CN103222427A - 一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法 - Google Patents

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高素萍
雷霆
周永红
邓敏
曾洲德
张硕
吴佩纹
陈凯
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Abstract

本发明公开了一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法，经过处理后依次接种到泸定百合诱导分化培养基MS+NAA0.15～0.25mg/L+6-BA1.5～2.0mg/L中；继代培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L中；生根培养基1/2MS+6-BA0.10～0.50mg/L中；培养温度为(25+2)0C，光照度为1500lx，光照时间为12h.d-1；上述培养基均含蔗糖30%，琼脂0.7%，pH5.8；生根珠芽继续进行炼苗，炼苗后移栽在腐殖土：蛭石或腐殖土：树皮的土中进行培养。选用珠芽进行组织培养并对前人的激素配方进行优化，降低了污染率、提高了繁殖速度。

Description

一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法
技术领域
本发明涉及植物组培技术领域，尤其涉及的是一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法。
背景技术
泸定百合其主要优点是植株强健高大、花大喇叭型具浓香,花朵平直不垂头，耐热性极强，又耐瘠薄和耐粘，是国内百合育种者普遍看好的抗性育种材料。自然状态依靠茎杆上株芽无性繁殖，但繁殖速度较慢，且由于自然生态环境的胁迫和各种原因的人为采集，野生泸定百合的居群类型和数量正加速消失，大规模采集作亲本已不可能，只有通过人工快繁扩大基数。目前一般采取鳞片扦插或组织培养两种技术，经鳞片扦插每个种球的繁殖系数仅40～60株。而组织培养的繁殖系数较高，所以我们选择研究泸定百合的组织培养技术。王红霞等以通江百合的的珠芽作为外植体,诱导百合小鳞茎。文献主要比较了不同激素浓度对珠芽的诱导增殖效果。其中采用的诱导丛生芽激素主要有6-BA和IAA；增殖激素主要是6-BA和NAA；生根培养基主要用的是NAA。其主要缺点是诱导丛生芽所用的IAA不能直接经高温灭菌，只能采用细菌过滤器，其过程比较繁杂。而我们选择不同浓度的6-BA和NAA组合来诱导愈伤组织形成小芽，优化了此研究过程。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法。
本发明的技术方案如下：
一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法，首先从优良植株上剥下珠芽，用洗衣粉冲洗后，用75%酒精擦拭全株，再用流水冲洗1小时；置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒15min，无菌水洗5～6次；经过以上处理后依次接种到泸定百合诱导分化培养基MS+NAA0.15～0.25mg/L+6-BA1.5～2.0mg/L中；继代培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L中；生根培养基1/2MS+6-BA0.10～0.50mg/L中；培养温度为(25+2)0C，光照度为1500lx，光照时间为12h.d-1；上述培养基均含蔗糖30%，琼脂0.7%，pH5.8；生根珠芽继续进行炼苗，炼苗后移栽在腐殖土：蛭石或腐殖土：树皮的土中进行培养。
野生泸定百合属多年生球根花卉，种球长期生长在野生复杂环境下，开花植株的地下鳞茎年龄至少3～5年，有的甚至达8～10年，其鳞片表面及内部组织因环境侵蚀，组培时消毒不易，而我们选用珠芽进行组织培养并对前人的激素配方进行优化，降低了污染率、提高了繁殖速度，并对增殖与分化、炼苗与移栽系列过程进行了针对性研究，得到最优的组培方案。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
实施例1
本实施例提供一种高效诱导泸定百合试管珠芽的方法，主要以植物组织培养技术作为技术支撑，选用泸定百合的珠芽作为外植体，通过不同的激素组合配方来诱导试管珠芽（激素组合配方见表1、表2），经过优化组合最终选定了一组最优的激素组合配方。
首先从优良植株上剥下珠芽，用洗衣粉冲洗后，用75%酒精擦拭全株，再用流水冲洗1小时。置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒15min，无菌水洗5～6次，小的珠芽直接进行接种，大的珠芽需切成两半。经过以上处理后依次接种到泸定百合诱导分化培养基（MS+NAA0.15～0.25mg/L+6-BA1.5～2.0mg/L）；继代培养基（MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L）；生根培养基中（1/2MS+6-BA0.10～0.50mg/L）。培养温度为(25+2)0C，光照度为1500lx，光照时间为12h.d-1。上述培养基均含蔗糖30%，琼脂0.7%，pH5.8。生根珠芽继续进行炼苗，炼苗后移栽在腐殖土：蛭石（1:1）或腐殖土：树皮（1:1）的土中进行培养，且炼苗成活率达100%。
不同的激素组合配方和（56天后）的结果如下表：
表1诱导分化培养基
编号 培养基配方 珠芽诱导率
① MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L 89%
② MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.20mg/L 72%
③ MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.25mg/L 59%
④ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.15mg/L 69.7%
⑤ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.20mg/L 95%
⑥ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.25mg/L 64.5%
表2继代培养基
编号 培养基配方 增殖系数
⑧ MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L 4.2
⑨ MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.15mg/L 5.3
⑩ MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L 3.1
实施例2
本实施例采用传统的方法繁殖泸定百合，即用做组培的同批珠芽材料直接进行土培{腐殖土：糟糠（1:1）}，所用土经过1%多菌灵消毒一周，培养条件在常温下（成都温江气候条件），并定期浇水。2个月后其地上部分平均高度为1cm，增殖系数为0。而同期的组培苗平均高度为10cm，增殖系数达5.3。以珠芽进行快繁，产生大量增殖仅需两个月，而传统繁殖方式珠芽产生珠芽，需要至少两年时间。用珠芽进行组织培养大大缩短了其成长速度和提高了其增殖率。
表3实施例1和实施例2对比
实验材料 培养方式 同期培养时间（d） 增殖系数
当年生珠芽 组织培养 60 3.1-5.3
当年生珠芽 土培 60 0
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (1)

1.一种高效诱导泸定百合试管珠芽方法，其特征在于，首先从优良植株上剥下珠芽，用洗衣粉冲洗后，用75%酒精擦拭全株，再用流水冲洗1小时；置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒15min，无菌水洗5～6次；经过以上处理后依次接种到泸定百合诱导分化培养基MS+NAA0.15～0.25mg/L+6-BA1.5～2.0mg/L中；继代培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L中；生根培养基1/2MS+6-BA0.10～0.50mg/L中；培养温度为(25+2)0C，光照度为1500lx，光照时间为12h.d-1；上述培养基均含蔗糖30%，琼脂0.7%，pH5.8；生根珠芽继续进行炼苗，炼苗后移栽在腐殖土：蛭石或腐殖土：树皮的土中进行培养。
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