CN106135000A

CN106135000A - 一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法

Info

Publication number: CN106135000A
Application number: CN201610642551.7A
Authority: CN
Inventors: 侯娜; 李从瑞; 文弢; 王港; 杨鹏
Original assignee: GUIZHOU PROVINCIAL ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES
Current assignee: GUIZHOU PROVINCIAL ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES
Priority date: 2016-08-08
Filing date: 2016-08-08
Publication date: 2016-11-23

Abstract

本发明提供了一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)外植体的建立；(2)丛生芽诱导阶段；(3)增殖培养阶段：(4)壮苗生根阶段；(5)练苗及移栽。本发明通过在专门配制的培养基上，通过叶片作为外植体，经过诱导分化、增殖培养、壮苗生根和试管苗移栽等繁殖步骤，获得豆瓣绿完整植物，利用分化的小苗进行增殖，在短时间内获得大量整齐一致的试管苗，通过壮苗生根培养能形成完整植株。本发明的方法，2)通过青豆瓣绿组培快繁技术研究，可大大提高种苗的繁殖系数，获得品相高度一致的种苗，便于大规模的工厂化培育，在今后豆瓣绿的种苗繁育及药用开发利用方面具有十分重要的意义。

Description

一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种胡椒科植物——豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

豆瓣绿(Peperomia magnolifolia)，别名柱香、岩豆瓣、豆瓣草、豆瓣如意、四瓣金钗、指甲草、豆瓣打不死、圆叶椒草、青叶碧玉，是胡椒科草胡椒属，多年生常绿草本植物。高10-30cm。茎肉质，基部匍匐，多分枝，下部数节常生不定根，节间有粗纵棱。叶密集，3-4片轮生，大小近相等；叶柄短长1-2mm，无毛或被短柔毛；叶片椭圆形或近圆形，长9-12cm，宽5-9cm，两端钝或圆，无毛或幼叶被疏柔毛，叶脉3条，细弱，通常不明显；叶带肉质，有透明腺点，干时变淡黄色，并显皱纹。穗状花序单生、顶生或腋生，长2-4.5cm；总花梗稍较花序轴短细，被疏毛或近无毛，而花序轴密被毛；苞片近圆形，有短柄，盾状；花小，两性，无花被，与苞片同生于花序轴凹陷处；雄蕊2，花丝短，花药近椭圆形；子房卵形，1室，柱头顶生，近头状，被短柔毛。浆果卵状球形，先端尖，长近1mm/花期2-4月及9-10月。

豆瓣绿原产于西印度群岛、巴拿马、南美洲北部，后来传入中国，一般作为盆栽装饰用，以其明亮的光泽和自然地绿色受到广泛欢迎。而且该植物还可以药用，根据中医药理，其内用可以祛风除湿，止咳祛痰。外用可以治跌打损伤，骨折，所以其也是中草药的重要一部分。

青叶碧玉(即豆瓣绿)具有较高的园林观赏价值和药用价值。作为小型盆栽。常用白色塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶几、装饰柜、博古架、办公桌上，十分美丽。或任枝条蔓延垂下，悬吊于室内窗前或浴室处，也极清新悦目。功效应用：对甲醛，二甲苯，二手烟有一定的净化作用。

在《全国中草药汇编》中记载豆瓣绿全草入药。全年可采，鲜用或晒干。【主治】祛风除湿，止咳祛痰，活血止痛。用于风湿筋骨疼痛，肺结核，支气管炎，哮喘，百日咳，肺脓疡，小儿疳积，痛经；外用治跌打损伤，骨折。《植物名实图考》：治跌打。在《贵州草药》中记载可止咳，健脾。《云南中草药》中记载可清热解毒，舒筋活络。

传统的分株和扦插繁殖法，周期长，繁殖系数低，每年只能增殖1～3倍，，而且不能获得品质一致的种苗，极大地限制了豆瓣绿作为园林绿化植物、药用植物方面的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的第一目的在于提供一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：

(1)外植体的建立；

(2)丛生芽诱导阶段；

(3)增殖培养阶段：

(4)壮苗生根阶段；

(5)练苗及移栽。

优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，所述步骤(1)外植体的建立为选取生长健壮的豆瓣绿母株；更优选地，所述外植体的建立为采用生长健壮的豆瓣绿母株的叶片作为外植体。

优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，所述步骤(2)丛生芽诱导阶段：为将所述豆瓣绿母株的叶片，消毒后将芽茎段接种到MS附加培养基后，30天左右诱导生出小芽；优选地，所述消毒方法为用70％的酒精浸泡10～20秒，置于0.1％的氯化汞溶液中消毒5～7分种，无菌水冲洗4～5次。

更优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，所述步骤(2)丛生芽诱导阶段的所述MS附加培养基中添加了噻苯隆(TDZ)0.1mg/l～0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l；

最优选地，步骤(2)丛生芽诱导阶段的所述MS附加培养基中添加了噻苯隆(TDZ)0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l。

优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，其特征在于，所述步骤(3)为利用步骤(2)诱导出的小芽接种在MS附加培养基中培养45～60天，形成芽的丛生植株。更优选地，所述MS附加培养基中添加了6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l～1.0mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l～0.5mg/l。最优选地，所述MS附加培养基中添加了6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l。

优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，所述步骤(4)为将所述步骤(3)的芽的丛生植株，接种到添加MS附加培养基上，培养20天后长成具2～3条根、3～6片叶的完整植株。更优选地，所述MS附加培养基中添加了吲哚乙酸(IBA)0.1mg/l～0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l；最优选地，所述MS附加培养基中添加了吲哚乙酸(IBA)0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l。

优选地，本发明所述豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法中，所述步骤(5)为当所述步骤(4)的完整豆瓣绿植株的试管苗长至2～4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗7～10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部附着的培养基，移入用0.01％的高锰酸钾消毒的腐殖土基质中。温室保持15～25℃的温度、60％以上的湿度、70～80％的遮阴并通风，即可正常生长豆瓣绿的种苗。

本发明的另一目的在于提供上述方法获得的豆瓣绿种苗。

由上可知，本发明通过在专门配制的培养基上，通过叶片作为外植体，经过诱导分化、增殖培养、壮苗生根和试管苗移栽等繁殖步骤，获得豆瓣绿完整植物，利用分化的小苗进行增殖，在短时间内获得大量整齐一致的试管苗，通过壮苗生根培养能形成完整植株。通过发明人的努力，完成了豆瓣绿组培快繁方法的研究工作。，该方法与该方法获得种苗至少具有以下优点：

1)本发明的方法，采用组培快繁技术通常有利于解决其繁殖困难和种苗的不足，并在短期内提供大量种苗，以保护园林绿化植物的产业化发展，为豆瓣绿的有效保护、产业开发，优良品种的培育及种源基地培育建设提供技术支撑。

2)通过青豆瓣绿组培快繁技术研究，可大大提高种苗的繁殖系数，获得品相高度一致的种苗，便于大规模的工厂化培育，在今后豆瓣绿的种苗繁育及药用开发利用方面具有十分重要的意义。

具体实施方式

以下实施例被引入以例举说明本发明的具体实施方案。本领域的技术人员应当理解，在接下来的所述实施例中公开的技术表示了由本发明人发现的技术，其在本发明的实践中作用良好。但是，通过参考本公开内容，本领域的技术人员应当理解，在不背离本发明精神及范围下，可以对公开的具体实施方案作很多变化，并且仍然得到相同或相似的结果。

实施例1青叶碧玉的组培快繁方法

青叶碧玉的组培快繁，包括以下步骤：

(1)外植体的建立：

选取生长健壮的豆瓣绿母株，采用叶片作为外植体。

(2)丛生芽诱导阶段：

选用生长健壮的叶片用70％的酒精浸泡10～20秒，置于0.1％的氯化汞溶液中消毒5～7分种，无菌水冲洗4～5次，用镊子将带芽茎段接种到MS附加噻苯隆(TDZ)0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l的培养基上，30天左右诱导出小芽。

(3)增殖培养阶段：

为获得更多的种苗，利用诱导出的小芽接种在MS附加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l培养基上，经45～60天培养，形成芽的丛生植株。

(4)壮苗生根阶段：

将长成的丛生植株分开，接种到添加吲哚乙酸(IBA)0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l培养基上培养，20天后长成具2～3条根、3～6片叶的完整植株。

(5)练苗及移栽：

当豆瓣绿试管苗长至2～4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗7～10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部附着的培养基，移入用0.01％的高锰酸钾消毒的腐殖土基质中。温室保持15～25℃的温度、60％以上的湿度、70～80％的遮阴并通风，豆瓣绿即可正常生长，种苗的移栽成活率可达85％～90％以上。通常每7天喷施0.1％的磷酸二氢钾，薄肥勤施，加强病虫害管护措施即可完成豆瓣绿种苗的组培快繁过程建设。

经过培养试验，结果表明：组培快繁获得的豆瓣绿种苗增殖系数高，繁殖速度快，不受季节限制，能在短期内获得品质一致的苗木。嫁接成活率可达到95％以上，生产成本降低40％以上。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种豆瓣绿的组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：

(1)外植体的建立；

(2)丛生芽诱导阶段；

(3)增殖培养阶段：

(4)壮苗生根阶段；

(5)练苗及移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)为选取生长健壮的豆瓣绿母株；优选地，采用生长健壮的豆瓣绿母株的叶片作为外植体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)为将所述豆瓣绿母株的叶片，消毒后将芽茎段接种到MS附加培养基后，45天左右诱导生出小芽。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述MS附加培养基中添加了噻苯隆(TDZ)0.1mg/l～0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)为利用步骤(2)诱导出的小芽接种在MS附加培养基中培养45～60天，形成芽的丛生植株。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述MS附加培养基中添加了6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l～1.0mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l-0.5mg/l。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)为将所述步骤(3)的芽的丛生植株，接种到添加MS附加培养基上，培养20天后长成具2～3条根、3～6片叶的完整植株。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述MS附加培养基中添加了吲哚乙酸(IBA)0.1mg/l～0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)为当所述步骤(4)的完整豆瓣绿植株的试管苗长至2～4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗7～10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部附着的培养基，移入用0.01％的高锰酸钾消毒的腐殖土基质中。温室保持15～25℃的温度、60％以上的湿度、70～80％的遮阴并通风，即可正常生长豆瓣绿的种苗。

10.根据权利要求1-9任意一项所述方法获得的豆瓣绿种苗。