CN104542286A - 铁皮石斛组培苗生产方法 - Google Patents

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王发松
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Guizhou Runzhilin Ecological Agricultural Science And Technology Development Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛组培苗生产方法，属于中药材组培方法；旨在提供一种快速繁衍铁皮石斛的方法。它包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；具体是：将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，诱导出原球茎、并进行增殖扩繁；将增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行分化培养，将丛芽侧芽分离成单株壮苗培养；将带刺小苗转入接种瓶中进行生根培养；挑选出壮苗，洗净生根培养基后进行消毒杀菌处理；将壮苗移栽松木皮基质上。采用本发明方法组培铁皮石斛，原球茎增值系数可达5以上，植物存活率可达90％以上、生根率达100％、产量较自然生长可提高50％左右；是一种快速繁衍铁皮石斛的方法。

Description

铁皮石斛组培苗生产方法
技术领域
本发明涉及一种中药材组培方法，尤其涉及一种铁皮石斛组培苗生产方法。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium officinale)，为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物，别名黑节草；有极丰富的药用价值是我国濒危珍稀的中药材。《本草纲目》记载，铁皮石斛具有“主治伤中、补五脏虚劳、强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、平胃气、长肌肉、益智除惊、轻身延年之功效”。其茎干入药，对咽喉疾病、提高人体免疫力乃至肿瘤都具有显著疗效。铁皮石斛生长十分缓慢，种子萌发率极低；在通常栽培条件下需要与某些真菌共生才能萌发，自然繁殖率极低。
目前，铁皮石斛组培快繁方法大多都选用茎尖、新芽、休眠芽为外植体，通过拟原球茎途径培养；用无菌种子产生原球茎组培方法鲜有报道。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明旨在提供一种铁皮石斛组培苗生产方法，以克服铁皮石斛资源短缺的问题。
为了实现上述目的，本发明的技术方案包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；其步骤如下：
1)原球茎诱导：将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4～6，诱导光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
2)原球茎分化：将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45～60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4～6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8～12丛苗、每丛2～3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4㎎/L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4～6，生根培养光照为10～11h/d、温度为22～28℃、湿度为40～70％；
4)移栽炼苗：挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500～800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8～10小时；用多菌灵将表面开有深度为3cm移栽孔的松木皮浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中。
在上述技术方案中，所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁，以香蕉汁为最佳。
在上述技术方案的基础上，还可在所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
与现有技术比较，本发明由于采用了上述技术方案，通过原球茎诱导分化出丛芽，再将丛芽增殖、培养成小苗，因此缩短了生产周期。由于在各阶段采用不同的优化培养基配方，使之在野生种源缺乏及繁殖率低的情况下能够快速繁衍，使该物种的优良性状的保存能够得到保障，同时避免了通过拟原球茎途径造成的周期长的缺点，缩短离体培养时间及生产成本，提高生根率和幼苗移栽率。实践证明，采用本发明方法组培铁皮石斛，原球茎增值系数可达5以上，植物存活率可达90％以上、生根率达100％、产量较自然生长可提高50％左右。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步说明：
实施例1，具体步骤如下：
1)原球茎诱导：将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4～6，诱导光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
2)原球茎分化：将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45～60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4～6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8～12丛苗(小苗12丛、大苗8～10丛)、每丛2～3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4㎎/L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4～6，生根培养光照为10～11h/d(小苗10h、大苗11h)、温度为22～28℃、湿度为40～70％；
转接苗必须注意：所接苗不可整丛接入或株苗带有整块未分化完全的球茎，必须单株接入；组培苗接在瓶内要均匀、整齐、直立；
4)移栽炼苗：挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500～800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8～10小时，备用；
5)基质采用三层松木皮组合而成，底层为5～10cm大小的松木皮、中层和上层采用3～5cm大小的松木皮，在所述基质上开设深度为3cm移栽孔；用多菌灵将基质浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中；
5)管理：种植一月内小苗，保持基质潮润状态，一周后可喷洒MS全营养液1000倍液；空气湿度维持在70～85％，光照80％的折光率，温度控制在25～30℃。
实施例2，各步骤同实施例1；其中，所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
在上述各实施例中，所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁，以香蕉汁为最佳。

Claims (3)

1.一种铁皮石斛组培苗生产方法，包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；其特征在于：步骤如下：
1)原球茎诱导：将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4～6，诱导光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
2)原球茎分化：将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45～60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4～6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23～28℃、湿度为50～70％；
3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8～12丛苗、每丛2～3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4㎎/L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4～6，生根培养光照为10～11h/d、温度为22～28℃、湿度为40～70％；
4)移栽炼苗：挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500～800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8～10小时；用多菌灵将表面开有深度为3cm移栽孔的松木皮浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛组培苗生产方法，其特征在于：所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁。
3.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛组培苗生产方法，其特征在于：所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
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