CN103238520B - 一种黄桷兰组培育苗的方法 - Google Patents
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Abstract
一种黄桷兰组培育苗的方法，选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝，剪掉叶片，表面消毒灭菌，剪成带1-2个芽的小段，经过预培养、初代培养、继代培养、生根培养、组培苗驯化后可移至大棚或花盆栽培，实施本发明，可以控制和减少外植体在初期培养阶段的污染，降低和消除外植体在初代培养期间易产生褐变死亡的现象，提高了黄桷兰组织培养成功率，实现了黄桷兰组织培养增值效果好，数量多的组培繁殖育苗，解决了长期以来困扰人们对黄桷兰繁殖育苗扦插不易生根成活，嫁接、压条生根时间长、繁殖数量少，难以满足市场对黄桷兰苗木需求的难题。
Description
所属技术领域
本发明涉及乔木园林植物组培育苗方法，尤其涉及一种黄桷兰组培育苗的方法。
背景技术
黄桷兰(学名：Michelia champaca)为木兰科含笑属常绿阔叶乔木，又名白兰花、黄玉兰。黄桷兰是著名的观赏绿化植物，又是名贵的花香树种，花叶齐观，枝干挺拨，树形美丽，叶色苍翠，开花期长，花朵洁白素雅，花芳香浓郁，香味清新淡雅。黄桷兰对二氧化硫和氯气等有害气体表现出较强的抗性和吸收能力，是很好的防污染绿化树种，同时，黄桷兰作为一种香料植物，还可以兼做香料和药物，从中可提取出香精油与干燥香料物质用于化工和医疗方面。因此，黄桷兰倍受人们的青睐，盆栽可布置庭院、厅堂、书房、会议室，露地栽培美化环境、净化空气，香化庭院居室，是一种市场需求量大的富贵树种。然而，黄桷兰由于雌雄蕊退化，一般都不能产生果实和种子，其自然繁殖率极低，种子少且易失活。黄桷兰茎细胞分化程度高，繁殖再生能力差，扦插也不易生根，人们对黄桷兰的组织培养殖技术研究还处于探索阶段。
目前商业上主要采取嫁接和高空压条的方法进行繁殖，这类方法繁殖时间长、繁殖数量极其有限，远不能满足市场需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种黄桷兰组培育苗的方法，能够大量繁殖黄桷兰幼苗，以弥补现有技术的不足。
一种黄桷兰组培育苗的方法，包括以下步骤：
选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝。剪掉叶片，对枝条表面消毒，再流水冲洗消毒液，并刷洗去掉外植体上的粉尘；再将枝条剪成带1-2个芽的小段，经过70％酒精浸泡、0.1％氯化汞浸泡、8％次氯酸钠溶液浸泡，用无菌水冲洗，无菌纸吸去材料上残留水，在无菌环境中修剪茎段，每茎段必须保留一芽，芽下端留1-1.5㎝长，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1㎝长，切口剪平。
预培养：将剪成斜面的茎段下端插入到少量B5培养基的培养瓶，每个培养瓶中只插一株茎段，防止消毒不彻底引起交叉污染，调控培养室温度为23±2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时，预培养一周。
初代培养：一周后，选择无污染的茎段转接到初代培养基上，置于培养室中进行初代培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时。经40-55天，分化出芽。
继代培养：将初代培养诱导出的芽从基部切下，转接到继代培养基培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为2000-2500Ix,光照时间为每天13小时。约35天后长出带3-5个叶片的无根苗。
继代培养后可切取带1-2叶茎段再次转接到继代培养基上，待腋芽萌发生长到3-5个叶片时，又可如此反复再次切段繁殖，实现大量组培。
生根培养：将长有3-5个叶片的健壮无根小苗，转接到生根培养基中进行生根培养，人为调控室内温度为23±2℃、光照强度为3000-3500Ix,光照时间为每天14小时，20天后开始有根长出，30—45天后根可长到1-1.5㎝。
组培苗驯化：当生根的组培苗生长到苗高5-7㎝或带有3-5片时，将培养瓶打开，在常温下炼苗3-5天，取出组培苗用清水洗净苗上残留培养基，在杀菌剂水溶液中浸泡10秒钟，栽植于通透性好的炼苗基质中，浇水并搭上小拱棚遮阴保湿。最初要保持较高的空气湿度，每隔5-6天逐渐降低空气相对湿度，依次为90％、80％、70％、60％、50％,平时保持基质湿润和透气，30天后开始有新根萌发。
经过组培苗驯化后可移至大棚或花盆栽培。
本发明所采用的具体培养基配方：
初代培养基：B5+IBA0.1-0.5㎎/L+氯吡脲1.0-1.5㎎/L+KT0.1-0.5㎎/L+活性炭1-2㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5-6.0。
继代培养基：B5+IBA0.1-0.5㎎/L+氯吡脲1.0-2.0㎎/L+KT0.1-0.5㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5-6.0。
生根培养基：B5+IBA1.0-1.5㎎/L+IAA0.1-0.5㎎/L+GA30.2㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5-6.0。
本发明所采用的各种培养基和接种工具均要经过在高压蒸气灭菌器中进行高温高压灭菌。
本发明组培苗驯化采用珍珠岩作为炼苗基质，珍珠岩洗净，用0.5％甲醛溶液消毒处理。
实施本发明，可以控制和减少外植体在初期培养阶段的污染，降低和消除外植体在初代培养期间易产生褐变死亡的现象，提高了黄桷兰组织培养成功率，实现了黄桷兰组织培养增值效果好，数量多的组培繁殖育苗。解决了长期以来困扰人们对黄桷兰繁殖育苗扦插不易生根成活，嫁接、压条生根时间长、繁殖数量少，难以满足市场对黄桷兰苗木需求的难题。
具体实施方式
下面结合实例，对本发明做进一步的说明：
实施例一：
一种黄桷兰组培育苗的方法，包括以下步骤：
1、外植体的选取与消毒：
选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝。回到实验室剪掉叶片，用棉球蘸上0.2％新洁尔灭擦拭枝条表面，再流水冲洗30分钟，其间轻轻刷洗外植体上的粉尘。再将枝条剪成带1-2个芽的小段，先用70％酒精浸泡10秒钟，无菌水冲洗一次，用0.1％氯化汞浸泡材料5分钟，无菌水冲洗4次，用5％次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后用无菌水冲洗5次，每次无菌水冲洗时间为30秒，用无菌纸吸去材料上残留水分后备用。
2、外植体接种与培养
(1)外植体预培养：在超净工作台上修剪茎段，每茎段必须保留一芽，芽下端留1-1.5㎝长，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1㎝长，切口剪平，将剪成斜面的下端插入到培养基。为了有效控制杂菌污染，先单个接种到只装有少量B5培养基的培养瓶中进行预培养，放置于培养室中培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时，预培养一周。
(2)初代培养：预培养后，选择无污染的外植体转接到初代培养基中进行初代培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时，经40-55天，部分外植体长出芽；初代培养基配方为B5+IBA0.1㎎/L+氯吡脲1.0㎎/L+KT-0.1㎎/L+活性炭1㎎/L+抗坏血酸30㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5。
(3)继代培养：将初代培养诱导出的芽从基部切下，转接到继代培养基中进行继代培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为2000-2500Ix,光照时间为每天13小时。约35-40天后长出带3-5个叶片的无根苗，切取带1-2叶茎段转接到继代培养基上，待腋芽萌发生长到3-5个叶片时，又可如此反复再次切段繁殖。继代培养基为B5+IBA0.1㎎/L+氯吡脲1.0㎎/L+KT0.1㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5。
(4)生根培养：将长有3-5个叶片的健壮无根小苗，转接到生根培养基中进行生根培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为3000-3500Ix,光照时间为每天14小时，25-30天后开始有根长出，45天后根长到1-1.5㎝。生根培养基配方为B5+IBA1.0㎎/L+IAA0.1㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.5。
3、组培苗驯化与移栽：当生根的组培苗生长到苗高5-7㎝或带有3-5片时，将培养瓶打开，在常温下炼苗3-5天，取出组培苗用清水洗净苗上残留培养基，在杀菌剂水溶液中浸泡10秒钟，栽植于通透性好的炼苗基质中，浇水并搭上小拱棚遮阴保湿。最初要保持较高的空气湿度，每隔5-6天逐渐降低空气相对湿度，依次为90％、80％、70％、60％、50％,平时保持基质湿润和透气，黄桷兰生根很慢，30天后开始有新根萌发，经过60-70天，小苗可以定植。
本发明组培苗驯化采用珍珠岩作为炼苗基质，是因为珍珠岩保湿又通透性好，新买的珍珠岩就用清水淋洗干净，用过的珍珠岩要提前用0.5％甲醛溶液消毒处理。
本发明组培苗驯化所用的杀菌剂，由500倍液多菌灵溶液中加入10㎎/L吲哚丁酸配制而成，浸泡组培苗起杀菌和促进生根的作用。
实施例二：
一种黄桷兰组培育苗的方法，包括以下步骤：
1、外植体的选取与消毒：
选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝。回到实验室剪掉叶片，用棉球蘸上0.3％新洁尔灭擦拭枝条表面，再流水冲洗50分钟，其间轻轻刷洗外植体上的粉尘。再将枝条剪成带1-2个芽的小段，先用70％酒精浸泡12秒，无菌水冲洗一次，用0.5％氯化汞浸泡材料6分钟，无菌水冲洗4次，用8％次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后用无菌水冲洗5次，每次无菌水冲洗时间为50秒，用无菌纸吸去材料上残留水分后备用。
2、外植体接种与培养
(1)外植体预培养：在无菌环境中修剪茎段，每茎段必须保留一芽，芽下端留1-1.5㎝长，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1㎝长，切口剪平，将剪成斜面的下端插入到培养基。为了有效控制杂菌污染，先单个接种到只装有少量B5培养基的培养瓶中进行预培养，放置于培养室中培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时，预培养一周。
(2)初代培养：预培养一周后，选择无污染的外植体转接到初代培养基中进行初代培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时。经40-55天，部分外植体长出芽。初代培养基配方为B5+IBA0.25㎎/L+氯吡脲1.5㎎/L+KT-0.3㎎/L+活性炭1.5㎎/L+抗坏血酸40㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.8。
(3)继代培养：将初代培养诱导出的芽从基部切下，转接到继代培养基中进行继代培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为2000-2500Ix,光照时间为每天13小时。约35天后长出带3-5个叶片的无根苗，切取带1-2叶茎段转接到继代培养基上，待腋芽萌发生长到3-5个叶片时，又可如此反复再次切段繁殖。继代培养基配方为B5+IBA0.1㎎/L+氯吡脲1.0㎎/L KT0.1㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.8。
(4)生根培养：将长有3-5个叶片的健壮无根小苗，转接到生根培养基中进行生根培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为3000-3500Ix,光照时间为每天14小时，20天后开始有根长出，40天后根长到1-1.5㎝。生根培养基配方为B5+IBA1.0㎎/L+IAA0.3㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为5.8。
3、组培苗驯化与移栽：当生根的组培苗生长到苗高5-7㎝或带有3-5片时，将培养瓶打开，在常温下炼苗3-5天，取出组培苗用清水洗净苗上残留培养基，在杀菌剂水溶液中浸泡10秒钟，栽植于通透性好的炼苗基质中，浇水并搭上小拱棚遮阴保湿。最初要保持较高的空气湿度，每隔5-6天逐渐降低空气相对湿度，依次为90％、80％、70％、60％、50％,平时保持基质湿润和透气，黄桷兰生根很慢，30天后开始有新根萌发，经过60-70天，小苗可以定植。
本发明组培苗驯化采用珍珠岩作为炼苗基质，是因为珍珠岩保湿又通透性好，新买的珍珠岩就用清水淋洗干净，用过的珍珠岩要提前用0.5％甲醛溶液消毒处理。
本发明组培苗驯化所用的杀菌剂，由500倍液多菌灵溶液中加入10㎎/L吲哚丁酸配制而成，浸泡组培苗起杀菌和促进生根的作用。
实施例三：
一种黄桷兰组培育苗的方法，包括以下步骤：
1、外植体的选取与消毒：
选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝。回到实验室剪掉叶片，用棉球蘸上0.5％新洁尔灭擦拭枝条表面，再流水冲洗60分钟，其间轻轻刷洗外植体上的粉尘。再将枝条剪成带1-2个芽的小段，先用70％酒精浸泡15秒钟，无菌水冲洗一次，用1.0％氯化汞浸泡材料8分钟，无菌水冲洗4次，用10％次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后用无菌水冲洗5次，每次无菌水冲洗时间为60秒，用无菌纸吸去材料上残留水分后备用。
2、外植体接种与培养：
(1)外植体预培养：在超净工作台上修剪茎段，每茎段必须保留一芽，芽下端留1-1.5㎝长，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1㎝长，切口剪平，将剪成斜面的下端插入到培养基。为了有效控制杂菌污染，先单个接种到只装有少量B5培养基的培养瓶中进行预培养，放置于培养室中培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时，预培养一周。
(2)初代培养：预培养一周后，选择无污染的外植体转接到初代培养基中进行初代培养，调控培养室温度为23+2℃，光照强度为1500LX、每天光照12小时。经40-55天，部分外植体长出芽。初代培养基配方为B5+IBA0.5㎎/L+氯吡脲1.5㎎/L+KT0.5㎎/L+活性炭2㎎/L+抗坏血酸50㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为6.0。
(3)继代培养：将初代培养诱导出的芽从基部切下，转接到继代培养基中进行继代培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为2000-2500Ix,光照时间为每天13小时。约35天后长出带3-5个叶片的无根苗，切取带1-2叶茎段转接到继代培养基上，待腋芽萌发生长到3-5个叶片时，又可如此反复再次切段繁殖。继代培养基配方为B5+IBA0.5㎎/L+氯吡脲2㎎/L+KT0.5㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为6.0。
(4)生根培养：将长有3-5个叶片的健壮无根小苗，转接到生根培养基中进行生根培养，调控室内温度为23±2℃、光照强度为3000-3500Ix,光照时间为每天14小时，15-20天后开始有根长出，30—45天后根可长到1.5-2.0㎝。生根培养基配方为B5+IBA1.5㎎/L+IAA0.5㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L，调整培养基pH为6.0。
3、组培苗驯化与移栽：当生根的组培苗生长到苗高5-7㎝或带有3-5片时，将培养瓶打开，在常温下炼苗3-5天，取出组培苗用清水洗净苗上残留培养基，在杀菌剂水溶液中浸泡10秒钟，栽植于通透性好的炼苗基质中，浇水并搭上小拱棚遮阴保湿。最初要保持较高的空气湿度，每隔5-6天逐渐降低空气相对湿度，依次为90％、80％、70％、60％、50％,平时保持基质湿润和透气，黄桷兰生根很慢，30天后开始有新根萌发，经过60-70天，小苗可以定植。
本发明组培苗驯化采用珍珠岩作为炼苗基质，是因为珍珠岩保湿又通透性好，新买的珍珠岩就用清水淋洗干净，用过的珍珠岩要提前用0.5％甲醛溶液消毒处理。
本发明组培苗驯化所用的杀菌剂，由500倍液多菌灵溶液中加入10㎎/L吲哚乙丁酸配制而成，浸泡组培苗起杀菌和促进生根的作用。
Claims (3)
1. 一种黄桷兰组培育苗的方法，其特征是：选择生长健壮、无病虫害当年生半木质化并带有3-5个饱满侧芽与顶芽的黄桷兰嫩枝；剪掉叶片，对枝条表面消毒，再流水冲洗消毒液，并刷洗去掉外植体上的粉尘；再将枝条剪成带1-2个芽的小段，经过酒精浸泡、0.1%氯化汞浸泡、8%次氯酸钠溶液浸泡，用无菌水冲洗，无菌纸吸去材料上残留水，在无菌环境中修剪茎段，每茎段必须保留一芽，芽下端留1-1.5㎝长，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1㎝长，切口剪平；将剪成斜面的茎段下端插入到少量B5培养基的培养瓶，每个培养瓶中只插一株茎段，防止消毒不彻底引起交叉污染，调控培养室温度为23±2℃，光照强度为1500Lux、每天光照12小时，预培养一周；一周后，选择无污染的茎段转接到初代培养基上，初代培养基配方为B5+IBA0.1-0.5㎎/L+氯吡脲1.0-1.5㎎/L+KT0.1-0.5㎎/L +活性炭1-2㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L， pH为5.5-6.0；置于培养室中进行初代培养，调控培养室温度为23±2℃，光照强度为1500 Lux、每天光照12小时；经40-55天，分化出芽；将初代培养诱导出的芽从基部切下，转接到继代培养基培养，继代培养基配方为B5 +IBA0.1-0.5㎎/L+氯吡脲1.0-2.0㎎/L+KT0.1-0.5㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L， pH为5.5-6.0；调控室内温度为23±2℃、光照强度为2000-2500 Lux,光照时间为每天13小时；约35天后长出带3-5个叶片的无根苗；将长有3-5个叶片的健壮无根小苗，转接到生根培养基中进行生根培养，生根培养基配方为B5 +IBA1.0-1.5㎎/L +IAA0.1-0.5㎎/L+ GA3 0.2㎎/L，加入食用白糖28-35g/L、粉状琼脂7-10g/L， pH为5.5-6.0；人为调控室内温度为23±2℃、光照强度为3000-3500 Lux,光照时间为每天14小时，20天后开始有根长出，30—45天后根可长到1-1.5㎝；当生根的组培苗生长到苗高5-7㎝或带有3-5片叶时，将培养瓶打开，在常温下炼苗3-5天，取出组培苗用清水洗净苗上残留培养基，在杀菌剂水溶液中浸泡10秒钟，栽植于通透性好的炼苗基质中，浇水并搭上小拱棚遮阴保湿；最初要保持较高的空气湿度，每隔5-6天逐渐降低空气相对湿度，依次为90%、80%、70%、60%、50%,平时保持基质湿润和透气，30天后开始有新根萌发；经过组培苗驯化后移至大棚或花盆栽培。
2. 如权利要求1所述的一种黄桷兰组培育苗的方法，其特征是：继代培养后切取带1-2叶茎段再次转接到继代培养基上，待腋芽萌发生长到3-5个叶片时，如此反复切段繁殖，实现大量组培。
3. 如权利要求1或2所述的一种黄桷兰组培育苗的方法，其特征是：组培苗驯化采用珍珠岩作为炼苗基质，珍珠岩洗净，用0.5%甲醛溶液消毒处理。
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