CN102428875A - 川丹参的组织培养快繁方法 - Google Patents

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张利
倪苏
谢显莉
王萌
邹章满
周永红
杨瑞武
雷淑琼
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Abstract

本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参的组织培养快繁方法，步骤如下：选择外植体；消毒处理；诱导培养；增殖培养；生根培养；炼苗与移栽。本发明川丹参的组织培养快繁方法，成果地将组织培养技术用于川丹参的快繁，并采用芽诱导和芽继代增殖结合的培养方法，有效克服了丹参茎段组织的褐化，使褐化降低20％。本发明川丹参的组织培养快繁方法，具有芽诱导率高和移栽成活率高的优点，芽诱导率一般可以达到85％以上，移栽成活率一般可到达80％以上。

Description

川丹参的组织培养快繁方法
技术领域
本发明涉及一种组织培养方法，更具体的说涉及一种川丹参1号的组织培养快繁方法。 
技术背景
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia)多年生草本植物，以其根及根茎入药，因其色红且形状似参而得名“丹参”，又称赤参、木羊乳(《吴普本草》)、紫丹参(《现代实用中药》)、红根(《中国药植志》)等。始载于《神农本草经》，列为上品，为历版《中华人民共和国药典》收载中药丹参的唯一来源。其性微寒、味苦、无毒，归心、肝二经，有活血通经、祛瘀止痛、清心安神之功效。用于治疗月经不调，经闭痛经，瘾瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。 
四川省中江县是川产道地药材——“川丹参”的主产区，其丹参种植历史悠久，据中江现存最古老的县志《康熙志》记载(成书于公元1715年)，中江的药材生产当时已初具规模。中江丹参品质极佳，以其根结实、色朱味浓、产量大、品质优而驰名中外，在国内外享有良好的声誉，树立起了“中江丹参”的品牌。从现有混杂群体中经过多年的系统选育，2011年性状稳定一致、药材产量高、品质优良、适合中江地区栽培的优质丹参新品种川丹参1号CDS-1通过了四川省品种审定委员会审定。 
近年来丹参的产业化、规模化进程加快，对优质种苗的需求量迅速增加，川丹参的传统无性根条繁殖，其繁殖系数较低，种苗带病毒等问题日益严重，这已严重影响了丹参产业的快速发展，也限制了川丹参1号这一新品种的推广。 采用现代生物技术，对川丹参1号进行组织培养与快繁，期望纯化种性，提高产量，达到“稳定、安全、可控”，既可以满足市场需要、增加农民的现金收入，又有利于出口创汇，具有较好的应用和推广意义。 
发明内容
本发明的目的是针对现有川丹参1号育种长期采用根条繁殖、种苗带病毒等问题提供一种川丹参1号组织培养快繁方法，该方法可以大量快速繁殖出生长速度快、品质优和染菌率低的丹参组培苗。 
为达到上述目的，本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参1号组织培养快繁方法，步骤如下： 
1.选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体； 
2.消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl2并滴加3-5滴吐温-80消毒5-7min，然后用无菌水冲洗5次以上； 
3.诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 
4.增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成1～3个节的切断转接到继代增殖培养基中培养，所用增殖培养基为2/3MS+0.4mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为6.0g/L，蔗糖浓度为27.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 
采用现代生物技术，对川丹参1号进行组织培养与快繁，期望纯化种性，提高产量，达到“稳定、安全、可控”，既可以满足市场需要、增加农民的现金收入，又有利于出口创汇，具有较好的应用和推广意义。 
发明内容
本发明的目的是针对现有川丹参1号育种长期采用根条繁殖、种苗带病毒等问题提供一种川丹参1号的组织培养快繁方法，该方法可以大量快速繁殖出生长速度快、品质优和染菌率低的丹参组培苗。 
为达到上述目的，本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参1号组织培养快繁方法，步骤如下： 
1.选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体； 
2.消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl2并滴加3-5滴吐温-80消毒5-7min，然后用无菌水冲洗5次以上； 
3.诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 
4.增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成1～3个节的切断转接到继代增殖培养基中培养，所用增殖培养基为2/3MS+0.4mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为6.0g/L，蔗糖浓度为27.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 
5.生根培养：将继代增殖培养基中长3～6cm的无根苗转接到生根培养基上，其余小芽继续培养；所用生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为5.0g/L，蔗糖浓度为25.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 
以上诱导、增殖和生根培养，培养温度为22±1℃，光照强度14000lx～16000lx，光照时间不少于12h·d-1； 
6.炼苗与移栽：无根苗在生根培养基中培养，当根长到2～5cm时，拿到培养室外常温下放置5～7天后打开瓶盖炼苗3～5天；经消毒清洗后移植到腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质中，并置于复有遮阳网的塑料拱棚中栽培至新芽伸长成活；所用腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质配比为2∶1∶1。 
本发明的有益效果为：本发明的川丹参1号组织培养快繁方法，成果地将组织培养技术用于川丹参的快繁，并采用芽诱导和芽继代增殖结合的培养方法，有效克服了丹参茎段组织的褐化，使褐化降低20％。本发明的川丹参1号组培快繁方法，具有芽诱导率高和移栽成活率高的优点，芽诱导率一般可以达到85％以上，移栽成活率一般可到达80％以上。 
具体实施方式
为了充分公开本发明的川丹参1号组织培养快繁方法，以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。 
实施例1 
于2010年12月挑选川丹参1号根条进行扦插繁殖，待2011年春长出新芽后开展组织培养快繁工作，具体方法如下： 
1.选择外植体：从川丹参1号植株上剪下带顶芽和带节的嫩茎段3cm为外 植体。 
2.消毒处理：材料经自来水冲洗，洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗2次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％HgCl2并滴加3滴吐温-80消毒6min，然后用无菌水冲洗6次； 
3.诱导培养：从消毒后的材料上用灭菌后的剪刀剪下1.0cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到装在广口瓶中的诱导培养基上培养； 
4.增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成2个节的切断转接到装在广口瓶中的继代增殖培养基中培养； 
5.生根培养：将继代增殖培养基中长5cm的无根苗转接到装在广口瓶中的生根培养基上，其余小芽继续培养； 
以上诱导、增殖和生根培养，培养温度为23℃，光照强度150001x，光照时间为12h·d-1。 
6.炼苗与移栽：无根苗在生根培养基中培养，当根长到4cm时，拿到培养室外常温下放置7天后打开瓶盖炼苗4天，打开瓶盖后用喷壶浇水每天早晚各一次；取出瓶苗，洗净附着在根部的培养基，用0.3％的高锰酸钾溶液浸泡1min，移植到由腐殖土、蛭石和珍珠岩以2∶1∶1的比例混合的基质中，浇透水，置于覆有遮阳网的塑料拱棚中栽培；移植后环境温度保持在15～20℃，湿度在80％，至新芽伸长成活。 

Claims (1)

1.本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参的组织培养快繁方法，步骤如下：
(1)、选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体；
(2)、消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl2并滴加3-5滴吐温-80消毒5-7min，然后用无菌水冲洗5次以上；
(3)、诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；
(4)、增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成1～3个节的切断转接到继代增殖培养基中培养，所用增殖培养基为2/3MS+0.4mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为6.0g/L，蔗糖浓度为27.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；
(5)、生根培养：将继代增殖培养基中长3～6cm的无根苗转接到生根培养基上，其余小芽继续培养；所用生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为5.0g/L，蔗糖浓度为25.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；以上诱导、增殖和生根培养，培养温度为22±1℃，光照强度14000lx～16000lx，光照时间不少于12h·d-1；
(6)、炼苗与移栽：无根苗在生根培养基中培养，当根长到2～5cm时，拿到培养室外常温下放置5～7天后打开瓶盖炼苗3～5天；经消毒清洗后移植到腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质中，并置于复有遮阳网的塑料拱棚中栽培至新芽伸长成活；所用腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质配比为2∶1∶1。 
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