CN1985578A - 乐昌含笑、金叶含笑的组织培养成苗方法 - Google Patents

乐昌含笑、金叶含笑的组织培养成苗方法 Download PDF

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Abstract

乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，包括以下步骤：1)采乐昌含笑嫩茎带芽茎段，放入3～5℃的低温条件下处理4～8天后取出消毒，经常规消毒后接种；2)将已杀菌消毒的芽接种于诱导培养基上，待不定芽萌发至1～2cm长时转入增殖培养基；在增殖培养基上的材料每隔30～40天继代培养一次，连续转接12～17代后转入生根培养基；3)不定芽转入根的诱导培养基，先暗培养8～12天，然后进入正常的根培养处理；4)培养根长到2cm左右时，在自然光照下炼苗6~8天后出苗。本发明的优点在于：繁殖系数高，能周年繁殖，适合工厂化育苗，大大缩短了育种的时间，提高了成苗的移栽成活率。

Description

乐昌含笑、金叶含笑的组织培养成苗方法
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，特别涉及一种乐昌含笑、金叶含笑的组织培养成苗方法。
背景技术
乐昌含笑、金叶含笑组织培养一般采用种子繁殖，但因种子自然结实率低、采种困难，繁殖系数低，繁殖周期长，不利于大量繁殖。另外，由于乐昌含笑、金叶含笑为多年生木本植物，常规的育种方法时间长，效果差，大大缩短了育种的时间。乐昌含笑、金叶含笑采用常规的组织培养难度较大，与其它植物比较，含较多的脂类和酚类物质，乐昌含笑和金叶含笑在组织培养过程中器官的分化和形态的发生都有一定的难度，尤其根系不易发生，用常规的组织培养方法无法成功。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的上述缺陷而提供一种乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，使其能够有效快速繁殖。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：
乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，包括以下步骤：
1)、材料的选取与消毒
在秋季或春季天气晴朗时采乐昌含笑嫩茎带芽茎段，在3～5℃的低温条件下处理4～8天后取出消毒，经常规消毒后接种；
2)、芽的诱导与增殖培养
将已杀菌消毒的芽接种于MS+6-BA0.8～1.2mg·L-1+IBA0.08～0.12mg·L-1诱导培养基上，待不定芽萌发至1～2cm长时转入增殖培养基；在增殖培养基上的材料每隔30～40天继代培养一次，连续转接12～17代后转入生根培养基；
3)、根的诱导
选生长一致的不定芽转入根的诱导培养基，基本培养基为1/2MS，激素配比为6-BA0.20～0.80mg·L-1+IBA0.60～1.20mg·L-1+NAA0.40～1.20mg·L-1；先进行暗培养8～12天，然后进入正常的根培养处理；
以上芽和根组织培养的条件为：温度23±2℃，光照强度2000 1x，除生根暗培养阶段外，光照时间11～12h/d；
4)、炼苗
生根培养50～65天左右苗，根长到2cm左右时，在自然光照下炼苗6～8天后出苗。
洗掉试管苗根部培养基，移栽到经消毒的珍珠岩和蛭石(1∶1)的混合基质中，浇水、遮荫和保温，移栽成活率88％左右。
上述步骤1外植体的选择中，以2～3年生的枝条长出的新梢近梢尖的嫩茎带芽茎段容易成功。
上述步骤2中继代培养间隔以30～40天为宜，继代培养间隔时间太短，不易增殖，太长，则无根苗逐渐枯萎。
上述步骤2中连续转接12～17代后方能生根，否则几乎没有根系。
上述步骤3中生根阶段需要一定时间的暗培养，不暗培养出根率极低。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、克服了常规组织培养根系难诱导、难成苗的难题。
2、乐昌含笑、金叶含笑的组织培养繁殖系数高，能周年繁殖，适合工厂化育苗。
3、乐昌含笑、金叶含笑的组织培养为基因转化、单倍体育种等先进的育苗技术提供了基础和条件，大大缩短了育种的时间。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，包括以下步骤：
1)、材料的选取与消毒
在秋季或春季天气晴朗时采乐昌含笑3年生枝发生的新梢近梢尖的嫩茎带芽茎段，放入5℃的冰箱内4天后取出消毒，首先用自来水冲洗5小时，洗洁精浸泡30分钟，无菌水冲洗3次；然后用70％酒精杀菌40秒，无菌水冲洗5次；最后用0.1％的升汞杀菌10分钟，无菌水洗10次接种；
2)、芽的诱导与增殖培养
将已杀菌消毒的芽接种于MS+6-BA0.8·L-1+IBA0.08·L-1诱导培养基上，待不定芽萌发至2cm长时转入增殖培养基；在增殖培养基上的材料每隔40天继代培养一次，连续转接17代后转入生根培养基；
3)、根的诱导
选生长一致的不定芽转入根的诱导培养基，基本培养基为1/2MS，激素配比为6-BA00.80mg·L-1+IBA1.20mg·L-1+NAAl.20mg·L-1；先进行暗培养12天，然后进入正常的根培养处理；
4)、炼苗
生根培养65天苗，根长到2cm左右时，先揭开已生根的瓶盖，在自然光照下炼苗8天后出瓶。洗掉试管苗根部培养基，移栽到经消毒的珍珠岩和蛭石(1∶1)的混合基质中，注意浇水、遮荫和保温。
移栽成活率90％。
实施例2：
1)、材料的选取与消毒
在秋季或春季天气晴朗时采乐昌含笑2年生枝发生的新梢近梢尖的嫩茎带芽茎段，放入3℃的冰箱内4天后取出消毒，首先用自来水冲洗4小时，洗洁精浸泡40分钟，无菌水冲洗5次；然后用70％酒精杀菌30秒，无菌水冲洗3次；最后用0.1％的升汞杀菌10分钟，无菌水洗10次接种；
2)、芽的诱导与增殖培养
将已杀菌消毒的芽接种于MS+6-BA0.8～1.2mg·L-1+IBA0.08～0.12mg·L-1诱导培养基上，待不定芽萌发至1～2cm长时转入增殖培养基；在增殖培养基上的材料每隔30～40天继代培养一次，连续转接12～17代后转入生根培养基；
3)、根的诱导
选生长一致的不定芽转入根的诱导培养基，基本培养基为1/2MS，激素配比为6-BA0.20～0.80mg·L-1+IBA0.60～1.20mg·L-1+NAA0.40～1.20mg·L-1；先进行暗培养8～12天，然后进入正常的根培养处理；
以上组织培养的条件为：温度23±2℃，光照强度2000 1x，除生根暗培养阶段外，光照时间11～12h/d
4)、炼苗技术
生根培养50天左右苗，根长到2cm左右时，先揭开已生根的瓶盖，在自然光照下炼苗6天后出瓶。洗掉试管苗根部培养基，移栽到经消毒的珍珠岩和蛭石(1∶1)的混合基质中，注意浇水、遮荫和保温。
移栽成活率87％。

Claims (2)

1、乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)、材料的选取与消毒
在秋季或春季天气晴朗时采乐昌含笑嫩茎带芽茎段，放入3～5℃的低温条件下处理4～8天后取出消毒，经常规消毒后接种；
2)、芽的诱导与增殖培养
将已杀菌消毒的芽接种于MS+6-BA0.8～1.2mg·L-1+IBA 0.08～0.12mg·L-1诱导培养基上，待不定芽萌发至1～2cm长时转入增殖培养基；在增殖培养基上的材料每隔30～40天继代培养一次，连续转接12～17代后转入生根培养基；
3)、根的诱导
选生长一致的不定芽转入根的诱导培养基，基本培养基为1/2MS，激素配比为6-BA0.20～0.80mg·L-1+IBA 0.60～1.20mg·L-1+NAA 0.40～1.20mg·L-1；先进行暗培养8～12天，然后进入正常的根培养处理；
以上芽和根组织培养的条件为：温度23±2℃，光照强度2000 lx，除生根暗培养阶段外，光照时间11～12h/d；
4)、炼苗
生根培养50～65天左右苗，根长到2cm左右时，在自然光照下炼苗6~8天后出苗。
2、如权利要求1所述的乐昌含笑、金叶含笑组织培养成苗方法，其特征在于：所述的带芽茎段为2～3年生的枝条长出的新梢近梢尖的嫩茎。
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