CN103828718B - 一种菊花离体育种方法 - Google Patents
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Abstract
一种菊花离体育种方法，本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种针对菊花的离体育种方法，它要解决现有处于开花期的菊花易受环境影响导致不结实的问题。育种方法：一、向MS培养液中加入NAA溶液和6-BA溶液配制育种培养液；二、对处于开花期的菊花茎段进行处理，使用清水冲洗后消毒，得到处理后的菊花茎段；三、菊花茎段放入装有育种培养液的培养箱中，控制光照强度和光照时间，沾取花粉进行人工授粉；四、采集成熟的种子自然阴干，完成菊花的离体育种。由于育种过程是在培养箱中进行，避免了外界地理条件，菊花离体培养的结实率为5%。本发明主要应用于菊花的育种。
Description
技术领域
本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种针对菊花的离体育种方法。
背景技术
菊花（Dendranthema grandiflourm Kitam）原产自我国，由于花色丰富，品种多样，而深受大众喜爱，广泛的在世界各地种植。当今世界菊花品种达7000多个，我国的菊花品种也有3000多个，由于花卉市场的发展和人们观赏水平的提高，对菊花的品种需求也表现出多样化，要求人们不断培育新的品种，而全新的育种技术在新品种的选育中也起着越来越重要的作用，传统育种手段已经无法满足市场的需要，诱变育种、分子育种以及组织培养技术等育种方法不断涌现，成为近年来育种的主要手段。
杂交育种方法是在菊花授粉期间不同品种的菊花自然传播花粉获得种子，或者人为干预授粉过程获得种子，选育新的花卉品种；芽变育种是利用自然栽培过程中的个别枝或植株的某一枝段或根部发生了变异的部分进行离体培养培育成的植株，从而获得新品种；诱变育种利用物理、化学和生物等因素诱导菊花的遗传性发生变异，然后根据育种目标进行选择，从而培育出新的品种,诱变育种包括物理诱变、化学诱变等方式；组织培养育种主要是通过原生质体培养、体细胞杂交、体细胞遗传变异以及单倍体的诱导与利用等途径来实现；分子育种是以分子遗传学为理论基础,采用生物技术的手段,将各种外源基因导入植物细胞，通过筛选获得植物新品种。然而无论是哪种育种方式都有自己的优点和不足，并且在后期的繁殖推广过程中都显示出了其自身的局限性，长期的无性繁殖会使品种的优势退化，抗病性减弱，生长势不强。有性繁殖种子的获得又受到地理条件、气候等多方面原因的影响。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有处于开花期的菊花易受环境影响导致不结实的问题，而提供一种菊花离体育种方法。
本发明菊花离体育种方法按下列步骤实现：
一、向MS培养液中加入NAA（萘乙酸）溶液和6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）溶液，经消毒处理后得到育种培养液；
二、对处于开花期的菊花茎段进行处理，保留两个饱满的花头，保留菊花茎段的3片叶子，菊花茎段的长度裁剪为10±0.5cm，使用清水冲洗后消毒，得到处理后的菊花茎段；
三、向培养箱中通入氧气，然后将处理后的菊花茎段放入装有育种培养液的培养箱中，在光照强度为2000～3000LX，光照时间为10～12h/d，温度为20～24℃的条件下培养，培养期间用毛笔沾取花粉进行人工辅助授粉，并每隔7天更换一次育种培养液，每次换液时剪去1cm处理后的菊花茎段；
四、待种子成熟，采集成熟的种子，放在通风处自然阴干，完成菊花的离体育种。
本发明菊花离体育种方法简便易行，所使用的育种培养液配方简单，利于其在菊花育种上的广泛应用，由于育种过程是在培养箱中进行，相对于自然育种避免了外界地理条件、气候等因素的影响，尤其适用于北方寒地区域的育种，如在东北林业大学试验田进行测试，神农香菊在自然生长条件下的结实率为0，而经本发明的离体培养结实率为5%。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式菊花离体育种方法按下列步骤实施：
一、向MS培养液中加入NAA（萘乙酸）溶液和6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）溶液，经消毒处理后得到育种培养液；
二、对处于开花期的菊花茎段进行处理，保留两个饱满的花头，保留菊花茎段的3片叶子，菊花茎段的长度裁剪为10±0.5cm，使用清水冲洗后消毒，得到处理后的菊花茎段；
三、向培养箱中通入氧气，然后将处理后的菊花茎段放入装有育种培养液的培养箱中，在光照强度为2000～3000LX，光照时间为10～12h/d，温度为20～24℃的条件下培养，培养期间用毛笔沾取花粉进行人工辅助授粉，并每隔7天更换一次育种培养液，每次换液时剪去1cm处理后的菊花茎段；
四、待种子成熟，采集成熟的种子，放在通风处自然阴干，完成菊花的离体育种。
本实施方式步骤二所述的菊花茎段选取花苞已经形成，舌状花即将展开的茎段，以缩短其离体培养周期，所采的花朵要饱满，保证种子的质量，用清水冲洗要彻底，以减少细菌的滋生。步骤三中通入氧气是为了使茎段的底部形成有氧的环境减少厌氧菌的滋生，有利于茎段对养分的吸收；本步骤中剪去1cm的菊花茎段的过程是在培养液中进行的。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一所述的育种培养液的制备方法是向1000～2000ml1/2MS培养液中加入2～5ml浓度为0.5mg/L的NAA（萘乙酸）溶液和2～5ml浓度为2.0mg/L的6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）溶液。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
本实施方式所述的MS培养液配方简单，并且其所含营养物质足以维持离体的菊花茎段生长。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中所述的消毒处理方式是采用高压蒸汽灭菌消毒。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二所述的消毒方式是采用次氯酸钠的水溶液浸泡消毒。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤三在光照强度为2000LX，光照时间为12h/d，培养温度为24℃的条件下培养。其它步骤及参数与具体实施方式一至四之一相同。
本实施方式控制育种期光照、温度等培养条件容易达到，一般的温室就可以达到育种要求，这样可以提高菊花育种的环境限制。
实施例一：本实施例菊花离体育种方法按下列步骤实施：
一、向1000ml1/2MS培养液中加入3ml浓度为0.5mg/L NAA（萘乙酸）溶液和2ml浓度为2.0mg/L6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）溶液，经消毒处理后得到育种培养液；
二、对处于开花期的神农香菊（Dendranthema indicum var.aromaticum）茎段进行处理，保留两个饱满的花头，保留菊花茎段的3片叶子，菊花茎段的长度裁剪为10cm，使用清水冲洗后使用质量浓度为2%的次氯酸钠水溶液浸泡消毒，得到处理后的菊花茎段；
三、向培养箱中通入氧气，然后将处理后的菊花茎段放入装有育种培养液的培养箱中，在光照强度为2000LX，光照时间为12h/d，温度为24℃的条件下培养，培养期间用毛笔沾取花粉进行人工辅助授粉，并每隔7天更换一次育种培养液，每次换液时剪去1cm处理后的菊花茎段；
四、待种子成熟，采集成熟的种子，放在通风处自然阴干，完成菊花的离体育种。
本实施例步骤四采集种子的过程是将已经落花的植株从培养液中拿出，将花朵剪下放在容器中，保持通风良好，自然风干。神农香菊在自然条件下生长季平均降水量330毫米左右，开花季节要求平均气温为10℃，通过在东北林业大学试验田的测试可知，如在该试验田自然生长神农香菊的结实率为0，经本实施例离体培养结实率为5%。
Claims (4)
1.一种菊花离体育种方法，其特征在于菊花离体育种方法按下列步骤实现：
一、向MS培养液中加入NAA溶液和6-BA溶液，经消毒处理后得到育种培养液；
二、对处于开花期的菊花茎段进行处理，保留两个花头，保留菊花茎段的3片叶子，菊花茎段的长度裁剪为10±0.5cm，使用清水冲洗后消毒，得到处理后的菊花茎段；
三、向培养箱中通入氧气，然后将处理后的菊花茎段放入装有育种培养液的培养箱中，在光照强度为2000～3000LX，光照时间为10～12h/d，温度为20～24℃的条件下培养，培养期间用毛笔沾取花粉进行人工辅助授粉，并每隔7天更换一次育种培养液，每次换液时剪去1cm处理后的菊花茎段；
四、待种子成熟，采集成熟的种子，放在通风处自然阴干，完成菊花的离体育种；
步骤一所述的育种培养液的制备方法是向1000～2000ml 1/2MS培养液中加入2～5ml浓度为0.5mg/L的NAA溶液和2～5ml浓度为2.0mg/L的6-BA溶液。
2.根据权利要求1所述的一种菊花离体育种方法，其特征在于步骤一中所述的消毒处理方式是采用高压蒸汽灭菌消毒。
3.根据权利要求1所述的一种菊花离体育种方法，其特征在于步骤二所述的消毒方式是采用次氯酸钠的水溶液浸泡消毒。
4.根据权利要求1所述的一种菊花离体育种方法，其特征在于步骤三在光照强度为2000LX，光照时间为12h/d，培养温度为24℃的条件下培养。
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