CN103168686B - 一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

一种小花蜘蛛抱蛋的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；（3）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（4）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；（5）取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙土壤生长一个半月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量小花蜘蛛抱蛋的优质种苗，有效解决了蜘蛛抱蛋的规模化育苗问题。

Description

一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法。 
背景技术
小花蜘蛛抱蛋,为百合科植物小花蜘蛛抱蛋（Aspidistra minutiflora Stapf in Journ.Linn.）。多年生常绿草本，根状茎直径约6毫米，具密节和鳞片。分布于我国亚热带地区广西、广东和贵州三省，以广西分布最多。生于路旁或山腰之花岗岩或石灰岩上。辛、苦，寒。肺、肝二经。有清热止咳，续伤接骨的功效。可用于痰热咳嗽，用于跌扑闪挫，金疮，损伤溺骨等证。 
小花蜘蛛抱蛋花色褐紫色或淡绿色，具有较高的园林观赏和一定的药用价值，近年来其资源遭到了严重破坏，且对生长环境要求十分苛刻，一般仅正常出现在保存较好的原生林内，对群落植物、光线、湿度、土壤和地被层均有不同程度的特殊要求。随着市场需求量的不断增加，野生小花蜘蛛抱蛋资源濒临枯竭了，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量，实现小花蜘蛛抱蛋优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。 
发明内容
本发明的目的是提供一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良小花蜘蛛抱蛋种苗。 
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 
（1）外植体的选择与消毒：取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， 
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下 培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20-28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为70%。 
本发明的突出优点在于： 
（1）本发明通过生物技术对小花蜘蛛抱蛋进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的小花蜘蛛抱蛋幼苗，显著提高了小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。 
（2）在MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA和0.1-0.4mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化；添加浓度为0.5-1.5mg/L的生长激素萘乙酸NAA可促进丛生芽的生长； 
在MS壮苗培养基中添加浓度为1.5mg/L的6-BA和0.2-0.6mg/L的吲哚乙酸IAA可促进丛生芽叶片的展开； 
在MS生根培养基上组合使用浓度为2.0mg/L的吲哚丁酸IBA和1.0mg/L的生长素IAA，可获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后可直接移栽沙床。 
（3）采用本发明所述的培养方法，得到的单芽增殖系数达到5-8倍，获得的组培苗生根率在95%以上，每株平均带3-4个根，根长为3-5厘米，移栽沙床成活率在98%以上；快速、便捷、高效地进行小花蜘蛛抱蛋组织培养，实现小花蜘蛛抱蛋组培种苗的规模化生产。 
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。 
一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 
（1）外植体的选择与消毒：取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， 
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加不同浓度的KT、6-BA和IAA，详见表1，30g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，数据分析发现，KT和IAA对小花蜘蛛抱蛋丛生芽增殖倍率具有显著影响，根据生长率指标确定的最适培养基激素浓度为0.2mg/L的KT2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA。 
表1不同激素对小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖效果的影响 
芽增殖倍率 
注：芽增殖倍数=（30天后芽数－接种时芽数）/接种时芽数 
（4）丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为12-14小时/天；其 中MS壮苗培养基中分别含0.5mg/L和1.5mg/L的6-BA和不同浓度的IAA，详见表2、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。观察发现，壮苗培养基中IAA浓度增加，小花蜘蛛抱蛋植株的高度增加长势趋好，培养基中添加1.5mg/L的6-BA和0.6mg/L的IAA壮苗效果最好，而且经过壮苗后得到的植株叶片舒展，适合进行生根培养； 
表2不同激素水平对小花蜘蛛抱蛋丛生芽壮苗效果的影响 
（5）试管苗生根培养：将步骤（4）中得到的丛生芽置于MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为12-14小时/天；其中MS生根培养基中分别含1.0mg/L、2.0mg/L的IBA和不同浓度的IAA，详见表3、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；观察发现，培养基中IAA浓度增加，组培苗的生根率也增加；培养基中添加2.0mg/L的IBA和1.0mg/L的IAA生根效果最好，生根率达95.4%，平均根长达到4.45cm； 
表3不同激素水平对小花蜘蛛抱蛋组培苗生根效果的影响 
（6）炼苗与移栽：获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次8-10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时温度条件为18-28°C，相对湿度75-80%，遮阳率70%。 

Claims (1)

1.一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤： 
（1）外植体的选择与消毒：取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， 
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 
（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。 
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