CN102138527B - 土茯苓组培苗的培养方法 - Google Patents

土茯苓组培苗的培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102138527B
CN102138527B CN 201110075078 CN201110075078A CN102138527B CN 102138527 B CN102138527 B CN 102138527B CN 201110075078 CN201110075078 CN 201110075078 CN 201110075078 A CN201110075078 A CN 201110075078A CN 102138527 B CN102138527 B CN 102138527B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
bud
days
agar
sucrose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 201110075078
Other languages
English (en)
Other versions
CN102138527A (zh
Inventor
段小群
曾建红
张华英
蒋剑刚
宋波
李云秋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUANGXI XIANGCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
GUANGXI XIANGCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUANGXI XIANGCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical GUANGXI XIANGCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN 201110075078 priority Critical patent/CN102138527B/zh
Publication of CN102138527A publication Critical patent/CN102138527A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102138527B publication Critical patent/CN102138527B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种土茯苓组培苗的培养方法，包括植物外植体的选择及无菌处理，丛生芽的诱导培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养。本发明的优点在于：选用配方合理的培养基，培养出的组培苗生根率高，稳定性好。该方法易操作，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，降低生产成本，不污染环境，可以实现批量生产。通过本发明方法生产土茯苓，产量大，成本低，周期短，极具市场竞争力。

Description

土茯苓组培苗的培养方法
技术领域
本发明涉及通过组织培养技术培养植物种苗的方法，具体是一种土茯苓组培苗的培养方法。
背景技术
土茯苓为百合科植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb.)的干燥根茎，为常绿攀援状灌木，主要分布于我国西南部、南部至东南部各省区，亚洲东南部各国也有分布。其性平味甘淡，入药选择其野生根状茎为原料，具有清热除湿，解毒，利关节、健脾胃等多种功能，可以治疗钩端螺旋体、关节酸痛、尿路感染、白带、疮疡等多种疾病。土茯苓的开发前景十分广阔，近年来由于需求量加大，人们对野生土茯苓资源的掠夺式采挖，其生态环境被严重破坏，导致野生土茯苓资源急剧下降，大力发展人工栽培，具有重要的生态和经济意义。
目前，国内外学者开展了对土茯苓的初步研究，包括化学成分，药理活性，人工种植等方面。而有关土茯苓的生物技术方法的研究较少，组织培养的研究主要集中在组织诱导、基本培养条件筛选和理化因子的考查等方面。
目前还没有找到一个切实有效地培养技术用以解决土茯苓诱导、增殖生根培养中存在的疑点和难点，从而影响了土茯苓的深入研究和应用。因此，研究土茯苓的人工培养技术，实现产业化显得十分重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种繁殖速度快的土茯苓组培苗的培养方法。
为实现上述目的本发明提供一种土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：
(1)植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒30～60秒，再用浓度为0.1％～0.2％升汞溶液消毒6～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；
(2)丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 1.0～2.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中诱导侧芽，培养期为30天；
(3)增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS+BA 2.0～4.0mg/L+NAA 0.2～0.4mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中进行继代培养，30天继代一次，连续转接3次，培养期为90天；
(4)壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS+BA0.8～1.0mg/L+KT 0.5～0.7mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中，培养期为30天；
(5)生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.5～0.9mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中，培养期为40天；
步骤(2)～(5)中所述培养基pH值为5.5～5.8，培养温度为23℃～27℃，光照时间为10～14小时/天，光照强度为100μmol/m2·S。
步骤(2)所述的丛生芽诱导培养基的优选为：MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。
步骤(3)所述的增殖培养基的优选为：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。
步骤(4)所述的壮苗培养基的优选为：MS+BA 0.8mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。
步骤(5)所述的生根培养基的优选为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。
本发明的优点在于：选用配方合理的培养基，培养出的组培苗生根率高，稳定性好。该方法易操作，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，降低生产成本，不污染环境，可以实现批量生产。通过本发明方法生产土茯苓，产量大，成本低，周期短，极具市场竞争力。
具体实施方式
通过下面给出的具体实施例可以进一步清楚地了解发明的内容，但不是对本发明的限定。
实施例1：
土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：
(1)外植体的选择及无菌处理：植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒60秒，再用0.1％升汞溶液消毒6分钟，无菌水冲洗3次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；
(2)丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中诱导侧芽，培养期为30天，接种第15天切口处变红膨大，开始形成绿色愈伤组织，25天侧芽明显伸长，生长较快，30天时丛生芽的诱导率为100％；
(3)增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中进行继代培养，培养期为90天，30天为一个继代周期，连续继代3次，初始生长较慢，增殖倍率小，第3次继代后增殖较快，增殖倍数可达到3.5倍；
(4)壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS+BA0.8mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，培养期为30天，30天后不定芽长高长粗，可见2～3cm的开叶小苗；
(5)生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，培养期为40天，15～20天有根生成，40天时能形成完整根系，生根率为85％，移栽成活率100％；
步骤(2)～(5)中所述培养基pH值为5.8，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天，光照强度为100μmol/m2·S。
实施例2：
土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：
(1)外植体的选择及无菌处理：植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒60秒，再用0.1％升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；
(2)丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 2.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中诱导侧芽，培养期为30天，接种第21天切口处开始变红膨大，开始形成绿色愈伤组织，生长较慢，30天时丛生芽的诱导率为72％；
(3)增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS+BA 4.0mg/L+NAA 0.4mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中进行继代培养，培养期为90天，30天为一个继代周期，连续继代3次，初始生长较慢，增殖倍率小，第3次继代后增殖倍数为2倍；
(4)壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS+BA1.0mg/L+KT 0.7mg/L+IBA 0.3mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，经壮苗培养30天，不定芽生长仍较缓慢，仅见1～1.5cm的开叶小苗；
(5)生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.9mg/L+IBA 0.5mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，培养期为40天，20～25天有根生成，40天时能形成完整根系，生根率为85％，移栽成活率95％；
步骤(2)～(5)中所述培养基pH值为5.5，培养温度为27℃，光照时间为14小时/天，光照强度为100μmol/m2·S。
实施例3：
土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：
(1)外植体的选择及无菌处理：植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒40秒，再用0.2％升汞溶液消毒6分钟，无菌水冲洗5次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；
(2)丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 1.5mg/L+IBA 0.25mg/L+NAA 0.25mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中诱导侧芽，培养期为30天，接种第20天切口处开始变红膨大，开始形成绿色愈伤组织，生长较慢，30天时丛生芽的诱导率为68％；
(3)增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS+BA3.0mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中进行继代培养，培养期为90天，30天为一个继代周期，连续继代3次，初始生长较慢，增殖倍率小，第3次继代后增殖倍数为2.5倍；
(4)壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS+BA0.9mg/L+KT 0.6mg/L+IBA 0.2mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，经壮苗培养30天，不定芽生长仍较缓慢，仅见少数有开叶小苗，且小苗开叶生长缓慢；
(5)生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.7mg/L+IBA 0.3mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L中，培养期为40天，20～25天有根生成，40天时能形成完整根系，生根率为85％左右，移栽成活率98％；
步骤(2)～(5)中所述培养基pH值为5.6，培养温度为27℃，光照时间为10小时/天，光照强度为100μmol/m2·S。

Claims (1)

1.一种土茯苓组培苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽, 将侧芽组织置于超净工作台中，用75%酒精消毒60秒，再用0.1%升汞溶液消毒6分钟，无菌水冲洗3次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；
（2）丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS + BA 1.0mg/L + IBA 0.1mg/L + NAA 0.1mg/L+蔗糖25 mg/L+琼脂7 mg/L中诱导侧芽，培养期为30天；
（3）增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS +BA 2.0mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖25 mg/L+琼脂7 mg/L中进行继代培养，30天继代一次，连续转接3次，培养期为90天；
（4）壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS + BA 0.8 mg/L + KT 0.5 mg/L + IBA 0.1mg/L+蔗糖25 mg/L+琼脂7 mg/L中，培养期为30天；
（5）生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.5 mg/L + IBA 0.1 mg/L+蔗糖25 mg/L+琼脂7 mg/L中，培养期为40天；
步骤（2）～(5)中 所述培养基pH值为5.8，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天，光照强度为100μmol/m2·S。
CN 201110075078 2011-03-25 2011-03-25 土茯苓组培苗的培养方法 Expired - Fee Related CN102138527B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110075078 CN102138527B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 土茯苓组培苗的培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110075078 CN102138527B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 土茯苓组培苗的培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102138527A CN102138527A (zh) 2011-08-03
CN102138527B true CN102138527B (zh) 2013-01-02

Family

ID=44406508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201110075078 Expired - Fee Related CN102138527B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 土茯苓组培苗的培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102138527B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104969775A (zh) * 2015-07-29 2015-10-14 句容美华园林景观发展有限公司 一种茯苓的栽培方法
CN107494275A (zh) * 2017-10-14 2017-12-22 陈培党 一种土茯苓组培快繁方法
CN109757376B (zh) * 2019-02-27 2022-02-15 山西农业大学 一种华肖菝葜幼苗组培快繁方法
CN112450073B (zh) * 2020-12-05 2021-05-11 广西壮族自治区农业科学院 一种土茯苓组培苗生根结根状茎的方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101366357B (zh) * 2008-09-17 2011-02-09 杭州植物园 红蓝石蒜的组织培养和快速繁殖技术的方法
CN101869074B (zh) * 2010-05-06 2012-07-18 浙江省农业科学院 一种土党参组培快繁方法
CN101822220B (zh) * 2010-05-11 2012-01-25 浙江大学 一种春兰名品茎尖组织培养快速繁殖方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN102138527A (zh) 2011-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102119655B (zh) 铁皮石斛自然光快繁育苗方法
CN103931492A (zh) 苹果砧木m9的组培快速育苗方法
CN104106468B (zh) 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法
CN103250645B (zh) 艾纳香的快速繁殖与移栽方法
CN103202229B (zh) 一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法
CN107223564B (zh) 一种前胡植株再生体系建立方法
CN104396742B (zh) 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的方法
CN102090341B (zh) 一种金线莲的快繁方法
CN104472366A (zh) 一种提高南方生态型枣树苗木耐盐性的组织培养快繁方法
US20220007606A1 (en) Method for disinfecting explants of kadsura coccinea stems with buds and method for directly inducing rapid proliferation of sterile buds by using explants of kadsura coccinea stems with buds
CN102138527B (zh) 土茯苓组培苗的培养方法
CN101953300B (zh) 温郁金1号的组织培养法
CN105850728A (zh) 一种荆半夏种茎快速繁殖方法
CN101926284B (zh) 一种川附子组织培养及快速繁殖方法
CN105265320A (zh) 一种绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法
CN105475129A (zh) 一种竹叶兰组培快繁的方法
CN100394845C (zh) 东方百合脱毒小籽球的瓶内生成方法
CN103548695B (zh) 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法
CN101637130B (zh) 海南粗榧种胚培养育苗方法
CN103609444B (zh) 常绿萱草的组织培养法
CN104813931A (zh) 一种铁皮石斛组培快繁的方法
CN103299902B (zh) 一种用于组织培养楝树幼苗的方法
CN104756863A (zh) 一种华南半蒴苣苔的离体保存方法
CN106305421B (zh) 一种培育耐盐柳枝稷的方法
CN104041419A (zh) 大薯脱毒组培苗的培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130102

Termination date: 20180325

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee