是天冬氨酸和谷氨酸。
发明内容
本发明的目的是提供一种天麻的组培快繁方法，该方法可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤：
⑴培养基配置：基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖2-3％，琼脂1-2％，pH5.5-6.0；
愈伤组织诱导培养基：1/2MS添加KT1.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L和Glu50-1000mg/L；
分化培养基：1/2MS添加KT1.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L和Glu100-500mg/L；
增殖培养基：1/2MS添加KT0.5-1.0mg/L、LFS0.1-0.3mg/L、Asp50-200mg/L和Glu200-800mg/L；
生根培养基：1/2MS添加KT1.0-3.0mg/L、LFS0.3-0.5mg/L、Asp100-200mg/L和Glu500-1000mg/L；
⑵外植体选择及处理：取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70％酒精喷洒一遍，再用0.1％的HgCl2消毒10min，无菌水冲洗4-5次，在超净工作台上将茎尖切成0.5-1.0cm的小块；
⑶诱导愈伤组织：将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23-27℃，光照1800-2300Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
⑷分化培养：将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
⑸增殖培养：将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
⑹生根培养：将步骤⑸增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
⑺移栽：当步骤⑹的生根组培苗生长至4-6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
上述的KT为激动素，是一种细胞分裂素，可调节植物生长。
上述的LFS为灵发素，是一种新型生长调节剂，它同时具有CTK和Auxin两类激素的生物活性。
上述的Asp为天冬氨酸，Glu为谷氨酸。
本发明的有益效果是：本发明可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
具体实施方式
结合实施例进一步对本发明作阐述，不构成对本发明的限制。
实施例1
一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤：
⑴培养基配置：基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖2％，琼脂1％，pH5.5；
愈伤组织诱导培养基：1/2MS添加KT1.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp20mg/L和Glu50mg/L；
分化培养基：1/2MS添加KT1.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp20mg/L和Glu100mg/L；
增殖培养基：1/2MS添加KT0.5mg/L、LFS0.1mg/L、Asp50mg/L和Glu200mg/L；
生根培养基：1/2MS添加KT1.0mg/L、LFS0.3mg/L、Asp100mg/L和Glu500mg/L；
⑵外植体选择及处理：取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70％酒精喷洒一遍，再用0.1％的HgCl2消毒10min，无菌水冲洗4次，在超净工作台上将茎尖切成0.5cm的小块；
⑶诱导愈伤组织：将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23℃，光照2300Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
⑷分化培养：将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
⑸增殖培养：将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
⑹生根培养：将步骤⑸增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
⑺移栽：当步骤⑹的生根组培苗生长至4cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
实施例2
一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤：
⑴培养基配置：基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖3％，琼脂2％，pH6.0；
愈伤组织诱导培养基：1/2MS添加KT2.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp100mg/L和Glu1000mg/L；
分化培养基：1/2MS添加KT2.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp100mg/L和Glu500mg/L；
增殖培养基：1/2MS添加KT1.0mg/L、LFS0.3mg/L、Asp200mg/L和Glu800mg/L；
生根培养基：1/2MS添加KT3.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp200mg/L和Glu1000mg/L；
⑵外植体选择及处理：取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70％酒精喷洒一遍，再用0.1％的HgCl2消毒10min，无菌水冲洗5次，在超净工作台上将茎尖切成1.0cm的小块；
⑶诱导愈伤组织：将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为27℃，光照1800Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
⑷分化培养：将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
⑸增殖培养：将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
⑹生根培养：将步骤⑸增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
⑺移栽：当步骤⑹的生根组培苗生长至6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
实施例3
一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤：
⑴培养基配置：基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为：基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖2.5％，琼脂1.5％，pH5.8；
愈伤组织诱导培养基：1/2MS添加KT1.5mg/L、LFS0.3mg/L、Asp50mg/L和Glu500mg/L；
分化培养基：1/2MS添加KT1.5mg/L、LFS0.3mg/L、Asp50mg/L和Glu250mg/L；
增殖培养基：1/2MS添加KT0.8mg/L、LFS0.2mg/L、Asp100mg/L和Glu500mg/L；
生根培养基：1/2MS添加KT2.0mg/L、LFS0.4mg/L、Asp150mg/L和Glu800mg/L；
⑵外植体选择及处理：取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70％酒精喷洒一遍，再用0.1％的HgCl2消毒10min，无菌水冲洗5次，在超净工作台上将茎尖切成0.8cm的小块；
⑶诱导愈伤组织：将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为25℃，光照2000Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
⑷分化培养：将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
⑸增殖培养：将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
⑹生根培养：将步骤⑸增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
⑺移栽：当步骤⑹的生根组培苗生长至5cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
Claims (1)
1.一种天麻的组培快繁方法，其特征在于：包括以下具体步骤：
⑴培养基配置：基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖2-3％，琼脂1-2％，pH5.5-6.0；
愈伤组织诱导培养基：1/2MS添加KT1.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L和Glu50-1000mg/L；
分化培养基：1/2MS添加KT1.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L和Glu100-500mg/L；
增殖培养基：1/2MS添加KT0.5-1.0mg/L、LFS0.1-0.3mg/L、Asp50-200mg/L和Glu200-800mg/L；
生根培养基：1/2MS添加KT1.0-3.0mg/L、LFS0.3-0.5mg/L、Asp100-200mg/L和Glu500-1000mg/L；
⑵外植体选择及处理：取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70％酒精喷洒一遍，再用0.1％的HgCl2消毒10min，无菌水冲洗4-5次，在超净工作台上将茎尖切成0.5-1.0cm的小块；
⑶诱导愈伤组织：将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23-27℃，光照1800-2300Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
⑷分化培养：将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
⑸增殖培养：将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
⑹生根培养：将步骤⑸增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
⑺移栽：当步骤⑹的生根组培苗生长至4-6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
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|---|---|---|---|---|
| CN106106176A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-11-16 | 张玉薇 | 天麻的组培快繁方法 |
| CN106106177A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-11-16 | 张玉薇 | 天麻组织培养用培养基 |
| CN112335545A (zh) * | 2020-11-05 | 2021-02-09 | 贵州大学 | 用于春兰根状茎组织培养的培养基及组培方法 |
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| CN106106176A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-11-16 | 张玉薇 | 天麻的组培快繁方法 |
| CN106106177A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-11-16 | 张玉薇 | 天麻组织培养用培养基 |
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Application publication date: 20160106 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |