CN106332782B - 独蒜兰组织培养一步成苗培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法。本发明充分利用独蒜兰蒴果种子数量大的优势，以种子为外植体建立适合独蒜兰一步成苗的组培快繁技术，本发明通过MSN培养基大大缩短了组培时间，并且可以有效解决组培苗黄化、生根困难、茎叶徒长的问题，大大降低了生产成本，提高了繁殖的成活率，是值得推广的技术。

Description

独蒜兰组织培养一步成苗培养方法
技术领域
本发明涉及农业科技领域，尤其是一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法。
背景技术
独蒜兰(Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe)，又名冰球子，为兰科独蒜兰属多年生植物，为中国药典上收录的山慈菇的基原植物，以假鳞茎入药，具有清热解毒、消肿散结功能。近年来，因其具有抗癌作用而受到日益关注。随着独蒜兰药用价值的开发，价格不断上涨，野生资源濒临绝灭。如今，独蒜兰栽培技术已经成熟，但是种苗问题没有解决，独蒜兰种子十分细小，自然条件下很难萌发，生产上主要还是利用分株法繁殖，繁殖系数很低，根本不能满足市场的需求和资源的可持续利用。组培技术的发展为独蒜兰种苗生产提供了新的途径，如何降低成本、提高种苗质量成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是：提供一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，它可以使独蒜兰种子萌发后一步成苗，只需转接一次，即可出瓶移栽，且所生产的组培苗球茎大、根系发达。
本发明是这样实现的：独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，包括如下步骤：
1)优良种子的获得：选择芽眼饱满、个头大、无病害的独蒜兰假鳞茎，于当年11月-翌年2月栽种，3月～4月开花后进行独蒜兰人工授粉；
2)蒴果的采收与选择：授粉后190-210天，挑选饱满的黄色蒴果，适时采收；
3)无菌播种：蒴果采收后，先用水冲洗干净硕果表面，然后用酒精擦拭蒴果表面消毒处理，在无菌条件下，将种子均匀地播种到播种培养基表面，播种瓶放在培养室中培养3周后种子开始萌发成绿色原球茎，2个月后长成带叶的幼苗；
4)幼苗转接：将带叶幼苗转接到MSN培养基上，每瓶转接15株；转接后的幼苗及时放在培养室中培养，生长3-4个月后形成球茎直径0.7-0.9cm的幼苗，即可出瓶移栽。
步骤3)中所述的播种培养基是以B5培养基为基础，包含0.5mg/L NAA、20g/L蔗糖、6.5g/L琼脂及0.5g/L活性炭，pH值为5.8，培养基分装后在121℃灭菌25分钟备用。
步骤3)中所述的用酒精擦拭蒴果表面消毒处理是指，用浸泡过质量百分比为75％酒精的脱脂棉对独蒜兰蒴果表面擦拭2-3次，然后将蒴果放置在消过毒的培养皿中，再在杀过菌的超净工作台上再用酒精浸泡的棉球擦蒴果表皮，用消毒过的镊子夹住蒴果在酒精灯外焰处来回快速烧2-3秒，如此反复烧2次，即完成对独蒜兰蒴果的消毒。
所述的步骤3)中，播种好的培养瓶在培养室培养的条件是：温度为22±1℃，光照时间12h/d，光照强度1800-2000lx。
步骤4)中所述的MSN培养基包括硝酸钾KNO3：850-1050mg/L，硝酸铵NH4NO3：300-450mg/L；磷酸二氢钾KH2PO4：112-212mg/L；硫酸镁MgSO4.7H2O：150-230mg/L；氯化钙CaCl2：180-260mg/L；微量元素、有机物和铁盐的组成成分和MS相同，但是浓度减半；NAA的浓度为1.0-1.2mg/L；蔗糖的浓度为20-30g/L；琼脂的浓度为6-7g/L；活性炭的浓度为0.5-1.5g/L；土豆汁的浓度为50-150g/L。
所述步骤4)中，幼苗转接后的培养条件为温度为22±1℃，光照时间14h/d，光照强度2000-2200lx。
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明充分利用独蒜兰蒴果种子数量大的优势，以种子为外植体建立适合独蒜兰一步成苗的组培快繁技术，本发明通过MSN培养基大大缩短了组培时间，并且可以有效解决组培苗黄化、生根困难、茎叶徒长的问题，大大降低了生产成本，是值得推广的技术。
具体实施方式
本发明的实施例1：独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，
试验地点：贵州省农科院现代中药材研究所实验室
1)优良种子的获得：选择芽眼饱满、个头大、无病害的独蒜兰假鳞茎，于当年11月-翌年2月栽种，3月～4月开花后进行独蒜兰人工授粉；
2)蒴果的采收与选择：授粉后190-210天，挑选饱满的黄色蒴果，适时采收；
3)无菌播种：蒴果采收后，先用水冲洗干净硕果表面，然后用酒精擦拭蒴果表面消毒处理，在无菌条件下，将种子均匀地播种到播种培养基表面，播种瓶放在培养室中培养3周后种子开始萌发成绿色原球茎，2个月后长成带叶的幼苗；
4)幼苗转接：将带叶幼苗转接到MSN培养基上，每瓶转接15株；转接后的幼苗及时放在培养室中培养，生长3-4个月后形成球茎直径0.7-0.9cm的幼苗，即可出瓶移栽。
步骤3)中所述的播种培养基是以B5培养基为基础，包含0.5mg/L NAA、20g/L蔗糖、6.5g/L琼脂及0.5g/L活性炭，pH值为5.8，培养基分装后在121℃灭菌25分钟备用。
步骤3)中所述的用酒精擦拭蒴果表面消毒处理是指，用浸泡过质量百分比为75％酒精的脱脂棉对独蒜兰蒴果表面擦拭2-3次，然后将蒴果放置在消过毒的培养皿中，再在杀过菌的超净工作台上再用酒精浸泡的棉球擦蒴果表皮，用消毒过的镊子夹住蒴果在酒精灯外焰处来回快速烧2-3秒，如此反复烧2次，即完成对独蒜兰蒴果的消毒。
所述的步骤3)中，播种好的培养瓶在培养室培养的条件是：温度为22±1℃，光照时间12h/d，光照强度1800-2000lx。
步骤4)中所述的MSN培养基包括硝酸钾KNO3：850-1050mg/L，硝酸铵NH4NO3：300-450mg/L；磷酸二氢钾KH2PO4：112-212mg/L；硫酸镁MgSO4.7H2O：150-230mg/L；氯化钙CaCl2：180-260mg/L；微量元素、有机物和铁盐的组成成分和MS相同，但是浓度减半；NAA的浓度为1.0-1.2mg/L；蔗糖的浓度为20-30g/L；琼脂的浓度为6-7g/L；活性炭的浓度为0.5-1.5g/L；土豆汁的浓度为50-150g/L。
所述步骤4)中，幼苗转接后的培养条件为温度为22±1℃，光照时间14h/d，光照强度2000-2200lx。
对比例1：步骤1)-3)均与实施例1相同，但是步骤3)中采用的MSN培养基替换为普通的1/2MS培养基，培养的独蒜兰幼苗的生长情况见表1。
表1MSN培养基和1/2MS培养基培养的独蒜兰幼苗的生长情况差异
根据表1得知，本发明的是实施例1的独蒜兰幼苗与对比例1的相比，其叶片宽大、球茎饱满、生根状况好，而且也避免了徒长的问题。

Claims (3)

1.一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
1）优良种子的获得：选择芽眼饱满、个头大、无病害的独蒜兰假鳞茎，于当年11月-翌年2月栽种，3月～4月开花后进行独蒜兰人工授粉；
2）蒴果的采收与选择：授粉后190-210天，挑选饱满的黄色蒴果，适时采收；
3）无菌播种：蒴果采收后，先用水冲洗干净硕果表面，然后用酒精擦拭蒴果表面消毒处理，在无菌条件下，将种子均匀地播种到播种培养基表面，播种瓶放在培养室中培养3周后种子开始萌发成绿色原球茎，2个月后长成带叶的幼苗；
步骤3）中所述的播种培养基是以B5培养基为基础，包含0.5mg/L NAA、20 g/L 蔗糖、6.5g/L琼脂及0.5 g/L活性炭，pH值为5.8，培养基分装后在121℃灭菌25分钟备用；播种好的培养瓶在培养室培养的条件是：温度为 22±1℃，光照时间12h/d，光照强度1800-2000lx；
4）幼苗转接：将带叶幼苗转接到MSN培养基上，每瓶转接15株；转接后的幼苗及时放在培养室中培养，生长3-4个月后形成球茎直径0.7-0.9cm的幼苗，即可出瓶移栽；步骤4）中所述的MSN培养基包括硝酸钾 KNO3：850-1050mg/L，硝酸铵 NH4NO3：300-450 mg/L；磷酸二氢钾 KH2PO4：112-212 mg/L；硫酸镁 MgSO4.7H2O：150-230mg/L；氯化钙 CaCl2：180-260mg/L；微量元素、有机物和铁盐的组成成分和MS相同，但是浓度减半；NAA的浓度为1.0-1.2mg/L；蔗糖的浓度为20-30g/L；琼脂的浓度为6-7g/L；活性炭的浓度为0.5-1.5g/L；土豆汁的浓度为50-150g/L。
2.根据权利要求1所述的独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，其特征在于：步骤3）中所述的用酒精擦拭蒴果表面消毒处理是指，用浸泡过质量百分比为75%酒精的脱脂棉对独蒜兰蒴果表面擦拭2-3次，然后将蒴果放置在消过毒的培养皿中，再在杀过菌的超净工作台上再用酒精浸泡的棉球擦蒴果表皮，用消毒过的镊子夹住蒴果在酒精灯外焰处来回快速烧2-3秒，如此反复烧2次，即完成对独蒜兰蒴果的消毒。
3.根据权利要求1所述的独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，其特征在于：所述步骤4）中，幼苗转接后的培养条件为温度为 22±1℃，光照时间14h/d，光照强度2000-2200 lx。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108235908A (zh) * 2017-12-20 2018-07-03 四川农业大学 一种独蒜兰全苗培养方法
CN110972956A (zh) * 2020-01-02 2020-04-10 昭通芸生农业科技开发有限公司 一种独蒜兰种子组织培育方法
CN112352681B (zh) * 2020-11-23 2023-02-03 云南省林业和草原科学院 一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法
CN114902950A (zh) * 2021-02-06 2022-08-16 李有荣 东北地区野生冰球子有性繁殖育种方法
CN114223545B (zh) * 2022-01-12 2022-08-30 中国科学院昆明植物研究所 一种提高独蒜兰远缘杂交种子萌发率的培养基及其应用和培育方法
CN116548310A (zh) * 2023-05-17 2023-08-08 云南省农业科学院高山经济植物研究所 一种促进云南独蒜兰组培苗快速成苗的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1631102A (zh) * 2004-12-29 2005-06-29 中国科学院华南植物园 独蒜兰的试管种球生产技术
CN100998311A (zh) * 2007-01-04 2007-07-18 西南交通大学 山慈姑独蒜兰人工繁殖方法
CN103168609A (zh) * 2013-04-18 2013-06-26 贵州省农作物品种资源研究所 独蒜兰种子原生地自然播种方法
CN104719152A (zh) * 2015-02-16 2015-06-24 贵州省农作物品种资源研究所 白及工厂化育苗方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1631102A (zh) * 2004-12-29 2005-06-29 中国科学院华南植物园 独蒜兰的试管种球生产技术
CN100998311A (zh) * 2007-01-04 2007-07-18 西南交通大学 山慈姑独蒜兰人工繁殖方法
CN103168609A (zh) * 2013-04-18 2013-06-26 贵州省农作物品种资源研究所 独蒜兰种子原生地自然播种方法
CN104719152A (zh) * 2015-02-16 2015-06-24 贵州省农作物品种资源研究所 白及工厂化育苗方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
云南独蒜兰原球茎诱导与增殖的研究;黄永会等;《贵州农业科学》;20091231;第37卷(第7期);第16页摘要，第17页第1、2.1节，第18页第3节 *
濒危兰科植物独蒜兰的快繁技术研究;张燕等;《陕西农业科学》;20131231(第3期);第57-59页 *
独蒜兰快繁技术的研究;黄成林等;《安徽农业大学学报》;20041231;第31卷(第1期);第100-103页 *
石斛兰和秋花独蒜兰种子的原球茎诱导及其生长分化;古碧珠等;《仲恺农业技术学院学报》;20081231;第21卷(第4期);第17-21页 *

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