CN112772412A - 一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法，涉及植物组培快繁育苗技术领域，方法包括如下步骤：选用自立自封薄膜袋和制作杀菌培养基；将杀菌培养基加入到所述自立自封薄膜袋中，非密封放在桌面上进行冷凝；冷凝后在非无菌环境条件下进行开放式操作接种；接种完毕按压所述自立自封薄膜袋的自封条进行密封；最后将接种完并密封的自立自封薄膜袋放培养架上整齐摆放进行培养。本发明的方法采用自立自封塑料薄膜袋进行种苗生产，免去了繁重的洗瓶工作，节约了用工成本；免去了玻璃瓶或塑料瓶的仓储空间，节约了采购运输成本；还能节省高压灭菌设备，省去了买高压灭菌设备投资和操作高压灭菌设备的用工。

Description

一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法

技术领域

本发明涉及植物组培快繁育苗技术领域，具体涉及一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法。

背景技术

植物组培快繁技术育苗已成为现代种苗供应的重要组成部分，如香蕉，马铃薯，桉树、甘蔗等多是通过植物组培快繁技术来进行工厂化生产，但是现有的植物组培快繁技术育苗均是采用玻璃瓶或塑料瓶作为培养容器，玻璃瓶存在着玻璃瓶易碎笨重的问题，塑料瓶虽质轻，但成本高，且玻璃瓶或塑料瓶还存在清洗费时费力、运输成本高等缺点。申请公开号CN105191803A公开了一种铁皮石斛组培袋苗生产方法，申请公开号CN1150885A公开了一种利用薄膜袋进行种苗组织培养快速繁殖的技术，这两篇专利均采用薄膜袋作为培养容器，但是这两篇专利的培养基需要高压灭菌、在超净工作台内操作接种，然后用封口机进行培养袋封口，培养需要放在特制的框内培养，操作繁琐，实验条件要求高。

发明内容

为此，本发明提供一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法，以解决现有植物组培快繁技术育苗存在培养容器清洗费时费力、运输成本高、实验条件要求高等问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明的第一方面，一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

选用自立自封薄膜袋和制作杀菌培养基；

将所述杀菌培养基加入到所述自立自封薄膜袋中，非密封放在桌面上进行冷凝；

冷凝后在非无菌环境条件下进行开放式操作接种；

接种完毕按压所述自立自封薄膜袋的自封条进行密封；

最后将接种完并密封的自立自封培养袋放培养架上整齐摆放进行培养。

本发明一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法，采用成本低、重量轻、透明度高的高分子自立自封薄膜袋作为组培快繁容器，取代现有玻璃瓶、塑料瓶；用培养基杀菌剂制成的杀菌培养基，取代现有高温高压灭菌、超净工作台内接种；用自封袋按压自封条，取代盖瓶盖或用封口机封口；用袋子的自立，取代原来的培养框，从而使其较好地保留现有技术功能优点的同时，具有占据空间小、运输成本低，能有效降低生产成本，较好地克服现有技术不足。

进一步地，所述自立自封薄膜袋的壁厚为0.06mm～0.09mm，透光率为95～100％。

进一步地，所述自立自封薄膜袋的规格为袋宽10cm，袋高15cm，底部高3cm，或者袋宽12cm，袋高17cm，底部高4cm，或者袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm，或者袋宽15cm，袋高20cm，底部高4cm。更进一步地，所述自立自封薄膜袋可以为不带孔设计，也可以为带1或2个透气孔，且透气孔由透气膜覆盖的设计。

进一步地，所述自立自封薄膜袋是由聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制作而成。

进一步地，所述杀菌培养基由生长培养基和杀菌剂配制而成，所述杀菌剂的添加浓度为0.3ml/L。

进一步地，所述杀菌剂为植物组织培养高效抗污杀菌剂S106。

进一步地，所述接种的具体方法如下：用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，自立自封薄膜袋袋口即张开；

把自立自封薄膜袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％酒精的广口瓶中用消毒，从广口瓶中取出消毒后的医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取母苗，修剪好后放入待接种自立自封薄膜袋中，取下夹子，母苗袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中母苗剪完；

左手按压待接种自立自封薄膜袋袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把植物茎段按生物极性方向均匀插入杀菌培养基表面，按压待接种自立自封薄膜袋自封条密封，接种完毕。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

釆用聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制造出壁厚为0.06mm，透光率95～100％，规格袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm的自立自封薄膜袋，作为植物组培快繁容器；

先在电饭锅内加入1升水烧到80℃时，依次加入蔗糖30g、琼脂4g进行溶化；再加入100倍MS母液、1mg/ml浓度的6-BA0.3ml、1mg/ml浓度的IBA0.1ml，煮沸，调pH值为5.8，得到生长培养基；然后加入杀菌剂0.3ml，煮沸1～2分钟，使之与生长培养基混合均匀，制备得到杀菌培养基；

扯开自立自封薄膜袋的自封条，倒入制备的杀菌培养基45ml，袋底即自行张开可以自立，袋口自然轻微闭合，待杀菌培养基凝固即可接种；

用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，培养袋口即张开；把培养袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％的酒精的广口瓶中进行消毒，消毒完后从广口瓶中取出医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取菊花苗，剪去叶片、根系，每二叶节为一段，剪下放入待接种新培养袋中，每袋放6～8段，取下夹子，袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中菊花苗剪完；

左手按压袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把6～8个菊花茎段按生物极性方向均匀插入培养基表面，按压自立自封薄膜袋封条密封，接种完毕；

把接种完密封好的自立自封薄膜袋均匀摆放在培养室的培养架上进行培养；培养30天后再重复转接操作，使菊花苗越来越多。

进一步地，所述100倍MS母液由如下体积份数的原料组成：大量元素三种母液10ml、大量元素一种母液10ml、大量元素钙盐10ml、微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机母液10ml。

进一步地，所述培养室的培养条件如下：温度25～27℃，光照强度1500～3000lx，光照时间每天14小时光照10小时黑暗。

本发明具有如下优点：

本发明一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法采用自立自封塑料薄膜袋进行种苗生产，免去了繁重的洗瓶工作，节约了用工成本；免去了玻璃瓶或塑料瓶的仓储空间，节约了采购运输成本；还能节省高压灭菌设备，省去了买高压灭菌设备投资和操作高压灭菌设备的用工。

本发明的方法在设备投资上，较常规组培节省70％左右，同时具有节省空间、便于操作、方便运输，降低生产投入的优点，较好地克服了现有技术的不足。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。

本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容能涵盖的范围内。

图1为本发明实施例1提供的接种方法中用不锈钢夹子夹住袋口使袋口张开的示意图；

图2为本发明实施例1提供的接种方法中袋口非密封自然闭合的示意图；

图3为本发明实施例1提供的接种方法中自立自封薄膜袋自封条密封示意图；

图4为本发明实施例2提供的接种完密封好的自立自封薄膜袋均匀摆放在培养室的培养架上进行培养的示意图；

图5为本发明实施例2提供的培养好的菊花苗的示意图；

图6为本发明实施例3提供的培养好的黄金构骨苗的示意图。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法包括如下步骤：

选用自立自封薄膜袋和制作杀菌培养基；

将所述杀菌培养基加入到所述自立自封薄膜袋中，非密封放在桌面上进行冷凝；

冷凝后在非无菌环境条件下进行开放式操作接种；

接种完毕按压所述自立自封薄膜袋的自封条进行密封；

最后将接种完并密封的自立自封薄膜袋放培养架上整齐摆放进行培养。

本发明的方法选用自立自封薄膜袋进行植物组培繁殖，免去了繁重的洗瓶工作，节约了用工成本。在工厂化规模生产中，一个工人以一天定额洗1000个培养瓶，每天工资100元计，每只培养瓶的洗瓶工资为0.1元。

本发明的方法采用具有杀菌作用的杀菌培养基对植物进行组培繁殖，免去了高压灭菌环节，省去了买高压灭菌设备投资和操作高压灭菌设备的用工；且采用开放式组培繁殖，仅需在常规组培培养基的环节，加入一定量的杀菌剂，就可在开放的非无菌环境下接种操作。

本发明的方法选用自立自封薄膜袋进行植物组培繁殖，免去了盖瓶盖或用封口机封袋口的麻烦，只需按压袋口自封条就完成密封效果，即按压就封，拉扯即开的效果。

本发明的方法选用自立自封薄膜袋进行植物组培繁殖，免去了常规袋式培养需要特制培养框装载，袋与袋之间相互依靠而挤靠在培养框内，利用自封自立培养袋的自立特点可像培养瓶一样在培养架上单个独立培养。

本发明的方法选用自立自封薄膜袋进行植物组培繁殖，免去了玻璃瓶或塑料瓶的仓储空间、节约采购运输成本。如堆放10000个玻璃或塑料培养瓶需要15～20立方米空间，而同样数量的自立自封薄膜袋仅需0.15立方米，且存取方便，不存在玻璃瓶破碎问题；若釆购车载运输成本相当高，而釆购10000只自立自封薄膜袋仅物流费用至少节省90％的运输成本。

在一个实施方式中，所述自立自封薄膜袋的壁厚为0.06mm～0.09mm，透光率为95～100％。这样既能保证培养植物用的容器不易发生破损，也能保证植物在培养过程中能充分接收到生长所需的光照。所述自立自封薄膜袋可以根据培养需要不设置透气孔或者设置1-2个透气孔，且透气孔由透气膜覆盖。

在一个实施方式中，所述自立自封薄膜袋的规格为袋宽10cm，袋高15cm，底部高3cm，或者袋宽12cm，袋高17cm，底部高4cm，或者袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm，或者袋宽15cm，袋高20cm，底部高4cm。根据不同的植物苗的高度、生长情况及其培养规格选取不同的培养容器规格。

在一个实施方式中，所述自立自封薄膜袋是由聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制作而成。通过该技术方案，使制备得到的自立自封薄膜袋具有防腐、防潮、透明度高等优点。

在一个实施方式中，所述杀菌培养基由生长培养基和杀菌剂配制而成，所述杀菌剂的添加浓度为0.3ml/L。通过该技术方案，采用具有杀菌作用的杀菌培养基对植物进行组培繁殖，免去了高压灭菌环节，省去了买高压灭菌设备投资和操作高压灭菌设备的用工；采用合适的杀菌剂添加量，可使植物在开放的非无菌环境下进行接种操作。

在一个实施方式中，所述杀菌剂为植物组织培养高效抗污杀菌剂S106。该杀菌剂是一种长效、广谱、高活性、植物组织培专用防污染杀菌剂，其用量少，使用方便，操作安全、配伍性好，其活性成分对环境无残留，不破坏培养基活性成分，还具有耐高压灭菌、稳定性高、使用成本低等优点，可有效降低袋苗废弃率，降低组培成本，提高组培效益。

在一个实施方式中，所述接种的具体方法如下：用手指轻轻拉开袋口，如图1所示，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，自立自封薄膜袋袋口即张开；

把自立自封薄膜袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％酒精的广口瓶中用消毒，从广口瓶中取出消毒后的医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取母苗，修剪好后放入待接种自立自封薄膜袋中，如图2所示，取下夹子，母苗袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中母苗剪完；

左手按压待接种自立自封薄膜袋袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把植物茎段按生物极性方向均匀插入杀菌培养基表面，如图3所示，按压待接种自立自封薄膜袋自封条密封，接种完毕。

实施例2

一种利用自立自封薄膜袋进行开放式菊花苗组培快繁的方法包括如下步骤：

釆用聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制造出壁厚为0.06mm，透光率95～100％，规格袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm的自立自封薄膜袋，作为植物组培快繁容器；

先在电饭锅内加入1升水烧到80℃时，依次加入蔗糖30g、琼脂4g进行溶化；再加入100倍MS母液、1mg/ml浓度的6-BA0.3ml、1mg/ml浓度的IBA0.1ml，煮沸，调pH值为5.8，得到生长培养基；然后加入杀菌剂0.3ml，煮沸1～2分钟，使之与生长培养基混合均匀，制备得到杀菌培养基；所述100倍MS母液由如下体积份数的原料组成：大量元素三种母液10ml、大量元素一种母液10ml、大量元素钙盐10ml、微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机母液10ml；

扯开自立自封薄膜袋的自封条，倒入制备的杀菌培养基45ml，袋底即自行张开可以自立，袋口自然轻微闭合，待杀菌培养基凝固即可接种；

用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，培养袋口即张开；把培养袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％的酒精的广口瓶中进行消毒，消毒完后从广口瓶中取出医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取菊花苗，剪去叶片、根系，每二叶节为一段，剪下放入待接种新培养袋中，每袋放6～8段，取下夹子，袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中菊花苗剪完；

左手按压袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把6～8个菊花茎段按生物极性方向均匀插入培养基表面，按压自立自封薄膜袋封条密封，接种完毕；

如图4所示，把接种完密封好的自立自封薄膜袋均匀摆放在培养室的培养架上进行培养，所述培养室的培养条件如下：温度25～27℃，光照强度1500～3000lx，光照时间每天14小时光照10小时黑暗；培养30天后再重复转接操作，使菊花苗越来越多。如图5所示，为培养好的菊花苗，该菊花苗的移栽成活率95％以上。

实施例3

一种利用自立自封薄膜袋进行开放式木本植物黄金构骨组培快繁的方法包括如下步骤：

釆用聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制造出壁厚为0.06mm，透光率95～100％，规格袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm的自立自封薄膜袋，作为植物组培快繁容器；

在黄金构骨生长培养基中加入0.3ml/L的植物组织培养高效抗污杀菌剂S106制备黄金构骨杀菌培养基；

扯开自立自封薄膜袋的自封条，倒入制备的杀菌培养基45ml，袋底即自行张开可以自立，袋口自然轻微闭合，待杀菌培养基凝固即可接种；

用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，培养袋口即张开；把培养袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％的酒精的广口瓶中进行消毒，消毒完后从广口瓶中取出医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取黄金构骨苗，剪去叶片、根系，每二叶节为一段，剪下放入待接种新培养袋中，每袋放6～8段，取下夹子，袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中黄金构骨苗剪完；

左手按压袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把6～8个黄金构骨茎段按生物极性方向均匀插入培养基表面，按压自立自封薄膜袋封条密封，接种完毕；

把接种完密封好的自立自封薄膜袋均匀摆放在培养室的培养架上进行培养，培养30天后再重复转接操作，使黄金构骨苗越来越多。如图6所示，为培养好的黄金构骨苗，该黄金构骨苗的移栽成活率95％以上。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种利用自立自封薄膜袋进行开放式植物组培快繁的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

选用自立自封薄膜袋和制作杀菌培养基；

将所述杀菌培养基加入到所述自立自封薄膜袋中，非密封放在桌面上进行冷凝；

冷凝后在非无菌环境条件下进行开放式操作接种；

接种完毕按压所述自立自封薄膜袋的自封条进行密封；

最后将接种完并密封的自立自封薄膜袋放培养架上整齐摆放进行培养。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自立自封薄膜袋的壁厚为0.06mm～0.09mm，透光率为95～100％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自立自封薄膜袋的规格为袋宽10cm，袋高15cm，底部高3cm，或者袋宽12cm，袋高17cm，底部高4cm，或者袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm，或者袋宽15cm，袋高20cm，底部高4cm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自立自封薄膜袋是由聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制作而成。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述杀菌培养基由生长培养基和杀菌剂配制而成，所述杀菌剂的添加浓度为0.3ml/L。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述杀菌剂为植物组织培养高效抗污杀菌剂S106。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接种的具体方法如下：用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，自立自封薄膜袋袋口即张开；

把自立自封薄膜袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％酒精的广口瓶中用消毒，从广口瓶中取出消毒后的医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取母苗，修剪好后放入待接种自立自封薄膜袋中，取下夹子，母苗袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中母苗剪完；

左手按压待接种自立自封薄膜袋袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把植物茎段按生物极性方向均匀插入杀菌培养基表面，按压待接种自立自封薄膜袋自封条密封，接种完毕。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

釆用聚对苯二甲酸乙二酯和聚丙烯复合材料制造出壁厚为0.06mm，透光率95～100％，规格袋宽13cm，袋高18cm，底部高4cm的自立自封薄膜袋，作为植物组培快繁容器；

先在电饭锅内加入1升水烧到80℃时，依次加入蔗糖30g、琼脂4g进行溶化；再加入100倍MS母液、1mg/ml浓度的6-BA0.3ml、1mg/ml浓度的IBA0.1ml，煮沸，调pH值为5.8，得到生长培养基；然后加入杀菌剂0.3ml，煮沸1～2分钟，使之与生长培养基混合均匀，制备得到杀菌培养基；

扯开自立自封薄膜袋的自封条，倒入制备的杀菌培养基45ml，袋底即自行张开可以自立，袋口自然轻微闭合，待杀菌培养基凝固即可接种；

用手指轻轻拉开袋口，用一枚不锈钢小夹子，垂直于开口面夹住，培养袋口即张开；把培养袋母苗袋口用手提喷雾器喷75％酒精消毒后，放在桌面上，用手扯开母苗袋口，用另一个不锈钢小夹垂直于开口面夹住，母苗袋口张开；把干净的医用手术剪、镊子浸泡于装有75％的酒精的广口瓶中进行消毒，消毒完后从广口瓶中取出医用手术剪和镊子，从母苗袋中夹取菊花苗，剪去叶片、根系，每二叶节为一段，剪下放入待接种新培养袋中，每袋放6～8段，取下夹子，袋口非密封自然闭合；以同样的方法直至母苗袋中菊花苗剪完；

左手按压袋口自然张口，右手从消毒酒精瓶中取出镊子，在袋中把6～8个菊花茎段按生物极性方向均匀插入培养基表面，按压自立自封薄膜袋封条密封，接种完毕；

把接种完密封好的自立自封薄膜袋均匀摆放在培养室的培养架上进行培养；培养30天后再重复转接操作，使菊花苗越来越多。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述100倍MS母液由如下体积份数的原料组成：大量元素三种母液10ml、大量元素一种母液10ml、大量元素钙盐10ml、微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机母液10ml。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养室的培养条件如下：温度25～27℃，光照强度1500～3000lx，光照时间每天14小时光照10小时黑暗。

Images