CN106359095A - 一种铁皮石斛的接转方法 - Google Patents

一种铁皮石斛的接转方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106359095A
CN106359095A CN201610803668.9A CN201610803668A CN106359095A CN 106359095 A CN106359095 A CN 106359095A CN 201610803668 A CN201610803668 A CN 201610803668A CN 106359095 A CN106359095 A CN 106359095A
Authority
CN
China
Prior art keywords
herba dendrobii
protocorm
culture medium
culture
switch
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610803668.9A
Other languages
English (en)
Inventor
陈永刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Metal And Stone Bio Tech Ltd Zhejiang
Original Assignee
Metal And Stone Bio Tech Ltd Zhejiang
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Metal And Stone Bio Tech Ltd Zhejiang filed Critical Metal And Stone Bio Tech Ltd Zhejiang
Priority to CN201610803668.9A priority Critical patent/CN106359095A/zh
Publication of CN106359095A publication Critical patent/CN106359095A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛的接转方法，它是将铁皮石斛的种子经萌发培养、原球茎增值培养、丛芽诱导和增值培养、生根培养和驯化后，得到铁皮石斛幼苗的方法。与现有技术相比，本发明方法具有萌发率高、培养时间短、整齐性好和变异率小的优点，具有良好的市场前景。

Description

一种铁皮石斛的接转方法
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种铁皮石斛的接转方法。
背景技术
铁皮石斛为兰科石斛属植物，是我国传统名贵中药材，已被国际列为一类保护植物。因其产量极为稀少、生长环境特殊和滋补功效卓著，素有“千金草”、“软黄金”和“植物黄金”之盛誉。其性味甘、平，归胃、肺、肾经，能补五脏血、精、津，平胃气、久服厚肠胃，协调阴阳。是治疗阴虚、目暗、胃弱、声音嘶哑等疾病的良药，铁皮石斛种植特别对提高人体免疫力、抗衰老、降三高(高血脂、高血糖、高血压)、抑制肿瘤等方面都有辅助的作用，具有免疫调节、延缓衰老等功效。不仅是大家熟悉的“脉络宁注射液”的必需原料，还是数十种中成药及保健品的必要原料。种植技术加上一些被利益所驱动的石斛倒卖商深入每个石斛产地搜寻订购，鲜品资源已严重不足。
铁皮石斛是附生植物，生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，主要分布于中国安徽、浙江、福建等地。铁皮石斛的生存活条件苛刻、生长周期长、繁殖率极低，长期以来通过采挖收集野生资源，致使铁皮石斛濒危灭绝。近年来人们不断地尝试各种方法人工栽培铁皮石斛，但栽培出的铁皮石斛成活率及品质都远远低于野生铁皮石斛，十分不理想。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，是提供铁皮石斛的接转方法。
为解决上述技术问题，本发明选取铁皮石斛种子为原料，采用MS基质或1/2MS基质培养方法进行悬浮播种的方式，促进铁皮石斛种子的萌发和生根，具体的技术方案如下：
一种铁皮石斛的接转方法，它包括以下步骤：
(1)选取成熟未开裂的铁皮石斛蒴果用清水洗净，去污剂溶液浸泡10min，再用清水冲刷洗净，在超净工作台上采用75％乙醇消毒30s，再用氯化汞溶液消毒10～15min，用无菌水冲洗3～4次，得到铁皮石斛无菌塑果。
(2)步骤(1)所得的铁皮石斛无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22～25℃、80～120转/min的条件下，培养20d，过滤得到铁皮石斛原球茎；将步骤所得的铁皮石斛原球茎接种于原球茎增值培养基上，在25～28℃、光照强度1000～4000lux、光照时间11～14h/d的条件下，7d后得到大量的铁皮石斛原球茎；
(3)将步骤(2)中所得铁皮石斛原球茎接种到丛芽诱导及增值培养基中，在25～28℃、光照强度1000～4000lux、光照时间11～14h/d的条件下培养60d繁殖出大量的5cm高铁皮石斛幼苗；
(4)将步骤(3)中所得的铁皮石斛幼苗接种到生根壮苗培养基中，在25～28℃、光照度1000～4000lux、光照时间11～14h/d的条件下培养60d，选取基部形成直径4～7mm的铁皮石斛；
(5)将步骤(4)中选取的铁皮石斛用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴80％，驯化6个月后，所得铁皮石斛种苗即可进行大田移栽。
其中，步骤(1)中，所述的去污剂为普通家用洗衣液或洗衣粉；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0.1％～0.15％。
其中，步骤(2)中，液体培养基为的组分为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA(或称“6-苄基氨基嘌呤”，是一种“细胞分裂素”)+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph 5.6-5.8；原球茎增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA(或称萘乙酸)+1.0mg/L 6-BA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph5.6-5.8，光照优选2000-2500lux，光照时间优选12h/d。
其中，步骤(2)中在获得铁皮石斛原球茎前的培养条件为：在22～25℃条件下，前7d给予暗培养，之后光照强度为1000～4000lux，优选2000-2500lux，光照时间11～14h/d，优选12h/d。
其中，步骤(3)中，所述的丛芽诱导及增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph 5.6-5.8，光照优选2000-2500lux，光照时间优选12h/d。
其中，步骤(4)中，所述的生根壮苗培养基的组分为：1/2MS培养基+1.0mg/L NAA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，pH 5.6～5.8，光照优选2000-2500lux，光照时间优选12h/d；
其中，步骤(5)中，所述的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1∶1∶0.5组成。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、铁皮石斛塑果消毒后，置于超净工作台上用解剖刀剖开塑果，取出种子，接种到步骤(2)中液体培养基上，采用1/2MS基本培养基并配以生长素6-BA 1.0mg/L，在转速为80～120转/min条件下，先暗培养，再光照进行培养，与现有的铁皮石斛种子萌发培养基相比，接种速度提高了一倍，且萌发率高(85％以上)，整齐性好，变异率小于0.8％。
2、步骤(2)采用原球茎增值培养基，迅速培育得到大量原球茎，然后步骤(3)中采用丛芽增值培养基接种，更好更快的获得铁皮石斛幼苗，与传统方法相比，缩短了周期，更利于规模化的生长运用。
3、步骤(4)所述的生根壮苗培养基中，采用1/2MS(大量元素减半)并配以生长素NAA1.0mg/L以及7.5％wt香蕉汁，与传统的培养技术相比，该方法能更好更快的促进铁皮石斛幼苗基部膨大，60d内即可使铁皮石斛组培苗的根茎膨大到直径4～7mm，生根率达90％。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：一种铁皮石斛的接转方法，该方法包括以下步骤：
(1)9月，剪取铁皮石斛人工授粉后120d的塑果，用去污剂清洗10min，再用流水冲洗10min，带入接种室，在超净工作台上用75v/v％酒精浸泡45～60s，再放置于0.1％的氯化汞水溶液中浸泡；
(2)将步骤(1)得到的铁皮石斛无菌塑果在超净工作台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22℃、120转/min的条件下，培养15d，种子开始萌发，5d后，通过显微镜观察，约60％的种子形成直茎0.5～0.7mm的原球茎，变异率约为0.75％，滤出原球茎备用；其中，光照条件为：前7d给予暗培养，以后光照度为2000lux、光照时间12h/d；所述的液体培养基组成为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+3％wt蔗糖+0.7％wt琼脂，Ph 5.6；
将上述所得的铁皮石斛原球茎接种于原球茎增值培养基上，在25℃、光照强度2000lux、光照时间12h/d的条件下，7d后，得到大量的直茎0.7～1mm的原球茎，变异率约为0.6％；所述原球茎增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.8％wt琼脂，Ph 5.6。
(3)将步骤(2)得到的铁皮石斛原球茎置于丛芽诱导及增值培养基中，在25℃、光照强度2000lux、光照时间12h/d的条件下培养60d繁殖出大量的5cm高铁皮石斛幼苗；其中，所述的丛芽诱导及增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3％wt蔗糖+0.7％wt琼脂，Ph 5.6；
(4)将步骤(3)中得到的铁皮石斛幼苗接种到生根壮苗培养基中，在25℃、光照度2000lux、光照时间12h/d的条件下培养60d，铁皮石斛的基部膨大到直径为4～7mm，平均直径为5.88mm，生根率大90％，这时可进行驯化移栽，其中，所述的生根壮苗培养基的组分为：1/2MS培养基+1.0mg/L NAA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7％wt琼脂，pH 5.6；
(5)将步骤(4)得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，移置铺有驯化栽培基质的苗床上，并遮阴保湿，驯化6个月后，所得铁皮石斛种苗即可进行大田移栽。
实施例2：
(1)9月，剪取铁皮石斛人工授粉后120d的塑果，用去污剂清洗10min，再用流水冲洗10min，带入接种室，在超净工作台上用75v/v％酒精浸泡45～60s，再放置于0.15％的氯化汞水溶液中浸泡；
(2)将步骤(1)得到的铁皮石斛无菌塑果在超净工作台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在25℃、120转/min的条件下，培养15d，种子开始萌发，5d后，通过显微镜观察，约60％的种子形成直茎0.5～0.7mm的原球茎，变异率约为0.75％，滤出原球茎备用；其中，光照条件为：前7d给予暗培养，以后光照度为2500lux、光照时间12h/d；所述的液体培养基组成为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+3％wt蔗糖+0.8％wt琼脂，Ph 5.8；
将上述所得的铁皮石斛原球茎接种于原球茎增值培养基上，在28℃、光照强度2500lux、光照时间12h/d的条件下，7d后，得到大量的直茎0.7～1mm的原球茎，变异率约为0.6％；所述原球茎增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7％wt琼脂，Ph 5.8。
(3)将步骤(2)得到的铁皮石斛原球茎置于丛芽诱导及增值培养基中，在28℃、光照强度2000lux、光照时间12h/d的条件下培养60d繁殖出大量的5cm高铁皮石斛幼苗；其中，所述的丛芽诱导及增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3％wt蔗糖+0.7％wt琼脂，Ph 5.8；
(4)将步骤(3)中得到的铁皮石斛幼苗接种到生根壮苗培养基中，在28℃、光照度2000lux、光照时间12h/d的条件下培养60d，铁皮石斛的基部膨大到直径为4～7mm，平均直径为5.82mm，生根率大88％，这时可进行驯化移栽，其中，所述的生根壮苗培养基的组分为：1/2MS培养基+1.0mg/L NAA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.8％wt琼脂，pH 5.8；
(5)将步骤(4)得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，移置铺有驯化栽培基质的苗床上，并遮阴保湿，驯化6个月后，所得铁皮石斛种苗即可进行大田移栽。
通过实施例，表面本发明在铁皮石斛种子萌发、接种、增值、生根阶段使用不同的培养基，取得了良好的效果，适用于铁皮石斛种苗规模生产的推广应用。

Claims (7)

1.一种铁皮石斛的接转方法，它包括以下步骤：
(1)铁皮石斛蒴果用清水洗净，去污剂溶液浸泡10min，再用清水冲刷洗净，在超净工作台上采用75％乙醇消毒30s，再用氯化汞消毒10～15min，用无菌水冲洗3～4次，得到铁皮石斛无菌塑果；
(2)步骤(1)所得的铁皮石斛无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22～25℃、80～120转/min的条件下，培养20d，过滤得到铁皮石斛原球茎；将步骤所得的铁皮石斛原球茎接种于原球茎增值培养基上，在25～28℃、光照强度1000～4000lux、光照时间11～14h/d的条件下，7d后得到大量的铁皮石斛原球茎；
(3)将步骤(2)中所得铁皮石斛原球茎接种到丛芽诱导及增值培养基中，在25～28℃、光照强度1000～4000lux、光照时间11～14h/d的条件下培养60d繁殖出大量的5cm高铁皮石斛幼苗；
(4)将步骤(3)中所得的铁皮石斛幼苗接种到生根壮苗培养基中，在25～28℃、光照度1000～4000lux、光照时间11～13h/d的条件下培养60d，选取基部形成直径4～7mm的铁皮石斛；
(5)将步骤(4)中选取的铁皮石斛用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴80％，驯化6个月后，所得铁皮石斛种苗即可进行大田移栽。
2.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0.1％～0.15％。
3.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(2)中，液体培养基为的组分为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA(或称“6-苄基氨基嘌呤”，是一种“细胞分裂素”)+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph5.6-5.8；原球茎增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA(或称萘乙酸)+1.0mg/L 6-BA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph5.6-5.8。
4.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(2)中在获得铁皮石斛原球茎前的培养条件为：在22～25℃条件下，前7d给予暗培养，之后光照强度为1000～4000lux，光照时间11～14h/d。
5.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的丛芽诱导及增值培养基的组分为：MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，Ph5.6-5.8。
6.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的生根壮苗培养基的组分为：1/2MS培养基+1.0mg/L NAA+7.5％wt香蕉汁+3％wt蔗糖+0.7-0.8％wt琼脂，pH5.6～5.8。
7.根据权利要求1所述铁皮石斛的接转方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1∶1∶0.5组成。
CN201610803668.9A 2016-08-29 2016-08-29 一种铁皮石斛的接转方法 Pending CN106359095A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610803668.9A CN106359095A (zh) 2016-08-29 2016-08-29 一种铁皮石斛的接转方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610803668.9A CN106359095A (zh) 2016-08-29 2016-08-29 一种铁皮石斛的接转方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106359095A true CN106359095A (zh) 2017-02-01

Family

ID=57900046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610803668.9A Pending CN106359095A (zh) 2016-08-29 2016-08-29 一种铁皮石斛的接转方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106359095A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107711517A (zh) * 2017-12-01 2018-02-23 江西宋氏灵斛生物科技有限公司 一种高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102301953A (zh) * 2011-07-20 2012-01-04 江苏农林职业技术学院 一种规模化高效快速繁殖铁皮石斛试管苗的方法
CN102948368A (zh) * 2012-11-13 2013-03-06 安徽新津铁皮石斛开发有限公司 一种铁皮石斛的组织培养方法
CN103371100A (zh) * 2012-04-17 2013-10-30 上海市农业科学院 春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法
CN104542286A (zh) * 2014-12-31 2015-04-29 贵州润芝霖生态农业科技开发有限公司 铁皮石斛组培苗生产方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102301953A (zh) * 2011-07-20 2012-01-04 江苏农林职业技术学院 一种规模化高效快速繁殖铁皮石斛试管苗的方法
CN103371100A (zh) * 2012-04-17 2013-10-30 上海市农业科学院 春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法
CN102948368A (zh) * 2012-11-13 2013-03-06 安徽新津铁皮石斛开发有限公司 一种铁皮石斛的组织培养方法
CN104542286A (zh) * 2014-12-31 2015-04-29 贵州润芝霖生态农业科技开发有限公司 铁皮石斛组培苗生产方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
付传明等: "铁皮石斛无菌播种产业化繁育技术研究", 《广西植物》 *
冼伟等: "铁皮石斛组培快繁及工厂化生产技术研究", 《安徽农业科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107711517A (zh) * 2017-12-01 2018-02-23 江西宋氏灵斛生物科技有限公司 一种高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102405842B (zh) 一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法
CN103314855A (zh) 白芨的种子组培繁殖方法
CN107182780A (zh) 滇黄精的育苗方法
CN102499088B (zh) 一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法
CN102187813B (zh) 蓝莓组织培养的方法及其专用培养基
CN103348920B (zh) 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法
CN101595824B (zh) 用檀香树种子胚离体快速育苗的方法
CN103444530A (zh) 一种福建野生金线莲野外自然回归迁地种植技术
CN103651124B (zh) 一种生姜再生植株的诱导方法
CN105075858B (zh) 一种白及种子的液体快速繁殖方法
CN105191803B (zh) 一种铁皮石斛组培袋苗生产方法
CN102499034B (zh) 降低木耳菜硝酸盐含量的无土栽培方法及木耳菜营养液
CN106069772A (zh) 一种建兰组培快速繁殖方法
CN102599065A (zh) 一种五爪龙的快速繁殖方法
CN102696480B (zh) 一种试管内沙基质培养油茶无菌芽的方法
CN105191795B (zh) 一种金叶水杉组培快繁方法
CN105075860B (zh) 一种灯盏花组培育苗方法
CN106359090A (zh) 一种有机铁皮石斛的培育种植方法
CN105265310B (zh) 一种通过组织培养繁育树莓苗的方法
CN106258903A (zh) 一种规模化生产白芨种苗的方法
CN106416972A (zh) 一种快速培养白芨种苗的方法
CN103828718B (zh) 一种菊花离体育种方法
CN102884980B (zh) 巨瓣兜兰组培快繁方法
CN105660415A (zh) 一种槲蕨的离体保存方法
CN105766636A (zh) 一种牡丹组织培养再生的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170201

RJ01 Rejection of invention patent application after publication