CN105191808B - 蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，包括以下步骤：步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗。本发明采用四种特制的培养基进行组织培养，有效提高了蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量，实现了优质蜘蛛抱蛋种苗的工厂化育苗。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养和繁殖技术领域，具体涉及一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法。
背景技术
蜘蛛抱蛋(AspidistraelatiorBlume)为百合科蜘蛛抱蛋属的多年生草本植物，别名飞天蜈蚣、一叶兰、大叶万年青、铁梗万年青、竹节伸筋、苞米兰、斩龙剑等，是我国传统的中草药。主治肾虚腰痛、胃肠溃疡、和胃安神、退热利尿、头痛失眠、活血散瘀、祛风止痛、续伤接骨、补虚止咳等。蜘蛛抱蛋分布区域狭窄，种群稀少，人为大量采挖，资源锐减。
蜘蛛抱蛋结实率低，人工栽培主要靠分株繁殖，繁殖系数较为低，其种子在自然条件下无法发芽，织培养相关的报道较少。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量，实现优质蜘蛛抱蛋种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其采用四种特制的培养基进行组织培养，有效提高了蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量，实现优质蜘蛛抱蛋种苗的工厂化育苗。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：MS、1.2-1.7mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.3mg/L的萘乙酸、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝2号培养基、0.5-2.0mg/L的甲硫达嗪、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、1.0-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基包括：MS、0.4-0.6mg/L的萘乙酸、1.8-2.2mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、0.5-1.0mg/L的萘乙酸、8-12g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：
步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡3-7min，取出后用线状自来水冲洗15-30min；
步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8-10min，取出后用无菌水冲洗3-5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，在所述步骤四之后，还包括：
步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，
在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5-6.0。
优选的是，所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：
将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。
本发明至少包括以下有益效果：
(1)本发明采用四种针对性强的第一培养基、第二培养基、第三培养基和第四培养基进行组织培养，在短时间内可以培养出大量可供大秒栽培的蜘蛛抱蛋幼苗，显著提高了蜘蛛抱蛋种苗的繁殖系数和种苗质量，可以实现了规模化生产，以满足生产上的需要。
(2)本发明首先用第一培养基进行外植体初代诱导获得无菌试管苗，然后用第二培养基进行无菌试管苗丛生芽快速繁殖培养分化出大量丛生芽获得试管丛生芽，随后用第三培养基进行丛生芽壮苗培养获得健壮的植株，最后用第四培养基进行生根培养获得完整带根苗，四种培养基环环相扣，配合紧密，极大提高了蜘蛛抱蛋成苗率。
(3)本发明的步骤七中将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。这样依次降低压力而依次升高温度，能够良性刺激外植体进行新陈代谢，诱导外植体分化、生根和成苗，极大提高了蜘蛛抱蛋的繁殖系数和成苗率。压力不宜超过8MPa，温度不易低于-5℃，超过8MPa和低于-5℃易对外植体造成不良的影响。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实例1
(1)外植体的选择与消毒：取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15min、添加了2滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8min、无菌水冲洗3次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于MS培养基中，在培养温度为23℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于花宝2号繁殖培养基中，在培养温度23℃、光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养40天得到试管苗丛生芽，其中花宝2号繁殖培养基中添加了0.5mg/L的甲硫达嗪TDZ、0.5mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为21.6。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度23℃、光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(6)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加30ml自来水，炼苗4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到灭过菌的椰糠基质中。
实例2
(1)外植体的选择与消毒：取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗30min、添加了3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒10min、无菌水冲洗5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于MS培养基中，在培养温度为27℃，光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于花宝2号繁殖培养基中，在培养温度27℃、光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养40天得到试管苗丛生芽，其中花宝2号繁殖培养基中添加了0.5mg/L的甲硫达嗪TDZ、0.5mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为21.6。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度27℃、光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.0mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(6)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加30ml自来水，炼苗7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到灭过菌的椰糠基质中。
实例3
(1)外植体的选择与消毒：取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗20min、添加了3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒9min、无菌水冲洗4次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于MS培养基中，在培养温度为25℃，光照强度1500lux，光照时间为9小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于花宝2号繁殖培养基中，在培养温度25℃、光照强度1500lux，光照时间为9小时/天的条件下培养40天得到试管苗丛生芽，其中花宝2号繁殖培养基中添加了0.5mg/L的甲硫达嗪TDZ、0.5mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为21.6。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度25℃、光照强度1500lux，光照时间为9小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加0.8mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(6)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加30ml自来水，炼苗5天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到灭过菌的椰糠基质中。
实例4
一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：MS、1.2mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸、25g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂；
步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝2号培养基、0.5mg/L的甲硫达嗪、0.1mg/L的萘乙酸、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、25g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基包括：MS、0.4mg/L的萘乙酸、1.8mg/L的6-苄基腺嘌呤、25g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂；
步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、0.5mg/L的萘乙酸、8g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂。
在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：
步骤a、将外植体置入体积分数为1.5％的洗洁精水溶液中浸泡3min，取出后用线状自来水冲洗15min；
步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8min，取出后用无菌水冲洗3次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。
在所述步骤四之后，还包括：
步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中。
在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为23℃，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天；
在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为23℃，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天；
在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为23℃，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天；
在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为23℃，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天。
在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25天、35天、25天和25天。
所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5。
在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：
将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。
实例5
一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：MS、1.7mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.3mg/L的萘乙酸、35g/L蔗糖和5.5g/L的琼脂；
步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝2号培养基、2.0mg/L的甲硫达嗪、0.5mg/L的萘乙酸、3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、35g/L蔗糖和5.5g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基包括：MS、0.6mg/L的萘乙酸、2.2mg/L的6-苄基腺嘌呤、35g/L蔗糖和5.5g/L的琼脂；
步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、1.0mg/L的萘乙酸、12g/L蔗糖和5.5g/L的琼脂。
在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：
步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡7min，取出后用线状自来水冲洗30min；
步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡10min，取出后用无菌水冲洗5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。
在所述步骤四之后，还包括：
步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗7天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中。
在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为27℃，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天；
在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为27℃，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天；
在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为27℃，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天；
在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为27℃，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天。
在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为35天、45天、35天和35天。
所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为6.0。
在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：
将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。
实例6
一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：MS、1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.2mg/L的萘乙酸、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂；
步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝2号培养基、1mg/L的甲硫达嗪、0.3mg/L的萘乙酸、2mg/L的6-苄基腺嘌呤、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基包括：MS、0.5mg/L的萘乙酸、2mg/L的6-苄基腺嘌呤、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂；
步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、0.8mg/L的萘乙酸、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂。
在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：
步骤a、将外植体置入体积分数为2％的洗洁精水溶液中浸泡5min，取出后用线状自来水冲洗20min；
步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡9min，取出后用无菌水冲洗4次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。
在所述步骤四之后，还包括：
步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗5天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中。
在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为25℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天；
在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为25℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天；
在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为25℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天；
在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为25℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天。
在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为30天、40天、30天和30天。
所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.8。
在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：
将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。
为了说明本发明的效果，发明人提供比较实验如下：
<比较例1>
在对外植体进行消毒处理之前，不将外植体用海绵包裹，然后进行变温变压处理，其余参数与实例6中的完全相同，工艺过程也完全相同。
<比较例2>
在配制第二培养基时，控制甲硫达嗪的含量为0.1mg/L。其余参数与实例6中的完全相同，工艺过程也完全相同。
实验：
按照实例1、实例2、实例3、实例4、实例5、实例6、比较例1和比较例2中的方案分别对蜘蛛抱蛋进行组织培养，统计丛生芽增殖系数。然后，将一块大田分为8块区域，将实例1、实例2、实例3、实例4、实例5、实例6、比较例1和比较例2的椰糠基质中的完整带根苗分别移栽到8块区域中，并统计成苗率。结果如表1所示。
表1丛生芽增殖系数和成苗率
| 丛生芽增殖系数 | 成苗率(％) | |
| 实例1 | 21.6 | 87％ |
| 实例2 | 23.2 | 85％ |
| 实例3 | 27.1 | 85％ |
| 实例4 | 38.1 | 95％ |
| 实例5 | 37.5 | 96％ |
| 实例6 | 39.0 | 98％ |
| 比较例1 | 28.0 | 83％ |
| 比较例2 | 25.3 | 86％ |
从上表1能够看出，按照实例1、实例2、实例3、实例4、实例5、实例6、比较例1和比较例2中的技术方案进行组织培养，其丛生芽增殖系数和成苗率均有较大的提高。而且，实例6中由于对外植体进行变温变压处理，其丛生芽增殖系数和成苗率均高于比较例1，实例6在配制第二培养基时，由于控制甲硫达嗪的含量为1mg/L，其丛生芽增殖系数和成苗率均高于比较例2。因此，进行变温变压处理与第二培养基中合适的甲硫达嗪的含量均能明显提高丛生芽增殖系数和成苗率。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。
Claims (4)
1.一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基为：MS、1.2-1.7mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.3mg/L的萘乙酸、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基为：花宝2号培养基、0.5-2.0mg/L的甲硫达嗪、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、1.0-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基为：MS、0.4-0.6mg/L的萘乙酸、1.8-2.2mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基为：1/2MS、0.5-1.0mg/L的萘乙酸、8-12g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；
在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：
步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡3-7min，取出后用线状自来水冲洗15-30min；
步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8-10min，取出后用无菌水冲洗3-5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴；
步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中；
在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：
将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。
2.如权利要求1所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，
在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；
在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天。
3.如权利要求2所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。
4.如权利要求2所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5-6.0。
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