CN104663457B - 丹参的组培快繁抑菌方法 - Google Patents
丹参的组培快繁抑菌方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104663457B CN104663457B CN201510122043.1A CN201510122043A CN104663457B CN 104663457 B CN104663457 B CN 104663457B CN 201510122043 A CN201510122043 A CN 201510122043A CN 104663457 B CN104663457 B CN 104663457B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seedling
- tissue
- radix salviae
- salviae miltiorrhizae
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种丹参的组培快繁抑菌方法，包括如下步骤：(1)无菌苗制备：选取野生丹参生长饱满的茎段，经流水冲洗、酒精处理、无菌水漂洗、NaClO溶液处理、无菌水漂洗后，用无菌滤纸吸去多余水分，制得无菌苗；(2)无菌苗接种：将制得的无菌苗接种到快繁培养基中；(3)增殖苗培植：无菌苗长出不定芽后，剪取1.5～2.0cm的茎段置入增殖培养基中培植；(4)生根组培苗培养：剪取生长健壮的增殖苗，置入生根培养基中培养；(5)移栽育苗：将生根组培苗炼苗后取出，洗净根部的培养物质，移栽到育苗基质中生长。本发明方法能够有效杀灭病菌，预防病菌传播，增强丹参的抗病能力，确保丹参的健康生长和优良品质。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种丹参的组培快繁抑菌方法。
背景技术
丹参(SalviamiltorrhizaBge.)为唇形科(LabiataeJuss)鼠尾草属(SalviaL)多年生草本药用植物，以根入药，是我国一种常用大宗中草药，主要用于治疗心脑血管系统疾病。近年来发现，丹参生产中有一种病毒引起丹参种质退化，该病田间发病率较高，有些田块发病率竟高达60-80％，表现为花叶、斑驳、卷叶、黄化、矮化等典型症状。感病植株的根系细小，产量大幅度下降，药用成分含量降低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够从种苗环节杀灭丹参病毒，减少或避免因病毒传播导致的丹参病害，提高丹参品质和丹参酮含量，进而增加生产效益的丹参的组培快繁抑菌方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
丹参的组培快繁抑菌方法，包括如下步骤：
(1)无菌苗制备：选取野生丹参生长饱满的茎段，流水冲洗1～3小时，用酒精处理10～20秒，无菌水漂洗3～4次，再用NaClO溶液处理5～10分钟，之后无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分，制得无菌苗；
(2)无菌苗接种：将制得的无菌苗接种到快繁培养基中；所述快繁培养基包含MS培养基、5～7g/L琼脂粉和25～35g/L的蔗糖；
(3)增殖苗培植：无菌苗长出不定芽后，剪取1.5～2.0cm的茎段置入增殖培养基中进行增殖培植得到增殖苗；所述增殖培养基包含MS培养基，以及附加的0.1～0.2mg/L植物激素BA、0.4～0.6mg/L植物激素NAA、0.01～0.02mg/L植物激素IBA、5～7g/L的琼脂粉和25～35g/L的蔗糖；
(4)生根组培苗培养：剪取生长健壮的增殖苗，置入生根培养基中进行生根培养得到生根组培苗；所述生根培养基包含MS培养基，以及附加的0.01～0.02mg/L植物激素NAA、0.4～0.6mg/L植物激素IBA、5～7g/L的琼脂粉和14～16g/L的蔗糖，调节PH值5.8～6.0；
(5)移栽育苗：将生根组培苗炼苗后取出，洗净根部的培养物质，移栽到育苗基质中生长。
作为优选，步骤(1)中，所述酒精的体积浓度为75％，所述NaClO溶液的质量分数为1％。
作为优选，步骤(2)中，所述快繁培养基包含MS培养基、6g/L琼脂粉和30g/L的蔗糖。
作为优选，步骤(3)中，所述增殖培养基包含MS培养基，以及附加的0.1mg/L植物激素BA、0.5mg/L植物激素NAA、0.01mg/L植物激素IBA、6g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。
作为进一步优选，步骤(3)中，在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度2000～3000Lx的条件下培养20～30天，得到增殖苗。
作为进一步优选，步骤(4)中，所述生根培养基包含MS培养基，以及附加的0.01mg/L植物激素NAA、0.5mg/L植物激素IBA、6.5g/L的琼脂粉和15g/L的蔗糖，调节PH值5.8～6.0。
作为进一步优选，步骤(4)中，在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度2000～3000Lx的条件下培养20～30天，得到生根组培苗。
作为进一步优选，步骤(5)中，所述育苗基质由体积比为2:2:1的珍珠岩、草炭土和园土组成，将珍珠岩、草炭土和园土充分混合后用多菌灵消毒。
作为进一步优选，步骤(5)中，将生根组培苗在培养室散射光下进行开口炼苗，使生根组培苗逐渐与外界接触，周围环境湿度保持在70～80％，5～7天后将生根组培苗取出移栽。
由于采用了上述技术方案，本发明采用组培技术繁殖丹参，能够有效脱除丹参体内的病原菌，预防病菌传播，增强丹参的抗病能力，确保丹参的健康生长和品质的提升，可使产量翻番，显著提高丹参酮含量，增加生产效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例：
丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于，包括如下步骤：
建立组培园：选址避开污染区域，对组培园的水质、土壤和空气要进行严格的检测，使空气符合大气环境质量一类标准。园内要拔除与丹参同科属的植株，以免杂交混杂，提高丹参的优良性。选用健壮、生命力强、株型优良的野生丹参植株取茎段进行培养。
(1)无菌苗制备：选取野生丹参生长饱满的茎段，流水冲洗2小时，用体积浓度为75％酒精处理10～20秒，无菌水漂洗3～4次，再用质量分数为1％NaClO溶液处理5～10分钟，之后用无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分，制得无菌苗；
(2)无菌苗接种：将制得的无菌苗接种到适宜的快繁培养基中；所述快繁培养基包含MS培养基、6g/L琼脂粉和30g/L的蔗糖，成活率可达90％以上；
(3)增殖苗培植：待无菌苗长出不定芽后，剪取1.5～2.0cm的茎段置入增殖培养基中进行增殖培植得到增殖苗；所述增殖培养基包含MS培养基，以及附加的0.1mg/L植物激素BA、0.5mg/L植物激素NAA、0.01mg/L植物激素IBA、6g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖；在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度3000Lx的条件下培养20～30天，获得丛生芽，得到增殖苗；
(4)生根组培苗培养：剪取生长健壮的增殖苗，置入生根培养基中进行生根培养得到生根组培苗；所述生根培养基包含MS培养基，以及附加的0.01mg/L植物激素NAA、0.5mg/L植物激素IBA、6.5g/L的琼脂粉和15g/L的蔗糖，调节PH值5.8-6.0；在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度3000Lx的条件下培养20～30天，得到生根组培苗；
统计分析：30天后统计增殖倍数、平均株高、生根率、平均根数和平均根长；结果表明每个外植体平均分化4至5个不定芽，平均芽长达3.25cm；生根率达89％，平均根数达7.8，平均根长达4.48cm。
(5)移栽育苗：将盛装生根组培苗的试管瓶口封口膜打开，在培养室散射光下进行开口炼苗，使试管内的生根组培苗逐渐与外界接触，1周内将周围环境湿度保持在70～80％，逐步提高小苗适应外界环境的能力，5～7天后将试管内的生根组培苗取出，洗净根部的培养物质，移栽到育苗基质中生长；所述育苗基质由体积比为2:2:1的珍珠岩、草炭土和洁净园土组成，三者充分混合后用50％多菌灵胶悬剂消毒，成活率高达95％。
通过选取一亩地的脱毒丹参(使用本发明方法繁殖的丹参)与未脱毒丹参(传统方法生产的丹参)作对比，脱毒丹参比未脱毒丹参产量提高30％，丹参酮含量提高30％，病毒发生率降低80％。
以上所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作出的等同变化与修改，均应属于本发明保护的范围。
Claims (9)
1.丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)无菌苗制备：选取野生丹参生长饱满的茎段，流水冲洗1～3小时，用酒精处理10～20秒，无菌水漂洗3～4次，再用NaClO溶液处理5～10分钟，之后无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分，制得无菌苗；
(2)无菌苗接种：将制得的无菌苗接种到快繁培养基中；所述快繁培养基为MS培养基、5～7g/L琼脂粉和25～35g/L蔗糖；
(3)增殖苗培植：无菌苗长出不定芽后，剪取1.5～2.0cm的茎段置入增殖培养基中进行增殖培植得到增殖苗；所述增殖培养基为MS培养基，附加0.1～0.2mg/L植物激素BA、0.4～0.6mg/L植物激素NAA、0.01～0.02mg/L植物激素IBA、5～7g/L琼脂粉和25～35g/L蔗糖；
(4)生根组培苗培养：剪取生长健壮的增殖苗，置入生根培养基中进行生根培养得到生根组培苗；所述生根培养基为MS培养基，附加0.01～0.02mg/L植物激素NAA、0.4～0.6mg/L植物激素IBA、5～7g/L琼脂粉和14～16g/L蔗糖，调节pH值5.8～6.0；
(5)移栽育苗：将生根组培苗炼苗后取出，洗净根部的培养物质，移栽到育苗基质中生长。
2.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(1)中，所述酒精的体积浓度为75％，所述NaClO溶液的质量分数为1％。
3.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(2)中，所述快繁培养基为MS培养基、6g/L琼脂粉和30g/L蔗糖。
4.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(3)中，所述增殖培养基为MS培养基，附加0.1mg/L植物激素BA、0.5mg/L植物激素NAA、0.01mg/L植物激素IBA、6g/L琼脂粉和30g/L蔗糖。
5.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(3)中，在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度2000～3000Lx的条件下培养20～30天，得到增殖苗。
6.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(4)中，所述生根培养基为MS培养基，附加0.01mg/L植物激素NAA、0.5mg/L植物激素IBA、6.5g/L琼脂粉和15g/L蔗糖，调节pH值5.8～6.0。
7.如权利要求1所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(4)中，在温度25±2℃，光照14～16小时，光照强度2000～3000Lx的条件下培养20～30天，得到生根组培苗。
8.如权利要求1至7任一项权利要求所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(5)中，所述育苗基质由体积比为2:2:1的珍珠岩、草炭土和园土组成，将珍珠岩、草炭土和园土充分混合后用多菌灵消毒。
9.如权利要求1至7任一项权利要求所述的丹参的组培快繁抑菌方法，其特征在于：步骤(5)中，将生根组培苗在培养室散射光下进行开口炼苗，使生根组培苗逐渐与外界接触，周围环境湿度保持在70～80％，5～7天后将生根组培苗取出移栽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510122043.1A CN104663457B (zh) | 2015-03-20 | 2015-03-20 | 丹参的组培快繁抑菌方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510122043.1A CN104663457B (zh) | 2015-03-20 | 2015-03-20 | 丹参的组培快繁抑菌方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104663457A CN104663457A (zh) | 2015-06-03 |
| CN104663457B true CN104663457B (zh) | 2016-07-27 |
Family
ID=53299472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510122043.1A Active CN104663457B (zh) | 2015-03-20 | 2015-03-20 | 丹参的组培快繁抑菌方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104663457B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105309316B (zh) * | 2015-11-27 | 2017-08-15 | 山东中医药大学 | 丹参组培苗培养基及丹参组培快繁方法 |
| CN108029558A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-05-15 | 长沙湘资生物科技有限公司 | 一种石见穿的快速繁殖方法 |
| CN111280058B (zh) * | 2020-03-24 | 2022-06-17 | 四川农业大学 | 一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102428875A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-05-02 | 四川农业大学 | 川丹参的组织培养快繁方法 |
| CN103798137A (zh) * | 2014-01-25 | 2014-05-21 | 潍坊职业学院 | 紫花丹参组培快繁方法 |
-
2015
- 2015-03-20 CN CN201510122043.1A patent/CN104663457B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102428875A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-05-02 | 四川农业大学 | 川丹参的组织培养快繁方法 |
| CN103798137A (zh) * | 2014-01-25 | 2014-05-21 | 潍坊职业学院 | 紫花丹参组培快繁方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 不同生长调节剂对丹参快速繁殖的影响;冯玲玲等;《中国野生植物资源》;20041231;第23卷(第6期);第54-57页 * |
| 丹参离体微繁技术研究;冯玲玲等;《武汉植物学研究》;20041231;第22卷(第5期);第463-468页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104663457A (zh) | 2015-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lata et al. | Propagation through alginate encapsulation of axillary buds of Cannabis sativa L.—an important medicinal plant | |
| CN104663457B (zh) | 丹参的组培快繁抑菌方法 | |
| CN106688893A (zh) | 一种牛大力组织培养育苗方法 | |
| Islam et al. | Rapid in vitro clonal propagation of herbal spice, Mentha piperita L. using shoot tip and nodal explants | |
| Sarma et al. | In vitro regeneration of plantlets from nodal explants of Aristolochia saccata and Aristolochia cathcartii | |
| CN107821168B (zh) | 一种沙冬青组培苗的繁殖方法 | |
| CN103798137A (zh) | 紫花丹参组培快繁方法 | |
| CN106135000A (zh) | 一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法 | |
| CN105340750A (zh) | 忍冬组培苗培养基及忍冬组培快繁方法 | |
| Ghauri et al. | Micropropagation of Stevia rebaudiana Bertoni through root explants | |
| CN104738108A (zh) | 一种用于织造车间杀菌的组合物 | |
| Elmaghrabi et al. | In vitro propagation of the wild medicinal plant, caper (Capparis spinosa L.) | |
| CN104488706A (zh) | 一种石斛的移栽方法 | |
| Thangavel et al. | High frequency shoots regeneration from nodal explants of Plectranthus barbatus Andrews belong to the Lamiaceae | |
| Kale et al. | In vitro regeneration and rapid multiplication of Kalanchoe blossfeldiana: An important ornamental plant | |
| Janarthanam et al. | In vitro plant regeneration from nodal explants of Coleus forskohlii Briq.-an important medicinal plant | |
| Ambajo et al. | Micropropagation of Launaea cornuta-an important indigenous vegetable and medicinal plant | |
| Passi et al. | In vitro micropropagation in tropical short day onion (Allium cepa L.) | |
| CN105660392A (zh) | 一种半夏块茎的试管培养方法 | |
| Hore et al. | Regeneration of plantlets from rhizome bud explants of Lasia spinosa (Lour.) Thwaites-A medicinal plants of Assam | |
| Naidu et al. | Conservation of an endangered medicinal plant Centella asiatica through plant tissue culture | |
| Bimal et al. | Plant regeneration from nodal explants of Adhatoda vasica Nees | |
| Nagarajan et al. | In vitro mass propagation of Bacopa monnieri (Linn.) Wettst from nodal explant-a multipurpose medicinal plant | |
| CN109169281A (zh) | 一种基于组织培养的玫瑰种质保存方法 | |
| CN107926712A (zh) | 一种滇黄精块茎和茎尖快速繁殖成苗的组培方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |