CN104472364B - 一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法 - Google Patents
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Abstract
一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法,包括如下步骤:(1)取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶背面以#字形划伤后置于MS繁殖培养基中培养,诱导愈伤形成,并分化获得丛生芽;(2)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;(3)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗。采用本发明所述的培养方法得到的金果榄丛生芽增殖系数达到20‑30倍,获得的组培苗生根率在95%以上,移栽苗床成活率在90%以上,有效解决了金果榄的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法。
背景技术
金果榄(Tinospora capillipes Gagnep.)为防己科青牛胆属缠绕藤本植物,药用部位为其干燥块根,是《中国药典》收载中药金果榄的基源植物之一。具有清热解毒、利咽止痛的功效,主治内服用于治疗各种炎症、如咽喉肿痛、扁桃体炎、急性胃肠炎、菌痢、痈肿疔疖等;外用浸膏、磨汁涂搽或研末调搽,用以治疗静脉炎、毒蛇咬伤等症。主产于广西、江西、湖北、湖南等地,是常用中药,块根含掌叶防己碱和咖伦宾、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、千金藤碱、蝙蝠葛碱和木兰花碱。药理研究表明金果榄有明显的抗炎镇痛作用、抗菌作用、抗肿瘤、降低血糖、抗应激作用、抗溃疡作用及解毒等,被喻为能替代抗生素的首选中药而倍受青睐。
目前金果榄药材主要来源于野生资源。由于市场对药材的需求量大幅度增加,造成野生资源的过度采挖,野生资源趋于匮乏。在自然条件下,金果榄零星生长于石灰岩的石隙石缝间,地上部分则沿石缝向上攀援于岩石或林木茎干上,生长极为缓慢。同时金果榄为雌雄异株植物,自然结实率低,自然繁殖率低,种子种苗稀缺,资源更新非常困难。虽然也有科研工作者对金果榄的扦插繁殖技术进行一定程度的研究,但效果不是十分明显,无法满足人工栽培的需要。而采用生物技术组织培养技术,可以有效快速地提高金果榄种苗的繁殖速度和质量,实现金果榄优质种苗的工厂化育苗,以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法,它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良金果榄种苗、满足生产需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法,包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入0.5-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.5mg/LTDZ甲硫达嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0-4.5;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.1-1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.0-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.3mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0-4.5;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入1.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2-0.8mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。
本发明的突出优点在于:
(1)采用生物技术对金果榄进行组织培养快速繁殖,通过金果榄丛生芽的繁殖,在短时间内可培育出大量适合栽培种植的金果榄幼苗,显著提高了金果榄种苗的增殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要。
(2)通过幼嫩叶片为外植体诱导分化获得大量的丛生芽,为金果榄组培苗的获得提供了新的途径,也为珍稀濒藤本植物组培苗的获取提供新途径。
(3)采用本发明所述的培养方法得到的金果榄丛生芽增殖系数达到25-35倍,丛生芽经过复壮后,接种到含有生根粉NAA、BA与香蕉泥的生根培养基上,获得的组培苗生根率在95%以上,移栽苗床成活率在95%以上;快速、便捷、高效地进行金果榄组织培养,实现金果榄组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
本发明所述的金果榄叶片成苗的快速繁育方法的一个实例,包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1mg/LTDZ甲硫达嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0,丛生芽增殖系数为26.4;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.1mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0;丛生芽再次增殖的系数为3.2;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入1.5mg/L的萘乙酸NAA、0.8mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为92.7%。
实施例2
本发明所述的金果榄叶片成苗的快速繁育方法的另一个实例,包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.25mg/L的吲哚丁酸IBA、0.5mg/LTDZ甲硫达嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.2,丛生芽增殖系数为28.6;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.2;丛生芽再次增殖的系数为4.1;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入2.5mg/L的萘乙酸NAA、0.4mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为96.2%。
实施例3
本发明所述的金果榄叶片成苗的快速繁育方法的再一个实例,包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.25mg/LTDZ甲硫达嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.3,丛生芽增殖系数为32.8;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.3;丛生芽再次增殖的系数为4.7;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为95.3%。
实施例4
本发明所述的金果榄叶片成苗的快速繁育方法的又一个实例,包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚丁酸IBA、0.25mg/LTDZ甲硫达嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.5,丛生芽增殖系数为30.5;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.55mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.5;丛生芽再次增殖的系数为4.0;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为92.3%。
Claims (1)
1.一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)叶片分化繁殖获得丛生芽:取金果榄无菌试管苗的幼嫩叶片,用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上,在培养温度23-27℃,光照强度1000lux,光照时间为6-8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入0.5-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.5mg/L噻二唑苯基TDZ、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0-4.5;
(2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.1-1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.0-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.3mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为4.0-4.5;
(3)健壮植株生根培养:将步骤(2)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中加入1.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2-0.8mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。
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