CN106962201B - 一种吉祥草试管苗种质保存方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种吉祥草试管苗种质保存方法，包括以下技术环节：1）吉祥草预处理；2）外植体取材、消毒与接种；3）不定芽诱导；4）慢生长增殖保存种质；5）活化；6）不定芽壮根后移栽。本发明首次建立了吉祥草的试管苗种质保存方法，该保存方法可以有效地保持吉祥草种质优良性状，显著延长了吉祥草种质的保存时间，极大节省了人力、物力和空间，而且操作简便，稳定可靠，为吉祥草的产业推广提供了有力保障。

Description

一种吉祥草试管苗种质保存方法
技术领域
本发明涉及一种吉祥草试管苗种质保存方法，属于中草药及园林植物科学技术领域。
背景技术
吉祥草（Reineckia carnea (Andr.) Kunth），又名紫衣草，是百合科吉祥草属多年生常绿草本植物，原产中国长江流域以南各省及西南地区，日本也有分布。吉祥草喜温暖湿润，畏烈日，在半阴出不太郁闭的树丛下生长，形成阴绿一片，非常美观。吉祥草适合在林下栽植，亦可在岩石圆中做点缀，同时吉祥草可用于盆栽做观赏，适用于于办公室、商场及庭院、窗台、几架或者花束花篮做配叶，株形优美，叶色青翠，是非常好的装饰花卉。
吉祥草是我国传统中草药，始载于隋唐时期陈藏器《本草拾遗》，谓其：“生西国，
胡人将来也。”《本草纲目》云：“吉祥草，叶如漳兰，四时青翠，夏开紫花成穗，易繁。”
吉祥草味甘，性凉，具有润肺止咳、凉血止血、解毒利咽、祛风等功能，常用于肺结核、咳嗽咯血、慢性支气管炎、哮喘、风湿性关节炎；外用治跌打损伤骨折。苗族民间常用来治疗咳嗽、支气管炎、肺炎等病症。在印度吉祥草自古被看成是神圣的草，是宗教仪式中不可缺少之物。吉祥草植株主要含皂苷类成分，甾体化合物，皂苷元等成分，研究发现具有明显的抗炎功效。吉祥草既是传统的中草药，具有很高的药用价值；同时又是重要的园林地被植物，具有较高的观赏价值；而且吉祥草对土壤要求不严格，管理成本低。因此，在园林中以吉祥草作为地被植物，既可以起到景观生态价值，同时又可以作为中草药资源，较高的生态价值和社会价值。
一直以来，吉祥草生产上都采用分株繁殖的方式进行栽培扩繁。长期无性繁殖过程中，病毒逐代积累，从而造成吉祥草品种退化严重，优良种性严重退化甚至丧失，园林观赏价值和药用价值大大降低，在生产中逐步淘汰。目前，吉祥草基础性方面的研究报道并不多，仅限于栽培生产应用研究和药用价值研究，对吉祥草组织培养方面的研究还鲜有报道。与此同时，随着吉祥草等药材的市场需求的日益增大，野生资源遭到过量开采，使GAP基地的建设迫在眉睫。
试管苗种质保存是将种质资源的外植体分离开母体培养出试管苗，利用设备进行贮藏保存，其好处是所占空间小，所需的人力资源少，而又能较好地保护物种及其遗传的多样性。目前吉祥草的试管苗种质保存方法尚未建立，因此加强吉祥草组织培养研究，探索建立保存时间久、稳定可靠的吉祥草种质资源保存方法对吉祥草的战略开发无疑提供了重要的技术保障。
发明内容
本发明的目的是针对目前我国吉祥草生产上长期采用分株繁殖方式而造成的种性退化严重的缺陷，提供了一种保存时间久、稳定可靠的吉祥草试管苗种质保存方法。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种吉祥草试管苗种质保存方法，其特征在于，该种质保存方法包括以下技术步骤：
1）吉祥草预处理：
将生长健壮、无病虫害的吉祥草植株取材后进行根部清洗，然后将根部浸入装有0.01g/L的多氯苯甲酸溶液中，5-6℃低温黑暗预处理3-4天；
2）外植体取材、消毒与接种
将吉祥草植株超纯水洗净后转入超净工作台进行无菌操作，剥去叶片，露出吉祥草嫩茎，将嫩茎先用浓度为75%酒精浸泡30s，然后投入加入了数滴吐温80的0.1%升汞溶液中，表面消毒12-15m后用灭菌水冲洗3-5次，滤纸吸干，将嫩茎用灭菌解剖刀分割成0.6-0.9cm的小茎段，然后将小茎段正向接种于装有诱导培养基的三角瓶中；
3）不定芽诱导
培养室温度控制为25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，27-33天诱导出不定芽；
4）慢生长增殖保存种质：
将不定芽接种至慢生长增殖培养基A或慢生长增殖培养基B中，然后将三角瓶转移到低温、弱光条件下缓慢生长，12个月继代接种一次，慢生长增殖培养基A和慢生长增殖培养基B继代接种交替使用，然后继续进行慢生长增殖步骤；
5）活化
当吉祥草种质保存期结束，需要将吉祥草不定芽恢复活性，将慢生长增殖的不定芽转接入活化培养基，然后转移到温度控制25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，获得健壮的吉祥草不定芽；
6）不定芽壮根后移栽：
将吉祥草不定芽转接到壮根培养基中，控制温度为23-25℃、光照强度为1500-2000 Lx培养条件下生长15-20天诱导生根，然后打开培养瓶炼苗7-10天后移栽入大田。
所述步骤2）中诱导培养基配方为：MS＋2，4-D 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖40g/L+氯化2-羟乙基三甲铵 0.3g/L+水解蛋白0.4g/L+活性炭1.5g/L+琼脂6.5g/L，pH 5.8-6.0。
所述步骤4）中的慢生长增殖培养基A的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO31600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 430～450mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 8～9mg/L，H3BO3 0.1～0.2mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA 0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH5.8-6.0；
所述的慢生长增殖培养基B的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 20～30mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 0.1～0.2mg/L，H3BO3 5～6mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.04～0.06mg/L，Na2MoO4·2H2O0.15～0.2mg/L，CoCl2·6H2O 0.15～0.2mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA 0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH 5.8-6.0。
所述步骤4）中的低温、弱光条件为：培养温度控制为6-8℃，光照强度控制为500-600lx，光周期控制为光12h/暗12h。
所述步骤4）中的继代次数不超过5次。
所述步骤5）中的活化培养基的配方为：MS+2mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+35g/L蔗糖+0.8g/L水解蛋白+5.5g/L植物凝胶，pH 5.8-6.0。
所述步骤6）中的壮根培养基的配方为：1/2MS+多效唑0.1mg/L+蔗糖15g/L，pH为5.8。
本发明相比现有技术有如下优点：
（1）本发明首次建立了吉祥草试管苗种质保存方法，该保存方法操作简便，稳定可靠，极大节省了人力、物力和空间，为吉祥草的产业推广提供了有力保障；
（2）本发明通过对吉祥草试管苗生长的有效调控，极大延长了吉祥草种质的保存时间，使得吉祥草试管苗种质保存期拉长到近5年，保存期结束后移栽，不仅成活率高，而且可以有效地保持吉祥草种质优良性状，较常规分株繁殖生产的吉祥草具有更高的园林观赏价值和中草药药用价值。
附图说明
附图1为采用本发明技术路线，对选材吉祥草种质进行低温预处理的照片；
附图2为采用本发明技术路线，吉祥草外植体成功诱导出不定芽时的照片；
附图3为采用本发明技术路线，吉祥草不定芽转接时的照片；
附图4为采用本发明技术路线，吉祥草慢生长增殖保存种质第55个月时的照片；
附图5为采用本发明技术路线，吉祥草大田移栽后生长3个月时的照片。
具体实施方式
一种吉祥草试管苗种质保存方法，其特征在于，该种质保存方法的技术环节和详细步骤如下：
1）吉祥草预处理：
将生长健壮、无病虫害的吉祥草植株取材后进行根部清洗，然后将根部浸入装有0.01g/L的多氯苯甲酸溶液中，5-6℃低温黑暗预处理3-4天；
2）外植体取材、消毒与接种
将吉祥草植株超纯水洗净后转入超净工作台进行无菌操作，剥去叶片，露出吉祥草嫩茎，将嫩茎先用浓度为75%酒精浸泡30s，然后投入加入了数滴吐温80的0.1%升汞溶液中，表面消毒12-15m后用灭菌水冲洗3-5次，滤纸吸干，将嫩茎用灭菌解剖刀分割成0.6-0.9cm的小茎段，然后将小茎段正向接种于装有诱导培养基（诱导培养基配方为：MS＋2，4-D1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖40g/L+氯化2-羟乙基三甲铵 0.3g/L+水解蛋白0.4g/L+活性炭1.5g/L+琼脂6.5g/L，pH 5.8-6.0）的三角瓶中；
3）不定芽诱导
培养室温度控制为25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，27-33天诱导出不定芽；
4）慢生长增殖保存种质：
将不定芽接种至慢生长增殖培养基A（慢生长增殖培养基A的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 430～450mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 8～9mg/L，H3BO3 0.1～0.2mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH 5.8-6.0）或慢生长增殖培养基B（慢生长增殖培养基B的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 20～30mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 0.1～0.2mg/L，H3BO3 5～6mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.04～0.06mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.15～0.2mg/L，CoCl2·6H2O 0.15～0.2mg/L，肌醇90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA 0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH 5.8-6.0）中，然后将三角瓶转移到温度控制为6-8℃、光照强度控制为500-600lx、光周期控制为光12h/暗12h的低温、弱光条件下缓慢生长，12个月继代接种一次，继代次数不超过5次，慢生长增殖培养基A和慢生长增殖培养基B继代接种交替使用，然后继续进行慢生长增殖步骤；
5）活化
当吉祥草种质保存期结束，需要将吉祥草不定芽恢复活性，将慢生长增殖的不定芽转接入活化培养基（活化培养基的配方为：MS+2mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+35g/L蔗糖+0.8g/L水解蛋白+5.5g/L植物凝胶，pH 5.8-6.0），然后转移到温度控制25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，获得健壮的吉祥草不定芽；
6）不定芽壮根后移栽：
将吉祥草不定芽转接到壮根培养基（壮根培养基的配方为：1/2MS+多效唑0.1mg/L+蔗糖15g/L，pH为5.8）中，控制温度为23-25℃、光照强度为1500-2000 Lx培养条件下生长15-20天诱导生根，然后打开培养瓶炼苗7-10天后移栽入大田。
实施例
2011年6月上旬，选择本公司培育的优良吉祥草种质按照本发明的技术路线进行试管苗种质保存，试管苗种质保存于连云港市振兴花卉园组培试验室内，其详细步骤如下：
1）吉祥草预处理：
6月上旬，在东辛农场园艺培植园内选择生长健壮、无病虫害的吉祥草植株取材后进行根部清洗，取回后将吉祥草植株根部浸入装有0.01g/L的多氯苯甲酸溶液中，然后置于振兴花卉园组培试验室的低温培养箱内，5℃低温黑暗预处理4天，如说明书附图1所示；
2）外植体取材、消毒与接种
将吉祥草植株超纯水洗净后转入超净工作台进行无菌操作，剥去叶片，露出吉祥草嫩茎，将嫩茎先用浓度为75%酒精浸泡30s，然后投入加入了数滴吐温80的0.1%升汞溶液中，表面消毒13m后用灭菌水冲洗4次，滤纸吸干，将嫩茎用灭菌解剖刀分割成0.6-0.9cm的小茎段，然后将小茎段正向接种于装有诱导培养基（诱导培养基配方为：MS＋2，4-D 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖40g/L+氯化2-羟乙基三甲铵 0.3g/L+水解蛋白0.4g/L+活性炭1.5g/L+琼脂6.5g/L，pH 5.9）的三角瓶中；
3）不定芽诱导
培养室温度控制为24-26℃，光照强度控制为1200Lx，光周期控制为光12h/暗12h，30天左右可以观察到吉祥草茎段普遍诱导出不定芽，如说明书附图2所示；
4）慢生长增殖保存种质：
将不定芽接种至慢生长增殖培养基A（慢生长增殖培养基A的配方为：KNO32400mg/L，NH4NO3 1700mg/L，KH2PO4 170mg/L，CaCl2∙2H2O 440mg/L，MgSO4∙7H2O 370mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙4H2O 22.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5mg/L，H3BO30.15mg/L，KI 0.7mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，白喉霉素 0.7mg/L，维生素B10.4mg/L，维生素B6 0.5mg/L，蔗糖 25g/L，甘露醇30g/L，植物凝胶 5.5g/L，NAA 0.2mg/L，2，4-D 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 25g/L，水解蛋白 1.0g/L，pH 5.9）或慢生长增殖培养基B（慢生长增殖培养基B的配方为：KNO3 2400mg/L，NH4NO3 1700mg/L，KH2PO4 170mg/L，CaCl2∙2H2O 25mg/L，MgSO4∙7H2O 370mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙4H2O 22.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 0.15mg/L，H3BO3 5.5mg/L，KI 0.7mg/L，CuSO4·5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.175mg/L，CoCl2·6H2O 0.175mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2mg/L，白喉霉素 0.7mg/L，维生素B1 0.4mg/L，维生素B6 0.5mg/L，蔗糖 25g/L，甘露醇30g/L，植物凝胶 5.5g/L，NAA 0.2mg/L，2，4-D 1mg/L，调环酸钙1mg/L，山梨醇 25g/L，水解蛋白 1g/L，pH5.9）中，吉祥草不定芽转接时的操作如说明书附图3所示，然后将三角瓶转移到温度控制为7℃、光照强度控制为550lx、光周期控制为光12h/暗12h的低温、弱光条件下缓慢生长，12个月继代接种一次，慢生长增殖培养基A和慢生长增殖培养基B继代接种交替使用，然后继续进行慢生长增殖步骤，继代次数以不超过5次为宜，吉祥草慢生长增殖保存种质第55个月时的状态如说明书附图4，可以观察到吉祥草不定芽状态仍然保存良好；
5）活化
当吉祥草种质保存期结束，需要将吉祥草不定芽恢复活性，将慢生长增殖的不定芽转接入活化培养基（活化培养基的配方为：MS+2mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+35g/L蔗糖+0.8g/L水解蛋白+5.5g/L植物凝胶，pH 5.8-6.0），然后转移到温度控制25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，获得健壮的吉祥草不定芽；
6）不定芽壮根后移栽：
将吉祥草不定芽转接到壮根培养基（壮根培养基的配方为：1/2MS+多效唑0.1mg/L+蔗糖15g/L，pH为5.8）中，控制温度为23-25℃、光照强度为1500-2000 Lx培养条件下生长15-20天诱导生根，然后打开培养瓶炼苗7-10天后移栽入东辛农场园艺培植园的大田内，统计移栽成活率，达到95%以上，吉祥草大田移栽生长3个月后，长势茂盛，郁郁葱葱，农艺性状非常优良，吉祥草大田移栽后生长3个月时的状态如说明书附图5所示。
本发明首次建立了吉祥草试管苗种质保存方法，该保存方法操作简便，稳定可靠，极大节省了人力、物力和空间，为吉祥草的产业推广提供了有力保障。
本发明通过对吉祥草试管苗生长的有效调控，极大延长了吉祥草种质的保存时间，使得吉祥草试管苗种质保存期拉长到近5年，保存期结束后移栽，不仅成活率高，而且可以有效地保持吉祥草种质优良性状，较常规分株繁殖生产的吉祥草具有更高的园林观赏价值和中草药药用价值。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (2)

1.一种吉祥草试管苗种质保存方法，其特征在于，该种质保存方法包括以下技术步骤：
1）吉祥草预处理：
将生长健壮、无病虫害的吉祥草植株取材后进行根部清洗，然后将根部浸入装有0.01g/L的多氯苯甲酸溶液中，5-6℃低温黑暗预处理3-4天；
2）外植体取材、消毒与接种：
将吉祥草植株超纯水洗净后转入超净工作台进行无菌操作，剥去叶片，露出吉祥草嫩茎，将嫩茎先用浓度为75%酒精浸泡30s，然后投入加入了数滴吐温80的0.1%升汞溶液中，表面消毒12-15m后用灭菌水冲洗3-5次，滤纸吸干，将嫩茎用灭菌解剖刀分割成0.6-0.9cm的小茎段，然后将小茎段正向接种于装有诱导培养基的三角瓶中；
3）不定芽诱导：
培养室温度控制为25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，27-33天诱导出不定芽；
4）慢生长增殖保存种质：
将不定芽接种至慢生长增殖培养基A或慢生长增殖培养基B中，然后将三角瓶转移到低温、弱光条件下缓慢生长，12个月继代接种一次，慢生长增殖培养基A和慢生长增殖培养基B继代接种交替使用，然后继续进行慢生长增殖步骤；
5）活化：
当吉祥草种质保存期结束，需要将吉祥草不定芽恢复活性，将慢生长增殖的不定芽转接入活化培养基，然后转移到温度控制25±1℃，光照强度控制为1000-1300Lx，光周期控制为光12h/暗12h，获得健壮的吉祥草不定芽；
6）不定芽壮根后移栽：
将吉祥草不定芽转接到壮根培养基中，控制温度为23-25℃、光照强度为1500-2000 Lx培养条件下生长15-20天诱导生根，然后打开培养瓶炼苗7-10天后移栽入大田；
所述步骤2）中诱导培养基配方为：MS＋2，4-D 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖40g/L+氯化2-羟乙基三甲铵 0.3g/L+水解蛋白0.4g/L+活性炭1.5g/L+琼脂6.5g/L，pH 5.8-6.0；
所述步骤4）中的慢生长增殖培养基A的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 430～450mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 8～9mg/L，H3BO3 0.1～0.2mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA 0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH 5.8-6.0；
所述的慢生长增殖培养基B的配方为：KNO3 2200～2600mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，CaCl2∙2H2O 20～30mg/L，MgSO4∙7H2O 360～380mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙4H2O 21～24mg/L，ZnSO4∙7H2O 0.1～0.2mg/L，H3BO35～6mg/L，KI 0.6～0.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.04～0.06mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.15～0.2mg/L，CoCl2·6H2O 0.15～0.2mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，白喉霉素 0.6～0.8mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，蔗糖 23～27g/L，甘露醇27～33g/L，植物凝胶 5.2～5.8g/L，NAA 0.15～0.25mg/L，2，4-D 0.8～1.2mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 23～27g/L，水解蛋白 0.9～1.1g/L，pH 5.8-6.0；
所述步骤4）中的低温、弱光条件为：培养温度控制为6-8℃，光照强度控制为500-600lx，光周期控制为光12h/暗12h；
所述步骤5）中的活化培养基的配方为：MS+2mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+35g/L蔗糖+0.8g/L水解蛋白+5.5g/L植物凝胶，pH 5.8-6.0；
所述步骤6）中的壮根培养基的配方为：1/2MS+多效唑0.1mg/L+蔗糖15g/L，pH为5.8。
2.根据权利要求1所述的吉祥草试管苗种质保存方法，其特征在于：所述步骤4）中的继代次数不超过5次。
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