CN110178728B - 一种中江丹参组培快繁的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中江丹参组培快繁的方法，步骤如下：S1，材料处理：选取生长健康均匀的“川丹参1号”根，经过消毒灭菌后得到无菌材料；S2，将材料接种于初代培养基上培养约5d，确认无任何真菌及细菌污染后转接到芽诱导培养基中；S3，根段转移至芽诱导培养基中培养约25d，直至丛芽生成；S4,将步骤S3中得到的丛生芽切分成单株的无根组培苗，转入壮苗培养基中，培养约14d；S5,经扶壮的组培苗接入生根培养基中，诱导生根S6,生根后的组培苗进行炼苗移栽。该中江丹参组培快繁的方法采用根为外植体，完全避免了丹参植物组织培养中常见的褐化问题，且各阶段培养基中均未添加蔗糖，可促使组培苗在培养阶段进行光合作用自养，有效增加了苗的生长能力。

Description

一种中江丹参组培快繁的方法

技术领域

本发明涉及药用植物组织培养育苗技术领域，具体为一种中江丹参组培快繁的方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia L.)多年生草本植物，以干燥根及根茎入药，为我国常用大宗中药材，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效，主要用于治疗冠心病、心绞痛、中风等多种心脑血管疾病以及慢性肝炎、早期肝硬化、脉管炎、糖尿病并发症等，是世界公认的心脑血管疾病治疗的首选用药，作为丹参的道地产区和主产区，四川省所产丹参在市场流通中被冠以“川丹参”之名，在各产区丹参中，川丹参尤其是产自四川省中江县的丹参(又名“中江丹参”)，以其根粗结实、色朱味浓、产量大、品质优而驰名中外，因此中江丹参种苗需求量逐年增大，但是现有的种植丹参中有繁殖品质退化、需种量大、病虫害多的问题。

发明内容

本发明的目的就是提供一种中江丹参组培快繁的方法，用以解决现有技术中繁殖品质退化、需种量大、病虫害多的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种中江丹参组培快繁的方法，步骤如下：

S1，材料处理：选取生长健康均匀的川丹根，经过消毒灭菌后得到无菌材料；

S2，将材料接种于初代培养基上培养约5d，确认无任何真菌及细菌污染后转接到芽诱导培养基中；

S3，根段转移至芽诱导培养基中培养约25d，直至丛芽生成；

S4,将步骤S3中得到的丛生芽切分成单株的无根组培苗，转入壮苗培养基中，培养约14d；

S5,经扶壮的组培苗接入生根培养基中，诱导生根；

S6,生根后的组培苗进行炼苗移栽。

优选的，所述步骤S1中根的清洁处理方法为使用500mg/L多菌灵溶液于摇床中浸摇40min，在超净工作台上消毒灭菌使用0.1％升汞(加入Tween802滴)浸泡时间为8min。

优选的，所述步骤S2中的初代培养基配比为1/2MS+7.5g/L琼脂+0.5g/L多菌灵+1.0g/L PVPP。

优选的，所述步骤S3中芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BA(6-苄氨基嘌呤)+0.05mg/L NAA(萘乙酸)+7g/L琼脂。

优选的，所述步骤S4中壮苗培养基为MS+0.5g/L酸水解酪蛋白+7g/L琼脂。

优选的，所述步骤S5中生根培养基为MS+0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)+0.1mg/LNAA(萘乙酸)+1.0g/L活性炭+7g/L琼脂。

优选的，所述步骤S6中炼苗移栽到蛭石：营养＝1：1经高温灭菌的基质中进行培养。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明实施例提供了一种中江丹参组培快繁的方法，采用根为外植体，避免了以往丹参组培中存在的褐化及玻璃化问题；

2、本发明选择的初代培养培养基可有效减少了一般在组培中以根为外植体容易出现污染的问题，1/2MS+7.5g/L琼脂+0.5g/L多菌灵+1.0g/L PVPP培养基对丹参进行为期约5d的初培养，可将污染率降低至3％；

3.产率高，单个外植体在芽诱导培养基上培养25d可生成约7个芽；

4.整个培养过程各阶段培养基中未添加蔗糖，无糖培养可促使丹参组培苗在培养阶段就能通过进行光合作用进行自养，生长状态更好，炼苗移栽存活率更高。

附图说明

图1为本发明结构框图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种中江丹参组培快繁的方法，步骤如下：

S1，材料处理：选取生长健康均匀的川丹根，经过消毒灭菌后得到无菌材料；

S2，将材料接种于初代培养基上培养约5d，确认无任何真菌及细菌污染后转接到芽诱导培养基中；

S3，根段转移至芽诱导培养基中培养约25d，直至丛芽生成；

S4,将步骤S3中得到的丛生芽切分成单株的无根组培苗，转入壮苗培养基中，培养约14d；

S5,经扶壮的组培苗接入生根培养基中，诱导生根；

S6,生根后的组培苗进行炼苗移栽。

进一步的，所述步骤S1中根的清洁处理方法为使用500mg/L多菌灵溶液于摇床中浸摇40min，在超净工作台上消毒灭菌使用0.1％升汞(加入Tween80 2滴)浸泡时间为8min。

进一步的，所述步骤S2中的初代培养基配比为1/2MS+7.5g/L琼脂+0.5g/L多菌灵+1.0g/L PVPP。

进一步的，所述步骤S3中芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BA(6-苄氨基嘌呤)+0.05mg/L NAA(萘乙酸)+7g/L琼脂。

进一步的，所述步骤S4中壮苗培养基为MS+0.5g/L酸水解酪蛋白+7g/L琼脂。

进一步的，所述步骤S5中生根培养基为MS+0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)+0.1mg/L NAA(萘乙酸)+1.0g/L活性炭+7g/L琼脂。

进一步的，所述步骤S6中炼苗移栽到蛭石：营养＝1：1经高温灭菌的基质中进行培养。

具体的，选取生长健康均匀“川丹参1号”的根，加入洗洁精用软刷仔细刷洗，除去土渍、须根，后加入配制500mg/L多菌灵溶液于摇床中浸摇40min，清洗后进行消毒灭菌处理，先将清洗过的根在无菌操作工作台内使用体积浓度为75％乙醇浸泡处理10s，浸泡结束后，无菌水冲洗2～3次，然后再用质量浓度0.1％升汞(加入Tween80 2滴)浸摇8min，最后用无菌水冲洗5～7次，得到无菌材料，经灭菌的外植体，将材料切分为2-3cm长的根段接种于培养初代培养基上，(25±2)℃下暗培养约5d，确认无任何真菌及细菌污染后转接到芽诱导培养基中，确定无污染后的根段转移至芽诱导培养基上，前期暗培养，培养至有可见外植体上丛芽形成转移光照培养，光照强度为3000lx，光照时间增为14/10h(光照/黑暗)培养温度(25±2)℃，培养约25d，直至丛芽茎叶分明生成，将丛生芽切成单芽，转入壮苗培养基中，30d天壮苗培养，期间，光照时间增为14h/10h(光照/黑暗)，光照强度3000lx，培养温度为25℃。在壮苗后，经过扶壮的丹参苗转入诱导生根培养基中，生根率100％，生根得到中江丹参组培再生苗，生根后的丹参组培苗进行炼苗移栽。在培养室内揭开组培瓶瓶盖继续培养，一周后，取出丹参组培苗，除去根部培养基移栽至以蛭石：营养＝1：1(经高温灭菌)的基质中培养。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种中江丹参组培快繁的方法，其特征在于：步骤如下：

S1，材料处理：选取生长健康均匀的“川丹参1号”根，经过消毒灭菌后得到无菌材料；

所述步骤S1中根的清洁处理方法为使用500mg/L多菌灵溶液于摇床中浸摇40min，在超净工作台上消毒灭菌使用加入Tween80 2滴的 0.1％升汞浸泡时间为8min ；

S2，将材料接种于初代培养基上培养约5d，确认无任何真菌及细菌污染后转接到芽诱导培养基中；

所述步骤S2中的初代培养基配比为1/2MS+7.5g/L琼脂+0.5g/L多菌灵+1.0g/L PVPP ；

S3，根段转移至芽诱导培养基中培养约25d，直至丛芽生成；

S4， 将步骤S3中得到的丛生芽切分成单株的无根组培苗，转入壮苗培养基中，培养约14d；

S5， 经扶壮的组培苗接入生根培养基中，诱导生根；

S6， 生根后的组培苗进行炼苗移栽。

2.根据权利要求1所述的中江丹参组培快繁的方法，其特征在于：所述步骤S3中芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BA(6-苄氨基嘌呤)+0.05mg/L NAA(萘乙酸)+7g/L琼脂。

3.根据权利要求1所述的中江丹参组培快繁的方法，其特征在于：所述步骤S4中壮苗培养基为MS+0.5g/L酸水解酪蛋白+7g/L琼脂。

4.根据权利要求1所述的中江丹参组培快繁的方法，其特征在于：所述步骤S5中生根培养基为MS+0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)+0.1mg/L NAA(萘乙酸)+1.0g/L活性炭+7g/L琼脂。

5.根据权利要求1所述的中江丹参组培快繁的方法，其特征在于：所述步骤S6中炼苗移栽到蛭石：营养＝1：1经高温灭菌的基质中进行培养。

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