CN109392710A - 一种石斛的育苗方法 - Google Patents

一种石斛的育苗方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109392710A
CN109392710A CN201811351871.2A CN201811351871A CN109392710A CN 109392710 A CN109392710 A CN 109392710A CN 201811351871 A CN201811351871 A CN 201811351871A CN 109392710 A CN109392710 A CN 109392710A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture medium
culture
volume ratio
sucrose
proliferation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811351871.2A
Other languages
English (en)
Inventor
李付忠
董丽菊
伍淼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Ferris Agricultural Technology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Ferris Agricultural Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Ferris Agricultural Technology Co Ltd filed Critical Shanghai Ferris Agricultural Technology Co Ltd
Priority to CN201811351871.2A priority Critical patent/CN109392710A/zh
Publication of CN109392710A publication Critical patent/CN109392710A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种石斛的育苗方法。该方法包括以下步骤：(1)将石斛的丛生芽接种到增殖继代培养基中，进行增殖继代培养，形成苗，所述增殖继代培养基为：MS+NAA0.1‑2.0mg/L+蔗糖2.0‑3.5％；(2)将所述苗接种到壮苗与生根培养基中，进行壮苗与生根培养，所述壮苗与生根培养基为：MS+NAA0.1‑2.0mg/L+蔗糖2.0‑3.5％。由于在不同的培养阶段使用了本发明特定的培养基体系，本发明的石斛的育苗方法，可实现组培苗的全年化、工厂化生产，不受季节、环境的影响；种子萌发早，缩短了育苗的生长周期；种子经5～6个月的育苗，生根率可达65％以上，株高可达2‑6cm。

Description

一种石斛的育苗方法
技术领域
本发明涉及一种石斛的育苗方法。
背景技术
石斛属植物均为附生植物，它们的生长环境独特，对气候环境的要求十分严格，多生于温和、阴凉、高湿的阴坡、半阴坡微酸性岩层峭壁上，群聚分布，上有林木侧方遮阴，下有溪沟水源，严重缺水时常叶片脱落。铁皮石斛、霍山石斛、鼓槌石斛等对生长条件要求苛刻，自身繁殖能力较差，大幅限制了其推广与应用。例如，铁皮石斛在云贵川野外偶尔可见，已濒危灭绝，其自身繁殖能力极低。铁皮石斛果实为蒴果，一般为长条形、梨形或者椭圆形，它每个果实有数万粒种子，但其种子极小、无胚乳、粉末状，自然条件下需要与某些真菌共生才能萌发。
《神农本草经》提出石斛具有强阴的作用，《本草纲目拾遗》这样介绍石斛：“清胃除虚热，生津，已劳损，以之代茶，开胃健脾”。现代化学和医疗研究表明，铁皮石斛含有多糖、生物碱、氨基酸、微量元素等，具有增强机体的免疫力，抗氧化、抗衰老、抑肿瘤、降血糖，养阴生津、强肾益精、缓解疲劳等功效。目前，铁皮石斛的产量不能满足市场的需求，其价格仍然居高不下。
专利CN103250639B中，培养基中涉及了甘草、甘遂，且激素用量很大。
专利CN104823856B中，涉及花宝1号、花宝2号、马铃薯、爱多收、速大多等。
专利CN102948368B中，培养环节，壮苗培养基中壮苗55-65天和生根培养基中生根40-50天，生长周期长。
其它专利如CN104509440B、CN104823856B中，培养基还用到了苹果泥、南瓜粉等，成本较高。
鉴于此，急需开发一种石斛简易的育苗方法，从而实现石斛种质资源的保护和种苗优质快繁，为石斛的合理开发和工厂化生产提供技术支持。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中石斛育苗的方法中培养基复杂、制备繁琐，苗的生长周期长的缺陷，而提供了一种石斛的育苗方法，该方法培养基配方简单，缩短了苗的生长周期，成活率高，适于工厂化生产。
本发明提供了一种石斛的育苗方法，包括以下步骤：
(1)将石斛的丛生芽接种到增殖继代培养基中，进行增殖继代培养，形成石斛苗，所述增殖继代培养基包括：MS培养基、NAA和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2.0mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.0-3.5％；
(2)将所述石斛苗接种到壮苗与生根培养基中，进行壮苗与生根培养，所述壮苗与生根培养基包括：MS培养基、NAA和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2.0mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.0-3.5％。
本发明所提供的育苗方法中所使用的MS培养基为常规MS培养基，该MS培养基为植物组织培养中常见的基本培养基，配制方法简单，可直接购买成品，也可自行配制。在本发明的一些实施例中，本发明提供的育苗方法中，所述的MS培养基的配方(mg/L)为：KNO31900；NH4NO3 1650；KH2PO4170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O0.025；Na2EDTA 37.3；FeSO4·7H2O 27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5。
所述的石斛可为本领域中常规的石斛品种，例如铁皮石斛、霍山石斛、鼓槌石斛、金钗石斛等。
步骤(1)中，所述增殖继代培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比较佳地为0.2-1mg/L，更佳地为0.4mg/L。
步骤(1)中，所述增殖继代培养基中较佳地还可加入6-BA；所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比较佳地为0.1-2mg/L，更佳地为1-1.5mg/L。
步骤(1)中，所述增殖继代培养基中较佳地还可加入土豆汁；所述土豆汁与所述MS培养基的质量百分比为8-15％，较佳地为10％。
步骤(1)中，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为3％。
步骤(1)中，所述增殖继代培养基的pH可为本领域常规的pH值，本发明中较佳地为5.8-6.0。
步骤(1)中，所述增殖继代培养条件可为本领域常规的条件，较佳地为光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d；温度为25℃-28℃；湿度为60-80％。
步骤(1)中，所述增殖继代培养的时间可为本领域常规的时间，本发明中较佳地为40-50天，更佳地为45天。
步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比较佳地为0.2-1mg/L，更佳地为1.0mg/L。
步骤(2)中，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为3％。
步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基的pH可为本领域常规的pH值，本发明中较佳地为5.8-6.0。
步骤(2)中，所述石斛苗的壮苗与生根的培养条件可为本领域常规的条件，较佳地为光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d；温度为25℃-28℃；湿度为60-80％。
步骤(2)中，所述壮苗与生根培养的时间可为本领域常规的时间，本发明中较佳地为40-60天，更佳地为50天。
所述石斛的育苗方法，还可包括分化培养方法，其步骤为：
将石斛的原球茎接种到分化培养基中，进行分化培养，形成所述的石斛丛生芽，所述的分化培养基包括：MS培养基、NAA(α-萘乙酸)和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为01-20mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.5-3.5％，较佳地为3％。
所述分化培养基中所述NAA与所述MS培养基的质量体积比较佳地为0.2-1mg/L，更佳地为0.4mg/L。
所述分化培养基中较佳地加入6-BA(6-苄基氨基嘌呤)；所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2mg/L，较佳地为0.2-0.6mg/L，更佳地为0.4mg/L。
所述分化培养基的pH可为本领域常规的pH值，本发明中较佳地为5.8-6.0。
所述分化培养条件可为本领域常规的条件，较佳地为光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d；温度为25℃-28℃；湿度为60-80％。
所述分化培养的时间可为本领域常规的时间，本发明中较佳地为30-35天，更佳地为30天。
所述石斛的育苗方法，进一步还可包括萌发培养方法，其步骤为：
将石斛蒴果内的种子在无菌萌发培养基上进行萌发培养，形成所述的原球茎，所述无菌萌发培养基包括：B5培养基和蔗糖，所述的蔗糖与所述B5培养基的质量百分比为2.5-3.5％，较佳地为3％。
本发明所提供的育苗方法中所使用的B5培养基为常规B5培养基，该B5培养基为植物组织培养中常见的基本培养基，配制方法简单，可直接购买成品，也可自行配制。在本发明的一些实施例中，本发明提供的育苗方法中，所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO33000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO33.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O 2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1。所述石斛蒴果可为本领域常规的蒴果，本发明中特别优选4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果。
所述石斛蒴果在使用前可使用本领域常规的方法消毒，本发明中较佳地用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒。
所述萌发培养的时间可为本领域常规的时间，本发明中较佳地为30-35天，更佳地为30天。
上述各培养基的配制可为本领域常规的，例如，加入培养体支持材料，本发明中较佳地为琼脂；所述琼脂与上述各培养基的质量体积比可为本领域常规的，例如5-10g/L，本发明中较佳地为5g/L。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：利用本发明的石斛的育苗方法，实现了组培苗全年化、工厂化生产，不受季节、环境的影响；培养基简单，制备方便，更有利于其推广和应用；种子萌发早，缩短了石斛育苗的生长周期；种子经5～6个月的育苗，生根率可达65％以上，根数为2-5根，株高可达2-6cm，平均直径可达0.1-0.4cm。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1～5
实施例1铁皮石斛组织培养的方法，包括以下步骤：
(1)外植体选择和消毒：本方法选用4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果为外植体，先用清水洗净；在超净台内，再用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒，最后用无菌水冲洗6遍，备用。
(2)播种与萌发：在超净台内，将(1)消好毒的蒴果破开，将其内的种子均匀的播洒在无菌萌发的培养基上，置于光照下培养30天，种子萌发，慢慢形成原球茎；培养至30天，原球茎上能用肉眼明显分辨出如针尖状形状。种子无菌萌发培养基为：B5+琼脂8g/L+3％蔗糖+pH5.8。
(3)原球茎的分化：待原球茎形成后，将(2)原球茎接种到分化培养基上，培养30天，形成铁皮石斛的丛生芽。培养至30天，高约0.5-1.0cm。原球茎分化培养基为：MS+6-BA(0.4mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖3％。
(4)丛生芽的增殖继代：将(3)中形成的丛生芽接种到增殖继代培养基中，培养50天。增殖继代培养基为：MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖3％+10％土豆汁。培养至50天，高约2-3cm，具2-4片叶。
(5)石斛苗的壮苗与生根：将(4)中的石斛苗接种到壮苗与生根的培养基中，培养50天。壮苗与生根培养基为：MS+NAA(0.8mg/L)+蔗糖3％。培养至50天，高约4-6cm，具3-5片叶、3-5条根且根长2-5cm。
所述的所有MS培养基均附加5g/L琼脂粉，pH调至5.8-6.0，培养条件控制在光照(2000-3000lux，10-12h/d)、温度25℃左右、湿度60-80％。
所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO3 3000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO3 3.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1。
所述的MS培养基的配方(mg/L)为：KNO3 1900；NH4NO3 1650；KH2PO4170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O0.025；Na2-EDTA 37.3；FeSO4·7H2O27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5。
一、无菌播种阶段效果比较
同一蒴果中的种子，分别在如下萌发培养基中培养30天，结果如下：
表1.无菌播种阶段效果比较
因为铁皮石斛种子极小，细如粉末状、淡黄色，但是播种于培养基上后肉眼可见其分布。所以，本发明中通过目测方法进行发芽面积比例的统计。首先播种时，通过目测，基本保证每处理每瓶中播下的铁皮石斛的种子量，基本保持一致；其次在培养过程中观察各处理各瓶中铁皮石斛的种子的萌动情况(借助于显微镜进行观察)和最终的发芽情况。
通过观察，在培养基B5上播种的种子萌动最早，约一周左右开始萌动，一个月左右形成众多膨大的绿色原球茎。
二、原球茎转入原球茎分化、增殖培养基中形成簇生小苗阶段
将上述实施例1中培养得到的原球茎分别在分化培养基中进行培养30天和增殖培养基中进行培养50天，结果如下：
表2.原球茎分化、增殖培养形成簇生小苗阶段效果比较
上述实施例，幼苗长势均良好，尤以实施例1中幼苗长势健壮，更佳。
三、丛生芽的增殖继代、壮苗与生根阶段
使用上述实施例1中经分化培养后，分别在不同增殖继代培养基中进行培养50天和壮苗与生根培养基中进行培养50天，结果如下：
表3.丛生芽的增殖继代、壮苗与生根阶段效果比较
实施例1和5，生根良好、植株健壮。对比例6苗子生长细长。对比例7生根时间较实施例5生根时间长15天左右，且苗子细长、长势弱。
实施例6
霍山石斛的组织培养，包括如下步骤：
(1)外植体选择和消毒：本方法选用4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果为外植体，先用清水洗净；在超净台内，再用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒，最后用无菌水冲洗6遍，备用。
(2)播种与萌发：在超净台内，将步骤(1)消好毒的蒴果破开，将其内的种子均匀的播洒在无菌萌发的培养基上，置于光照下培养30天，种子萌发，慢慢形成原球茎；培养至30天，原球茎上能用肉眼明显分辨出如针尖状形状。种子无菌萌发培养基为：B5+琼脂8g/L+2.5％蔗糖+pH6.0。
(3)原球茎的分化：待原球茎形成后，将(2)原球茎接种到分化培养基上，培养30天，形成霍山石斛的丛生芽。培养至30天，高约0.5-1.0cm。原球茎分化培养基为：MS+6-BA(0.4mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖3％。
(4)丛生芽的增殖继代：将(3)中形成的丛生芽接种到增殖继代培养基中，培养45天。增殖继代培养基为：MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖2％+10％土豆汁。培养至50天，高约2-3cm，具2-4片叶。
(5)石斛苗的壮苗与生根：将(4)中的石斛苗接种到壮苗与生根的培养基中，培养60天。壮苗与生根培养基为：MS+NAA(0.2mg/L)+蔗糖2％。培养至60天，高约4-6cm，具3-5片叶、3-5条根且根长2-5cm。
所述的所有MS培养基均附加10g/L琼脂粉，pH调至5.8-6.0，培养条件控制在光照(2000-3000lux，10-12h/d)、温度25℃左右、湿度60-80％。
所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO3 3000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO3 3.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1。
所述的MS培养基的配方(mg/L)为：KNO3 1900；NH4NO3 1650；KH2PO4170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O0.025；Na2-EDTA 37.3；FeSO4·7H2O27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5。
实施例7
鼓槌石斛的组织培养，包括如下步骤：
(1)外植体选择和消毒：本方法选用4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果为外植体，先用清水洗净；在超净台内，再用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒，最后用无菌水冲洗6遍，备用。
(2)播种与萌发：在超净台内，将步骤(1)消好毒的蒴果破开，将其内的种子均匀的播洒在无菌萌发的培养基上，置于光照下培养30天，种子萌发，慢慢形成原球茎；培养至30天，原球茎上能用肉眼明显分辨出如针尖状形状。种子无菌萌发培养基为：B5+琼脂8g/L+3.5％蔗糖+pH5.8。
(3)原球茎的分化：待原球茎形成后，将(2)原球茎接种到分化培养基上，培养30天，形成鼓槌石斛的丛生芽。培养至30天，高约0.5-1.0cm。原球茎分化培养基为：MS+6-BA(0.2mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖2.5％。
(4)丛生芽的增殖继代：将(3)中形成的丛生芽接种到增殖继代培养基中，培养45天。增殖继代培养基为：MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖3.5％+10％土豆汁。培养至50天，高约2-3cm，具2-4片叶。
(5)石斛苗的壮苗与生根：将(4)中的石斛苗接种到壮苗与生根的培养基中，培养60天。壮苗与生根培养基为：MS+NAA(0.8mg/L)+蔗糖3.5％。培养至60天，高约4-6cm，具3-5片叶、3-5条根且根长2-5cm。
所述的所有MS培养基均附加10g/L琼脂粉，pH调至5.8-6.0，培养条件控制在光照(2000-3000lux，10-12h/d)、温度25℃左右、湿度60-80％。
所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO3 3000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO3 3.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1。
所述的MS培养基的配方(mg/L)为：KNO3 1900；NH4NO3 1650；KH2PO4170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O0.025；Na2-EDTA 37.3；FeSO4·7H2O27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5。
实施例8
金钗石斛的组织培养，包括如下步骤：
(1)外植体选择和消毒：本方法选用4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果为外植体，先用清水洗净；在超净台内，再用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒，最后用无菌水冲洗6遍，备用。
(2)播种与萌发：在超净台内，将步骤(1)消好毒的蒴果破开，将其内的种子均匀的播洒在无菌萌发的培养基上，置于光照下培养30天，种子萌发，慢慢形成原球茎；培养至30天，原球茎上能用肉眼明显分辨出如针尖状形状。种子无菌萌发培养基为：B5+琼脂8g/L+3％蔗糖+pH5.8。
(3)原球茎的分化：待原球茎形成后，将(2)原球茎接种到分化培养基上，培养30天，形成金钗石斛的丛生芽。培养至30天，高约0.5-1.0cm。原球茎分化培养基为：MS+6-BA(0.6mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖2.5％。
(4)丛生芽的增殖继代：将(3)中形成的丛生芽接种到增殖继代培养基中，培养45天。增殖继代培养基为：MS+6-BA(1.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖3％+10％土豆汁。培养至50天，高约2-3cm，具2-4片叶。
(5)石斛苗的壮苗与生根：将(4)中的石斛苗接种到壮苗与生根的培养基中，培养60天。壮苗与生根培养基为：MS+NAA(0.8mg/L)+蔗糖3％。培养至60天，高约4-6cm，具3-5片叶、3-5条根且根长2-5cm。
所述的所有MS培养基均附加5g/L琼脂粉，pH调至5.8-6.0，培养条件控制在光照(2000-3000lux，10-12h/d)、温度25℃左右、湿度60-80％。
所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO3 3000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO3 3.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1。
所述的MS培养基的配方(mg/L)为：KNO3 1900；NH4NO3 1650；KH2PO4170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O0.025；Na2-EDTA 37.3；FeSO4·7H2O27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5。
实施例6-8各个阶段的实验结果如下所示：
表4.无菌播种阶段效果
实施例编号 萌动时间 发芽面积比例
实施例6 7天 7/10
实施例7 7天 6.5/10
实施例8 10天 7/10
表5.原球茎分化、增殖培养形成簇生小苗阶段效果
实施例编号 增殖系数
实施例6 2.8
实施例7 3.1
实施例8 3.0
表6.丛生芽的增殖继代、壮苗与生根阶段效果
实施例编号 生根率 根数 株高/cm
实施例6 70％ 2-5 2-5
实施例7 65％ 2-5 2-5
实施例8 80％ 2-5 2-5
由以上实施例可知，利用本方法，经过160天左右的时间即可实现石斛种子到石斛苗的培育，成活率可达98％以上。

Claims (10)

1.一种石斛的育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将石斛的丛生芽接种到增殖继代培养基中，进行增殖继代培养，形成石斛苗，所述增殖继代培养基包括：MS培养基、NAA和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2.0mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.0-3.5％；
(2)将所述石斛苗接种到壮苗与生根培养基中，进行壮苗与生根培养，所述壮苗与生根培养基包括：MS培养基、NAA和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2.0mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.0-3.5％。
2.如权利要求1所述的育苗方法，其特征在于，所述的石斛为铁皮石斛、霍山石斛、鼓槌石斛、金钗石斛；
和/或，所述MS培养基的配方(mg/L)为：KNO3 1900；NH4NO3 1650；KH2PO4 170；MgSO4·7H2O 370；CaCl2·2H2O 440；KI 0.83；H3BO3 6.2；MnSO4·4H2O 22.3；ZnSO4·7H2O 8.6；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；Na2EDTA 37.3；FeSO4·7H2O27.8；肌醇100；甘氨酸2；盐酸硫胺素0.4；盐酸吡哆醇0.5和烟酸0.5；
和/或，步骤(1)中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.2-1mg/L；
和/或，步骤(1)中，所述增殖继代培养基中还包括6-BA；
和/或，步骤(1)中，所述增殖继代培养基中还包括土豆汁；
和/或，步骤(1)中，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为3％；
和/或，步骤(1)中，所述增殖继代培养基中还包括琼脂；
和/或，步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.2-1mg/L；
和/或，步骤(2)中，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为3％；
和/或，步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基中还包括琼脂。
3.如权利要求2所述的育苗方法，其特征在于，步骤(1)中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.4mg/L；
和/或，步骤(1)中，所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2mg/L；
和/或，步骤(1)中，所述土豆汁与所述MS培养基的质量百分比为8-15％；
和/或，步骤(1)中，所述琼脂与所述增殖继代培养基的质量体积比为5-10g/L；
和/或，步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为1.0mg/L；
和/或，步骤(2)中，所述琼脂与所述壮苗与生根培养基的质量体积比为5-10g/L。
4.如权利要求3所述的育苗方法，其特征在于，步骤(1)中，所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比为1-1.5mg/L；
和/或，步骤(1)中，所述土豆汁与所述MS培养基的质量百分比为10％；
和/或，步骤(1)中，所述琼脂与所述增殖继代培养基的质量体积比为5g/L；
和/或，步骤(2)中，所述琼脂与所述壮苗与生根培养基的质量体积比为5g/L。
5.如权利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步骤(1)中，所述增殖继代培养基的pH为5.8-6.0；
和/或，步骤(1)中，光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d，温度为25℃-28℃，湿度为60-80％；
和/或，步骤(1)中，所述增殖继代培养的时间为40-50天；较佳地45天；
和/或，步骤(2)中，所述壮苗与生根培养基的pH为5.8-6.0；
和/或，步骤(2)中，光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d，温度为25℃-28℃，湿度为60-80％；
和/或，步骤(2)中，所述壮苗与生根培养的时间为40-60天；较佳地为50天。
6.如权利要求1～5任一项所述的育苗方法，其特征在于，还包括分化培养，其步骤为：将石斛的原球茎接种到分化培养基中，进行分化培养，形成所述的石斛丛生芽，所述分化培养基包括：MS培养基、NAA和蔗糖，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2.0mg/L，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为2.5-3.5％。
7.如权利要求6所述的育苗方法，其特征在于，所述分化培养基中，所述蔗糖与所述MS培养基的质量百分比为3％；
和/或，所述分化培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.2-1mg/L；
和/或，所述分化培养基中还包括6-BA；所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比为0.1-2mg/L；
和/或，所述分化培养基中还包括琼脂；
和/或，所述分化培养基的pH为5.8-6.0；
和/或，所述分化培养的光照强度为2000-3000lux，光照时间为10-12h/d；温度为25℃-28℃；湿度为60-80％；
和/或，所述分化培养的时间为30-35天。
8.如权利要求7所述的育苗方法，其特征在于，所述分化培养基中，所述NAA与所述MS培养基的质量体积比为0.4mg/L。
和/或，所述分化培养基中，所述6-BA与所述MS培养基的质量体积比为0.2-0.6mg/L，较佳地为0.4mg/L；
和/或，所述分化培养基中，所述琼脂与所述分化培养基的质量体积比为5-10g/L，较佳地为5g/L；
和/或，所述分化培养的时间为30天。
9.如权利要求6所述的育苗方法，其特征在于，还包括萌发培养，其步骤为：将石斛蒴果内的种子在无菌萌发培养基上进行萌发培养，形成所述的原球茎，所述无菌萌发培养基包括：B5培养基和蔗糖，所述的蔗糖与所述B5培养基的质量百分比为2.5-3.5％。
10.如权利要求9所述的育苗方法，其特征在于，所述的蔗糖与所述B5培养基的质量百分比为3％；
和/或，所述的B5培养基的配方(mg/L)为：KNO3 3000；(NH4)2SO4 134；NaH2PO4·H2O 150；MgSO4·7H2O 500；CaCl2·2H2O 150；KI 0.75；H3BO3 3.0；MnSO4·4H2O 10；ZnSO4·7H2O2.0；Na2MoO4·2H2O 0.25；CuSO4·5H2O 0.025；CoCl2·6H2O 0.025；FeNa2-EDTA 28；肌醇100；盐酸硫胺素10；盐酸吡哆醇1和烟酸1；
和/或，所述石斛蒴果为4-6个月龄的饱满未裂开的蒴果；
和/或，所述石斛蒴果在使用前使用75％的酒精进行表面消毒，然后用0.1％的氯化汞溶液进行消毒；
和/或，所述萌发培养的时间为30-35天，较佳地为30天。
CN201811351871.2A 2018-11-14 2018-11-14 一种石斛的育苗方法 Pending CN109392710A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811351871.2A CN109392710A (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种石斛的育苗方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811351871.2A CN109392710A (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种石斛的育苗方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109392710A true CN109392710A (zh) 2019-03-01

Family

ID=65473328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811351871.2A Pending CN109392710A (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种石斛的育苗方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109392710A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111955347A (zh) * 2020-09-03 2020-11-20 广东生态工程职业学院 一种石斛继代增殖培养基及其制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1608424A (zh) * 2004-11-24 2005-04-27 上海增靓生物科技有限公司 铁皮石斛的人工大面积栽培方法
CN102523881A (zh) * 2012-01-16 2012-07-04 澄思源生物科技（上海）有限公司 铁皮石斛工厂化栽培方法
CN103598101A (zh) * 2013-12-02 2014-02-26 云南省农业科学院花卉研究所 一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法
CN103636500A (zh) * 2013-12-09 2014-03-19 温州科技职业学院 一种大苞鞘石斛兰的无菌播种和组织培养的方法
CN104542286A (zh) * 2014-12-31 2015-04-29 贵州润芝霖生态农业科技开发有限公司 铁皮石斛组培苗生产方法
CN104855262A (zh) * 2015-06-05 2015-08-26 杭州正德农业开发有限公司 有机铁皮石斛的培育种植方法
CN106212280A (zh) * 2016-07-27 2016-12-14 山西大学 一种铁皮石斛微繁殖育种方法
CN107509633A (zh) * 2016-06-16 2017-12-26 安徽霍山鹏飞现代农业科技有限公司 铁皮石斛组的培育方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1608424A (zh) * 2004-11-24 2005-04-27 上海增靓生物科技有限公司 铁皮石斛的人工大面积栽培方法
CN102523881A (zh) * 2012-01-16 2012-07-04 澄思源生物科技（上海）有限公司 铁皮石斛工厂化栽培方法
CN103598101A (zh) * 2013-12-02 2014-02-26 云南省农业科学院花卉研究所 一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法
CN103636500A (zh) * 2013-12-09 2014-03-19 温州科技职业学院 一种大苞鞘石斛兰的无菌播种和组织培养的方法
CN104542286A (zh) * 2014-12-31 2015-04-29 贵州润芝霖生态农业科技开发有限公司 铁皮石斛组培苗生产方法
CN104855262A (zh) * 2015-06-05 2015-08-26 杭州正德农业开发有限公司 有机铁皮石斛的培育种植方法
CN107509633A (zh) * 2016-06-16 2017-12-26 安徽霍山鹏飞现代农业科技有限公司 铁皮石斛组的培育方法
CN106212280A (zh) * 2016-07-27 2016-12-14 山西大学 一种铁皮石斛微繁殖育种方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘道敏等: ""霍山石斛工厂化繁育技术研究"", 《安徽科技学院学报》 *
吴明开等: ""贵州药用石斛组培快繁初代培养研究"", 《农技服务》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111955347A (zh) * 2020-09-03 2020-11-20 广东生态工程职业学院 一种石斛继代增殖培养基及其制备方法
CN111955347B (zh) * 2020-09-03 2022-03-29 广东生态工程职业学院 一种石斛继代增殖培养基及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101258835B (zh) 铁皮石斛优质种苗快速繁殖方法
CN101120653B (zh) 无籽罗汉果及其培育方法
CN104429965B (zh) 峨眉金线莲种子无激素快速组培繁殖的方法
CN102499080B (zh) 一种以苦荞麦叶柄为外植体的植株快速繁殖方法
CN106332782B (zh) 独蒜兰组织培养一步成苗培养方法
CN104472353A (zh) 一种建立黄精快繁殖体系的方法
CN104126511A (zh) 一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基
CN1255022C (zh) 兜兰的无菌播种和组织培养方法
CN112931198A (zh) 一种菠萝抗寒种质的制备方法
CN101720672A (zh) 密毛兜兰的无菌种子萌发和幼苗增殖方法
CN105248279A (zh) 微型马铃薯的组织培养方法
CN106258960A (zh) 一种蕙兰种子萌发快繁方法
CN105706872A (zh) 白芨种子直播自然繁殖育苗方法
CN109392710A (zh) 一种石斛的育苗方法
KR101341148B1 (ko) 기내배양에 의한 감귤나무 대량생산 방법
CN110741937B (zh) 一种黄精快速繁殖的方法
CN105165363B (zh) 一种土人参的高产繁种方法
CN110741928A (zh) 一种核桃育种方法
CN110495393A (zh) 一种获得紫色花椰菜小孢子dh再生植株的方法
CN113951144B (zh) 一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法
CN102228006B (zh) 金荞麦组织培养快速育苗方法
CN108834893B (zh) 一种红根野蚕豆组培快繁新方法
Ahirwar et al. A high frequency plantlets regeneration protocol for banana (Musa paradisiaca L.) micropropagation.
Piria et al. In vitro production of protocorms and protocorm like bodies in orchids–A review
US20060015963A1 (en) Commercially viable process for in-vitro mass culture of Chlorophytum borivilianum

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190301