CN107509633A - 铁皮石斛组的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了铁皮石斛组的培育方法，铁皮石斛组的培育方法依次包括以下步骤，1）繁殖：a.原球茎诱导,b.原球茎分化,c.芽的增殖，d. 壮苗与生根,2）选苗,3）出瓶,4）栽培,5）田间管理、防治病虫。本发明具种子萌芽率高，异变率低，苗株成活率高，长势好，病变率低，经济效益高的优点。

Description

铁皮石斛组的培育方法

技术领域

本发明涉及铁皮石斛组的培育方法。

背景技术

铁皮石斛是一种名贵的中草药材，唐代医学经典《道藏》中，铁皮石斛被列为“中华九大仙草”之首，它作为养生保健的极品，为历代医家推崇倍至。但因其生长周期缓慢，极难存活，且被人工大量开采，野生铁皮石斛濒临灭绝。因些，人工栽培就成为一种既能保护濒危资源又可以满足人们需要的良好措施。为了获得高产、优质的铁皮石斛，必须人为创造一个优越的生长环境，使种植条件基本接近其野生的环境气候条件，以满足它的生长需要，而培养基的选择对铁皮石斛移栽的成活率、生长、繁殖和产量影响很大，因此移栽前铁皮石斛的培育至关重要。同时，它的根是气生根，有明显的好气性和浅根性，在移栽后的基质要以疏松透气、排水良好、不易发霉、无病菌，无害虫潜藏者为宜。

铁皮石斛喜温暖、多雾、微风、清洁、散射光环境，忌阳光直射和曝晒。在移栽过程中要创造条件为铁皮石斛创造最佳的生长环境。铁皮石斛原产区大多处于温带和亚热带，全年气候温暖、湿润，冬季温度在0℃以上。根据铁皮石斛的生长习性，要考虑场地的光照、温度、湿度、通风等自然因素。

发明内容

本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种种子萌芽率高，异变率低，苗株成活率高，长势好，病变率低，经济效益高的一种铁皮石斛组的培育方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现，铁皮石斛组的培育方法，依次包括以下步骤，

1）繁殖，

a. 原球茎诱导

将采集的成熟种子，用洗洁精把种子表面洗净，在自来水下冲洗 10 -15min ，然后用75 % 酒精消毒 30-35s，无菌水清洗 3 -5遍，接着用 0.1% 升汞消毒 10-12 min ,再用无菌水冲洗 4-5 遍；配置MS、 糖 30g/L、 卡拉胶 8.6 g/L 、2g/L椰子汁的混合物作为播种培养基，然后将播种于培养基中暗培养 7-10d，待种子开始萌发,颜色有点发白,将萌发的种子放于光照下培养；20d左右后取原球茎，配置1／2MS+6-BA 2.2 mg/L+NAA的混合液作为增殖培养基，将取出的原球茎接种到增殖培养基中培养 30-35d；

b.原球茎分化

配置分化培养液：MS+BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L+土豆 20 g/L+ 糖 30 g/L+ 卡拉胶8.6 g/L，将长势良好深绿色、表面有茸毛状物、结实的颗粒状原球茎转入分化培养基中，在转接时尽量不要把原球茎分散，使整个颗粒直接放入，培养周期30-32 d；

c.芽的增殖

配置芽增殖营养液：B 5 +BA 0.1mg/L+NAA 0.5 mg/L+CM150mg/L+ 糖 25g/L+土豆 10g/L+卡拉胶 8.6g/L ，原球茎在分化培养基中培养30天左右后，把长势好的丛芽分成 3-4株 / 丛接入芽增殖培养基中培养45 -50d，剩余细小的丛芽分成单株，让其继续在分化培养基中生长到 8 cm 左右，再切成 2 cm 左右长的茎段平放接种于芽增殖培养基中培养40-45d，培养时需日光灯照射，光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 10-12h/d，温度控制在25±1；

d. 壮苗与生根

配置生根培养基：B 5 +IBA 2 mg/L+ 香蕉 15g/L+糖 30g/L+ 卡拉胶 8.6g/L+异噻唑啉酮0.5g/L，培养基 pH 为 5.6-5.8 ， 培养温度 25 ℃ ，挑选出3 cm 或者 3 cm 以上丛苗，将挑选出的丛苗和单株培养的苗放入生根培养基中， 培养40-45d，所述培养基中加入少量活性炭，培养时需日光灯照射， 光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 10-12h/d，温度控制在25±1° ；

2）选苗

挑选出生长健壮、叶色正常的苗：根长需达到3cm以上，有4~5条根，根皮色白中带绿，无黑色根，无畸形，无变异，肉质茎有3~4个节间、长有4~5片叶；

3）出瓶

组培苗出瓶时，将培养基与小苗一起轻轻取出，整齐放置于盆中待清洗，污染苗、裸根苗或少根苗分别放置；正常组培苗先在清水中洗净培养基，特别要洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，再换清水清洗一到两次次；裸根或少根组培苗经过上述清洗后，还需将小苗根部置于100mg/L的ABT生根粉中浸泡15-20分钟，以进行生根诱导；污染苗经过清洗后，用1000倍多菌灵浸泡整株小苗10-15分钟；出瓶移苗的日平均气温应为15~30℃，出苗时需用镊子将组培苗小心取出；

4）栽培

（1）育苗大棚的布置，要通电、通水、通路，棚宽6m、长30m、棚肩高107m以上、棚顶高2.8m以上，棚顶覆盖塑料无滴薄膜和70%遮荫度的遮荫网，棚内安装有自来水管，大棚四周和入口装有40目的防虫网，棚内装有自动控制的喷雾系统，这样可以防晒、防雨、防虫、保温、保湿、透气，还能大大减少劳动量；

（2）棚内搭建畦底架空的高架种植畦，可使水分和透气容易控制，从而为组培苗生长提供最佳水分，保证通风透气，又能同时喷肥喷药，移栽成活率高，大面积移栽时能大大节省劳动力；用角钢、砖头、木条或方条等材料作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3~0.5cm的塑料平板作为栽培基质的支撑面，支撑面要有约20—30斜度，畦宽1~1.2m，畦底架空高度30~50cm，种植畦上方装有可随时喷雾的喷头；

（3）准备基质：将腐土、牛粪、糠未、木屑、蔗渣、树皮、石灰石等混合，打碎成有玉米粒大小的颗粒状，用0.05-0.1g/L的0.3%高锰酸钾后对基质喷洒消毒，基质的ph值控制在5-6.5之间，在种植畦上铺5~30cm厚的基质，摊平，将出瓶后的苗洗去培养基后再移植到种植畦上；移栽时用手指在基质挖2~75px深的小洞，轻轻把石斛根部放入小洞，不能弄断石斛的肉质根，然后用基质盖好，裸根苗或少根苗需分开种；

5）田间管理、防治病虫

定时浇水，定期施肥，除草、修枝，喷洒农药。

进一步的，浇水：春季通常在基质表面干燥时再浇水，晴天早晚各浇水一次，浇水时间适宜选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；夏季晴天每天早晚各浇水一次，夏季的浇水时间选在清晨或傍晚，夏季的阴天雨天，根据基质的湿度适当补水或不浇水；秋季晴天间隔1天或2～3天浇一次水，阴雨天根据基质的湿度进行补水或不浇水，秋季浇水时间选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；冬季2～3天浇一次水，浇水一定要一次性浇足、浇透；

进一步的，追肥：用0.05—0.1%磷酸二氢钾进行根外追肥，施肥后两天停止浇水；

进一步的，除草：每年除草 2 次，第一次在 3 月中旬至 4 月上旬，第 2 次在 11 月间；

进一步的，修枝：每年春季发芽前或采收时，应剪去部分老枝和枯枝以及生长过密的茎枝，可促进新芽生长。

为了保持石斛的丛生群居的习性，为了使石斛菌根更好发挥效应，

使石斛在最短的时间、最小的空间内产生最大的经济效益，铁皮石斛

种植密度最低以3000株/10平方米为佳。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

种子萌芽率高，异变率低，通过分化培养基培养，原球茎分化率可达85-90%左右，通过增殖培养基培养，铁皮石斛的叶片平展性好，丛生芽的增殖系数大于茎段平放的增值系数，增殖在 3-5 倍， 茎段平放的增殖芽均从茎段节间长出，芽较整齐、 粗壮的茎段增殖速度快， 芽粗且多，消毒效果好，抑制了病变，移栽后的铁皮石斛成活率高，长势好，移栽后的成活率98%以上，增加了经济效益。

具体实施方式：

为了加深对本发明的理解，下面将结合实例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。

实施例1：

2013年8月开始选种，然后进行培育；

1）繁殖，

a. 原球茎诱导

2013年9月初，将采集的成熟种子，用洗洁精把种子表面洗净，在自来水下冲洗 10 min，然后用 75 % 酒精消毒 30s，无菌水清洗 3遍，接着用 0.1% 升汞消毒 10 min ,再用无菌水冲洗 4 遍；配置MS、 糖 30g/L、 卡拉胶 8.6 g/L 、2g/L椰子汁的混合物作为播种培养基，然后将播种于培养基中暗培养 7d，待种子开始萌发,颜色有点发白,将萌发的种子放于光照下培养；20d后取原球茎，配置1／2MS+6-BA 2.2 mg/L+NAA的混合液作为增殖培养基，将取出的原球茎接种到增殖培养基中培养 30d；

b.原球茎分化

2013年的11月初，配置分化培养液：MS+BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L+土豆 20 g/L+ 糖 30g/L+ 卡拉胶 8.6 g/L，将长势良好深绿色、表面有茸毛状物、结实的颗粒状原球茎转入分化培养基中，在转接时尽量不要把原球茎分散，使整个颗粒直接放入，培养周期30d；

c.芽的增殖

2013年的12月初，配置芽增殖营养液：B 5 +BA 0.1mg/L+NAA 0.5 mg/L+CM150mg/L+糖 25g/L+土豆 10 g/L+卡拉胶 8.6g/L ，将原球茎在分化培养基中培养的长势好的丛芽分成 3-4 株 / 丛接入芽增殖培养基中培养45d，剩余细小的丛芽分成单株，让其继续在分化培养基中生长到 8 cm 左右，再切成 2 cm 左右长的茎段平放接种于芽增殖培养基中培养40d，培养时需日光灯照射，光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 10h/d，温度控制在25±1；

d. 壮苗与生根

2014年的1月中旬，配置生根培养基：B 5 +IBA 2 mg/L+ 香蕉 15g/L+糖 30g/L+ 卡拉胶 8.6g/L+异噻唑啉酮0.5g/L，培养基 pH 为 5.6-5.8 ， 培养温度 25 ℃ ，挑选出3 cm或者 3 cm 以上丛苗，将挑选出的丛苗和单株培养的苗放入生根培养基中， 培养45d，所述培养基中加入少量活性炭，培养时需日光灯照射， 光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 12h/d，温度控制在25±1° ；

2）选苗

2014年3月上旬，挑选出生长健壮、叶色正常的苗：根长需达到3cm以上，有4~5条根，根皮色白中带绿，无黑色根，无畸形，无变异，肉质茎有3~4个节间、长有4~5片叶；

3）出瓶

组培苗出瓶时，将培养基与小苗一起轻轻取出，整齐放置于盆中待清洗，污染苗、裸根苗或少根苗分别放置；正常组培苗先在清水中洗净培养基，特别要洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，再换清水清洗一到两次次；裸根或少根组培苗经过上述清洗后，还需将小苗根部置于100mg/L的ABT生根粉中浸泡15分钟，以进行生根诱导；污染苗经过清洗后，用1000倍多菌灵浸泡整株小苗10分钟；出瓶移苗的日平均气温应为15~30℃，出苗时需用镊子将组培苗小心取出；

4）栽培

（1）育苗大棚的布置，要通电、通水、通路，棚宽6m、长30m、棚肩高107m以上、棚顶高2.8m以上，棚顶覆盖塑料无滴薄膜和70%遮荫度的遮荫网，棚内安装有自来水管，大棚四周和入口装有40目的防虫网，棚内装有自动控制的喷雾系统，这样可以防晒、防雨、防虫、保温、保湿、透气，还能大大减少劳动量；

（2）棚内搭建畦底架空的高架种植畦，可使水分和透气容易控制，从而为组培苗生长提供最佳水分，保证通风透气，又能同时喷肥喷药，移栽成活率高，大面积移栽时能大大节省劳动力；用角钢、砖头、木条或方条等材料作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3~0.5cm的塑料平板作为栽培基质的支撑面，支撑面要有约20—30斜度，畦宽1~1.2m，畦底架空高度30~50cm，种植畦上方装有可随时喷雾的喷头；

（3）准备基质：将腐土、牛粪、糠未、木屑、蔗渣、树皮、石灰石等混合，打碎成有玉米粒大小的颗粒状，用0.05-0.1g/L的0.3%高锰酸钾后对基质喷洒消毒，基质的ph值控制在5-6.5之间，在种植畦上铺20cm厚的基质，摊平，将出瓶后的苗洗去培养基后再移植到种植畦上；移栽时用手指在基质挖2~75px深的小洞，轻轻把石斛根部放入小洞，不能弄断石斛的肉质根，然后用基质盖好，裸根苗或少根苗需分开种；

5）田间管理

浇水：

春季通常在基质表面干燥时再浇水，晴天早晚各浇水一次，浇水时间适宜选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；

夏季晴天每天早晚各浇水一次，夏季的浇水时间选在清晨或傍晚，夏季的阴天雨天，根据基质的湿度适当补水或不浇水；

秋季晴天间隔1天或2～3天浇一次水，阴雨天根据基质的湿度进行补水或不浇水，秋季浇水时间选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；

冬季2～3天浇一次水，浇水一定要一次性浇足、浇透；

追肥：用0.05—0.1%磷酸二氢钾进行根外追肥，施肥后两天停止浇水；

除草：第一次在2014年4 月上旬，第 2 次在214年的 11 月中旬；

修枝：每年春季发芽前或采收时，应剪去部分老枝和枯枝以及生长过密的茎枝，可促进新芽生长。

种植密度：平面种植280株/1平方米，

生长速度：每株每年生长15～22厘米、重约7～10克。

分蘖增殖：每株年分蘖增殖8～10株，当年可采收4～6株。

效果 ：步骤1）中繁殖的种子萌芽成活率达到了95% 以上，无黑色根，无畸形，无变异，芽齐；步骤2）生根后根茎粗壮，叶子平展度好，不定芽增殖约为5倍；移栽后无病虫害, 成活率在 98.5% 以上，提高了经济效益。

以上所述仅为说明本发明的实施方式，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.铁皮石斛组的培育方法，其特征在于：所述铁皮石斛组的培育方法依次包括以下步骤，

1）繁殖

a. 原球茎诱导

将采集的成熟种子，用洗洁精把种子表面洗净，在自来水下冲洗 10 -15min ，然后用75 % 酒精消毒 30-35s，无菌水清洗 3 -5遍，接着用 0.1% 升汞消毒 10-12 min ,再用无菌水冲洗 4-5 遍；配置MS、 糖 30g/L、 卡拉胶 8.6 g/L 、2g/L椰子汁的混合物作为播种培养基，然后将播种于培养基中暗培养 7-10d，待种子开始萌发,颜色有点发白,将萌发的种子放于光照下培养；20d左右后取原球茎，配置1／2MS+6-BA 2.2 mg/L+NAA的混合液作为增殖培养基，将取出的原球茎接种到增殖培养基中培养 30-35d；

b.原球茎分化

配置分化培养液：MS+BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L+土豆 20 g/L+ 糖 30 g/L+ 卡拉胶8.6 g/L，将长势良好深绿色、表面有茸毛状物、结实的颗粒状原球茎转入分化培养基中，在转接时尽量不要把原球茎分散，使整个颗粒直接放入，培养周期30-32 d；

c.芽的增殖

配置芽增殖营养液：B 5 +BA 0.1mg/L+NAA 0.5 mg/L+CM150mg/L+ 糖 25g/L+土豆 10g/L+卡拉胶 8.6g/L ，原球茎在分化培养基中培养30天左右后，把长势好的丛芽分成 3-4株 / 丛接入芽增殖培养基中培养45 -50d，剩余细小的丛芽分成单株，让其继续在分化培养基中生长到 8 cm 左右，再切成 2 cm 左右长的茎段平放接种于芽增殖培养基中培养40-45d，培养时需日光灯照射，光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 10-12h/d，温度控制在25±1；

d. 壮苗与生根

配置生根培养基：B 5 +IBA 2 mg/L+ 香蕉 15g/L+糖 30g/L+ 卡拉胶 8.6g/L+异噻唑啉酮0.5g/L，培养基 pH 为 5.6-5.8 ， 培养温度 25 ℃ ，挑选出3 cm 或者 3 cm 以上丛苗，将挑选出的丛苗和单株培养的苗放入生根培养基中， 培养40-45d，所述培养基中加入少量活性炭，培养时需日光灯照射， 光照强度 0-50μmol/(m · s) ，光照时数为 10-12h/d，温度控制在25±1° ；

2）选苗

挑选出生长健壮、叶色正常的苗：根长需达到3cm以上，有4~5条根，根皮色白中带绿，无黑色根，无畸形，无变异，肉质茎有3~4个节间、长有4~5片叶；

3）出瓶

组培苗出瓶时，将培养基与小苗一起轻轻取出，整齐放置于盆中待清洗，污染苗、裸根苗或少根苗分别放置；正常组培苗先在清水中洗净培养基，特别要洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，再换清水清洗一到两次次；裸根或少根组培苗经过上述清洗后，还需将小苗根部置于100mg/L的ABT生根粉中浸泡15-20分钟，以进行生根诱导；污染苗经过清洗后，用1000倍多菌灵浸泡整株小苗10-15分钟；

4）栽培

（1）育苗大棚的布置，要通电、通水、通路，棚宽6m、长30m、棚肩高107m以上、棚顶高2.8m以上，棚顶覆盖塑料无滴薄膜和70%遮荫度的遮荫网，棚内安装有自来水管，大棚四周和入口装有40目的防虫网，棚内装有自动控制的喷雾系统；

（2）棚内搭建畦底架空的高架种植畦；用角钢、砖头、木条或方条等材料作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3~0.5cm的塑料平板作为栽培基质的支撑面，支撑面要有约20—30斜度，畦宽1~1.2m，畦底架空高度30~50cm，种植畦上方装有可随时喷雾的喷头；

（3）准备基质：将腐土、牛粪、糠未、木屑、蔗渣、树皮、石灰石等混合，打碎成有玉米粒大小的颗粒状，用0.05-0.1g/L的0.3%高锰酸钾后对基质喷洒消毒，基质的ph值控制在5-6.5之间，在种植畦上铺5~30cm厚的基质，摊平；

5）田间管理、防治病虫

定时浇水，定期施肥，除草、修枝，喷洒农药。

2.根据权利要求1所述铁皮石斛组的培育方法，其特征在于：出瓶移苗的日平均气温应为15~30℃，出苗时需用镊子将组培苗小心取出，洗去培养基后再移植到种植畦上。

3.根据权利要求1所述铁皮石斛组的培育方法，其特征在于：栽培步骤中，移栽时用手指在基质挖2~75px深的小洞，轻轻把石斛根部放入小洞，不能弄断石斛的肉质根，然后用基质盖好，裸根苗或少根苗需分开种。

4.根据权利要求1所述铁皮石斛组的培育方法，其特征在于：

田间管理具体步骤如下，

浇水：春季通常在基质表面干燥时再浇水，晴天早晚各浇水一次，浇水时间适宜选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；夏季晴天每天早晚各浇水一次，夏季的浇水时间选在清晨或傍晚，夏季的阴天雨天，根据基质的湿度适当补水或不浇水；秋季晴天间隔1天或2～3天浇一次水，阴雨天根据基质的湿度进行补水或不浇水，秋季浇水时间选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上；冬季2～3天浇一次水，浇水一定要一次性浇足、浇透；

追肥：用0.05—0.1%磷酸二氢钾进行根外追肥，施肥后两天停止浇水；

除草：每年除草 2 次，第一次在 3 月中旬至 4 月上旬，第 2 次在 11 月间；

修枝：每年春季发芽前或采收时，应剪去部分老枝和枯枝以及生长过密的茎枝，可促进新芽生长。