CN105283439B - 含硼的二酰基肼类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供具有式I的含硼的二酰基肼类化合物：及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R1、R2、R3、R4和R5如说明书中所提出的定义。本发明还提供含硼的二酰基肼类化合物用于蜕皮激素受体为基底的诱发基因表达系统中的用途。因此，本发明可用于以下希望控制基因表达程度的应用：诸如基因疗法、疾病的治疗、蛋白质和抗体的大规模生产、以细胞为基础的筛选试验、功能性基因组、蛋白质组(proteomic)、代谢组(metabolomic)、及转基因有机体的表征的调节。

Description

含硼的二酰基肼类化合物
【技术领域】
本发明在生物科技、基因工程、基因表达及医药化学之领域内。本发明提供新颖含硼的二酰基肼类化合物及这类化合物于以核受体为基底之诱发基因表达系统中的用途。
【先前技术】
在基因工程领域中，基因表达的精确控制为研究、操纵及控制发展及其它生理过程的重要工具。基因表达是涉及许多特异性蛋白质-蛋白质相互作用的复杂生物过程。为了触发基因表达，使得其产生蛋白质合成中的第一步骤所必要的RNA，必须使转录激活因子来到控制基因转录的启动子附近。转录激活因子本身通常与具有至少一个DNA结合结构域的蛋白质相连结，该结合结构域与存在于基因的启动子区域内的DNA结合位置结合。因此，为了发生基因表达，包含DNA结合结构域及位于与DNA结合结构域的适当距离的反式激活结构域的蛋白质必须来到基因的启动子区域内的正确位置上。
传统的转基因方法系利用细胞型特异性启动子来驱动设计的转基因的表达。将含有转基因的DNA构建体先并入宿主基因体内。当以转录激活因子触发时，则转基因的表达发生在指定的细胞类型中。
调节细胞中的外来基因表达的另一方式是经由诱导型启动子。使用这类这类诱导型启动子的实例包括PR1-a启动子、原核抑制子-操纵子(operator)系统、免疫抑制-免疫亲和素系统和较高等的真核细胞转录激活系统(诸如类固醇激素受体系统)，且如下文所述。
来自烟草的PR1-a启动子是在病原体侵犯之后于系统性后天抗性反应期间诱发。PR1-a的用途可能受到限制，因其常对内源性物质及外在因子有反应，诸如病原体、UV-B照射及污染源。已说明基于热休克、干扰素及重金属所诱导启动子的基因调节系统(Wurn等Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:5414-5418(1986)；Arnheiter等Cell 62:51-61(1990)；Filmus等Nucleic Acids Research 20:27550-27560(1992))。然而，这类系统由于其对非目标基因表达的作用而 受到限制。这类系统亦有缺陷。
原核抑制子-操纵子系统利用细菌抑制子蛋白质及与其结合的独特的操纵子DNA序列。已将来自细菌大肠杆菌之四环素("Tet")及乳糖("Lac")抑制子-操纵子系统用于控制植物及动物中的基因表达。在Tet系统中，四环素与TetR抑制子蛋白质结合，导致构型变化，从操纵子释放抑制子蛋白质，因此容许发生转录。在Lac系统中，lac操纵组(operon)因应答乳糖或合成类似物(诸如异丙基-b-D-硫半乳糖苷)的存在而激活。不幸地，这类系统的使用受到配体(亦即四环素及乳糖)的不稳定化学性、其毒性、其天然的存在性、或诱导或抑制所需的相对高浓度的限制。这类系统在动物中的实用性基于类似的理由而受到限制。
免疫抑制分子(诸如FK506、雷帕霉素(rapamycin)和环胞灵A(cyclosporine A))可与免疫亲和素FKBP12、亲环素(cyclophilin)等等结合。可使用此信息，设计通用策略，使任何两种蛋白质简单地通过将FK506放置于两种蛋白质中每一种上或将FK506放置于一种上并将环胞灵A置于另一种上而结合在一起。FK506(FK1012)的合成的同二聚体或由FK506-环胞灵(FKCsA)融合所生成的化合物接着可用于诱导这类分子的二聚化(Spencer等Science 262:1019-24(1993)；Belshaw等Proc Natl Acad Sci USA 93:4604-7(1996))。与FKBP12融合的Gal4DNA结合结构域和VP16激活因子结构域与亲环素融合，且FKCsA化合物是在含有Gal4结合位置的启动子控制下用于显示报告基因的杂二聚化及激活。不幸地，此系统包括可具有不想要的副作用之免疫抑制剂，及因此限制其用于各种哺乳动物基因开关应用。
还利用了较高等的真核细胞转录激活系统，诸如类固醇激素受体系统。类固醇激素受体为核受体超家族的成员且可发现于脊椎及无脊椎细胞中。不幸地，激活调节基因表达的受体的类固醇化合物的用途(特别在植物及哺乳动物中)由于其在这类有机体中涉及许多其它天然生物学路径而受到限制。为了克服这类困难，已使用昆虫蜕皮激素受体(EcR)发展出替代系统。
昆虫的生长、蜕皮及发育由蜕皮激素类固醇激素(蜕皮激素(molting hormone))及保幼激素调节(Dhadialla等Annu.Rev.Entomol.43:545-569(1998))。昆虫的蜕皮激素的分子靶标由至少蜕皮激素(EcR)及超螺旋蛋白质(ultraspiracle protein)(USP)所组成。EcR为核类固醇受体超家族成员，其 以标记DNA和配体结合结构域及激活结构域为特征(Koelle等Cell,67:59-77(1991))。EcR受体对许多类固醇化合物有反应，诸如松固酮(ponasterone)A及黎固酮(muristerone)A。已说明具有蜕皮类固醇(ecdysteroid)激动剂活性的非类固醇化合物，包括市场上可取得的罗门哈斯公司(Rohm and Haas Company)销售的杀昆虫剂虫酰肼(tebufenozide)和甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)(参见WO 96/27673和US 5,530,028)。二种类似物在其它的有机体中具有异常的安全性特征。
昆虫蜕皮激素受体(EcR)与超螺旋蛋白(USP)(哺乳动物类视黄醇X受体(RXR)的昆虫同源物)杂二聚化，且结合蜕皮类固醇及蜕皮激素受体反应元件，以激活蜕皮激素反应基因的转录。EcR/USP/配体复合物在昆虫发育及繁殖期间扮演重要角色。EcR具有五个模块结构域：A/B(反式激活)、C(DNA结合，杂二聚化)、D(枢钮，杂二聚化)，E(配体结合，杂二聚化和反式激活)及F(反式激活)结构域。这类功能域中有些(诸如A/B、C及E)在与其它蛋白质融合时仍保留其功能。
严密调节的诱导型基因表达系统或〝基因开关〞可用于各种应用，诸如基因疗法、细胞中蛋白质的大规模生产、以细胞为基础的高通量筛选试验、功能性基因组、及转基因植物和动物的表征的调节。
基于EcR的基因开关的第一形式是使用果蝇(Drosophila melanogaster)EcR(DmEcR)及小家鼠(Mus musculus)RXR(MmRXR)，且显示这类受体在类固醇(松固酮A)的存在下使哺乳动物细胞株及转基因小鼠的报告基因反式激活(Christopherson等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:6314-6318(1992)；No等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:3346-3351(1996))。后来，Suhr等Proc.Natl.Acad.Sci.95:7999-8004(1998)显示非类固醇蜕皮激素激动剂(虫酰肼)经由家蚕(Bombyx mori)EcR(BmEcR)在无外源性杂二聚体配对的存在下诱导哺乳动物细胞的报告基因的高度反式激活。
WO 97/38117和WO99/58155揭示调控外源性基因表达的方法，其中包含外源性基因及蜕皮激素反应元件的DNA构建体由包含蜕皮激素受体的第二DNA构建体激活，该蜕皮激素受体在其配体的存在下及任选地在能够充当沉默配对(silent partner)的受体存在下与蜕皮激素反应元件结合，以诱导基因表达。将挑选的蜕皮激素受体从果蝇分离。这类系统通常需要沉默配对的存在，优选 为类视黄醇X受体(RXR)，以提供最优激活。在哺乳动物细胞中，昆虫蜕皮激素受体(EcR)与类视黄醇X受体(RXR)杂二聚化，且以配体依赖方式调节目标基因的表达。WO 99/02683揭示自蚕娥家蚕(silk moth Bombyx mori)分离的蜕皮激素受体在哺乳动物系统中具有功能性，而不需要外源性二聚体配对。
US 6,265,173B1揭示受体之类固醇/甲状腺超家族的各种成员可与果蝇超螺旋蛋白(USP)受体或其包含用于基因表达系统之USP的至少二聚化域的片段组合。US 5,880,333揭示在植物中使用的果蝇EcR及超螺旋蛋白(USP)杂二聚体系统，其中反式激活结构域及DNA结合结构域位于二个不同的杂交蛋白质上。不幸地，这类基于USP的系统在动物细胞中构成，因此对调节报告基因表达无效。
在各种这类例子中，将反式激活结构域及DNA结合结构域(如WO 99/02683中的天然EcR或如WO 97/38117中的经修饰的EcR)并入单一分子中，且其它的杂二聚体配对(USP或RXR)以其天然状态使用。
上述基于EcR的基因调节系统的缺点包括在无配体存在下相当大的背景活性及这类系统不适用于植物和动物中(参见US 5,880,333)。因此，在本领域中对改进的基于EcR的系统仍有需求，从而在植物或动物中精确地调控外源性基因的表达。这类经改进的系统可用于以下的应用：诸如基因疗法、蛋白质和抗体的大规模生产、以基于细胞的高通量筛选试验、功能性基因组、及转基因动物之表征的调节。就特定的应用而言，诸如基因疗法，可能希望具有对合成的非类固醇配体充分反应且同时对天然类固醇不敏感的诱导型基因表达系统。因此，相对不贵、可轻易取得且对宿主具有低毒性的简单、集成及取决于配体的经改进的系统证实可用于调节生物系统。
已证明基于蜕皮激素受体的诱导型基因表达系统(其中反式激活和DNA结合结构域通过将其放置于两个不同的蛋白质上而互相分离)在无配体的存在下造成背景活性大幅下降，且在配体的存在下造成超越背景的显著增加的活性(参见WO 01/70816 A1)。此双杂交系统与申请案WO 97/38117和WO 99/02683中所揭示的两种系统相比是显著改进的诱导型基因表达调控系统。双杂交系统利用一对相互作用的蛋白质使转录激活结构域来到相对于DNA结合域更有利的位置的能力，使得当DNA结合结构域与基因上的DNA结合位 置结合时，反式激活结构域更有效地激活启动子(参见例如US 5,283,173)。简言之，双杂交基因表达系统包含二个基因表达盒，第一个编码与核受体多肽融合的DNA结合结构域，且第二个编码与不同的核受体多肽融合的反式激活结构域。第一个多肽与第二个多肽的相互作用在配体的存在下有效地连接DNA结合结构域与反式激活结构域。因为DNA结合域及反式激活结构域处于二个不同分子上，所以大幅降低在无配体存在下的背景活性。
当与类固醇配体(例如，松固酮A(〝PonA〞)或黎固酮A(〝MurA〞))相比时，双杂交系统还提供对非类固醇配体(例如，二酰基肼类化合物)改进的敏感性。亦即当与类固醇相比时，非类固醇配体在较低的浓度下提供较高的活性。此外，双杂交系统避免由于在使用未经修饰的RXR作为杂二聚体受体配对时常发生的RXR过表达的一些副作用。在一个双杂交系统中，使EcR或RXR的天然DNA结合结构域及反式激活结构域消除，结果使这类杂交分子具有较低的机会与存在于细胞内的其它类固醇激素受体相互作用，造成副作用减少。额外的基因开关系统包括那些在以下专利及专利申请案中所述者：US 7,091,038、WO2004078924、EP1266015、US20010044151、US20020110861、US20020119521、US20040033600、US20040197861、US20040235097、US20060020146、US20040049437、US20040096942、US20050228016、US20050266457、US20060100416、WO2001/70816、WO2002/29075、WO2002/066612、WO2002/066613、WO2002/066614、WO2002/066615、WO2005/108617、US 6,258,603、US20050209283、US20050228016、US 20060020146、EP0965644、US 7,304,162和US 7,304,161。
通过基于蜕皮激素受体的基因调节系统的改进而增加其于各种应用的用途。二酰基肼(〝DAH〞)化合物及其作为基于蜕皮激素受体的基因调节系统中配体的应用揭示于美国专利案号8,076,517、7,456,315、7,304,161和6,258,603，及其中引述的专利中。然而，对具有改进的物理化学及/或药理性质的DAH仍有需求。
【附图简要说明】
图1为载体(RS-1)的载体图谱。
图2A-2E列出图1的载体图谱的核酸序列(SEQ ID NO:1)。在括号内列出的核酸序列代表以下的载体序列组份：[6x GalRE]1、[fLuc]2、[VP16]3、[RXR]4、 [Gal4DBD]5和[EcRVY]6。
图3显示通过在右及左小腿肌肉上经由IM注射Ad-RTS-fLUC及经口给药100毫克/千克体重的第13、59、67、85和86号化合物而在小鼠小腿肌肉中的荧光素酶表达的柱状图。
【发明内容】
在一个方面中，本发明提供以下式I-XI代表的含硼的二酰基肼化合物类，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，在本文统称为〝本发明化合物〞。本发明化合物含有至少一个硼原子于其结构中。
在另一方面中，本发明提供包含本发明化合物及一或多种赋形剂的组合物。在其他方面中，组合物为医药上可接受的组合物。
在另一方面中，本发明提供本发明化合物用作为基于蜕皮激素受体的诱导型基因表达系统的配体。本发明的优点在于其提供调节基因表达及调控表达程度以满足使用者的需要的方式。
在另一方面中，本发明提供调节感兴趣的基因在经分离的宿主细胞或非人类有机体中的基因表达的方法，其包含将宿主细胞或非人类有机体与本发明化合物或其组合物接触。
在另一方面中，本发明提供治疗对象的疾病、病症、伤害或病况的方法，其包含将本发明化合物或其组合物给予该对象。
在另一方面中，本发明提供用于治疗疾病、病症、伤害或病况的本发明化合物或其组合物。
在另一方面中，本发明提供用于制造供治疗疾病、病症、伤害或病况的药剂的本发明化合物或其组合物。
在另一方面中，本发明提供控制昆虫的方法，其包含将该昆虫或其栖息处与杀昆虫有效量的本发明化合物或其组合物接触。
【实施方式】
在一个实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物：
其中：
R1和R2各自独立地选自：氢、任选取代的烷基和卤代烷基；或
R1和R2与其连接的碳原子一起形成4-至8-元环烷基；
R3选自：氢、任选取代的烷基、卤代烷基、任选取代的环烷基、的任选取代的烯基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R4选自：
X1选自：-O-和-N(R8a)-；
Y1为-(CR9aR9b)m-；
Z1选自：-O-和-N(R8b)-，或Z1不存在；
R6a选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6a形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7a和R7b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R7a’和R7b’各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8a和R8b各自独立地选自：氢和烷基；
R9a和R9b各自独立地选自：氢和烷基；
m为1、2、3或4；
X2选自：-O-和-N(R8c)-；
Y2为-(CR9cR9d)n-；
Z2选自：-O-和-N(R8d)-，或Z2不存在；
R6b选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6b形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7c和R7d各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8c和R8d各自独立地选自：氢和烷基；
R9c和R9d各自独立地选自：氢和烷基；
n为1、2、3或4；
X选自：-O-和-N(R8e)-；
R6c选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6c形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7e和R7f各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8e选自：氢和烷基；
R6d选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6d形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R6f选自：氢、烷基、氨基和羟基；
X5选自：-O-和-N(R8k)-；
R7g和R7h各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8k选自：氢和烷基；
X6选自：-O-和-N(R8l)-；
X7选自：-O-和-N(R8n)-；
R8l选自：氢和烷基；
R8m选自：氢和烷基；
R8n选自：氢和烷基；
R10a选自：氢和-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且
R10b、R10c和R10d各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、任选取代的烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、杂烷基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；或
R10b选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、-N(H)CHO、-N(H)CN、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、杂烷基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；和/或
R10c和R10d与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；例如R4-5为：
例如R4-6为：
例如R4-7为：
R11a和R11b各自独立地选自：氢和烷基；
R12a和R12b选自：羟基和烷氧基；或
R12a与R12b一起形成键联-O(CR13aR13b)pO-；或
-B(R12a)(R12b)形成氟化物加成物；
R13a和R13b各自独立地选自：氢和C1-4烷基；
o为0、1、2、3、4或5；
p为2、3或4；
R5为R4-3、R4-4、R4-8、R4-9或R4-10；或R5选自：
X3选自：-O-和-N(R8f)-；
Y3为-(CR9eR9f)q-；
Z3选自：-O-和-N(R8g)-，或Z3不存在；
R6e选自：羟基和烷基；或
R6e形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7i和R7j各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8f和R8g各自独立地选自：氢和烷基；
R9e和R9f各自独立地选自：氢和烷基；
q为1、2、3或4；
X4选自：-O-和-N(R8h)-；
Y4为-(CR9gR9h)r-；
Z4选自：-O-和-N(R8i)-，或Z4不存在；
R6g选自：羟基和烷基；或
R6g形成羟基酸加成物或氨基酸加成物
R7k和R7l各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8h和R8i各自独立地选自：氢和烷基；
R9g和R9h的各自独立地选自：氢和烷基；
r为1、2、3或4；
R10e选自：氢和-(CR11cR11d)s-B(R12c)(R12d)；且
R10f、R10g和R10h独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；或
R10f选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、 -SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；且
R10g和R10h与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；例如R3-3为：
R11c和R11d各自独立地选自：氢和烷基；
R12c和R12d选自：羟基和烷氧基；或
R12c与R12d一起形成键联-O(CR13cR13d)tO-；或
-B(R12c)(R12d)形成氟化物加成物；
R13c和R13d各自独立地选自：氢和C1-4烷基；
s为0、1、2、3、4或5；
t为2、3或4；
R14a和R14b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；
R15a和R15b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、任选取代的烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；
R16选自：氢、羟基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基和芳基烷氧基；
R17选自：卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的烷基、任选取代的 环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R18选自：氢、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R19选自：氢、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基和氨基；
R20选自：卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和氨基；
R21选自：氢、烷基、芳基、氰基和硝基；
前提条件：
a)当R4为R4-5、R4-6或R4-7，且R5为R5-3时，则R10a或R10e中的一种不为氢；或
b)当R4为R4-5、R4-6或R4-7，且R5为R5-4或R5-5时，则R10a不为氢，
及其的药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R5选自：R5-1、R5-2、R5-3、R5-4和R5-5；且R1、R2、R3和R4如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-1；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-2；R5的选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；及R1、R2和R3系如式I中所定义。
在另一具体实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-3；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接 受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-4；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-5；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10a为-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-5；R5为R5-3；R10e为-(CR11cR11d)s-B(R12c)(R12d)；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-6；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10a为-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-7；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10a为-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-8；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；及R10a为-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-9；R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；及R10e为氢；且R1、R2和R3如式I中所定义。
在另一具体实施方式中，本发明化合物为具有式II的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；且R1、R2、R3、R10b、R10c和o系如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，o为0。在其他实施方式中，R10b和R10c各自独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、烷氧基烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基。在另一具体实施方式中，R10b和R10c各自独立地选自：氢、卤素、C1-4烷基、烷氧基烷基和C1-4烷 氧基。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式III的化合物：
其中R1、R2、R3、R10b、R10c、R10d、R10f、R10g和s如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，s为0。在其他实施方式中，R10b、R10c和R10d独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；或
R10b选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；且
R10c和R10d与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式IV的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；R6a为羟基；及R1、R2、R3、R7a、X1、Y1和Z1如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7a选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z1不存在。在其他实施方式中，Z1为-O-。在其他实施方式中，Z1为-N(H)-。在其他实施方式中，X1为-O-。在其他实施方式中，X1为-N(H)-。在其他实施方式中，R9a和R9b选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1、2或3。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式V的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；R6a为羟基；且R1、R2、R3、R7a、X1、Y1和Z1如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7a选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z1不存在。在其他实施方式中，Z1为-O-。在其他实施方式中，Z1为-N(H)-。在其他实施方式中，X1为-O-。在其他实施方式中，X1为-N(H)-。在其他实施方式中，R9a和R9b选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1、2或3。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式VI的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；R6a为羟基；且R1、R2、R3、R7a、X1、Y1和Z1如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7a选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z1不存在。在其他实施方式中，Z1为-O-。在其他实施方式中，Z1为-N(H)-。在其他实施方式中，X1为-O-。在其他实施方式中，X1为-N(H)-。在其他实施方式中，R9a和R9b选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1、2或3。在其他实施方式中，Z1不存在且m为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一具体实施方式中，本发明化合物为具有式VII的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R6b为羟基；R10e为氢，且R1、R2、R3、R7c、X2、Y2和Z2如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7c选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z2不存在。在其他实施方式中，Z2为-O-。在其他实施方式中，Z2为-N(H)-。在其他实施方式中，X2为-O-。在其他实施方式中，X2为-N(H)-。在其他实施方式中，R9c和R9d选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1、2或3。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式VIII的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R6b为羟基；R10e为氢，且R1、R2、R3、R7c、X2、Y2和Z2如式I中所定义，及其的药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7c选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z2不存在。在其他实施方式中，Z2为-O-。在其他实施方式中，Z2为-N(H)-。在其他实施方式中，X2为-O-。在其他实施方式中，X2为-N(H)-。在其他实施方式中，R9c和R9d选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1、2或3。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式IX的化合物：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R6b为羟基；R10e为氢，且及R1、R2、R3、R7c、X2、Y2和Z2如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7c选自：氢、卤素和烷基。在其他实施方式中，Z2不存在。在其他实施方式中，Z2为-O-。在其他实施方式中，Z2为-N(H)-。在其他实施方式中，X2为-O-。在其他实施方式中，X2为-N(H)-。在其他实施方式中，R9c和R9d选自：氢和甲基。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1、2或3。在其他实施方式中，Z2不存在且n为1。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，其中R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；R10e为氢；且R1、R2和R3系如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7a选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；R8a选自：氢和C1-4烷基；且R6f选自：氢、C1-4烷基、羟基和-NH2。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，其中：
R4为R4-5；
R10a为氢；
R10b、R10c和R10d独立地选自：氢、卤素、氨基、氰基、-N(H)CHO、-N(H)CN、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；或
R10b选自：氢、卤素、羟基、氨基、氰基、-N(H)CHO、-N(H)CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；且
R10c和R10d与两个相邻的碳原子一起形成稠合任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；
R5选自：
R7a选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；且
R1、R2和R3系如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，其中：
R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；
R10e为氢；且
R1、R2和R3如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I的化合物，其中：
R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；及
R10e为氢。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中R1为任选取代的C1-6烷基；R2选自：氢和的任选取代的C1-6烷基；R3为任选取代的C1-6烷基；且R4和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中R1选自：甲基、乙基、正丙基和正丁基；R2选自：氢和甲基；及R4和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R3选自：甲基和叔丁基。在其他实施方式中，R2为氢，且R3为叔丁基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中R1为任选取代的C1-6烷基；R2为氢；R3选自：任选取代的苯基、任选取代的吡啶基和任选取代的嘧啶基；且R4和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R3选自：任选取代的吡啶基和任选取代的嘧啶基；
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中R1、R2和R3各自为甲基；及R4和R5系如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中化合物未展现光学活性，亦即化合物为非手性或为消旋性，或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中带有R1、R2和R3的碳原子为不对称碳原子，且该不对称碳原子的绝对构型为 R，亦即化合物为富含对映异构性的R异构物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中R异构物的对映异构物过量为至少约60％，例如至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％。在其他实施方式中，R异构物的对映异构物过量为至少约90％。在其他实施方式中，R异构物的对映异构物过量为至少约95％。在其他实施方式中，R异构物的对映异构物过量为至少约98％。在其他实施方式中，R异构物的对映异构物过量为至少约99％。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中带有R1、R2和R3的碳原子为不对称碳原子，且该不对称碳原子的绝对构型为S，亦即化合物为富含对映异构性的S异构物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，本发明化合物为具有式I-IX中任一种的化合物，其中S异构物的对映异构物过量为至少约60％，例如至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％。在其他实施方式中，S异构物的对映异构物过量为至少约90％。在其他实施方式中，S异构物的对映异构物过量为至少约95％。在其他实施方式中，S异构物的对映异构物过量为至少约98％。在其他实施方式中，S异构物的对映异构物过量为至少约99％。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式X的化合物：
其中R1不等于R3，且R1、R3、R4和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，在具有式X及XI的化合物的混合物中，具有式X的化合物的对映异构物过量为至少约60％，例如至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％。在其他实施方式中，具有式X的 化合物的对映异构物过量为至少约90％。在其他实施方式中，具有式X的化合物的对映异构物过量为至少约95％。在其他实施方式中，具有式X的化合物的对映异构物过量为至少约98％。在其他实施方式中，具有式X的化合物的对映异构物过量为至少约99％。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式XI的化合物：
其中R1不等于R3，且R1、R3、R4和R5如式I中所定义，及其的药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，在具有式X及XI的化合物的混合物中，具有式XI的化合物的对映异构物过量为至少约60％，例如至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％。在其他实施方式中，具有式XI的化合物的对映异构物过量为至少约90％。在其他实施方式中，具有式XI的化合物的对映异构物过量为至少约95％。在其他实施方式中，具有式XI的化合物的对映异构物过量为至少约98％。在其他实施方式中，具有式XI的化合物的对映异构物过量为至少约99％。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式X或XI的化合物，其中：
R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；
R10e为氢；且
R1、R2和R3如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。在其他实施方式中，R7a选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基。在其他实施方式中，R10b和R10c各自独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、烷氧基烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基。在其他实施方式中，R10b和R10c各自独立地选自：氢、卤素、C1-4烷基、烷氧基烷基和C1-4烷氧基。在其他实施方式中，R5为R5-3。在其他实施方式中，R10f、R10g和R10h各自独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基。在其他实施方式中，R1选自：乙基和正丙基，且R3为叔丁基。在其他实施方式中，R1为叔丁基，且及R3为任选取代的苯基。在其他实施方式中，R5为3,5-二甲基苯基。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐类和溶剂合物，其中R4为R4-1或R4-8；R6a形成羟基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一具体实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-2；R6b形成羟基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐类和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-3；R6c形成羟基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-4；R6d形成羟基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一具体实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其的药学上可接受的盐类和溶剂合物，其中R5为R5-1；R6e形成羟基酸加成物，及R1、R2、R3和R4系如式I中所定义，及其的药学上可接受的盐类和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R5为R5-2；R6g形成羟基酸加成物，且R1、R2、R3和R4如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其 药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-1或R4-8；R6a形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-2；R6b形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其的药学上可接受的盐类和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-3；R6c形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-4；R6d形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R5为R5-1；R6e形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R4如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R5为R5-2；R6g形成氨基酸加成物，且R1、R2、R3和R4如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-5、R4-6或R4-7；R10a为-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；-B(R12c)(R12d)形成氟化物加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有式I-XI中任一种的化合物，及其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中R4为R4-5、R4-6或R4-7；R10e为-(CR11aR11b)s-B(R12c)(R12d)；-B(R12a)(R12b)形成氟化物加成物，且R1、R2、R3和R5如式I中所定义，及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
在另一实施方式中，本发明化合物为具有下式的化合物：
在另一实施方式中，本发明化合物为表A的化合物。
表A
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷基〞指含有1至12个碳原子(即C1-12烷基)或指定的碳原子数目(即C1烷基，诸如甲基，C2烷基，诸如乙基，C3烷基，诸如丙基或异丙基等等)的直链或支链脂族烃。在一个实施方式中，烷基选自直链C1-10烷基。在另一实施方式中，烷基选自支链C3-10烷基。在另一实施方式中，烷基选自直链C1-6烷基。在另一实施方式中，烷基选自支链C3-6烷基。在另一实施方式中，烷基选自直链C1-4烷基。在另一实施方式中，烷基选自支链C3-4烷基。在另一实施方式中，烷基选自直链或支链C3-4烷基。在另一实施方式中，使烷基部分或完全氘化，即将烷基的一或多个氢原子以氘原子替换。非限制性例示的C1-10烷基包括甲基(包括-CD3)、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。非限制性例示的C1-4烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的烷基〞指如上文定义的烷基，其未经取代或经一、二或三个独立选自下组的取代基取代：硝基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、环烷基等。在一个实施方式中，任选取代的烷基经两个取代基取代。在另一实施方式中，任选取代的烷基系经一个取代基取代。非限制性例示的任选取代的烷基包括-CH2CH2NO2、-CH2CH2CO2H、-CH2CH2SO2CH3、-CH2CH2COPh、-CH2C6H11等。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝环烷基〞指含有1至3个环及具有从3至12个碳原子(即C3-12环烷基)或指定的碳数目的饱和及部分不饱和(含有一或两个双键)环状脂族烃。在一个实施方式中，环烷基具有两个环。在一个实施方式中，环烷基具有一个环。在另一实施方式中，环烷基选自C3-8环烷基。在另一实施方式中，环烷基选自C3-6环烷基。非限制性例示的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降莰基、十氢萘、金刚烷基、环己烯基等。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的环烷基〞指如上文定义的环烷基，其未经取代或经一、二或三个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、羟烷基氨基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯烷基、(杂环基)烷基和(杂芳基)烷基。在一个实施方式中，任选取代的环烷基经两个取代基取代。在另一 实施方式中，任选取代的环烷基经一个取代基取代。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝环烯基〞指如上文定义的部分不饱和环烷基。在一个实施方式中，环烯基具有一个碳至碳双键。在另一实施方式中，环烯基选自C4-8环烯基。例示的环烯基包括环戊烯基、环己烯基等。
就本发明的目的而言，如以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的环烯基〞意指如上文定义的环烯基，其未经取代或经一、二或三个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、单羟烷基、二羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、羟烷基氨基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯烷基、(杂环基)烷基和(杂芳基)烷基。在一个实施方式中，任选取代的环烯基系经两个取代基取代。在另一实施方式中，任选取代的环烯基系经一个取代基取代。在另一实施方式中，环烯基未经取代。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烯基〞指含有一、二或三个碳碳双键的如上文定义的烷基。在一个实施方式中，烯基选自C2-6烯基。在另一实施方式中，烯基选自C2-4烯基。非限制性例示的烯基包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、戊烯基和己烯基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的烯基〞指如上文定义的烯基，其未经取代或经一、二或三个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或杂环基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝炔基〞指含有一至三个碳碳三键的如上文定义的烷基。在一个实施方式中，炔基具有一个碳碳三键。在一个具体实施方式中，炔基选自C2-6炔基。在另一实施方式中，炔基选自C2-4炔基。非限制性例示的炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔 基、2-丁炔基、戊炔基和己烯基。
就本发明的目的而言如以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的炔基〞指如上文定义的炔基，其未经取代或经一、二或三个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或杂环基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝卤代烷基〞指经一或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。在一个实施方式中，烷基经一、二或三个氟及/或氯原子取代。在另一实施方式中，卤代烷基选自C1-4卤代烷基。非限制性例示的卤代烷基包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基和三氯甲基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝羟烷基〞指经一或多个(例如，一、二或三个)羟基取代的烷基。在一个实施方式中，羟烷基为单羟烷基，即经一个羟基取代。在另一实施方式中，羟烷基为二羟烷基，即经两个羟基取代。在另一实施方式中，羟烷基选自C1-4羟烷基。非限制性例示的羟烷基包括羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基，诸如1-羟乙基、2-羟乙基、1,2-二羟乙基、2-羟丙基、3-羟丙基、3-羟丁基、4-羟丁基、2-羟基-1-甲基丙基和1,3-二羟丙-2-基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷氧基〞指连接至末端氧原子的任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基或任选取代的炔基。在一个实施方式中，烷氧基选自C1-4烷氧基。在另一实施方式中，烷氧基选自连接至末端氧原子的C1-4烷基，例如甲氧基、乙氧基和第三丁氧基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷硫基〞指经任选取代的烷基取代的硫原子。在一个实施方式中，烷硫基选自C1-4烷硫基。非限制性例示的烷硫基包括-SCH3和-SCH2CH3-。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷氧基烷基〞指经烷氧基取代的烷基。非限制性例示的烷氧基烷基包括甲氧基甲 基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、甲氧基丁基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基丙基、乙氧基丁基、丙氧基甲基、异丙氧基甲基、丙氧基乙基、丙氧基丙基、丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、异丁氧基甲基、仲丁氧基甲基和戊氧基甲基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝卤烷氧基〞指连接至末端氧原子的卤代烷基。非限制性例示的卤烷氧基包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝杂烷基〞指含有1至10碳原子及至少两个杂原子的稳定的直链或支链烃基，该杂原子可相同或不同且选自O、N或S，其中：1)氮原子及硫原子可随意地氧化；及/或2)氮原子可随意地季铵化。杂原子可位于杂烷基的任何内部位置上或杂烷基连接至分子的其余部分的位置上。在一个实施方式中，杂烷基含有两个氧原子。非限制性例示的杂烷基包括-CH2OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OCH2CH2OCH3、-CH2NHCH2CH2OCH2、-OCH2CH2NH2、-NHCH2CH2N(H)CH3和-OCH2CH2OCH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳基〞指具有从6至14个碳原子的单环或双环芳族环系统(即C6-C14-芳基)。非限制性例示的芳基包括苯基(缩写为〝Ph〞)、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、联苯基、伸联苯基和茀基。在一个实施方式中，芳基系选自苯基或萘基。在一个实施方式中，芳基为苯基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的芳基〞指如上文定义的芳基，其未经取代或经一至五个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、羟烷基氨基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯烷基、(杂环基)烷基、(环烷基氨基)烷基、(C1-C4卤烷氧基)烷基或(杂芳基)烷基。在一个实施方式中，任选取代的芳基为任选取代的苯基。在一个实施方式中，任选取代的苯基具有四个取代基。在另一实施方式中，任选取代的苯基具有三个取代基。在另 一实施方式中，任选取代的苯基具有两个取代基。在另一实施方式中，任选取代的苯基具有一个取代基。非限制性例示的经取代的芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、2,6-二-氟苯基、2,6-二-氯苯基、2-甲基-3-甲氧基苯基、2-乙基-3-甲氧基苯基、3,4-二-甲氧基苯基、3,5-二-氟苯基、3,5-二-甲基苯基、3,5-二甲氧基-4-甲基苯基、2-氟-3-氯苯基和3-氯-4-氟苯基。术语〝任选取代的芳基〞意谓着包括具有稠合的任选取代的环烷基和稠合的任选取代的杂环基环的基团。示例包括：
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳氧基〞指连接至末端氧原子的任选取代的芳基。非限制性例示的芳氧基为PhO-。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝杂芳氧基〞指连接至末端氧原子的任选取代的杂芳基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳烷氧基〞或〝芳基烷氧基〞指连接至末端氧原子的芳烷基。非限制性例示的芳烷氧基为PhCH2O-。
就本发明的目的而言，术语〝杂芳基〞或〝杂芳族〞指具有5至14个环原子(亦即C5-C14杂芳基)及1、2、3或4个独立选自氧、氮和硫的杂原子的单环及双环芳族环系统。在一个实施方式中，杂芳基具有三个杂原子。在另一实施方式中，杂芳基具有两个杂原子。在另一实施方式中，杂芳基具有一个杂原子。在一个实施方式中，杂芳基为C5杂芳基。在另一实施方式中，杂芳基为C6杂芳基。非限制性例示的杂芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、苯并恶酮基、苯并吡喃基、呫吨基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、嗒嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞基、萘啶基、噌啉基、喹唑啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、吩嗪基、噻唑基、异噻唑基、吩噻唑基、异恶唑基、呋咕基和吩恶嗪基。在一个实施方式中，杂芳基系选自噻吩基(例如，噻吩-2-基和噻吩-3-基)、呋喃基(例如，2-呋喃基和3-呋喃基)、吡咯基(例如，1H-吡咯-2-基和1H-吡咯-3-基)、咪唑基(例如，2H-咪唑-2-基和2H-咪唑-4-基)、吡唑基(例如，1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基和1H-吡唑-5-基)、吡啶基(例如，吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)、嘧啶基(例如，嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基)、噻唑基(例如，噻唑-2-基、噻唑-4-基和噻唑-5-基)、异噻唑基(例如，异噻唑-3-基、异噻唑-4-基和异噻唑-5-基)、恶唑基(例如，恶唑-2-基、恶唑-4-基和恶唑-5-基)及异恶唑基(例如，异恶唑-3-基、异恶唑-4-基和异恶唑-5-基)。术语〝杂芳基〞也包括可能的N-氧化物。例示的N-氧化物包括吡啶基N-氧化物等。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝任选取代的杂芳基〞指如上文定义的杂芳基，其未经取代或经一至四个独立选自下组的取代基(例如，一或两个取代基)取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、羟烷基氨基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯烷基、(杂环基)烷基和(杂芳基)烷基。在一个实施方式中，任选取代的杂芳基具有一个取代基。在一个实施方式中，随意地经取代为任选取代的吡啶基，即2-、3-或4-吡啶基。可取代任何有效的碳或氮原子。在另一实施方式中，任选取代的杂芳基为任选取代的吲哚。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝杂环〞或〝杂环基〞指含有一、二或三个环、具有从3至14个环员(即3-至14-元杂环基)及至少一个杂原子的饱和及部分不饱和(例如，含有一或两个双键)环基团。各杂原子独立地选自氧、硫(亚砜和砜)和/或可季铵化的氮原子。术语〝杂环基〞包括环脲基(诸如2-咪唑啶酮)及环酰氨基(诸如β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺和ε-内酰胺)。术语〝杂环基〞也包括具有稠合的任选取代的芳基的基团(例如，吲哚啉基)。在一个实施方式中，杂环基系选自含有一个环及一或两个氧和/或氮原子的5-或6-元环基团。杂环基可随意地经 由碳或氮原子与分子的其余部分连结。非限制性例示的杂环基包括2-侧氧吡咯啶-3-基、2-咪唑啶酮、哌啶基、吗啉基、哌基、吡咯啶基和吲哚啉基。
就本发明的目的而言，如以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝的任选取代的杂环基〞意指如上文定义的杂环基，其未经取代或经一至四个独立选自下组的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、脲基、胍基、羧基、羧烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环、烷氧基烷基、(氨基)烷基、羟烷基氨基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯烷基、(杂环基)烷基、(杂芳基)烷基等。取代可发生在任何有效的碳或氮原子上且可形成螺环。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝氨基〞指-NH2。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷基氨基〞指-NHR22，其中R22为烷基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝二烷基氨基〞指-NR23aR23b，其中R23a和R23b各自独立地是烷基或R23a与R23b一起形成3-至8-元任选取代的杂环基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝羟烷基氨基〞指-NHR24，其中R24为羟烷基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝环烷基氨基〞指-NR25aR25b，其中R25a为任选取代的环烷基，且R25b为氢或烷基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(氨基)烷基〞指经氨基取代的烷基。非限制性例示的氨基烷基包括-CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2NH2等。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(烷基氨基)烷基〞指经烷基氨基取代的烷基。非限制性例示的(烷基氨基)烷基为-CH2CH2N(H)CH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(二烷基氨基)烷基〞指经二烷基氨基取代的烷基。非限制性例示的(二烷基 氨基)烷基为-CH2CH2N(CH3)2。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(环烷基氨基)烷基〞指经环烷基氨基取代的烷基。非限制性例示的(环烷基氨基)烷基包括-CH2N(H)环丙基、-CH2N(H)环丁基和-CH2N(H)环己基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(氰基)烷基〞指经一或多个氰基(例如，-CN基团)取代的烷基。非限制性例示的(氰基)烷基包括-CH2CH2CN、-CH2CH2CH2CN和-CH2CH2CH2CH2CN。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝甲酰氨基〞指式-C(＝O)NR26aR26b的基团，其中R26a和R26b各自独立为氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或R26a和R26b与其连接的氮一起形成3-至8-元杂环基。在一个实施方式中，R26a和R26b各自独立为氢或任选取代的烷基。非限制性例示的甲酰氨基包括-CONH2、-CON(H)CH3、CON(CH3)2和CON(H)Ph。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(甲酰氨基)烷基〞指经甲酰氨基取代的烷基。非限制性例示的(甲酰氨基)烷基包括-CH2CONH2、-C(H)CH3-CONH2和-CH2CON(H)CH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝磺酰氨基〞指式-SO2NR27aR27b的基，其中R27a和R27b各自独立为氢、任选取代的烷基或任选取代的芳基，或R27a和R27b与其连接的氮一起形成3-至8-元杂环基。非限制性例示的磺酰氨基包括-SO2NH2、-SO2N(H)CH3和-SO2N(H)Ph。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷基羰基〞指经烷基取代的羰基(亦即-C(＝O)-)。非限制性例示的烷基羰基为-COCH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳基羰基〞指经任选取代的芳基取代的羰基(亦即-C(＝O)-)。非限制性例示的芳基羰基为-COPh。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷基磺酰基〞指经上述任选取代的烷基中的任一种取代的磺酰基(亦即-SO2-)。非限制性例示的烷基磺酰基为-SO2CH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳 基磺酰基〞指经上述的任选取代的芳基中任一种取代的磺酰基(亦即-SO2-)。非限制性例示的芳基磺酰基为-SO2Ph。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝巯烷基〞指经-SH基团取代的上述烷基中的任一种。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝羧基〞指式-COOH的基。
就本发明的目的而言，如以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝羧烷基〞系指经-COOH取代的上述烷基中的任一种。非限制性例示的羧烷基为-CH2CO2H。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷氧基羰基〞指经烷氧基取代的羰基(即-C(＝O)-)。非限制性例示的烷氧基羰基为-CO2-Me和-CO2Et。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝芳烷基〞系指经一、二或三个任选取代的芳基取代的烷基。在一个实施方式中，芳烷基为经一个任选取代的芳基取代的C1-4烷基。非限制性例示的芳烷基包括苯甲基、苯乙基、-CHPh2和-CH(4-F-Ph)2。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝脲基〞指式-NR30a-C(＝O)-NR30bR30c的基团，其中R22a为氢、烷基或任选取代的芳基，且R30b和R30c各自独立为氢、烷基或任选取代的芳基，或R30b和R30c与其连接的氮一起形成4-至8-元杂环基。非限制性例示的脲基包括-NH-C(C＝O)-NH2和-NH-C(C＝O)-NHCH3。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝胍基〞指式-NR28a-C(＝NR29)-NR28bR28c的基团，其中R28a、R28b和R28c各自独立为氢、烷基或任选取代的芳基，且R29为氢、烷基、氰基、烷基磺酰基、烷基羰基、甲酰氨基或磺酰氨基。非限制性例示的胍基包括-NH-C(C＝NH)-NH2、-NH-C(C＝NCN)-NH2、-NH-C(C＝NH)-NHCH3等。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝(杂环基)烷基〞指经一、二或三个任选取代的杂环基取代的烷基。在一个实施方式中，(杂环基)烷基为经一个任选取代的杂环基取代的C1-4烷基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝 (杂芳基)烷基〞指经一、二或三个任选取代的杂芳基取代的烷基。在一个实施方式中，(杂芳基)烷基为经一个任选取代的杂芳基取代的C1-4烷基。
就本发明的目的而言，以本身或成为另一基团的一部分所使用的术语〝烷基羰基氨基〞指连接至氨基的烷基羰基。非限制性例示的烷基羰基氨基为-NHCOCH3。
本发明包含通过对一或多个原子用具有不同的原子量或质量数的原子替换而经同位素标记(亦即经放射标记)的本发明化合物中的任一种。可纳入所公开的化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如分别为2H(或氘(D))、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、 35S、18F和36Cl，例如3H、11C和14C。在一个实施方式中，其提供其中基本所有在本发明化合物内的位置上的原子都经具有不同的原子量或质量数的原子替换的组成物。在另一实施方式中，其提供其中一部分在本发明化合物内的位置上的原子经替换的组成物，即富含在该位置上具有不同的原子量或质量数的原子的本发明化合物。经同位素标记的本发明化合物可以本领域中已知的方法制备。
本发明化合物可含有一或多个不对称中心且因此可生成对映异构物、非对映异构物及其它的立体异构物形式。本发明包含所有这类可能的形式及其消旋物和分解形式及其混合物的用途。个别的对映异构物可鉴于本发明并根据本领域中已知的方法分离。当本文所述的化合物含有烯烃双键或几何不对称性的其它中心时，则倾向于使这类化合物包括E及Z几何异构物，除非另有其它指定。也倾向于使本发明包含所有的互变异构物。例如，本发明包含式I的R4-5的以下互变异构物：
本发明包含式I的R4-6和R5-4的以下互变异构物：
如本文所使用的术语〝立体异构物〞为个别分子的所有异构物的通用术语，这类异构物的差别仅为其原子在空间中的取向。其包括对映异构物以及具有一个以上彼此不为对映的手性中心的化合物的异构物(非对映异构物)。
术语〝手性中心〞或〝不对称碳原子〞指连接四个不同基团的碳原子。
术语〝对映异构物〞及〝对映异构物的(enantiomeric)〞指不可以叠置于其镜像上取因此具有光学活性的分子，其中对映异构物使偏振光平面以一个方向旋转而其对映化合物使偏振光平面以相反方向旋转。
术语〝消旋物〞指等份数的对映异构物的混合物且该混合物不具有光学活性。
术语〝绝对构型〞指手性分子实体(或基团)的原子的空间排列及其立体化学的描述，例如R或S。
在说明书中所使用的立体化学术语及惯例与在Pure&Appl.Chem 68:2193 (1996)中所述的那些一致，除非另有其它指示。
术语〝对映异构物过量〞或〝ee〞系指一种对映异构物与其它者相比的存在量有多少的量度。R与S对映异构物的混合物的对映异构物过量百分比经定义为│R-S│*100，其中R及S为混合物中的对映异构物的各自的摩尔数或重量分数，使得R+S＝1。对映异构物过量百分比根据手性物质的旋光度定义为([α]obs/[α]max)*100，其中[α]obs为对映异构物的混合物的旋光度取[α]max为纯对映异构物的旋光度。可以使用各种分析技术测定对映异构物过量，包括NMR光谱法、手性管柱层析术或旋光测定法。
术语〝对映异构性纯〞或〝对映纯(enantiopure)〞指手性物质的样品的所有其分子(在侦测的限度范围内)具有相同的手性矢向。
术语〝富含对映异构物〞或〝富含对映物(enantioenriched)〞系指手性物质的样品的其对映异构物比率大于50：50。富含对映异构物的化合物可为对映异构性纯。
本发明包含本发明化合物的盐(包括医药上可接受的无毒性盐)的制备及用途。医药上可接受的加成盐的示例包括无机和有机酸加成盐及碱盐。药学上可接受的盐包括但不限于金属盐，诸如钠盐、钾盐、铯盐及类似物；碱土金属盐，诸如钙盐、镁盐及类似物；有机胺盐，诸如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己胺盐、N,N’-二苯甲基乙二胺盐及类似物；无机酸盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；有机酸盐，诸如柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、扁桃酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、甲酸盐等；磺酸盐，诸如甲烷磺酸盐、苯磺酸盐、对-甲苯磺酸盐等；及氨基酸盐，诸如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等。
酸加成盐可通过将特定的本发明化合物的溶液与医药上可接受的无毒性酸溶液(诸如盐酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、琥珀酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸、二氯乙酸等)混合而形成。碱盐可通过将本发明化合物的溶液与医药上可接受的无毒性碱溶液(诸如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胆碱、碳酸钠等)混合而形成。
术语〝药学上可接受的盐〞包括具有以下通式的硼酸盐：
其中M+为H+或单价阳离子。以实施例说明，化合物53(参见下文)系根据以下的流程与NaOH反应而转化成药学上可接受的盐：
包含本发明化合物的溶剂合物的制备及用途。溶剂合物通常不显著地改变化合物的生理活性或毒性，且本身可作为药理等效物起作用。如本文所使用的术语〝溶剂合物〞为本发明化合物与溶剂分子的组合、物理缔合作用及/或溶剂化作用，例如二溶剂合物、单溶剂合物或半溶剂合物，其中溶剂分子对本发明化合物的比率分别为约2：1，约1：1或约1：2。此物理缔合作用包含不同程度的离子及共价键合，包括氢键合。在特定的情况下，可将溶剂合物分离，诸如当一或多种溶剂分子并入结晶固体的晶格中时。因此，〝溶剂合物〞包含溶液相及可分离的溶剂合物。本发明化合物可以与医药上可接受的溶剂(诸如水、甲醇、乙醇等)的溶剂化形式存在，且倾向于使本发明包括本发明化合物的溶剂化及非溶剂化形式。一种溶剂合物类型为水合物。〝水合物〞是溶剂合物的特殊子集，其中溶剂分子为水。溶剂合物通常可作为药理等效物起作用。溶剂合物的制备为此项技术中所知。参见例如M.Caira等J.Pharmaceut.Sci.,93(3):601-611(2004)，其说明氟康唑(fluconazole)与乙酸乙酯及与水的溶剂合物的制备。溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的类似制备说明于E.C.van Tonder等AAPS Pharm.Sci.Tech.,5(1):Article 12(2004)及A.L.Bingham等Chem.Commun.603-604(2001)。制备溶剂合物的典型的非限制性方法可包含将本发明化合物在大于20℃至约25℃的温度下溶解在所欲溶剂(有机物、水或其混合物)中，接着将溶液以足以形成晶体的速率冷却及将晶体以已知的方法分离，例如过滤。可使用分析技术(诸如红外线光谱法)确定溶剂存在于溶剂合物的晶体中。
如本文所使用的术语〝氟化物加成物〞系指具有通式RB(OH)2的硼酸与 KHF2的缩合产物。氟化物加成物的通用结构为：
其中M+为单价阳离子。例如，式I的基团R4-5(其中R10a为-B(OH)2)的氟化物加成物为：
如本文所使用的术语〝羟基酸加成物〞系指具有通式(R)(RO)B-OH的硼酸与具有式HOOC-C(R’)(R")-OH的羟基酸的缩合产物。R’和R"各自独立地选自氢、羧基、任选取代的烷基、芳烷基、氨基烷基、卤代烷基、氰基、(氰基)烷基、(甲酰氨基)烷基、(羧基)烷基或羟烷基等。R’和R"与彼等连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基。非限制性例示的R’/R"基团包括氢、-CH3、-OH、-CH(CH3)2、-CH(CH3)(Et)、-CH2Ph、-CH2CH2SCH3、-CH2CO2H、-CH2CH2CO2H、-(CH2)4NH2、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-CH2Ph-OH、-CH2-咪唑、-CH2SH、-CH2C(O)NH2、-CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-和-CH2CH2OCH2CH2-。在一个实施方式中，R’选自：-CH2Ph、-CO2H、-CH2CO2H和-CH2CONH2。羟基酸加成物的通用结构为：
其中M+为单价阳离子。例如，式I的基团R4-1的羟基酸加成物为：
如本文所使用的术语〝氨基酸加成物〞指具有通式(R)(RO)B-OH的硼酸与天然或非天然D-或L-氨基酸(包括β-氨基酸，例如具有式HOOC-C(R"‘)(R"")-NH2的氨基酸)的缩合产物。适合的非天然氨基酸包括(非限制)下组的对映异构物及消旋物形式：2-甲基缬氨酸、2-甲基丙氨酸、(2-异丙基)-β-丙氨酸、苯基甘氨酸、4-甲基苯基甘氨酸、4-异丙基苯基甘氨酸、3-溴苯基甘氨酸、4-溴苯基甘氨酸、4-氯苯基甘氨酸、4-甲氧基苯基甘氨酸、4-乙氧基苯基甘氨酸、4-羟苯基甘氨酸、3-羟苯基甘氨酸、3,4-二羟苯基甘氨酸、3,5-二羟苯基甘氨酸、2,5-二氢苯基甘氨酸、2-氟苯基甘氨酸、3-氟苯基甘氨酸、4-氟苯基甘氨酸、2,3-二氟苯基甘氨酸、2,4-二氟苯基甘氨酸、2,5-二氟苯基甘氨酸、2,6-二氟苯基甘氨酸、3,4-二氟苯基甘氨酸、3,5-二氟苯基甘氨酸、2-(三氟甲基)苯基甘氨酸、3-(三氟甲基)苯基甘氨酸、4-(三氟甲基)苯基甘氨酸、2-(2-噻吩基)甘氨酸、2-(3-噻吩基)甘氨酸、2-(2-呋喃基)甘氨酸、3-吡啶基甘氨酸、4-氟苯基丙氨酸、4-氯苯基丙氨酸、2-溴苯基丙氨酸、3-溴苯基丙氨酸、4-溴苯基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、3-(2-喹啉基)丙氨酸、3-(9-蒽基)丙氨酸、2-氨基-3-苯基丁酸、3-氯苯基丙氨酸、3-(2-噻吩基)丙氨酸、3-(3-噻吩基)丙氨酸、3-苯基丝氨酸、3-(2-吡啶基)丝氨酸、3-(3-吡啶基)丝氨酸、3-(4-吡啶基)丝氨酸、3-(2-噻吩基)丝氨酸、3-(2-呋喃基)丝氨酸、3-(2-噻唑基)丙氨酸、3-(4-噻唑基)丙氨酸、3-(1,2,4-三唑-1-基)-丙氨酸、3-(1,2,4-三唑-3-基)-丙氨酸、六氟缬氨酸、4,4,4-三氟缬氨酸、3-氟缬氨酸、5,5,5-三氟亮氨酸、2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、3-氯丙氨酸、3-氟丙氨酸、2-氨基-3-氟丁酸、3-氟正亮氨酸、4,4,4-三氟苏氨酸、L-烯丙基甘氨酸、第三-亮氨酸、炔丙基甘氨酸、乙烯基甘氨酸、S-甲基半胱氨酸、环戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、3-羟基正缬氨酸、4-氮杂亮氨酸、3-羟基亮氨酸、2-氨基-3-羟基-3-甲基丁酸、4-硫杂异亮氨酸、阿西维辛(acivicin)、鹅羔胺酸(ibotenic acid)、使君子氨酸(quisqalic acid)、2-二氢茚基甘氨酸、2-氨基异丁酸、2-环丁基-2-苯基甘氨酸、2-异丙基-2-苯基甘氨酸、2-甲基缬氨酸、2,2-二苯基甘氨酸、1-氨基-1-环丙烷羧酸、1-氨基-1-环戊烷羧酸、1-氨基-1-环己烷羧酸、3-氨基-4,4,4-三氟丁酸、3-苯基异丝氨酸、3-氨基-2-羟基-5-甲基己酸、3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸、3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-氟苯基) 丙酸、3-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-硝苯基)丙酸和3-氨基-3-(1-萘基)丙酸。这类非天然氨基酸系于市场上取自以下的市场供货商：包括奥德里奇公司(Aldrich)、西格玛公司(Sigma)、伏路卡公司(Fluka)、兰卡斯特公司(Lancaster)、ICN公司、TCI公司、先进化学技术公司(Advanced ChemTech)、栎木产品公司(OakwoodProducts)、ICC公司(Indofine Chemical Company)、NSC技术公司(NSC Technology)、PCR研究化学公司(PCR Research Chemicals)、巴亨公司(Bachem)、安可罗斯有机公司(AcrosOrganics)、塞尔基公司(Celgene)、生物网络研究公司(Bionet Research)、泰格科学公司(Tyger Scientific)、托克李斯公司(Tocris)、研究加公司(Research Plus)、阿什斯蒂文斯公司(Ash Stevens)、坎托公司(Kanto)、克罗科学公司(Chiroscience)和潘尼苏拉实验室公司(Peninsula Lab)。以下的氨基酸可根据文献程序合成：3,3,3-三氟丙胺酸(Sakai,T.等Tetrahedron 1996,52,233)及3,3-二氟丙胺酸(D’Orchymont,H.Synthesis 1993,10,961)。可用于Z位置上的其它N-保护基包括乙烯基(Ac)、第三丁氧基羰基(Boc)、甲氧基羰基或乙氧基羰基。非限制性例示的R"'/R""基团包括氢、CH3、OH、-CH(CH3)2、-CH(CH3)(Et)、-CH2Ph、-CH2CH2SCH3、-CH2CO2H、-CH2CH2CO2H、-(CH2)4NH2、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-CH2Ph-OH、-CH2-咪唑、-CH2SH、-CH2C(O)NH2和-CH2CH2C(O)NH2。氨基酸加成物的通用结构为：
其中M+为H+或单价阳离子。以实施例方式说明，式I的R4-1基团的氨基酸加成物为：
如本文所使用的〝单价阳离子〞指无机阳离子，诸如但不限于碱金属离子，例如Na+和K+，以及有机阳离子，诸如但不限于铵和经取代的铵离子，例 如NH4+、NHMe3+、NH2Me2+、NHMe3+和NMe4+。
如本文所使用的术语〝微米化〞指使粒子群的尺寸通常缩减至微米规格的处理或方法。
如本文所使用的术语〝微米(micron)〞或〝μm〞指〝微米(micrometer)〞，其为1×10-6米。
在另一方面中，本发明提供包含本发明化合物及一或多种赋形剂的组合物。在一个具体实施方式中，赋形剂包含二甲亚砜或丙酮。在一个实施方式中，组合物包含药学上可接受的赋形剂，以提供〝药学上可接受的组合物〞。在另一实施方式中，组合物包含微米化本发明化合物。在另一实施方式中，药学上可接受的赋形剂包含Miglyol 812、phospholipon90G或聚乙二醇1000琥珀酸生育酚酯或其混合物。在另一实施方式中，医药上可接受的赋形剂基本上由Miglyol 812、phospholipon 90G和聚乙二醇1000琥珀酸生育酚酯所组成。在另一实施方式中，药学上可接受的赋形剂包含在另一实施方式中，药学上可接受的赋形剂包含山梨醇酐单月桂酸酯、羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯、牛磺胆酸钠(sodium taurocholate)、ethocelTM或棕榈酰基-油酰基-磷脂酰胆碱或其混合物。在另一实施方式中，药学上可接受的赋形剂包含氢化大豆卵磷脂。可对本发明化合物与一或多种赋形剂使用本领域技术人员熟知的方法掺合。
在另一实施方式中，赋形剂包含乙醇、异丙醇、丙二醇、苯甲醇、甘油、山梨醇、蔗糖、卡波姆(carbopol)、麦芽糊精、来卡辛(lycasin)(麦芽糖醇)、苯甲酸钠、糖精钠、lutrolE、F、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、柠檬酸、capryol 90、吐温80(聚山梨酸酯80)、 CL-M、硬脂酸聚烃氧酯(polyoxyl stearate)、羟丙基甲基纤维素、 RH 40、 EL、羧甲基纤维素钠(CMC)、瓜尔豆胶、黄原胶、聚乙二醇或聚乙烯基吡咯啶酮，或其混合物。
在另一实施方式中，赋形剂包含 LauroglycolTM 90、PeceolTM、GeleolTM或或其混合物。
在另一实施方式中，赋形剂包含capmul、或或其混合物。
在另一实施方式中，赋形剂包含DYNASAN、IMWITOR(单油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、辛酸甘油酯)、(长链醇)、(Macrogol)、MASSA ESTARINUM(氢化椰油脂酸甘油酯)、MIGLYOL(辛酸/癸酸三酸甘油酯)、Nafol(醇)、WITEPSOL(氢化椰油脂酸甘油酯)或(氢化椰油脂酸甘油酯)，或其混合物。
在另一实施方式中，赋形剂包含羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯(hypromellose acetate succinate)。
在另一实施方式中，赋形剂包含(聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物)。
组合物可含有从0.01％至99重量％的本发明化合物，例如约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约6％，约7％，约8％，约9％或约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，或约95％。任何特定组合物中的含量将取决于有效剂量，即诱导所需基因表达水平的剂量。
在另一方面中，本发明提供微米化的本发明化合物及其组合物。在一个实施方式中，微米化形式的本发明化合物的平均粒径分布为约20微米或更小，例如约19微米，约18微米，约17微米，约16微米，约15微米，约14微米，约13微米，约12微米，或约11微米，或更小。在另一实施方式中，平均粒径分布为约10微米或更小，例如约9微米，约8微米，约7微米，约6微米或约5微米，或更小。在另一实施方式中，平均粒径分布为约5微米或更小，例如约4微米，约3微米，约2微米，或约1微米或更小。在另一实施方式中，平均粒径分布为约1微米或更小，例如约0.9微米，约0.8微米，约0.7微米，约0.6微米，约0.5微米，约0.4微米，约0.3微米，约0.2微米，约0.1微米，约0.09微米，约0.08微米，约0.07微米，约0.06微米，约0.05微米，约0.04微米，约0.03微米，约0.02微米，或约0.01微米或更小。
在另一方面中，本发明提供制造组合物的方法，其包含将本发明化合物或微米化的本发明化合物与一或多种赋形剂掺合。在一个实施方式中，赋形剂为药学上可接受的赋形剂。
在另一方面中，本发明提供调节感兴趣的基因在宿主细胞中的基因表达的方法，其包含将宿主细胞与本发明化合物或其组合物接触。在一个实施方式中，宿主细胞包含编码基因开关的多核苷酸，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域，其中感兴趣的基因的表达程度相对于本发明化合物不存在下的感兴趣的基因的表达程度是增加的。在另一实施方式中，宿主细胞为经分离的宿主细胞。在特定的其它实施方式中，经分离的宿主细胞系由编码基因开关的多核苷酸构建体离体基因修饰(例如，转化、转染或感染)，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在另一实施方式中，将经离体基因修饰的宿主细胞给药对象。在特定的实施方式中，感兴趣的基因的表达在基因开关的控制下，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在另一实施方式中，宿主细胞在对象中，例如动物，例如人。例如，在对象中的一或多种细胞(宿主细胞)可通过将病毒载体给药对象(或经选择的其宿主细胞群)而经历离体基因修饰，其中病毒载体包含编码基因开关的多核苷酸，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在其它的实施方式中，宿主细胞为自哺乳动物对象获得的自体宿主细胞，其中该自体宿主细胞系由编码基因开关的多核苷酸构建体基因修饰，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在另一实施方式中，宿主细胞为同种异体干细胞或免疫细胞，其中同种异体宿主细胞系由编码基因开关的多核苷酸构建体基因修饰，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在另一实施方式中，将本发明化合物作为药学上可接受的组合物给予对象。在另一实施方式中，基因开关包含结合本发明化合物的蜕皮激素受体(EcR)配体结合结构域。在另一实施方式中，基因开关进一步包含第二配体结合结构域，其与结合本发明化合物的第一配体结合结构域(例如，EcR配体结合结构域)二聚化。在一个实施方式中，EcR配体结合结构域与对应的野生型EcR多肽序列相比而包含一或多种氨基酸取代。在另一实施方式中，第二配体结合结构域为视黄酸X受体配体结合域。在另一实施方式中，第二配体结合结构域为野生型昆虫USP(超螺旋蛋白质)。在另一实施方式中，视黄酸X受体(RxR)配体结合结构域为嵌合性视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，嵌合性配体结合域为哺乳动物RxR/无脊椎动物USP嵌合体。在另一实施方式中，宿主细胞进一步包含编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸。
在另一方面中，本发明提供治疗对象的疾病、病症、伤害或病况的方法，其包含将本发明化合物或其组合物给予对象。在一个实施方式中，载体(或两种或多种载体)包含编码基因开关的多核苷酸(或多核苷酸类)，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在一个实施方式中，载体(或载体类)可为DNA或RNA载体。在一个实施方式中，载体(或载体类)可为细胞质体或病毒载体(例如，腺病毒载体或腺相关病毒载体)。在一个实施方式中，将包含编码基因开关的多核苷酸(或多核苷酸类)的载体(或多个载体)给予对象，以治疗对象的疾病、病症、伤害或病况，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在一个实施方式中，在给予本发明化合物之后，感兴趣的基因(GOI)在对象的体内表达，该表达来自包含编码GOI及包含基因开关的多核苷酸(或多核苷酸类)的载体(或多个载体)，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在一个实施方式中，在对象或非人类有机体内的宿主细胞包含编码基因开关的多核苷酸，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。在另一实施方式中，对象为人。在另一实施方式中，疾病、病症、伤害或病况选自：癌症、代谢相关性病症、肾脏病、贫血、自体免疫疾病、眼部病症、血液病症、神经性病症、肺部(肺)病症、风湿性病症、心脏病症、肝(肝脏)病症和传染病。在另一实施方式中，疾病、病症、伤害或病况为癌症。在另一实施方式中，癌症为黑色素瘤。在另一实施方式中，基因开关包含蜕皮激素受体(EcR)配体结合结构域。在另一实施方式中，基因开关还包含第二配体结合结构域，其与结合本发明化合物的第一配体结合域(例如，EcR配体结合域)二聚化。在一个实施方式中，EcR配体结合结构域与对应的野生型EcR多肽序列相比包含一或多种氨基酸取代。在另一实施方式中，第二配体结合结构域为野生型昆虫USP(超螺旋蛋白质)。在另一实施方式中，第二配体结合结构域为视黄酸X受体配体结合域。在另一实施方式中，视黄酸X受体(RxR)配体结合结构域为嵌合性视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，嵌合性配体结合结构域为哺乳动物RxR/无脊椎动物USP嵌合体。在另一实施方式中，宿主细胞还包含编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸。在另一实施方式中，基因开关调节编码IL-12或其亚基的多核苷酸的表达(参见例如US 2011/0268766)。
在另一实施方式中，本发明提供用于治疗对象的疾病、病症、伤害或病况 的本发明化合物或其组合物。
在另一实施方式中，本发明提供用于制造供治疗对象的疾病、病症、伤害或病况的药剂的本发明化合物或其组合物。
在另一方面中，本发明提供包含本发明化合物的试剂盒或包含本发明化合物与一或多种赋形剂的组合物的试剂盒。在一个实施方式中，试剂盒还包含将本发明化合物给予经分离的宿主细胞或对象的用法说明。在另一实施方式中，试剂盒还包含RHEOSWITCHTHERAPEUTIC(参见例如以下的指导手册：" MammalianInducible Expression System(哺乳动物诱导型表达系统),"NEB公司(New England Inc.)，1.3版，2007年11月；Karzenowski,D.等BioTechiques39:191-196(2005)；Dai,X.等Protein Expr.Purif.42:236-245(2005)；Palli,S.R.等Eur.J.Biochem.270:1308-1515(2003)；Dhadialla,T.S.等Annual Rev.Entomol.43:545-569(1998)；Kumar,M.B等J.Biol.Chem.279:27211-27218(2004)；Verhaegent,M.和Christopoulos,T.K.Annal.Chem.74:4378-4385(2002)；Katalam,A.K.,等MolecularTherapy 13:S103(2006)；及Karzenowski,D.等Molecular Therapy 13:S194(2006))。
可将本发明化合物连同其它的药学活性化合物给予对象。本领域技术人员应了解，与本发明化合物联用的药学活性化合物经选择以避免对接受者的不良效果或化合物之间不希望的相互作用。可与本发明化合物联用的其它药学活性化合物的示例是例如AIDS化学治疗剂、氨基酸衍生物、类似物、麻醉药、肛门直肠用产品、制酸剂与排气剂、抗生素、抗凝血剂、解毒药、抗血纤维蛋白溶解剂、抗组织胺、抗发炎剂、抗肿瘤剂、抗寄生虫剂、抗原生动物剂、解热剂、防腐剂、镇痉剂与抗胆碱药、抗病毒剂、食欲抑制剂、关节炎用药、生物反应改质剂、骨骼代谢调节剂、肠排空药、心血管药剂、中枢神经系统刺激剂、脑代谢增强剂、耳垢溶解剂、胆碱酯酶抑制剂、感冒与咳嗽用制剂、集落刺激因子、避孕药、细胞保护剂、牙用制剂、除臭剂、皮肤病药、解毒剂、糖尿病药、诊断剂、腹泻药、多巴胺受体激动剂、电解质、酶与消化药、麦角制剂、生育剂、纤维补充剂、抗眞菌剂、乳溢抑制剂、胃酸分泌抑制剂、胃肠原激剂、促性腺素抑制剂、毛发生长抑制剂、补血剂、出血用药、止血药、组织胺H2受体拮抗剂、激素、高血糖用药、降血脂剂、免疫抑制剂、轻泻药、治痳疯药、 除白血球补佐剂、肺界面活性剂、偏头痛制剂、黏液溶解药、肌肉松弛拮抗剂、肌肉松弛剂、麻醉拮抗剂、鼻喷雾剂、恶心用药、核苷类似物、营养补充品、骨质疏松症制剂、催产素、副交感神经阻滞剂、拟副交感神经剂、巴金森症(Parkinsonism)用药、青霉素佐剂、磷脂质、血小板抑制剂、卟啉症药剂、前列腺素类似物、前列腺素、质子帮浦抑制剂、搔痒病用药、精神作用药、喹啉酮、呼吸刺激剂、唾液刺激剂、盐取代剂、硬化剂、皮肤创伤制剂、戒烟辅助剂、磺酰胺、交感神经阻滞剂、溶血栓剂、图雷特氏(Tourette’s)用药、肿瘤用制剂、结核病制剂、利尿酸药、尿道用药、子宫收缩剂、子宫松弛剂、阴道用制剂、眩晕用药、维生素D类似物、维生素和医疗成像造影剂。在一些实施例中，本发明化合物可用作为药物疗法的佐剂，例如〝关闭〞基因以产生代谢特殊药物的酶。
本发明化合物或其组合物亦可用于农业应用，以控制杀虫性蛋白质(诸如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)(Bt)毒素的表达。此表达可具有组织或植物特异性。另外，特别当还需要控制植物害虫时，可将一或多种杀虫剂与本发明化合物或其组合物联用，从而提供额外的优点及效力，包括与单独施用杀虫剂相比更少的总施用量。当使用与杀虫剂的混合物时，在组合物中的各组份的相对比例取决于各杀虫剂对待处理作物、害虫和/或杂草的相对功效及所需施用率。本领域技术人员应理解，杀虫剂的混合物可提供优点，诸如与单独使用一种杀虫剂相比更宽的活性谱。可与本发明化合物组合成组合物的杀虫剂的示例包括杀真菌剂、除草剂、杀昆虫剂、除螨剂和杀生物剂。
在其它的农业实施方式中，本发明化合物可用以控制一或多种感兴趣的基因(GOI)的表达。示例性GOI包括任何所需表征，不论该表征是否为农艺表征、投入表征(诸如除草剂或杀昆虫剂抗性)、最终消费者(动物或人)营养学上所需的GOI、以及有效处理植物产品的所需GOI。因此，在特定的实施方式中，植物细胞、植物组织、全植物等由编码基因开关的多核苷酸基因修饰，其中一或多种GOI的表达在基因开关的控制下。同样地，在特定的实施方式中，真菌细胞、细菌细胞或酵母细胞由编码基因开关的多核苷酸基因修饰，其中一或多种GOI的表达在基因开关的控制下。
昆虫中的蜕皮激素受体对蜕皮激素类固醇激素(蜕皮激素)及其它的类固醇化合物(诸如松固酮A和黎固酮A)有自然反应。(Graham等Insect Biochemistry and MolecularBiology 37:611-626(2007)；Dinan和Hormann"Ecdysteroid Agonists and Antagonists(蜕皮激素激动剂和拮抗剂)"Comprehensive Molecular Insect Science(《综合分子昆虫科学》)，第1版:197-242,(2005))。具有蜕皮激素受体激动剂活性的二酰基肼类化合物已证明为杀昆虫剂。(参见美国专利案号5,530,028)。
在另一方面中，本发明提供控制昆虫的方法，例如减少或预防昆虫蔓延或杀死昆虫，该方法包含将昆虫或其栖息处与杀昆虫有效量的本发明化合物或其组合物接触。在另一实施方式中，本发明化合物或其组合物具有对抗下列者的杀昆虫活性：
1)来自鳞翅目(鳞翅目(Lepidoptera))的昆虫，例如球菜夜蛾(Agrotisypsilon)、芜菁夜蛾(Agrotis segetum)、棉树叶虫(Alabama argillacea)、黎豆夜蛾(Anficarsia gemmatalis)、苹实巢蛾(Argyresthia conjugella)、丫纹夜蛾(Autographagamma)、松尺蠖(Bupalus piniarius)、枞卷叶蛾(Cacoecia murinana)、苹小卷叶蛾(Capuareticulana)、冬尺蛾(Cheimatobia brumata)、云杉卷叶蛾(Choristoneura fumiferana)、西方云杉卷叶蛾(Choristoneura occidentalis)、粟夜蛾(Cirphis unipuncta)、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、欧洲松毛虫(Dendrolimus pini)、瓜野螟(Diaphania nitidalls)、西南玉米螟(Diatraea grandiosella)、埃及钻夜蛾(Earias insulana)、南美玉米苗斑螟(Elasmopalpus lignosellus)、葡萄与苹果卷叶蛾(Eupoecilia ambiguella)、欧洲松梢小卷蛾(Evetria bouliana)、粒肤地老虎(Feltia subterranea)、大蜡蛾(Galleriamellonella)、李小食心虫(Grapholitha funebrana)、梨小食心虫(Grapholithamolesta)、西红柿夜蛾(Hellothis armigera)、烟草夜蛾(Hellothis virescens)、亚麻夜蛾(Heliothis zea)、菜心螟(Hellula undalis)、暗点赫尺蛾(Hibernia defoliaria)、美国白蛾(Hyphantria cunea)、苹果巢蛾(Hyponomeuta malinellus)、蕃茄蠹蛾(Keiferialycopersicella)、铁杉尺蠖(Lambdina fiscellaria)、甜菜夜蛾(Laphygma exigua)、咖啡潜夜蛾(Leucoptera coffeella)、旋纹潜叶蛾(Leucoptera scitella)、斑幕潜叶蛾(Lithocolletis blancardella)、葡萄小卷叶蛾(Lobesia botrana)、草地螟(Loxostegesticticalis)、舞毒蛾(Lymantria dispar)、松针毒蛾(Lymantria monacha)、桃潜叶蛾(Lyonetia clerkella)、天幕粘叶蛾(Malacosoma neustria)、甘蓝夜蛾(Mamestrabrassicae)、黄杉 毒蛾(Orgyia pseudotsugata)、欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalls)、冬夜蛾(Panolls flammea)、红铃虫(Pectinophora gossypiella)、杂色夜蛾(Peridromasaucia)、圆黄掌舟蛾(Phalera bucephala)、马铃薯蠹蛾(Phthorimaea operculella)、柑桔潜叶蛾(Phyllocnistis citrella)、大菜粉蛾(Pieris brassicae)、苜蓿绿夜蛾(Plathypena scabra)、小菜蛾(Plutella xylostella)、大豆夜蛾(Pseudoplusiaincludens)、松梢卷叶蛾(Rhyacionia frustrana)、马铃薯块茎蛾(Scrobipalpulaabsoluta)、麦蛾(Sitotroga cerealella)、葡萄长须卷叶蛾(Sparganothis pilleriana)、草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)、灰翅夜蛾(Spodoptera littoralls)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)、松异周蛾(Thaumatopoea pityocampa)、栎绿卷叶蛾(Tortrixviridana)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)和云杉小卷叶蛾(Zeiraphera Canadensis)；
2)甲虫(鞘翅目(Coleoptera))，例如梨长吉丁(Agrilus sinuatus)、具条叩甲(Agriotes lineatus)、暗纹叩甲(Agriotes obscurus)、马铃薯鳃金龟(Amphimallussolstitialis)、异形小蠹(Anisandrus dispar)、棉铃象甲(Anthonomus grandis)、苹果花象甲(Anthonomus pomorum)、优茧蜂侧刺叶蚤(Aphthona euphoridae)、点击甲虫(Athoushaemorrhoidals)、甜菜隐食甲(Atomaria linearis)、松纵坑切梢小蠹(Blastophaguspiniperda)、粗纹小蜂(Blitophaga undata)、蚕豆象(Bruchus rufimanus)、豌豆象(Bruchus pisorum)、欧洲兵豆象(Bruchus lentis)、苹果卷叶象甲(Byctiscus betulae)、甜菜大龟甲(Cassida nebulosa)、豆叶甲(Cerotoma trifurcata)、金花金龟(Cetoniaaurata)、甘蓝荚象甲(Ceuthorrhynchus assimilis)、油菜龟象甲(Ceuthorrhynchusnapi)、甜菜茎跳甲(Chaetocnema tibialis)、烟草金针虫(Conoderus vespertinus)、天门冬叶甲(Crioceris asparagi)、叩头虫亚种(Ctenicera ssp.)、长角叶甲(Diabroticalongicornis)、黄瓜半星叶甲(Diabrotica semipunctata)、十二星瓜叶甲(Diabrotica12-punctata)、巴西叶甲(Diabrotica speciosa)、玉米根叶甲(Diabrotica virgifera)、墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis)、烟草跳甲(Epitrix hiirtpennis)、棉籽灰象(Eutinobothrus brasiilensis)、松树皮象(Hylobius abietis)、埃及苜蓿象甲(Hyperabrunneipennis)、苜蓿叶象甲(Hypera postica)、云杉八齿小蠹(Ips typographus)、具条负泥虫(Lema bilineata)、黑角负泥虫(Lema melanopus)、马铃薯甲虫(Leptinotarsadecemlineata)、甜菜金针虫(Limonius californicus)、稻象甲(Lissorhoptrusoryzophilus)、芦苇叩头虫(Melanotus communis)、油菜露尾甲(Meligethes aeneus)、忽布鳃角金龟(Melolontha hippocastani)、欧洲鳃金龟(Melolontha melolontha)、稻负泥虫(Oulema oryzae)、葡萄黑耳喙象(Otiorrhynchus sulcatus)、草莓根象甲(Otiorrhynchus ovatus)、辣根猿叶甲(Phaedon cochleariae)、梨切叶象(Phyllobiuspyri)、油菜蓝跳甲(Phyllotreta chrysocephala)、金龟属(Phyllophaga sp.)、犀角金龟(Phyllopertha horticola)、大豆淡足跳甲(Phyllotreta nemorum)、黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata)、日本丽金龟(Popillia japonica)、豌豆叶象甲(Sitonalineatus)和谷象(Sitophilus granaria)；
3)蝇、蚊(双翅目(Diptera))，例如埃及伊蚊(Aedes aegypti)、白纹伊蚊(Aedesalbopictus)、剌扰伊蚊(Aedes vexans)、墨西哥果实蝇(Anastrepha ludens)、五斑按蚊(Anopheles maculipennis)、灾难按蚊(Anopheles crucians)、淡色按蚊(Anophelesalbimanus)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)、泛生按蚊(Anopheles freeborni)、白踝按蚊(Anopheles leucosphyrus)、微小按蚊(Anopheles minimus)、四斑按蚊(Anophelesquadrimaculatus)、红头丽蝇(Calliphora vicina)、地中海果实蝇(CeratitisCapitata)、蛆症金蝇(Chrysomya bezziana)、螺旋金蝇(Chrysomya hominivorax)、腐败锥蝇(Chrysomya macellaria)、中室斑虻(Chrysops discails)、静斑虻(Chrysopssilacea)、大西洋斑虻(Chrysops allanticus)、螺旋蝇(Cochliomyla hominivorax)、高粱瘿蚊(Contarinia sorghicola)、嗜人瘤蝇(Cordylobia anthropophaga)、毛库蠓(Culicoides furens)、尖音库蚊(Culex pipiens)、黑须库蚊(Culex nigripalpus)、致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)、跗斑库蚊(Culex tarsalis)、纯色脉毛蚊(Culisetainornata)、黑尾脉毛蚊(Culiseta melanura)、瓜实蝇(Dacus cucurbitae)、橄榄实蝇(Dacus oleae)、芸苔荚瘿蚊(Dasineura brassicae)、葱地种蝇(Delia antique)、麦地种蝇(Delia coarctata)、灰地种蝇(Delia platura)、甘蓝地种蝇(Della radicum)、人肤蝇(Dermatobia hominis)、黄腹厕蝇(Fannia canicularis)、三点禾蝇(GeomyzaTripunctata)、马肠胃蝇(Gasterophilus intestinalis)、刺舌蝇(Glossinamorsiftans)、须舌蝇(Glossina palpalis)、引舌蝇(Glossina fuscipes)、胶舌蝇(Glossina tachinoides)、东方臂蝇(Haematobia irritans)、桃红瘿蚊(Haplodiplosisequestris)、潜蝇属(Hippelates spp.)、 种蝇(Hylemyia platura)、纹皮蝇(Hypodermalineata)、急流细蠓(Leptoconops torrens)、蔬菜斑潜蝇(Liriomyza sativae)、非洲菊斑潜蝇(Liriomyza trifolii)、羊绿蝇(Lucilia caprina)、铜绿蝇(Lucilia cuprina)、丝光绿蝇(Lucilia sericata)、寡毛蝇(Lycoria pectoralis)、曼蚊(Mansonia titillanus)、黑森瘿蚊(Mayetiola destructor)、家蝇(Musca domestica)、厩腐蝇(Muscinastabulans)、羊鼻蝇(Oestrus ovis)、禾蝇(Opomyza florum)、瑞典麦杆蝇(Oscinellafrit)、甜菜潜叶蝇(Pegomya hysocyami)、葱蝇(Phorbia antiqua)、甘蓝种蝇(Phorbiabrassicae)、麦种蝇(Phorbia coarctata)、银足白蛉(Phlebotomus argentipes)、哥伦比亚鳞蚊(Psorophora columbiae)、胡萝卜茎蝇(Psila rosae)、异色鳞蚊(Psorophoradiscolor)、混合墨蚊(Prosimullum mixtum)、樱桃实蝇(Rhagoletis Cerasi)、苹果实蝇(Rhagoletis pomonella)、红尾肉蝇(Sarcophaga haemorrhoidalis)、肉蝇属(Sarcophagasp.)、带蚋(Simulium vittatum)、厩刺蝇(Stomoxys calcitrans)、牛虻(Tabanusbovinus)、黑虻(Tabanus atratus)、具条牛虻(Tabanus lineola)与拟原虻(Tabanussimilis)、沼泽大蚊(Tipula oleracea)和欧洲大蚊(Tipulapaludosa)；
4)蓟马(缨翅目(Thysanoptera))，例如兰花蓟马(Dichromothrips corbetti)、蓟马亚种(Dichromothrips ssp.)、褐花蓟马(Frankliniella fusca)、西花蓟马(Frankllniella occidentalls)、东方花卉蓟马(Frankllniella tritici)、柑桔蓟马(Scirtothrlps citri)、稻蓟马(Thrips olyzae)、南黄蓟马(Thrips palmi)和棉蓟马(Thrips tabaci)；
5)白蚁(等翅目(Isoptera))，例如干木白蚁(Calotermes flavicollis)、欧美散白蚁(Leucotermes flavipes)、南美异白蚁(Heterotermes aureus)、黄肢散白蚁(Reticulltermes flavipes)、南方散白蚁(Retfculltermes virginicus)、南欧网纹散白蚁(Reticulltermes lucifugus)、纳塔尔白蚁(Termes natalensis)和家白蚁(Coptotermes formosanus)；
6)蟑螂(蟑螂目(Blattaria)-蟑螂科(Blattodea))，例如德国蟑螂(Blattellagermanica)、亚洲蟑螂(Blattella asahinae)、美洲蟑螂(Periplaneta americana)、日本蟑螂(Periplaneta japonica)、褐色蟑螂(Periplaneta brunnea)、黑胸蟑螂(Periplanetafuligginosa)、澳洲蟑螂(Periplaneta australasiae)和东方蟑螂(Blatta orientalis)；
7)纯种虫子(半翅目(Hemiptera))，例如拟缘蝽(Acrosternum hilare)、麦长蝽(Blissus leucopterus)、烟草小盲蝽(Cyrtopeltis notatus)、赤星蝽(Dysdercuscingulatus)、棉红蝽(Dysdercus intermedius)、麦扁盾蝽(Eurygaster integriceps)、棉蝽(Euschistus impictivenfris)、叶足缘蝽(Leptoglossus phyllopus)、美国牧草盲蝽(Lygus llneolaris)、牧草盲蝽(Lygus pratensis)、稻绿蝽(Nezara viriduia)、方背皮蝽(Piesma quadrata)、稻蝽(Solubea insularis)、红肩蝽(Thyanta perditor)、红豆蚜(Acyrthosiphon onobrychis)、落叶松球蚜(Adelges laricis)、鼠李马铃薯蚜(Aphidulanasturti)、蚕豆蚜(Aphis fabae)、草莓根蚜(Aphis forbesi)、苹果蚜(Aphis pomi)、棉蚜(Aphis gossypii)、茶藨子蚜(Aphis grossulariae)、醋栗蚜(Aphis schneideri)、芹菜蚜(Aphis spiraecola)、接骨木蚜(Aphis sambuci)、豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)、马铃薯蚜(Aulacofthum solani)、银叶粉虱(Bemisia argentifolii)、飞廉短尾蚜(Brachycauduscardui)、光管舌尾蚜(Brachycaudus helichrysi)、桃黑短尾蚜(Brachycauduspersicae)、李短尾蚜(Brachycaudus prunicola)、菜蚜(Brevicoryne brassicae)、角钉毛蚜(Capiftophorus horni)、棉花方翅网蝽(Cerosipha gossypii)、草莓毛管蚜(Chaetosiphon fragaefolii)、茶藨隐瘤额蚜(Cryptomyzus ribis)、高加索椎球蚜(Dreyfusia nordmannianae)、云杉椎球蚜(Dreyfusia piceae)、根瘤圆尾蚜(Dysaphisradicola)、拟塘鹅蚜(Dysaulacorthum pseudosolani)、车前圆尾蚜(Dysaphisplantaginea)、梨西圆尾蚜(Dysaphis pyri)、蚕豆微叶蝉(Empoasca fabae)、桃粉蚜(Hyalopterus pruni)、茶藤苦菜蚜(Hyperomyzus lactucae)、麦长管蚜(Macrosiphumavenae)、马铃薯长管蚜(Macrosiphum euphorbiae)、蔷薇长管蚜(Macrosiphon rosae)、巢菜修尾蚜(Megoura viciae)、高粱蚜(Melanaphis pyrarius)、麦无网长管蚜(Metopolophium dirhodum)、桃蚜(Myzus persicae)、冬葱瘤额蚜(Myzus ascalonicus)、樱桃黑瘤额蚜(Myzus cerasi)、桃卷叶蚜(Myzus varians)、蒿苣蚜(Nasonovia ribis-nigri)、褐稻虱(Nilaparvata lugens)、莴苣根瘿绵蚜(Pemphigus bursarius)、甘蔗扁角飞虱(Perkinsiella saccharicida)、蛇麻疣额蚜(Phorodon humuli)、苹木虱(Psyllamall)、梨木虱(Psylla piri)、冬葱缢瘤蚜(Rhopalomyzus ascalonicus)、玉米缢管蚜(Rhopalosiphum maidis)、稻麦蚜(Rhopalosiphum padi)、苹草缢管蚜(Rhopalosiphuminserfum)、马 拉圆尾蚜梨砧草蚜(Sappaphis mala)、苹红扎圆尾蚜(Sappaphis mali)、麦二叉蚜(Schizaphis graminum)、榆梨棉蚜(Schizoneura lanuginosa)、麦长管蚜(Sitobion avenae)、温室白粉虱(Trialeurodes vaporariorum)、橘二岔蚜(Toxopteraaurantiiand)、葡萄根瘤蚜(Viteus vitifolli)、温带臭虫(Cimex lectularius)、热带臭虫(Cimex hemipterus)、老猎椿象(Reduvius senilis)、锥蝽属(Triatoma spp.)及轮背猎蝽(Arilus critatus)；
8)蚂蚁、蜜蜂、黄蜂、锯蜂(膜翅目(Hymenoptera))，例如黄翅菜叶蜂(Athaliarosae)、大头切叶蚁(Atta cephalotes)、卡培古鲁切叶蚁(Atta capiguara)、大头切叶蚁(Atta cephalotes)、光亮切叶蚁(Afta laevigata)、强壮切叶蚁(Atta robusta)、六孔切叶蚁(Atta sexdens)、德州切叶蚁(Atta texana)、举尾蚁属(Crematogaster spp.)、李小叶蜂(Hoplocampa minuta)、苹实叶蜂(Hoplocampa testudinea)、小黄家蚁(Monomoriumpharaonls)、热带火蚁(Solenopsis geminata)、红火蚁(Solenopsis invicta)、黑火蚁(Solenopsis richteri)、南方火蚁(Solenopsis xyloni)、红收获蚁(Pogonomyrmexbarbatus)、加州收获蚁(Pogonomyrmex californicus)、热带大头家蚁(Pheidolemegacephala)、西方蚁蜂(Dasymutilla occidentalis)、熊蜂属(Bombus spp.)、黄胡蜂(Vespula squamosa)、常见黄胡蜂(Paravespula vulgaris)、树黄胡蜂(Paravespulapennsylvanica)、德国黄胡蜂(Paravespula germanica)、白斑脸黄胡蜂(Dolichovespulamaculata)、黄边胡蜂(Vespa crabro)、赭色马蜂(Polistes rubiginosa)、佛罗里达弓背蚁(Camponotus floridanus)和阿根廷蚁(Linepithema humile)；
9)蟋蟀、蝗虫、蚱蜢(直翅目(Orthoptera))，例如家蟋蟀(Acheta domestica)，欧洲蝼蛄(Gryllotalpa gryllotalpa)，飞蝗(Locusta migratoria)，双带蚱蜢(Melanoplusbivittatus)，赤腿蚱蜢(Melanoplus femurrubrum)，墨西哥蚱蜢(Melanoplusmexicanus)，迁徙蚱蜢(Melanoplus sanguinipes)，落矶山蚱蜢(Melanoplus spretus)，红翅蝗(Nomadacris septemfasciata)，南美沙漠蝗(Schistocerca americans)，非洲沙漠蝗(Schistocerca gregaria)，摩洛哥戟纹蝗(Dociostaurus maroccanus)，温室沙螽(Tachycines asynamorus)，塞内加尔小车蝗(Oedaleus senegalensis)，臭腹腺蝗(Zonozerus variegatus)，非洲蔗蝗(Hieroglyphus daganensis)，印度黄檀蝗(Kraussaria angulifera)，意大 利蝗(Calliptamus italicus)，澳洲疫蝗(Chortoicetesterminifera)和南非蝗(Locustana pardalina)；
10)蛛形纲(Arachnoidea)，诸如蜘蛛类(arachnids)(蜱螨目(Acarina))，例如软蜱科(Argasidae)、硬蜱科(Ixodidae)及疥螨科(Sarcoptidae)家族，诸如美洲花蜱(Amblyomma americanum)、彩饰花蜱(Amblyomma variegatum)、海湾蜱(Ambryommamaculatum)、波斯锐缘蜱(Argas persicus)、具环牛蜱(Boophilus annulatus)、消色牛蜱(Boophilus decoloratus)、微小牛蜱(Boophilus microplus)、森林革蜱(Dermacentorsilvarum)、安氏革蜱(Dermacentor andersoni)、变异革蜱(Dermacentor variabllis)、长蝝璃眼蜱(Hyalomma truncatum)、蓖子硬蜱(Ixodes ricinus)、红硬蜱(Ixodesrubicundus)、肩突硬蜱(Ixodes scapularis)、全环硬蜱(Ixodes holocyclus)、太平洋硬蜱(Ixodes pacificus)、毛白钝缘蜱(Ornithodorus moubata)、赫母软蜱(Ornithodorushermsi)、图塔软蜱(Ornithodorus turicata)、柏氏禽刺螨(Ornithonyssus bacoti)、耳残喙蜱(Otobius megnini)、鸡皮刺螨(Dermanyssus gallinae)、羊痒螨(Psoroptes ovis)、棕色犬壁虱(Rhipicephalus sanquineus)、具尾扇头蜱(Rhipicephalusappendiculatus)、外翻扇头蜱(Rhipicephalus evertsi)、疥螨(Sarcoptes scabiei)，及瘿螨科(Eriophyidae spp.)，诸如苹刺瘿螨(Aculus schlechtendali)、橘锈螨(Phyllocoptrata oleivora)和柑芽瘿螨(Eriophyes sheldoni)；跗线螨科(Tarsonemidaespp.)，诸如仙客来细螨(Phytonemus pallidus)和多食跗线螨(Polyphagotarsonemuslatus)；伪叶螨科(Tenuipalpidae spp.)，诸如紫伪叶螨(Brevipalpus phoenicis)；叶螨科(Tetranychidae spp.)，诸如朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)、神泽氏叶螨(Tetranychus kanzawai)、太平洋红叶螨(Tetranychus pacificus)、棉红叶螨(Tetranychus telarius)和棉叶螨(Tetranychus urticae)、苹果全爪螨(Panonychusulmi)、橘全爪螨(Panonychus citri)及草地小爪螨(Oligonychus pratensis)；蜘蛛目(Araneida)，例如黑寡妇球腹蛛(Lafrodectus mactans)和棕色隐遁蜘蛛(Loxoscelesrecluse)；
11)蚤(蚤目(Siphonaptera))，例如猫栉头蚤(Ctenocephalides felis)、犬栉头蚤(Ctenocephalides canis)、印鼠客蚤(Xenopsylla cheopis)、人蚤(Pulex irriftans)、穿皮潜蚤(Tunga penefrans)和具带病蚤(Nosopsyllus fasciatus)；
12)衣鱼(silverfish)、家衣鱼(firebrat)(缨尾目(Thysanura))，例 如衣鱼(Lepisma saccharins)和斑衣鱼(Thermobia domestica)；
13)唇足类(centipedes)(唇足亚纲(Chilopoda))，例如蚰蜒(Scutigeracoleoptrata)；
14)千足虫(倍足纲(Diplopoda))，例如钩虫属(Narceus spp.)；
15)蠼螋(Earwigs)(革翅目(Dermaptera))，例如欧洲球螋(forifculaauricularia)；和/或
16)虱(虱毛目(Phthiraptera))，例如头虱(Pediculus humanus capitis)、体虱(Pediculus humanus corporis)、耻阴虱(Pthirus pubis)、牛血虱(Haematopinuseurysternus)、猪血虱(Haematopinus suis)、牛颚虱(Linognathus vituli)、牛毛虱(Bovicola bovis)、鸡短角羽虱(Menopon gallinae)、鸡体虱(Menacanthus stramineus)和水牛盲虱(Solenopotes capillatus)。
在另一实施方式中，本发明化合物或其组合物具有对抗双翅目、半翅目及/或鳞翅目昆虫的杀昆虫活性。在另一实施方式中，本发明化合物或其组合物具有对抗鳞翅目昆虫的杀昆虫活性。在另一实施方式中，本发明化合物或其组合物具有对抗半翅目昆虫的杀昆虫活性。
本发明化合物或其组合物可通过通常使用的方法而以水性喷雾剂形式施用于植物叶子，诸如常规的高排量液压喷雾剂(high-liter hydraulic spray)、低排量(low-liter)喷雾剂、喷气和空中喷雾剂。施用稀释及施用率取决于所使用的设备类型、施用的方法和频率及配体施用率。可能需要包括额外的佐剂于喷雾罐中。这类佐剂包括表面活性剂、分散剂、散布剂、黏着剂、消泡剂、乳化剂和其它类似材料，这类说明于全部皆由MDMC出版公司(McCutcheon Division of MC Publishing Company)(新泽西州)于每年出版的McCutcheon’s Emulsifiers and Detergents(《麦氏乳化剂和去垢剂》)，McCutcheon’sEmulsifiers and Detergents/Functional Materials(《麦氏乳化剂和去垢剂/功能性材料》)以及McCutcheon’s Functional Materials(《麦氏功能性材料》)中。本发明化合物或其组合物也可在施用前与肥料或施肥材料混合。本发明化合物或其组合物与固体施肥材料也可在混合或调合设备中掺合，或可将这类与肥料并入颗粒调配物中。可使用适合于待处理作物和杂草的任何相对比例的肥料。本发明化合物或其组合物通常占施肥组合物的从5％至50％。这类组合物提供的施肥材料促进所需的植物快速生长并同时控制基因表达。
如本文所使用的术语〝治疗有效量〞指足以治疗疾病、病况、伤害或病症的一或多种症状，或预防疾病、病况、伤害或病症的进展，或引起疾病、病况、伤害或病症缓解的本发明化合物的量。例如，关于癌症的治疗，在一个实施方式中，治疗有效量指降低肿瘤生长速率、降低肿瘤质量、减少转移数量、延长肿瘤发展的时间或增加存活时间达到至少约5％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，或至少约100％的本发明化合物的量。
如本文所使用的术语〝杀昆虫有效量〞指足以控制昆虫的本发明化合物的量，例如减少或预防昆虫蔓延或杀死昆虫。例如，杀昆虫有效量指诱发昆虫过早蜕皮及死亡的本发明化合物的量。
术语〝一个〞或〝一种〞系指一个(种)或一个(种)以上。
如本文所使用的术语〝约〞包括所引用的数字±10％。因此〝约10〞指9至11。
如本文所使用的术语〝赋形剂〞指组合物中除了本发明化合物以外的任何成分。赋形剂通常为添加至组合物中以促进本发明化合物的处理、处置、给予等的惰性物质。有用的赋形剂包括但不限于佐剂、抗黏着剂、黏合剂、载剂、崩散剂、填充剂、调味剂、着色剂、稀释剂、润滑剂、助滑剂、保存剂、吸收剂、溶剂、界面活性剂和甜味剂。
常规的药学赋形剂为本领域技术人员所熟知。本领域技术人员应理解，可将各种广泛的药学上可接受的赋形剂用在于本发明化合物的掺合物中，包括Handbook ofPharmaceutical Excipients(《药学赋形剂手册》)，药学出版社(Pharmaceutical Press)第4版(2003)，及Remington:The Science and Practice of Pharmacy(《雷明顿：药剂学科学和实践》)，LWW公司(Lippincott Williams &Wilkins)，第21版(2005)中所示的那些。在一个实施方式中，组合物包含下列赋形剂中的一种或多种：水、Labrasol、Lauroglycol 90、Phosal 53MCT、Miglyol、 EL、聚山梨醇酯80、Crillet 1HP、肉豆蔻酸异丙酯、油酸及/或PEG 400NF。在另一实施方式中，组合物包含脂质。
药学上可接受的载剂包括填充剂，诸如醣类(例如，海藻糖、乳糖或蔗糖)、 甘露醇或山梨醇、纤维素制剂及/或磷酸钙(例如，磷酸三钙或磷酸氢钙)，以及黏合剂，诸如淀粉糊(使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉)、白明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯啶酮。若必要时，可添加崩散剂，诸如上述淀粉及亦为羧甲基-淀粉、交联的聚乙烯基吡咯啶酮、琼脂或藻酸或其盐，诸如藻酸钠。辅助剂为流动调节剂和润滑剂，例如硅石、滑石、硬脂酸或其盐，诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。在一个具体实施方式中，糖衣锭核心配备有适合的包衣，若必要时，其具有抗胃液性。就此目的而言，可使用经浓缩的糖溶液，其可任选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯基吡咯啶酮、聚乙二醇和/或二氧化肽、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了制造抗胃液的包衣，使用适合的纤维素制剂的溶液，诸如乙酰基纤维素酞酸酯或羟丙基甲基纤维素酞酸酯。可将染料或颜料添加至锭剂或糖衣锭包衣中，例如用于识别或为了使活性化合物剂量的组合特征化。
可经口服使用的医药制剂包括由白明胶制成的推压嵌合胶囊(push-fitcapsule)，以及由白明胶和增塑剂(诸如甘油或山梨醇)制成的软密封胶囊。推压嵌合胶囊可含有呈颗粒或纳米粒子形式的活性化合物，其可任选地与填充剂(诸如乳糖)、黏合剂(诸如淀粉)及/或润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)及任选的稳定剂混合。在一个实施方式中，将活性化合物任选地与稳定剂溶解或悬浮在适合的液体中，诸如脂肪油或液态石蜡。
脂肪油可包含单-、二-或三甘油酯。单-、二-及三甘油酯包括那些自C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18、C20和C22酸的衍生物。例示的二甘油酯特别包括甘油二油酸酯、甘油二棕榈酸酯(dipalmitolein)和混合型羊脂-羊蜡(caprylin-caprin)二甘油酯。较佳的三甘油酯包括植物油、鱼油、动物脂肪、氢化植物油、部分氢化植物油、合成的三甘油酯、经改性的三甘油酯、经分馏的三甘油酯、中和长链三甘油酯、建构的三甘油酯及其混合物。示例性三甘油酯包括：杏仁油、巴巴苏油(babassu oil)、琉璃苣油(borage oil)、黑加仑籽油(blackcurrant seed oil)、菜籽油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉花籽油、月见草油、葡萄籽油、花生油(groundnut oil)、芥籽油、橄榄油、棕榈油、棕榈核油、花生油(peanut oil)、油菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、大豆油、葵花油、氢化蓖麻油、氢化椰子油、氢化棕榈油、氢化大豆油、氢化植物 油、氢化棉花籽和蓖麻油、部分氢化大豆油、部分大豆和棉花籽油、甘油三己酸酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、甘油三-十一酸酯、甘油三月桂酸酯、甘油三油酸酯、甘油三亚麻油酸酯、甘油三次亚麻油酸酯、甘油三辛酸酯/癸酸酯、甘油三辛酸酯/癸酸酯/月桂酸酯、甘油三辛酸酯/癸酸酯/亚麻油酸酯、及甘油三辛酸酯/癸酸酯/硬脂酸酯。
在一个实施方式中，三甘油酯为以商品名称LABRAFAC CC取得的中链三甘油酯。其它的三甘油酯包括中性油，例如中性植物油，特别为经分馏的椰子油，诸如已知并可以商品名称MIGLYOL购得者，包括以下产品：MIGLYOL810、MIGLYOL 812、MIGLYOL 818和CAPTEX355。其它的三甘油酯为辛酸-癸酸三甘油酯，诸如已知并可以商品名称MYRITOL购得者，包括MYRITOL813的产品。更多的此类别的三甘油酯为CAPMUL MCT、200、300、800、NEOBEE M5和MAZOL 1400。
包含三甘油酯的药学组合物还可包含亲脂性和/或亲水性表面活性剂，其在以水性溶剂溶解时可形成澄清溶液。一种这类表面活性剂为聚乙二醇1000琥珀酸生育酚酯(维生素E TPGS)。这类组合物的示例说明于美国专利6,267,985中。
在另一实施方式中，药学上可接受的载剂包含LABRASOL(Gattefosse SA)，其为PEG-8辛酸/癸酸甘油酯。在另一实施方式中，药学上可接受的载剂包含PL90G、维生素ETPGS和Miglyol 812N。
如本文所使用的术语〝治疗〞(〝treat〞、〝treating〞或〝treatment〞)包含以改善或治愈疾病、病症、伤害或病况为目的而将本发明化合物或其组合物给予对象，包括先行性治疗(preemptive treatment)。
如本文所使用的术语〝对象〞系指昆虫、植物、水藻或动物，例如人类或兽医学动物，例如牛、羊、猪、马、狗或猫。在一个实施方式中，对象的宿主细胞包含编码基因开关的多核苷酸，该基因开关包含结合本发明化合物的配体结合结构域。
如本文所使用的术语〝感兴趣的基因〞为希望表达且编码肽、蛋白质或多肽的任何基因。
如本文所使用的术语〝基因表达〞指DNA转录成信使RNA(mRNA)和/或mRNA翻译成氨基酸序列。
如本文所使用的术语〝调节基因表达〞指响应本发明化合物与结合本发明化合物的配体结合结构域接触的基因表达程度相对于不与结合本发明化合物的配体结合结构域接触的基因表达程度为增加的。
如本文所使用的术语〝基因开关〞指肽、蛋白质或多肽复合物，其功能为(a)结合本发明化合物(即配体)，及(b)以配体依赖方式调节感兴趣的基因的转录。基因开关可用于各种应用，诸如基因疗法、在细胞中生产蛋白质、基于细胞的高通量筛选试验、功能性基因组、及转基因植物和动物的表征的调节。
在一个具体实施方式中，编码基因开关的多核苷酸为重组多核苷酸，亦即经分子生物操纵而工程化的多核苷酸，以编码基因开关。在另一具体实施方式中，重组多核苷酸为合成的多核苷酸。参见例如美国专利申请发表案号2012/0322148、2012/0185954和2011/0059530。
如本文所使用的术语〝基因〞指包含编码功能性分子的核苷酸的多核苷酸，该功能性分子包括仅由转录所产生者(例如，生物活性RNA物种)或由转录及翻译所产生者(例如，多肽)。术语〝基因〞包含cDNA和基因体DNA核酸。术语〝基因〞也指表达特异性RNA、蛋白质或多肽的核酸片段，包括在该编码序列之前(5’非-编码序列)及之后(3’非编码序列)的调节序列。〝内源基因(native gene)〞指在自然中发现具有其本身的调节序列的基因。〝嵌合性基因〞系指非内源基因的任何基因，其包含不共同于自然中发现的调节和/或编码序列。据此，嵌合性基因可能包含不同来源衍生的调节序列和编码序列，或相同来源衍生但以不同于自然中发现的方式排列的调节序列和编码序列。嵌合性基因可包含不同来源衍生的编码序列和/或不同来源衍生的调节序列。〝内源性基因〞指在有机体的基因体中于其天生位置上的内源基因。〝外来〞基因或〝异源性〞或〝外源性〞基因指正常不在宿主有机体内发现，但通过基因转移而引入宿主有机体内的基因。外来基因可包含插入非天生有机体内的内源基因，或嵌合性基因。〝转基因〞为通过转化程序而引入基因组内的基因。
在一个实施方式中，将本发明化合物以组合物形式给予经分离的宿主细胞或对象。在另一实施方式中，将本发明化合物以药学上可接受的组合物形式给予经分离的宿主细胞或对象。
如本文所使用的术语〝与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化〞指选择性蛋白质-蛋白质相互作用。
在一个实施方式中，本发明化合物在细胞基因开关试验中的基因开关功效或〝EC50〞为约20μM或更小，约10μM或更小，约5μM或更小，约3μM或更小，约2μM或更小，约1μM或更小，约500nM或更小，约300nM或更小，约200nM或更小，或约100nM或更小，例如约75nM，约50nM，约25nM，约15nM，约10nM，约9nM，约8nM，约7nM，约6nM，约5nM，约4nM，约3nM，约2nM，约1nM，约0.5nM或更小。测量经基因开关调节的基因表达的活体外试验的示例为本领域技术人员所熟知。参见例如Karzenowski等BioTechniques 39:191-200(2005)。
如本文所使用的〝EC50〞为〝半最大有效浓度〞，其指诱导经基因开关调节的多核苷酸(编码感兴趣的基因)表达变化的本发明化合物的浓度，其是在基准的表达程度与特定的暴露时间之后的最大表达程度之间的中点。
如本文所使用的术语〝结合本发明化合物的配体结合结构域〞指选择性结合本发明化合物的氨基酸序列。在本文所公开的方法中，本发明化合物与配体结合结构域结合，例如蜕皮激素受体配体结合结构域，其为调节编码感兴趣的基因的多核苷酸序列的表达的配体依赖性转录激活复合物的一部分。因此，感兴趣的基因的表达是以配体(本发明化合物)依赖性方式调节。
在一个实施方式中，结合本发明化合物的配体结合结构域(例如，蜕皮激素受体配体结合结构域)与另一配体结合结构域(例如，类视黄醇X受体配体结合结构域)二聚化，以形成蛋白质-蛋白质复合物。
在一个实施方式中，感兴趣的基因的表达由本发明化合物以开/关方式调节，与本发明化合物的浓度或剂量无关。在另体实施方式中，感兴趣的基因的表达由本发明化合物以浓度(或剂量)依赖性方式调节，即在本发明化合物的浓度(或剂量)与感兴趣的基因的基因表达程度之间有剂量反应关系。参见例如US 2009/0123441。
术语〝可操作地连结〞指在单一多核苷酸上的多核苷酸序列相连，使得一者的功能受到另一者的影响。例如，当启动子能够影响编码序列的表达时(亦即编码序列系在启动子的转录控制下)，启动子与该编码序列可操作地连结。编码序列可与调节序列以正义或反义取向可操作地连结。
在一个实施方式中，宿主细胞为经分离的宿主细胞。在一个实施方式中，〝经分离的〞宿主细胞指不存在于对象中的细胞。在一个实施方式中，〝经分离的〞宿主细胞指在细胞培养装置或细胞培养制剂中的一或多个宿主细胞。
在一个实施方式中，宿主细胞在对象内，且宿主细胞系通过将本发明化合物或其组合物给予对象而与本发明化合物接触。在另一实施方式中，宿主细胞与本发明化合物或其组合物于试管内接触。在另一实施方式中，宿主细胞系与本发明化合物或其组合物于离体接触。在另一实施方式中，宿主细胞在人对象中。在另一实施方式中，宿主细胞在动物对象中。在另一实施方式中，宿主细胞在植物对象中。在另一实施方式中，宿主细胞在水藻对象中。
在一个实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象。在一个实施方式中，将本发明化合物或其组合物经口给予对象。在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物非经肠给予对象。在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物经皮下、肌肉内、静脉内、腹膜内或肿瘤内给予。
除了上述给药模式以外，还可将本发明化合物或其组合物添加至由对象消耗的食物中。在一个实施方式中，将本发明化合物或其组合物与食物材料合并、调合或掺合，以提供〝食物产品〞。术语〝食物产品〞使用其最宽广的可能意义且包括由动物(例如，人)消耗的任何形式的可消化材料，例如固体、乳液、液体。食物产品可经调配使得对象可随其饮食取得适量的本发明化合物或其组合物。在另一实施方式中，本发明化合物或其组合物系经调配成添加至食物材料中的预混合物。在一个实施方式中，食物产品或预混合物包含本发明化合物或其组合物及一或多种脂质。
在一个具体实施方式中，在结合本发明化合物的基因开关中的配体结合结构域为结合本发明化合物的H组核受体配体结合结构域或其突变体。在另一实施方式中，H组核受体配体结合结构域选自：结合本发明化合物的蜕皮激素受体配体结合结构域、泛存受体受体配体结合结构域、孤儿受体-1配体结合结构域、NER-1配体结合结构域、受体-相互作用的蛋白质-15配体结合结构域、肝X受体-3配体结合结构域、似类固醇激素受体蛋白质配体结合结构域、肝X受体配体结合结构域、肝X受体配体结合结构域、类法尼醇(farnesoid)X受体配体结合结构域、受体-相互作用的蛋白质-14配体结合结构域和法尼醇(farnesol)受体配体结合结构域或其突变体。
在另一实施方式中，H组核受体配体结合结构域为结合本发明化合物的蜕皮激素受体配体结合结构域或其突变体。在另一实施方式中，蜕皮激素受体配体结合结构域选自：结合本发明化合物的节肢动物蜕皮激素受体配体结合结构域、鳞翅目蜕皮激素受体配体结合结构域、双翅目蜕皮激素受体配体结合结构域、直翅目蜕皮激素受体配体结合结构域、同翅目蜕皮激素受体配体结合结构域和半翅目蜕皮激素受体配体结合结构域、蚜虫云杉卷叶蛾(spruce budworm Choristoneura fumiferana)蜕皮激素受体配体结合结构域、甲虫黄粉虫(Tenebrio molitor)蜕皮激素受体配体结合结构域、烟草天蛾(Manduca sexta)蜕皮激素受体配体结合结构域、夜蛾(Heliothies virescens)蜕皮激素受体配体结合结构域、蠓摇蚊(Chironomus tentans)蜕皮激素受体配体结合结构域、蚕蛾家蚕蜕皮激素受体配体结合结构域、丛林斜眼褐蝶(squinting bush brown Bicyclus anynana)蜕皮激素受体配体结合结构域、七叶树孔雀纹蛱蝶(Junonia coenia)蜕皮激素受体配体结合结构域、果蝇蜕皮激素受体配体结合结构域、埃及伊蚊(Aedes aegypti)蜕皮激素受体配体结合结构域、绿头苍蝇(Lucilia capitata)蜕皮激素受体配体结合结构域、铜绿蝇(Lucilia cuprina)蜕皮激素受体配体结合结构域、红头丽蝇(Calliphora vicinia)蜕皮激素受体配体结合结构域、地中海果实蝇(Mediterranean fruit fly Ceratitis capitata)蜕皮激素受体配体结合结构域、飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮激素受体配体结合结构域、桃蚜(Myzuspersicae)蜕皮激素受体配体结合结构域、提琴蟹(Celuca pugilator)蜕皮激素受体配体结合结构域、美洲钝眼蜱(Amblyomma americanum)蜕皮激素受体配体结合结构域、白蝇银叶粉虱(Bamecia argentifoli)蜕皮激素受体配体结合结构域、黑尾叶蝉(Nephotetixcincticeps)蜕皮激素受体配体结合结构域或其突变体。在另一具体实施方式中，蜕皮激素受体配体结合结构域为蚜虫云杉卷叶蛾蜕皮激素受体配体结合结构域，其氨基酸序列系于美国专利发表案号2006/0100416 A1中提出。
在另一实施方式中，蜕皮激素受体配体结合结构域为结合本发明化合物的蚜虫云杉卷叶蛾蜕皮激素受体配体结合结构域。
适合的蜕皮激素受体配体结合结构域包括例如美国专利案号7,935,510、7,919,269、7,563,879；及美国专利发表案号2006/0100416 A1中公开的那些。
在一个实施方式中，基因开关包含与结合本发明化合物的配体结合结构域 二聚化的配体结合结构域。在一个实施方式中，与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域为B组核受体配体结合结构域。在另一具体实施方式中，B组核受体配体结合结构域选自：类视黄醇X受体配体结合结构域、H-2区II结合蛋白质配体结合结构域、核受体共-调节子-1配体结合结构域、超螺旋蛋白质配体结合结构域、2C1核受体配体结合结构域和绒毛膜因子1配体结合结构域。在另一实施方式中，与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域不为蜕皮激素受体配体结合结构域。
在一个实施方式中，与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域为视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为脊椎动物视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为智人(Homo sapiens)视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为视黄酸X受体α异型体。在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为视黄酸X受体β异型体。在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为视黄酸X受体γ异型体。
在另一实施方式中，视黄酸X受体配体结合结构域为无脊椎动物视黄酸X受体配体结合结构域。在另一实施方式中，无脊椎动物视黄酸X受体配体结合结构域为飞蝗视黄酸X受体配体结合结构域。
在另一实施方式中，无脊椎动物视黄酸X受体配体结合结构域为非鳞翅目、非双翅目视黄酸X受体配体结合结构域。
在一个实施方式中，类视黄醇受体配体结合结构域为脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域、无脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域、超螺旋蛋白质配体结合结构域或嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域。
在一个实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域包含两种多肽片段，其中第一多肽片段来自脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域、无脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域或超螺旋蛋白质配体结合结构域，且第二多肽片段来自不同的脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域、不同的无脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域或不同的超螺旋蛋白质配体结合结构域。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域公开于美国专 利案号7,531,326。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-6、螺旋1-7、螺旋1-8、螺旋1-9、螺旋1-10、螺旋1-11或螺旋1-12，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段分别包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋7-12、螺旋8-12、螺旋9-12、螺旋10-12、螺旋11-12、螺旋12，或F域。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含根据本发明的第一物种RXR的螺旋1-6，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋7-12。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含根据本发明的类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-7，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋8-12。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-8，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋9-12。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-9，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋10-12。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-10，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋11-12。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-11，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的螺旋12。
在另一较佳的实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含类视黄醇X受体的第一物种的螺旋1-12，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含类视黄醇X受体的第二物种的F域。
在一个实施方式中，在嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域中的第一多肽片段为人类类视黄醇X受体序列，且在嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构 域中的第二多肽片段为无脊椎动物类视黄醇X受体序列。在另一实施方式中，无脊椎动物类视黄醇X受体序列为飞蝗类视黄醇X受体序列。
在另一实施方式中，嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第一多肽片段包含人类类视黄醇X受体的螺旋1-8，且嵌合性类视黄醇X受体配体结合结构域的第二多肽片段包含飞蝗类视黄醇X受体的螺旋9-12。
在一个实施方式中，基因开关还包含DNA结合结构域(〝DBD〞)。在另一实施方式中，DBD选自：GAL4DBD、LexA DBD、转录因子DBD、类固醇/甲状腺激素核受体超家族成员DBD、细菌LacZ DBD和酵母DBD。
在一个实施方式中，基因开关还包含反式激活结构域(〝TD〞)。在另一实施方式中，反式激活结构域选自：VP16TD、GAL4TD。NF-κB TD、BP64TD和B42酸性TD。
在一个实施方式中，DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域是由内含在相同的多核苷酸内的多核苷酸序列编码。
在另一实施方式中，DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、结合与本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域是由内含在一或多个单独的多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码。
在另一实施方式中，DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域是由内含在两个单独的多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码。
在另一实施方式中，DNA结合结构域及结合本发明化合物的配体结合结构域系以内含在第一多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码，及与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域是由内含在第二多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码。
在另一实施方式中，DNA结合结构域及与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域系以内含在第一多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码，及结合本发明化合物的配体结合结构域及反式激活结构域是由内含在第二多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码。
在其中DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域 中的一或多者是由内含在一或多个单独的多核苷酸序列内的多核苷酸序列编码的具体实施方式中，一或多个单独的多核苷酸序列可操作地连结至一或多个单独的启动子。在另一实施方式中，一或多个单独的多核苷酸序列可操作地连结至一或多个单独的增强子元件。在另一实施方式中，启动子和/或增强子具有组成型活性。在另一实施方式中，激活因子和/或增强子为组织特异性激活因子和/或增强子。
在一个实施方式中，基因开关包含DNA结合结构域、蜕皮激素受体配体结合结构域、与蜕皮激素受体配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域。
在另一实施方式中，基因开关包含DNA结合结构域、蜕皮激素受体配体结合结构域、类视黄醇X受体配体结合结构域及反式激活结构域。
在另一实施方式中，基因开关包含DNA结合结构域、蜕皮激素受体配体结合结构域、嵌合性脊椎动物/无脊椎动物类视黄醇X受体配体结合结构域及反式激活结构域。
在另一实施方式中，基因开关包含第一多肽，其包含DNA结合结构域(DBD)和第一配体结合结构域(LBD)，及基因开关包含第二多肽，其包含反式激活结构域(TAD)和第二LBD。在一个实施方式中，第一LBD为EcR配体结合结构域。在一个实施方式中，第一LBD为RxR、USP、嵌合性LBD或嵌合性RxR/USP LBD。在一个实施方式中，第二LBD为EcR配体结合结构域。在一个实施方式中，第二LBD为RxR、USP、嵌合性LBD或嵌合性RxR/USP LBD。在一个实施方式中，DBD为Gal4DNA结合结构域。在一个实施方式中，TAD为VP16反式激活结构域。在一个实施方式中，基因开关包含第一多肽，其包含Gal4DNA结合结构域和EcR配体结合结构域(LBD)，且基因开关包含第二多肽，其包含VP16反式激活结构域和嵌合性RxR/USP配体结合结构域。在一个实施方式中，EcR配体结合结构域与对应的野生型EcR多肽序列相比包含一或多个氨基酸取代。
在另一实施方式中，基因开关包含GAL4DNA结合结构域、云杉卷叶蛾蜕皮激素受体配体结合结构域(其经工程化而含有云杉卷叶蛾蜕皮激素受体序列的突变体V107I和Y127E，在美国专利发表案号2006/0100416 A1中提出)、嵌合性智人/飞蝗类视黄醇X受体配体结合及VP16反式激活结构域。
术语〝V107I〞指使美国专利发表案号2006/0100416 A1中提出的云杉卷叶蛾蜕皮激素受体序列中的位置107上的缬氨酸氨基酸残基改变成异亮氨酸。术语〝Y127E〞指使美国专利发表案号2006/0100416 A1中提出的云杉卷叶蛾蜕皮激素受体序列中的位置127上的酪氨酸氨基酸残基改变成谷氨酰胺。
在另一实施方式中，宿主细胞进一步包含编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸。结合基因开关复合物的启动子可操作地连结至编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸。
在另一实施方式中，编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸内含在与编码DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域中的一种或多种多核苷酸相同的多核苷酸中。这类构建体公开于例如美国专利发表案号2009/0123441中。
在另一实施方式中，编码受基因开关调节其表达的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸内含在与编码DNA结合结构域、结合本发明化合物的配体结合结构域、与结合本发明化合物的配体结合结构域二聚化的配体结合结构域及反式激活结构域中的一种或多种多核苷酸不同的多核苷酸中。
在一个实施方式中，基因开关对本发明化合物的敏感性超越类固醇激素。在另一实施方式中，基因开关对本发明化合物1的敏感性超越另一种二酰基肼化合物。
基因开关对本发明化合物相对于另一种配体的敏感性可于试管内试验法轻易地测定，例如使用报告基因(诸如萤火虫荧光素酶)的试管内试验法。这类试管内试验法的示例为本领域技术人员所熟知。参见例如Karzenowski等BioTechniques 39:191-200(2005)。
在一个实施方式中，编码基因开关的多核苷酸内含在载体中。在一个实施方式中，载体选自：细胞质体、表达载体、复制子、噬菌载体、黏质体、病毒载体、脂质体、带电脂质(例如，细胞转染素(cytofectin))、DNA-蛋白质复合物和生物聚合物。
在另一实施方式中，载体为反转录病毒载体。在另一实施方式中，载体选自：与腺相关病毒载体、痘病毒载体、杆状病毒载体、牛痘病毒载体、单纯疱疹病毒载体、艾伯斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒载体、腺病毒载体、双生病 毒载体和花椰菜花叶病毒载体。
在一个实施方式中，宿主细胞为原核宿主细胞。在另一实施方式中，宿主细胞为真核宿主细胞。在其它的实施方式中，宿主细胞为免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(Natural Killer cell)等)或干细胞(例如，间质干细胞(MSC)、子宫内膜衍生的干细胞、子宫内膜再生细胞等)。
在另一实施方式中，宿主细胞为脊椎动物宿主细胞。在另一实施方式中，宿主细胞为无脊椎动物宿主细胞。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、线虫细胞、昆虫细胞、鱼细胞、植物细胞、禽细胞、藻类细胞、动物细胞和哺乳动物细胞。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：斑马鱼细胞、鸡细胞、仓鼠细胞、小鼠细胞、大鼠细胞、兔子细胞、猫细胞、狗细胞、牛细胞、山羊细胞、母牛细胞、猪细胞、马细胞、羊细胞、猿细胞、猴细胞、黑猩猩细胞和人类细胞。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：曲菌细胞、木霉细胞(Trichoderma cell)、酵母菌细胞、毕赤氏酵母细胞、念珠菌细胞和汉逊氏菌细胞(Hansenula cell)。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：集胞藻(Synechocystis)细胞、聚球藻(Synechococcus)细胞、沙门氏杆菌细胞、芽孢杆菌细胞、不动杆菌细胞、红球菌细胞、链霉菌细胞、大肠杆菌细胞、假单胞菌细胞、甲基单胞菌(Methylomonas)细胞、甲基杆菌(Methylobacter)细胞、产碱菌细胞、集胞藻细胞、链蓝藻形球菌细胞、硫杆菌细胞、甲烷杆菌(Methanohacterium)细胞和克雷伯瓦菌细胞(Klebsiella cell)。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：苹果细胞、拟南芥细胞、珍珠粟细胞、香蕉细胞、大麦细胞、豆子细胞、甜菜根细胞、黑豆细胞、鹰嘴豆细胞、辣椒细胞、黄瓜细胞、茄子细胞、蚕豆细胞、玉米细胞、瓜细胞、小米细胞、绿豆细胞、燕麦细胞、秋葵细胞、柳枝细胞、木瓜细胞、花生细胞、豌豆细胞、胡椒细胞、木豆细胞、菠萝细胞、四季豆细胞、马铃薯细胞、南瓜细胞、稻米细胞、高粱细胞、大豆细胞、西葫芦细胞、甘蔗细胞、甜菜细胞、向日葵细胞、红薯细胞、茶叶细胞、蕃茄细胞、烟草细胞、西瓜细胞、洋菇细胞和小麦细胞。
在另一实施方式中，宿主细胞选自：仓鼠细胞、小鼠细胞、大鼠细胞、兔 子细胞、猫细胞、狗细胞、牛细胞、山羊细胞、母牛细胞、猪细胞、马细胞、羊细胞、猴细胞、黑猩猩细胞和人类细胞。
宿主细胞转化为本领域中所熟知且可通过各种方法达成，包括但不限于电穿孔、病毒感染、质粒(或载体)转染、非病毒载体介导的转染、土壤杆菌介导的转化，粒子撞击等。所需基因产物的表达包含在适合的条件下培养转化的宿主细胞且诱导转化的基因表达。在原核和真核细胞中的培养条件及基因表达方案为本领域中所熟知。可收获细胞并将基因产物根据对基因产物特异性的方案分离。
此外，可选择宿主细胞，所述宿主细胞调控插入的多核苷酸的表达，或以所需特定方式修饰并加工多肽产物。不同的宿主细胞对蛋白质的翻译及翻译后加工和修饰(例如，糖基化、切割(例如，信号序列的切割))具有特征性及特定的机制。可选择适当的细胞系或宿主系统，以确保所表达的外来蛋白质的所需修饰和加工。例如，在细菌系统中的表达可用以产生未经糖基化的核心蛋白质产物。然而，在细菌中所表达的多肽可能未适当折叠。在酵母中的表达可产生糖基化产物。在真核细胞中的表达可增加异质蛋白质的〝天然〞糖基化和折叠的可能性。而且，在哺乳动物细胞中的表达可提供重新构建或构建多肽活性的工具。此外，不同的载体/宿主表达系统可以不同程度影响加工反应(诸如蛋白水解切割)。
在一个实施方式中，宿主细胞包含二种或多种正交的(orthogonal)基因开关。当(a)各个既定的基因开关受其各自配体的调控而使得受该基因开关调节的基因的表达幅度产生可测出的变化，且(b)该变化在统计学上与宿主细胞中的所有其它基因开关的表达的变化有显著性差异时，则这二种或多种单独可操作的基因调节系统被称为〝正交的〞。在一个实施方式中，每一单独可操作的基因开关系统的调节引起基因表达的变化比在宿主细胞中所有其它可操作的基因开关的变化多至少2倍，3倍，4倍，5倍，10倍，20倍，50倍，70倍，100倍，200倍，300倍，400倍或500倍。正交的基因开关系统的非限制性示例参见美国专利公开案号US 2002/0110861 A1。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的癌症，所述癌症例如选自：骨髓发育不良、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮肤癌、胰脏癌、结肠癌、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌、脑癌、原发性脑癌、 头-颈癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、头或颈癌、乳房肿瘤、卵巢肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、威尔姆斯氏(Wilms’)肿瘤、子宫颈癌、睪丸癌、膀胱肿瘤、胰脏肿瘤、胃癌、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食道癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰脏胰岛瘤、恶性类癌肿瘤、绒毛膜癌、蕈状肉芽肿、恶性高钙血症、子宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性颗粒球性白血病、急性颗粒球性白血病、发样细胞白血病、神经胚细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、真性红血球增多症、本态性血小板增多症、霍奇金氏(Hodgkin’s)症、非霍奇金氏淋巴瘤、软组织肉瘤、间皮瘤、骨原性肉瘤、原发性大球蛋白血症和视网膜胚细胞瘤等。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的代谢相关性病症，所述代谢相关性病症例如选自：异常脂血症、动脉粥样硬化、胰岛素抗性、糖尿病(例如，I型糖尿病、II型糖尿病、MODY和妊娠糖尿病)、肥胖、葡萄糖不耐症、动脉粥样化疾病、高血压、心脏病(其包括但不限于冠状动脉心脏病、中风、心脏功能不全、冠状动脉功能不全和高血压)、高脂血症、葡萄糖不耐、胰岛素抗性、高血糖症、高胰岛素血症、代谢综合征X(或综合征X，或胰岛素抗性综合征，或雷文氏(Reaven’s)综合征，或代谢性心血管风险综合征)、高血压、慢性疲劳、加速老化、退化性疾病、老化的内分泌不足、Gm1神经节苷脂症、穆尔基奥(Morquio)-B型疾病、克拉培氏(Krabbe’s)症、法布瑞氏(Fabry’s)症、高歇氏(Gaucher’s)病、戴萨克斯(Tay-Sachs)症、山德霍夫(Sandhoff)症、墨角藻糖苷酶缺乏病、碳水化合物代谢疾病(例如，肝糖贮积症)、氨基酸代谢病症(例如，苯酮尿症、枫糖尿症、第1型戊二酸血症)、有机酸代谢病症(例如，黑尿症)、脂肪酸氧化与粒线体代谢病症(例如，中链酰基去氢酶缺乏症)、卟啉代谢病症(例如，急性间歇性紫质症)、嘌呤或嘧啶代谢病症(例如；勒-奈(Lesch-Nyhan)二氏综合征)、类固醇代谢病症(例如，先天性肾上腺增生)、粒线体功能病症(例如；凯-赛(Kearns-Sayre)二氏综合征)和过氧化物酶体功能病症(例如，泽尔韦格(Zellweger)综合征)。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的 肾脏病。在一个实施方式中，肾脏病为肾衰竭。在另一实施方式中，肾脏病为慢性肾衰竭。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的贫血。在一个实施方式中，贫血为与肾脏病相关联的贫血，例如肾衰竭或慢性肾衰竭。在另一实施方式中，贫血与以例如一或多种化疗剂的癌症疗法相关联。在另一实施方式中，贫血与年迈的年纪相关联。在另一实施方式中，贫血与受损的肺功能相关联。在另一实施方式中，贫血与骨髓发育不良相关联。在另一实施方式中，贫血与放射疗法相关联。在另一实施方式中，贫血与重大疾病相关联。在另一实施方式中，贫血与心脏疾病相关联。在另一实施方式中，贫血不是心脏疾病。〝心脏疾病〞的非限制类型为充血性心脏衰竭、缺氧、缺血性心脏疾病、高血压性心脏疾病、冠状动脉疾病、末梢血管疾病和缺血性心脏病例，例如心肌梗塞、心脏病发作、心脏衰竭、心律不整、心肌破裂、心包膜炎、心源性休克、血栓形成、栓塞、动脉粥样硬化症和动脉狭窄症。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的自体免疫疾病，所述自体免疫疾病例如选自：胃酸缺乏自身免疫慢性活动性肝炎、急性弥漫性脑脊髓炎、急性出血性脑白质炎、艾迪森氏(Addison’s)症、γ球蛋白血症、γ球蛋白缺乏症、斑秃、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、关节黏连性脊椎炎、抗-GBM/TBM肾炎、抗磷脂综合征、抗合成酶综合征、关节炎、异位性过敏、异位性皮肤炎、再生不良性贫血、自体免疫性心肌病、自身免疫溶血性贫血、自体免疫性肝炎、自体免疫性内耳疾病、自体免疫性淋巴细胞增生综合征、自体免疫性末梢神经病、自体免疫性胰脏炎、自体免疫性多内分泌腺病综合征I、II及III型、自体免疫性助孕素皮肤炎、自体免疫性血小板减少性紫瘢症、自体免疫性葡萄膜炎、巴洛(Balo)病/巴洛同心圆性硬化、贝西氏(Bechets)综合征、博格尔(Berger’s)病、毕氏(Bickerstaff’s)脑炎、Blau综合征、大水泡性天疱疮样病、卡斯托曼氏(Castleman’s)病、慢性疲劳免疫功能异常综合征、慢性发炎性脱髓鞘多发性神经病、慢性复发性多发性骨髓炎、史格-斯特劳斯(Churg-Strauss)综合征、斑痕性类天疱疮、乳糜泻、科刚氏(Cogan)综合征、冷凝集素症、补体成份2缺乏症、颅动脉炎、CREST综合征、克隆氏(Crohns)病、库欣氏(Cushing’s)综合征、皮肤白细胞破碎性血管炎、迪哥氏(Dego’s)病、疱疹样皮肤炎、皮肌炎、第1型糖尿病、弥漫性皮肤系统性 硬化症、德雷斯勒(Dressler’s)综合征、盘状红斑性狼疮、湿疹、附着点炎相关性关节炎、嗜酸性筋膜炎、获得性大包性表皮松解、结节性红斑、本态性混合型冷球蛋白血症、伊凡氏(Evan’s)综合征、进行性骨化性纤维发育不良、纤维肌炎、纤维化肺泡炎、胃炎、胃肠类天疱疮、巨细胞动脉炎、古德帕斯氏(Goodpasture’s)综合症、葛瑞夫兹(Graves’)病、格巴二氏(Guillain-Barré)综合征(GBS)、桥本氏(Hashimoto’s)脑炎、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫瘢症(Henoch-Schonlein purpura)、妊娠疱疹、休斯(Hughes)综合征(或抗磷脂综合征)、低γ球蛋白血症、自发性发炎脱髓鞘疾病、自发性肺纤维化、自发性血小板减少性紫瘢症、IgA肾病(或博格尔(Berger’s)病)、内含体肌炎、脱髓鞘性多发性神经病、幼年型自发性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征、白细胞破碎性血管炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、线状IgA病(LAD)、卢伽雷氏(Lou Gehrig’s)病、类狼疮性肝炎、红斑性狼疮、马基德(Majeed)综合征、梅尼尔氏(Ménière’s)病、显微性多血管炎、米勒-费雪(Miller-Fisher)综合征、混合性结缔组织疾病、穆夏-哈柏曼(Mucha-Habermann)病、穆-魏(Muckle-Wells)二氏综合征、多发性骨髓瘤、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎(又名戴维克氏(Devic’s)病)、眼部斑痕性类天疱疮、欧氏(Ord)甲状腺炎、反复性风湿症、PANDAS(合并链球菌感染的儿童自体免疫性神经精神异常)、副肿瘤性小脑变性、副肿瘤性小脑变性、帕里-荣伯(Parry Romberg)综合征、帕森-透纳(Parsonnage-Turner)综合征、睫状体坦部色素层炎、天疱疮、寻常天疱疮、恶性贫血、静脉周围性脑脊髓炎、POEMS综合征、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、坏疽性脓皮病、纯红血球再生不良、罗氏(Rasmussen’s)脑炎、雷诺氏(Raynaud)征候群、复发性多软骨炎、瑞特氏(Reiter’s)综合征、后腹膜腔纤维化、类风湿性关节炎、类风湿性热、施密特(Schmidt)综合征、施尼茨勒(Schnitzler)综合征、巩膜炎、修格连氏综合征、脊椎关节病、黏血综合征、史迪尔氏(Still’s)氏病、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、苏沙茨氏(Susac’s)综合征、史威特(Sweet)氏综合征、席登罕氏(Sydenham)舞蹈症、交感性眼炎、高安氏(Takayasu’s)动脉炎、颞动脉炎、托-杭(Tolosa-Hunt)二氏综合征、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病、未分化脊柱关节病、 血管炎、华格纳氏(Wegener’s)肉芽肿病、威尔森氏(Wilson’s)综合征和威斯科特-奥德里奇(Wiskott-Aldrich)氏综合征。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的眼部病症，所述眼部病症例如选自：青光眼，包括开角型青光眼(例如，原发性开角型青光眼、色素性青光眼、剥落性青光眼、低眼压青光眼)、隅角闭锁型青光眼(临床上又名闭角型青光眼、狭角型青光眼、瞳孔阻滞型青光眼和睫状肌阻滞型青光眼)(例如，急性隅角闭锁型青光眼和慢性隅角闭锁型青光眼)、无虹膜性青光眼、先天性青光眼、少年型青光眼、水晶体引发的青光眼、新生血管性青光眼(例如，使用由血管内皮生长因子(VEGF)诱饵、色素衍生性生长因子(PDGF)、内皮抑素、血管抑素或血管生成素-1所组成的载体)、创伤后青光眼、类固醇诱发的青光眼、史德格-韦伯(Sturge-Weber)综合征青光眼和葡萄膜炎诱发的青光眼，糖尿病视网膜病(例如，使用由VEGF诱饵、PDGF、内皮抑素、血管抑素或血管生成素-1所组成的载体)、黄斑变性(例如，由VEGF诱饵、PDGF、内皮抑素、血管抑素、血管生成素-1、ATP结合卡匣亚家族A成员4所组成的载体)、黄斑变性(例如，使用由VEGF诱饵、PDGF、内皮抑素、血管抑素、血管生成素-1、ATP结合卡匣亚家族A成员4所组成的载体)、脉络膜血管新生(例如，使用由VEGF诱饵、PDGF、内皮抑素、血管抑素或血管生成素-1所组成的载体)、血管渗漏及/或视网膜水肿、细菌性结膜炎、真菌性结膜炎、病毒性结膜炎、葡萄膜炎、角膜后沉降物、黄斑水肿(例如，使用由VEGF诱饵、PDGF、内皮抑素、血管抑素或血管生成素-1所组成的载体)、眼内水晶体植入后发炎反应、葡萄膜炎综合征(例如，慢性虹膜睫状体炎或慢性眼内炎)、视网膜血管炎(例如，如类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、系统性红斑性狼疮、进行性全身性硬化症、结节性多动脉炎、华格纳氏(Wegener’s)肉芽肿病、颞动脉炎、贝赛特氏(Adamantiades Bechcet)症、修格连(Sjorgen’s)症、复发性多软骨炎和HLA-B27相关联的脊柱炎中所见)、类肉瘤病、伊尔斯(Eales)病、急性视网膜坏死、原田氏(Vogt KoyanakiHarada)综合征、眼弓虫病、放射线视网膜病、增生性玻璃体视网膜病、眼内炎、眼性青光眼(例如，发炎性青光眼)、视神经炎、缺血性视神经病(例如，由同素异位NADH去氢酶单位4所组成的载体)、甲状腺相关性眼眶病、眼眶假性肿瘤、色素分散综合征(色素性青光眼)、巩膜炎、表层巩膜 炎脉络膜病(例如，〝白点〞综合征，包括但不限于急性多发性后部鳞状细胞)、视网膜病(例如，囊样黄斑水肿、中心性浆液性脉络膜病和疑似眼组织浆菌综合征(例如，由胶质细胞源性亲神经因子周边素-2所组成的载体))、视网膜血管疾病(例如，糖尿病性视网膜病、柯氏(Coat’s)病和视网膜动脉大动脉瘤)、视网膜动脉阻塞、视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变、色素性视网膜炎(例如，由视网膜色素特异性65kDa蛋白所组成的载体)、家族渗出性玻璃体视网膜病(FEVR)、自发性息肉状脉络膜血管病、视网膜前黄斑膜和白内障。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的眼部病症，其中眼部病症选自：青光眼、湿性与干性的年龄相关的黄斑退化、糖尿病性视网膜病和黄斑水肿。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的血液病症，所述血液病症例如选自：贫血、出血和凝血疾病(例如，弥漫性血管内凝血(DIC)、血友病、亨-舍(Henoch-Schonlien)二氏紫瘢症、遗传性出血性微血管扩张综合征、血小板减少(ITP、TTP)、血栓好发症、冯威里氏(Von Willebrand’s)病)、白血病(例如，急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤)、骨髓增生性疾病(例如，骨髓纤维化、真性红血球增多症、血小板增多症(thrombocythemia))、血浆细胞疾病(例如，大球蛋白血症、临床意义未知的单株球蛋白症、多发性骨髓瘤)、脾疾病、白血球病症(例如，嗜碱性球病症、嗜酸性球病症、淋巴细胞减少、单核球病症、嗜中性球减少、嗜中性白血球增多症)、血栓形成、深静脉血栓形成(DVT)、血色素沉着病、月经过多、镰状细胞病和地中海贫血。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的神经性病症，所述神经性病症例如选自：高歇(Gaucher)病、帕金森氏(Parkinson’s)症、阿兹海默氏(Alzheimer’s)症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、多发性硬化症(MS)、亨丁顿氏(Huntington’s)病、弗来德利希氏(Fredrich’s)共济失调、轻微认知障碍、大脑淀粉样血管病变、帕金森氏病、路易氏(Lewy)体病、额颞痴呆(FTD)、多发性系统退化症(MSA)、进行性核上眼神经麻痹、移动疾病(包括共济失调、脑性麻痹、舞蹈指痉病、肌肉紧张不全、妥瑞 氏(Tourette’s)综合征、核黄疸)、颤抖病症、白质失养症(包括肾上腺白质失养症、异染性白质失养症、脑白质海绵状变性、亚历山大(Alexander)病、佩梅(Pelizaeus-Merzbacher)病)、神经元蜡样脂褐质沉着疾病、共济失调微血管扩张综合征、雷特氏(Rett)综合征、α-共核蛋白病(例如，路易氏体病、多发性系统退化症、哈-斯(Hallervorden-Spatz)二氏病或额颞痴呆)、尼曼-匹克(Niemann-Pick)C型疾病(NPCD)、脊髓小脑萎缩症第1、2与3型和齿状核红核苍白球萎缩症(DRLPA)。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的肺部病症，所述肺部病症例如选自：气喘、肺膨胀不全、支气管炎、COPD(慢性阻塞性肺病)、肺气肿、肺癌、间皮瘤、肺炎、石绵沉着病、曲菌肿、曲菌病、急性侵入性曲菌病、支气管扩张、阻塞性细支气管炎机化性肺炎(BOOP)、嗜酸性球性肺炎、坏死性肺炎、胸膜积液、尘肺症、气胸、肺放线菌病、肺泡蛋白沉着症、肺炭疽、肺动静脉畸形、肺纤维化、肺栓塞、肺组织细胞增多症X(嗜酸性肉芽肿)、肺高血压、肺水肿、肺出血、肺土壤丝菌病、肺结核病、肺静脉闭塞性疾病、类风湿性肺病、类肉瘤病、放射性纤维化、高敏感性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、婴儿呼吸窘迫综合征、自发性肺纤维化、自发性间质性肺炎、淋巴管平滑肌增生症、肺兰格罕(Langerhans’)细胞组织球增多症、肺泡蛋白沉着症、窦炎、扁桃腺炎、中耳炎、咽炎、喉炎、肺错构瘤、游离肺、先天囊肿性腺瘤样畸形(CCAM)和囊肿性纤维化。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的风湿性病症，所述风湿性病症例如选自：系统性红斑性狼疮、皮肌炎、硬皮病、系统性坏死性动脉炎、表皮坏死性小静脉炎、类风湿性关节炎、修格连氏综合征、雷诺氏(Raynaud’s)现象、瑞特氏(Reiter’s)综合征、关节炎、牛皮癣性关节炎、血清阴性脊椎关节病、修格连氏综合征、全身性硬化症、皮肌炎/多发性肌炎、混合型结缔组织病和关节黏连性脊椎炎。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的传染病，所述传染病例如选自：真菌性疾病，诸如皮癣菌病(例如，毛癣菌病、钱癣或圆癣感染)、香港脚、甲沟炎、变色糠疹、红癣、擦疹、真菌性尿布疹、念珠菌外阴炎、念珠菌龟头炎、外耳炎、念珠菌症(皮肤和黏膜皮肤)、慢性黏膜念珠菌症(例如，鹅口疮和阴道念珠菌症)、隐球菌症、地丝菌症、毛孢 子菌病、曲菌病、青霉菌病、镰菌症、接合菌病、孢子丝菌病、产色霉菌病、球霉菌症、组织浆菌症、芽生菌病、副球霉菌症、伪端盘吸虫病、足菌肿、真菌性角膜炎、耳霉菌症、肺囊虫症和真菌血症、不动杆菌感染、放线菌病、非洲昏睡病、AIDS(后天免疫不全综合征)、阿米巴病、边虫病、炭疽、溶血隐密杆菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲菌病、星状病毒感染、焦虫症、蜡样芽孢杆菌感染、细菌性肺炎、细菌性阴道炎(BV)、杆菌感染、纤毛虫症、拜林回线虫(Baylisascaris)感染、BK病毒感染、黑色毛干结节病、人芽囊原虫感染、包柔氏(Borrelia)螺旋体感染、肉毒杆菌症(和婴儿肉毒杆菌症)、巴西出血热、布氏杆菌症、伯克氏菌(Burkholderia)感染、布路里(Buruli)溃疡、卡力西病毒(Calcivirus)感染(诺罗病毒(Norovirus)和沙波病毒(Sapovirus))、念珠菌症、猫抓病、蜂窝性组织炎、查加斯(Chagas)病(美洲锥虫病)、软下疳、水痘、衣原体感染、霍乱、着色芽生菌病、肝吸虫病、难养芽胞梭菌(Clostridium difficile)、球霉菌症、科罗拉多蜱热(CTF)、普通感冒(急性病毒性鼻咽炎、急性鼻炎)、库贾氏(Creutzfeldt-Jakob)病(CJD)、隐球菌症、隐孢子虫病、皮肤幼虫移行症(CLM)、登革热、脆双核阿米巴症、白喉、裂头绦虫病、裂头绦虫病、龙线虫病(Dracunculiasis)、伊波拉出血热、包虫病(Echinococosis)、艾利希体症(Ehrlichiosis)、蛲虫病(Enterobiasis)(蛲虫感染)、肠球菌(Enterococcus)感染、肠病毒(Enterovirus)感染、流行性斑疹伤寒(Epidemic typhus)、传染性红斑(Erythema infectiosum)、幼儿急疹(Exanthem subitum)、姜片虫病(Fasciolopsiasis)、片吸虫病(Fasciolosis)、致死性家族性失眠症(FFI)、丝虫病(Filariasis)、梭杆菌(Fusobacterium)感染、气性坏疽(梭菌肌坏死)、地丝菌症(Geotrichosis)、格斯特曼(Gerstmann--Scheinker)综合征(GSS)、梨形鞭毛虫症(Giardiasis)、鼻疽(Glanders)、颚口虫病(Gnathostomiasis)、淋病(Gonorrhea)、腹股沟肉芽肿(Granuloma inguinale)(杜诺凡病(Donovanosis))、A群链球菌感染、B群链球菌感染、流感嗜血杆菌、手足口症(HFMD)、汉他病毒(Hantavirus)肺综合征(HPS)、幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)感染、溶血性尿毒综合征(HUS)、出血热伴随肾综合征(HFRS)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎、单纯疱疹、组织浆菌症(Histoplasmosis)、钩虫感染、人博卡病毒(bocavirus)感染、人尤因氏艾利希体症(ewingii ehrlichiosis)、人颗粒球性边虫病(granulocytic anaplasmosis)(HGA)、人颗粒球性边虫病(HGA)、人单核球性艾利希体症、人乳头状瘤病毒(HPV)感染、人副流感病毒感染、膜样绦虫病(Hymenolepiasis)、艾伯斯坦-巴尔病毒传染性单核球增多症(Epstein-Barr Virus Infectious Mononucleosis)(Mono)、流行性感冒(flu)、等孢球虫病(Isosporiasis)、川崎(Kawasaki)病、角膜炎、金格杆菌(Kingella kingae)感染、库鲁病(Kuru)、拉色热(Lassa fever)、退伍军人症(Legionellosis)(退伍军人病)、退伍军人症(庞提亚克热(Pontiac fever))、利什曼病(Leishmaniasis)、麻疯病(Leprosy)、钩端螺旋体病(Leptospirosis)、李斯特菌症(Listeriosis)、莱姆病(莱姆包柔氏螺旋体病)、淋巴性丝虫病(象皮病(Elephantiasis))、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎(Lymphocyticchoriomeningitis)、疟疾(Malaria)、马堡病毒出血热(Marburg hemorrhagic fever)(MHF)、麻疹、类鼻疽(Melioidosis)(惠特穆尔氏(Whitmore’s)病)、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病(Metagonimiasis)、微孢子虫病(Microsporidiosis)、传染性软疣(MC)、腮腺炎、斑疹伤寒(Murine typhus)(地方性斑疹伤寒(Endemic typhus))、霉浆菌肺炎(Mycoplasma pneumonia)、足菌肿(Mycetoma)、蝇蛆病(Myiasis)、新生儿结膜炎(新生儿眼炎)、(新)变异型库贾氏(Creutzfeldt-Jakob)病(vCJD、nvCJD)、土壤丝菌病(Nocardiosis)、盘尾丝虫病(Onchocerciasis)(河盲症)、副球霉菌症(Paracoccidioidomycosis)(南美芽生菌病(blastomycosis))、并殖吸虫病(Paragonimiasis)、巴氏杆菌病(Pasteurellosis)、头虱病(Pediculosis capitis)(头虱)、体虱病(Pediculosis corporis)(体虱)、阴虱病(Pediculosis pubis)(阴虱、蟹虱)、骨盆腔发炎(PID)、百日咳(Pertussis)(百日咳(Whooping cough))、鼠疫(Plague)、肺炎球菌感染、肺囊虫(Pneumocystis)肺炎(PCP)、肺炎、脊髓灰白质炎(Poliomyelitis)、脊髓灰白质炎、普氏菌(Prevotella)感染、原发性阿米巴脑膜脑炎(PAM)、进行性多灶性脑白质病、鹦鹉热(Psittacosis)、Q热症、狂犬病、鼠咬热(Rat-bite fever)、呼吸系融合细胞病毒感染、鼻孢子虫病(Rhinosporidiosis)、鼻病毒(inovirus)感染、立克次体(Rickettsial)感染、立克次体痘(Rickettsialpox)、瑞夫特河谷热(Rift Valley fever)(RVF)、落矶山斑疹热(Rocky mountain spotted fever)(RMSF)、轮状病毒(Rotavirus)感染、风疹(Rubella)、沙门氏菌症(Salmonellosis)、SARS(严重急性呼吸 系统综合征)、疥疮(Scabies)、血吸虫病(Schistosomiasis)、败血症、志贺杆菌病(Shigellosis)(杆菌性痢疾)、带状疱疹(Shingles)(Herpes zoster)、天花(Smallpox)(Variola)、孢子丝菌病(Sporotrichosis)、金黄葡萄球菌食物中毒、金黄葡萄球菌感染、类圆线虫病(Strongyloidiasis)、梅毒(Syphilis)、绦虫病(Taeniasis)、破伤风(tanus)(牙关紧闭症(Lockjaw))、须癣(Tineabarbae)(Barber’s itch)、头癣(Tinea capitis)(头皮的钱癣)、体癣(Tinea corporis)(身体的钱癣)、股癣(Tinea cruris)(Jock itch)、手癣(Tinea manuum)(手部的钱癣)、黑糠疹(Tinea nigra)、甲癣(Tinea unguium)(甲真菌病(Onychomycosis))、花斑癣(Tineaversicolor)(变色糠疹(Pityriasis versicolor))、蛔虫症(Toxocariasis)(内脏幼虫移行症(VLM))、弓虫病(Toxoplasmosis)、旋毛虫病(Trichinellosis)、滴虫病(Trichomoniasis)、鞭虫病(Trichuriasis)(鞭虫感染)、结核病、兔热病(Tularemia)、尿素霉浆菌(Ureaplasma urealyticum)感染、委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equineencephalitis)、委内瑞拉出血热(Venezuelan hemorrhagic fever)、病毒性肺炎、西尼罗河热(West Nile Fever)、白色毛干结节病(White piedra)(白癣(Tinea blanca))、假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)感染、耶尔森氏菌症(Yersiniosis)、黄热病(Yellow fever)和接合菌病(Zygomycosis)。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的血管性水肿。在另一实施方式中，血管性水肿为遗传性血管性水肿。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的疾病、病况或病症，其选自：败血症、血液高凝结性、肺功能障碍、低氧血症、出血性胰腺炎、心肌梗塞、肺移植、创伤、热伤害和血管渗漏。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗疾病、病况或病症，其中激肽释放素的抑制提供有利的治疗效果。这类疾病、病况或病症的实施方式包括但不限于接触系统的疾病、病况或病症。参见例如Shariat-Madar等Innate Immunity,vol.10,no.1,3-13(2004)，及Frick等EMBO J.,(2006)25,5569-5578(2006)。在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的疾病、病况或病症，其选自：粥状动脉栓塞症、冠状动脉疾病、阿兹海默氏症、发炎性肠疾病(例如，克隆氏病)、血管渗漏、急性呼吸压迫综合征和缓激肽介导的发炎。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗疾病、病况或病症，其中缓激肽B2受体的抑制提供有利的治疗效果。在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的疾病、病况或病症，其选自：肾小球硬化症、阿兹海默氏症、脑水肿、血管渗漏、急性呼吸压迫综合征、疼痛、发炎、创伤、烧伤、休克、过敏和心血管疾病。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的传染性疾病，所述传染性疾病例如选自：牛呼吸道疾病、猪呼吸道疾病、禽流感、鸡传染性支气管炎、牛海绵状脑病、犬利什曼病、慢性消耗性疾病、人免疫不全病毒(HIV)、肝炎、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、古典型猪瘟、包虫病、地方性肺炎、FIP、口蹄疫、肺腺瘤病、梅迪-威司奈(Maedi-Visna)病、动物的乳房炎、犬小孢子菌症、羊传染性口疮(动物疾病)、小反刍兽疫、痘病、鹦鹉喙羽症、狂犬病、地中海热(布氏杆菌病)或班格氏(Bang’s)病或波型热、马耳他热、传染性流产、流行性流产、沙门氏菌食物中毒、肠型副伤寒、杆菌性痢疾、假结核病、鼠疫、瘟疫性热病、结核病、弧菌症、转圈病、魏氏(Weil’s)病(钩端螺旋体病)或犬钩端螺旋体热、出血性黄疸(出血性黄疸螺旋体)、乳品工人热(哈特焦螺旋体)、回归热、蜱媒回归热、螺旋体热、流浪热、饥荒热、莱姆关节炎、班沃尔夫氏(Bannworth’s)综合征(莱姆病)、蜱媒脑膜多发神经炎、慢性游走性红斑、弧菌症、大肠杆菌症、大肠杆菌毒血症、白痢、猪肠水肿、肠型副伤寒、葡萄球菌性消化道中毒、葡萄球菌性胃肠炎、犬冠状病毒(CCV)或犬小病毒肠炎、猫传染性腹膜炎病毒、传染性胃肠炎(TGE)病毒、哈格曼(Hagerman)红口病(ERMD)、传染性造血组织坏死病(IHN)、猪放线杆菌(嗜血杆菌)胸膜肺炎、汉森氏(Hansen’s)病、链丝菌病、绵羊霉菌性皮炎、假鼻疽、惠特穆尔氏(Whitmore’s)病、弗朗西斯氏(Francis’)病、鹿蝇热、兔热病、欧哈拉(O’Hara)病、链状杆菌热、哈弗希耳(Haverhill)热、流行性关节红斑、鼠咬热、船运或运输热、出血性败血症、鹦鹉病、鹦鹉热、披衣菌症、北美芽生菌病、芝加哥病、吉尔克里斯氏(Gilchrist’s)病、猫抓热、良性淋巴网状内皮细胞增多、良性非细菌性淋巴腺炎、杆菌性血管瘤病、杆菌性紫斑性肝炎、Q热症、巴尔干流感(Balkan influenza)、巴尔干流感(Balkan grippe)、屠宰场热、蜱媒热、肺立克次体病、美洲蜱斑疹伤寒、蜱媒斑疹伤寒热、水泡性立克次体病、英国皇家植物园斑点 热、蚤媒斑疹伤寒热、地方性斑疹伤寒热、都市斑疹伤寒、钱癣、皮癣菌病、癣、发癣菌病、小孢子菌病、股癣、香港脚(Athlete’s Foot)、申克氏孢子丝菌、二形真菌、隐球菌症及组织浆菌症、良性表皮猴痘、BEMP、猿猴疱疹病毒、猿猴B病毒病、委内瑞拉马脑炎、C型昏睡性脑炎、黄热病、黑吐病、汉他病毒肺综合征、韩国出血热、流行性肾病、流行性出血热、出血性肾病肾炎、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎、加州脑炎/拉克罗斯脑炎、非洲出血热、Green-Vervet猴病、恐水症、狂犬病、传染性肝炎、流行性肝炎、流行性黄疸、红疹、麻疹、猪流感和马流感、鸡瘟、新城病、梨浆虫病、弓虫病、非洲睡眠病、刚比亚锥虫病、罗德西亚锥虫病、查加斯氏(Chagas’s)病、查加斯-马沙氏病、南美锥虫病、溶组织内阿米巴、小袋虫痢疾、隐孢子虫病、梨形鞭毛虫症、皮肤利什曼病：树胶工人溃疡、鼻咽黏膜利什曼病、pianbols、uta和buba(美洲)；或东方疮、东方疖(旧世界)；巴格达疖、新德里疖、包鲁溃疡、脏器利什曼病：黑热病、微孢子虫病、胃线虫症、旋毛虫病、血管圆线虫病、嗜酸性脑膜炎或脑膜脑炎(广东住血线虫)、腹部血管圆线虫病(哥斯达黎加住血线虫)、钩虫病、板口线虫病、钩虫病、毛细线虫病、马来丝虫病、蛔虫症、结节线虫病、类圆线虫病、毛圆线虫病、鸡蛔虫症、裂头绦虫病、动裂头条虫症、包虫囊病、棘球蚴病、颗粒性包虫病(Echinococcus granulosis)、囊型包虫病、绦虫感染和住血吸虫(Schistosoma)。
在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物给予对象，以治疗对象的慢性肾疾病、骨关节炎、肿瘤，病毒性上呼吸道感染，猫浆细胞性口炎，猫嗜曙红细胞肉芽肿，猫白血病病毒感染，犬瘟热感染，全身性真菌感染，心肌病和黏多醣贮积症VII。
在本发明的方法中，基因开关调节编码肽、蛋白质或多肽的多核苷酸的表达。在一个实施方式中，基因开关调节编码治疗感兴趣的肽、蛋白质或多肽的多核苷酸的表达，以治疗对象(例如，人类)的疾病、病况或病症。在另一实施方式中，感兴趣的的肽、蛋白质或多肽选自：Her-2/neu(ERBB2/c-erbB-2)、骨钙化素、基质裂解素-1、前列腺特异性抗原、人类碘化钠共同转运子、H19、IF-1、IGF-2、胸腺素β15、T细胞因子、软骨衍生的视黄酸敏感性蛋白质、前列腺蛋白酶(Prostasin)、端粒酶催化亚基、周期素-A、中期因子(midkine)、c-erbB-2、前列腺特异性膜抗原、p51、端粒酶RNA、摄护腺酸性磷酸酶、 PCA3dd3、DF3/MUC1、hex II、环加氧酶-2、super PSA、skp2、PRL-3、CA125/M17S2、IAI.3B、CRG-L2、TRPM4、RTVP、TARP、端粒反转录酶、A4淀粉样蛋白质、淀粉样β-蛋白前驱体、阿兹海默氏症A4淀粉样蛋白前驱体、神经肽FF、内质网应激元素、尿皮质醇II、酪氨酸羟化酶、补体因子3、血清淀粉样A3、金属蛋白酶-3的组织抑制剂(TIMP-3)、p75肿瘤坏死因子受体、肿瘤坏死因子-α、TRPM4、RTVP、TARP、端粒反转录酶、A4淀粉样蛋白质、淀粉样β-蛋白前驱体、阿兹海默氏症A4淀粉样蛋白前驱体、神经肽FF、内质网应激元素、尿皮质醇II、酪氨酸羟化酶、补体因子3、血清淀粉样A3、金属蛋白酶-3的组织抑制剂(TIMP-3)、p75肿瘤坏死因子受体、肿瘤坏死因子-α、过氧小体增殖物激活的受体/IIA-1非胰脏分泌的磷脂酶A2、SOCS-3、SR-BI、Ob、位置-1蛋白酶、TIGR、VL30、兴奋性氨基酸转运子-2、MDTS9、LIM、二氢吡咯5-甲酸酯还原酶、SIM2、Bax、Fas、bbc3、PINK-1、肌钙蛋白T、myoD、肌动蛋白、平滑肌22α、上调肌营养不良蛋白(Utrophin)、肌肉生长抑制素、平滑肌肌球蛋白重链、心锚蛋白(ankyrin)重复蛋白质、MLP、平滑肌细胞特异性抗原(Smoothelin)、MYBPC3、Tα1α-微管蛋白、细胞间黏附分子-4(ICAM-4)、γ-氨基丁酸型A受体β1亚基、神经元烟碱乙酰胆碱受体β2-亚基、早老素(presenilin)-1、钙-钙调蛋白依赖性激酶IIα、CRF2α受体、神经生长因子、GLP-2受体、I型转谷氨酰胺酶、K14、硬脂酰基-CoA去饱和酶、Megsin、催乳素、GDF-9、PSP94、NRL、NGAL、长乳清酸性蛋白质、与乳腺相关联的淀粉样A、内皮素-1、丝甘蛋白聚糖(Serglycin)、血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)、Tie受体酪氨酸激酶、KDR/flk-1、内皮因子(Endoglin)、CCR5、CD11d、血小板糖蛋白IIb、前内皮素原(preproendothelin)-1、白介素-18结合蛋白质、CD34、Tec酪氨酸激酶、MLH1、MSH2、MSH6、PMS1、APC、LEF-1、F2受体、TGF-βtype II受体、EYA4、PCA3、K2、PROST 03、PCAM-1、PCADM-1、PCA3dd3、PCAV、PAcP、ATB0、CSA-1、SYG972、Urb-ctf、BCU399、TBX2、Cyr61、DIAPH3、BEHAB、IL-8、BLSA、BP1、DAP-激酶、HOXA9、ARP、Nbk、CD43、β7-hcG、β6-hCG、β6e-hCG、β5-hCG、β8-hcG、β3-hCG、MTA1s、Old-35、Old-64、LAGE-1、CIF150/hTAFII150、P65癌胚蛋白、端粒酶、CYP1B1、14-3-3σ、NES1、CAR-1、HMGI、MAG、ELL2、Ephrin B2、WAF1、CIF130、C35、BMP2、BUB3、聚合酶κ、EAG1、EAG2、 HMG I、HLTF、Barx2、Pp 32r1、BMP4、TS10q23.3、核主轴相关的蛋白质、PFTAIRE、SEMA3B、MOGp、Fortilin、IGFBP-3、Polyhomeotic 2、PNQALRE、SCN5A、miR15、miR16、Headpin、PAOh1/SMO、Hippo、Mst2、PSMA-like、JAB1、NF-AT、P28ING5、MTG16、ErbB-2、HDAC9、GPBP、MG20、KLF6、ARTS1、Dock 3、膜联蛋白(Annexin)8、MH15、DELTA-N p73、RapR6、StarD10、Ciz1、HLJ1、RapR7、A34、Sef、Killin、SGA-1M、TGFβ第II型受体、与GCA-相关联的基因、PRV-1、Vezf1、MLP、VEGI、PRO256、AOP2、Remodelin、磷二酯酶4D、前列腺素受体副型EP3、CARP、HOP、PLTP、UCP-2、FLJ11011、Codanin-1、抵抗素(Resistin)、Archipelin、Neuronatin、Ncb5or、7B2、PTHrP、PEX、KChIPl、SLIT-3、CX3CR1、SMAP-2、IC-RFX、E2IG4、UCP2、Ob受体、Ob、Dp1、NRG-1、突触蛋白III、NRG1AG1、AL-2、脯氨酸脱氢酶、MNR2、ATM、Ho-1、CON202、Ataxin-1、NR3B、NIPA-1、DEPP、肾上腺髓质素、csdA、Inf-20、EOPA、SERT、FRP-1、血清淀粉样A、BMP2、BMPR1A、ACLP、似抵抗素分子β、Dlg5、TRANCE、软骨基质蛋白(Matrilin)-3、滑膜蛋白(Synoviolin)、HIV LTR、SHIVA、EBI 1、EBI 2、EBI 3、NM23、Eps8、β-10、毛囊生长因子、角化粒素(Corneodesmosin)、GCR9、Bg、FGF23、BBSR、MIC-1、MIA-2、IL-17B、甲酰基甘氨酸产生酶、LPLA2、CXCL1O、HFE2A、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10R DN或其亚基、IL-15、IL-18、IL-21、IL-23、IL-24、IL-27、GM-CSF、IFN-α、IFN-γ。IFN-α1、IFNα2、IL-15-R-α、CCL3(MIP-1a)、CCL5(RANTES)、CCL7(MCP3)、XCL1(淋巴细胞趋化因子(lymphotactin))、CXCL1(MGSA-α)、CCR7、CCL19(MIP-3b)、CXCL9(MIG)、CXCL10(IP-10)、CXCL12(SDF-1)、CCL21(6Ckine)、OX40L、4-1BBL、CD40、CD70、GITRL、LIGHT、b-防御素(Defensin)、HMGB1、Flt3L、IFN-beta、TNF-α、dnFADD、BCG、TGF-α、PD-L1RNAi、PD-L1反义寡核苷酸、TGFbRII DN、ICOS-L、S100、CD40L、p53、存活素(survivin)、p53-存活素融合物、MAGE3、髓鞘碱性蛋白质、PSA和PSMA。
在另一实施方式中，感兴趣的的肽、蛋白质或多肽为睫状神经营养因子体、血管抑制蛋白(vasohibin)、IL-10、促红血球生成素、VEGF捕获剂或PDGF。
在另一实施方式中，感兴趣的的肽、蛋白质或多肽为JUN-激酶抑制剂、 血管抑制素(vasoinhibin)、EPO或CTNF。
在另一实施方式中，基因开关调节编码IL-12或其亚基的多核苷酸的表达。在另一实施方式中，IL-12或其亚基为人IL-12或其亚基。
在另一实施方式中，基因开关调节编码C1酯酶抑制剂(例如，人C1酯酶抑制剂)、激肽释放素抑制剂或缓激肽B2受体拮抗剂的多核苷酸的表达。
激肽释放素抑制剂的示例包括但不限于埃可兰肽(ecallantide)和那些在下列中所提出的激肽释放素抑制剂：美国专利发表案号2010/0034805、2009/0264350、2009/0234009、2008/0221031、2007/0213275、2006/0264603和2005/0089515。
缓激肽B2受体抑制剂的示例包括但不限于亥洛金司汀(helokinestatin)和抗缓激肽B2受体抗体。亥洛金司汀的氨基酸序列参见Kwok,H.F.等Peptides29I 65-72(2008)。抗缓激肽B2受体抗体的非限制性示例参见Alla,S.A.等J.Biol.Chem.271:1748-1755(1996)。
在另一实施方式中，基因开关调节编码IL-12或其亚基的多核苷酸的表达，以治疗对象(例如人)的癌症，例如黑色素瘤。
在另一实施方式中，多核苷酸编码(a)包含GAL4DNA结合结构域、具有突变体V107I和Y127E的云杉卷叶蛾蜕皮激素受体配体结合结构域(相对于美国专利发表案号2006/0100416 A1中提出的云杉卷叶蛾蜕皮激素受体)、由智人RXR的螺旋1-8及飞蝗RXR的螺旋9-12所组成的嵌合性RXR配体结合结构域、VP16反式激活结构域的基因开关，且(b)人类IL-12，且当基因开关中的蜕皮激素受体配体结合结构域结合本发明化合物时，由多核苷酸编码的基因开关调节人类IL-12的表达。在其他实施方式中，将多核苷酸给予患有癌症的对象，诸如黑色素瘤。可将药学上可接受的载体中或由免疫细胞(诸如树状细胞)所包含的多核苷酸经肿瘤内给予。在一个实施方式中，将多核苷酸先给予对象，接着给予本发明化合物或其组合物。在另一实施方式中，将本发明化合物或其组合物先给予对象，接着给予多核苷酸。例如，可将本发明化合物或其组合物在相对于多核苷酸给予对象的日的第-1、0、+1、+2、+3、+4、+5、+6、+7天给予对象。
在另一实施方式中，基因开关调节编码转录因子的多核苷酸的表达，例如GATA-1、GATA的同伴(FOG-1)、EKLF(Kruppel样转录因子)、p45/核因 子-红血球2(NF-E2)、干细胞白血病(SCL)或T-细胞急性淋巴细胞性白血病-1、OCT4、或Sry-相关的高迁移率族box转录因子(Sox6)、或生长因子，例如IGFII、bFGF、Flt3、干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、骨形态发生蛋白质4(BMP4)、重组人类血管内皮生长因子(VEGF-A165)、白介素-3(IL-3)、白介素-6(IL-6)或白介素-11(IL-11)、或促红血球生成素，用于对象的再生医学，例如分化，反分化，重新编程，自我更新，或在血液基因转化(blood pharming)过程中造血干细胞、造血祖细胞或诱导的多功能性干细胞的扩增，即红血球细胞或其它的血液产物的产生。
通用合成方法
本发明化合物是根据本发明而使用本领域技术人员已知的方法(参见例如美国专利案号8,076,517、7,456,315、7,304,161和6,258,603)，和/或以下文的通用流程中所示的示例性方法制得。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-1(当J为CH时)或R4-8(当J为N时))可如通用流程2和3所述而制得。简言之，在通用流程2中，将式A的频哪醇硼烷(pinacolborane)化合物转化成式B的氧硼杂环戊烯(boroxole)且使氧硼杂环戊烯与具有式C的肼进行反应，得到式D的酰基肼。使酰基肼与酰氯进行反应，得到具有式E的二酰基肼。
在通用流程3中，使具有式F的化合物与具有式C的肼进行反应，得到具有式G的酰基肼。使酰基肼与酰氯进行反应，得到具有式H的二酰基肼。将具有式H的化合物的溴基转化成具有式J的频哪醇硼烷，接着转化成硼酸，将其环化，得到具有式K的二酰基肼类。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-2)可如通用流程4所述而制得。简言之，将具有式L的二酰基肼的烯烃转化成具有式M的频哪醇硼烷。将频哪醇硼烷转化成具有式N的硼酸，且将具有式N的化合物环化，得到化合物O。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-3，R6c为OH，及R7e和R7f为氢)可如通用流程5所述而制得。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-4，R6d为OH，及R7g和R7h为氢)可如通用流程6、7和8所述而制得。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-9，及R7a’和R7b’各自为氢)可如通用流程9所述而制得。
具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-10，X6为-O-，及R7a’和R7b’各自为氢)可如通用流程10所述而制得。具有式I的本发明化合物(其中R4为R4-10，X6为-N(R8l)-，且R7a’和R7b’各自为氢)亦可如通用流程7所述而制得。
实施例
实施例1
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第50号化合物)的合成
步骤1：3-二羟硼基(borono)-4-甲基苯甲酸的合成
将3-溴-4-甲基苯甲酸(11.00克，51.2毫摩尔)在氩气下溶解于具有两个滴液漏斗及氩气入口的500毫升3-颈圆底烧瓶中的无水THF(150毫升)中。将搅拌的溶液冷却至-78℃且从滴液漏斗逐滴(经1小时期间)添加n-BuLi(在己烷中的1.6M，60.7毫升，97.0毫摩尔)。在添加完成之后，将溶液在-78℃下再搅拌1小时。将B(OMe)3(17.7毫升，159.0毫摩尔)从第二滴液漏斗缓慢添加至其中。将混合物在-78℃下搅拌1小时且接着温热至室温过夜。在减压下蒸发溶剂。将粗产物溶解在醚中且倒入水性HCl(1N)中。对混合物用醚(3×150毫升)萃取，且将合并的有机层以盐水清洗，经无水MgSO4干燥，过滤且蒸发至干燥。将粗产物使用ISCO系统(220克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度接着DCM/MeOH梯度)纯化。在己烷/EtOAc中洗去杂质且在MeOH/DCM(5：95)的溶剂混合物中洗脱出纯产物，得到3.3克(33％产率) 纯SKC-01-126。1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ12.10(br s,1H),8.16(s,1H),7.90-7.63(m,1H),7.11(d,J＝7.9Hz,1H),2.42(s,3H)。
步骤2：4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯的合成
将3毫升浓缩、H2SO4添加至配备有回流冷凝器及干燥套管的250毫升圆底烧瓶中MeOH(100毫升)中的SKC-01-126(3.3克，18.3毫摩尔)的搅拌溶液中。将混合物回流过夜。在冷却至室温之后，真空蒸发溶剂。添加水并对产物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层以盐水清洗，经无水MgSO4干燥，过滤且蒸发至干燥，得到成为白色固体的甲酯SKC-01-127。将未进一步纯化的甲酯(4.00克，20.6毫摩尔)溶解在配备有丁-史塔克分水器(Dean-stark trap)的250毫升圆底烧瓶中的无水甲苯(100毫升)中。将2,3-二甲基丁-2,3-二醇(3.66克，30.9毫摩尔)添加至搅拌的反应混合物中，接着添加催化量的对-TSOH.H2O(0.196克，1.03毫摩尔)。将反应混合物加热至回流过夜2天。收集水(～2毫升)且移除。在冷却之后，反应混合物变成固体。将粗产物使用ISCO系统(80克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到SKC-01-138。LCMS(M+H)277。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(d,J＝1.9Hz,1H),7.87(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),3.79(s,3H),2.48(s,3H),1.25(s,12H)。
步骤3：1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酸的合成
将N-溴琥珀酰亚胺(1.01克，5.70毫摩尔)添加至无水CCl4(30毫升)中的SKC-01-138(1.50克，5.43毫摩尔)的溶液中。将作为催化剂的二环己烷甲腈(0.07克，0.27毫摩尔)在1小时期间内分四次添加至此搅拌的混合物中。将混合物在70℃下搅拌过夜。LCMS显示在5.75分钟具有预期的苯甲基溴质量的主峰。在冷却之后，真空蒸发溶剂。将粗产物溶解在醚中并过滤，以移除任何琥珀酰亚胺。对滤液用KOH(在H2O中的15％w/v，3×70毫升)萃取。将水相在室温(〝rt〞)下搅拌1-2小时。将溶液在0℃下冷却且缓慢地添加HCl(在H2O中的6N，～120毫升)，以达到pH<2。通过烧结的玻璃漏斗过滤而收集到白色沉淀物且经空气干燥，以生成白色固体粉末状的5-羧基苯并氧硼杂环戊烯SKC-01-150(0.800克，83％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.91(s,1H),9.35(s,1H),8.38(s,1H),8.04(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.05(s,2H)。
步骤4：N’-(叔丁基)-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼的合成
将BOP(373毫克，0.84毫摩尔)、HOBt(129毫克，0.84毫摩尔)及DIPEA(0.294毫升，1.68毫摩尔)在氩气下于室温下添加至无水DMF(1.5毫升)中的SKC-01-150(150毫克，0.84毫摩尔)的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌5分钟。将叔丁基肼盐酸盐(105毫克，0.84毫摩尔)添加至其中且将反应混合物在40℃下搅拌1小时。LCMS显示硼氧杂环戊烯羧酸的完全转化。将反应混合物转移至闪烁小瓶中且使用Genevac移除DMF。将黏稠的粗制混合物 溶解在15％水性KOH及醚中。将反应混合物以醚萃取且以水性KOH清洗三次。将含有产物的水性馏份在冰浴上冷却且缓慢地添加6N HCl，使其达到pH1-2。对混合物使用乙酸乙酯萃取。产物留在水性馏份中且在真空下蒸发至干燥。固体KCl是通过将产物以DCM中的5％MeOH清洗及收集滤液而从产物移除，得到95％的纯产物。在产物吸附在中性氧化铝上(24克中性氧化铝管柱，MeOH：DCM的溶剂混合物)之后，将其使用ISCO系统进一步纯化。使用在DCM中的～5％MeOH出产物。收集馏份且干燥，得到(0.187克，89％产率)纯硼氧杂环戊烯甲酰肼SKC-02-011。将黏性产物溶解在水及少量THF中，冷藏且冷冻干燥，得到浅黄色粉末。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.11(s,1H),7.93(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.52(dd,J＝8.0,0.7Hz,1H),5.16(s,2H),1.19(s,10H)。
以下的反应系使用上述程序进行，得到SCK-02-021：
将无水DMF(1.7毫升)中的SKC-01-150(170毫克，0.96毫摩尔)、BOP(423毫克，0.96毫摩尔)、HOBt(146毫克，0.96毫摩尔)、DIPEA(0.834毫升，4.78毫摩尔)与肼盐酸盐(105毫克，0.84毫摩尔)以上述反应组合。将粗制混合物使用ISCO系统(24克中性氧化铝，MeOH/DCM的梯度)纯化。 1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.05(s,1H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.50(d,J＝7.8Hz,1H),5.12(s,1H),2.51–2.44(m,1H),1.76–1.59(m,1H),1.51–1.27(m,1H),1.11(t,J＝7.4Hz,3H),1.02(s,9H)。
以下反应以略微修改的上述程序进行，得到(R)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼：
步骤4：N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第50号化合物)的合成：
将氧硼杂环戊烯甲酰肼SKC-02-011(0.090克，0.363毫摩尔)在氩气下添加至100毫升圆底烧瓶中于无水DCM(2毫升)的中酰氯(0.061克，0.363毫摩尔)的溶液中，接着添加三乙胺(0.051毫升，0.0363毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示数个与预期产物一致的峰。通过制备性HPLC纯化得到20毫克(14％)第50号化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.63(s,1H),7.89(s,1H),7.54(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.09(s,2H),6.91(s,1H),4.99(s,2H),2.20(s,6H),1.49(s,9H)。
第50号化合物也使用一锅程序以SKC-01-150(100毫克，0.56毫摩尔)、BOP(249毫克，0.56毫摩尔)、HOBt(86毫克，0.56毫摩尔)、DIPEA(0.098毫升，0.56毫摩尔)制得。将除了酰肼以外的所有试剂在100毫升圆底烧瓶中混合，溶解在无水DMF(2毫升)中并在氩气下室温搅拌5分钟。将N-(叔丁基)-3,5-二甲基酰肼(124毫克，0.56毫摩尔)添加至其中且将反应混合物在75℃下加热过夜。LCMS显示两个靠近的峰，其中一个峰显示ES+及ES-模式的预期产物质量(分子量380.24)。将反应混合物以醚稀释并用10％w/v水性KOH萃取。水性馏份的LCMS显示具有预期产物质量的单一峰。将水层冷却至0℃，以6N HCL逐滴处理，使其成为酸性(pH 1-2)并用乙酸乙酯萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将残余物使用HPLC纯化， 得到20毫克(9％)第50号化合物。
以下的反应系使用上述程序进行，得到第51号化合物。
该反应使用在2毫升二氯甲烷中的SKC-02-021(70毫克，0.24毫摩尔)、3,5-二甲基苯甲酰氯(40.7毫克，0.24毫摩尔)及三乙胺(0.101毫升，0.72毫摩尔)进行。将粗制反应混合物使用制备性HPLC纯化，得到第51号化合物。
以下的反应系使用上述程序进行，得到(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第59号化合物)：
第59号化合物：LCMS[MH+]＝441。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.37(d,J＝54.9Hz,1H),9.39(t,J＝7.9Hz,1H),7.34-6.93(m,4H),6.75(td,J＝13.6,7.5Hz,1H),5.16-4.87(m,2H),4.54-4.17(m,1H),3.17(d,J＝5.2Hz,1H),1.79-1.41(m,2H),1.10-0.93(m,12H)。
N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-((R)-2,2-二甲基戊-3-基)-7-氟-5’-侧氧基-3H-1l4-螺[苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-1,2’-[1,3,2]恶唑硼啶]-6-甲酰肼(第95号化合物)根据以下方式自第59号化合物制得：
将5.3毫升无水甲苯及1毫升二甲亚砜中的甘氨酸(11.93毫克，0.159毫摩尔)的溶液放入配备有搅拌器的25毫升烧瓶中。添加(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(70毫克，0.159毫摩尔)且将混合物保持在回流下28小时。在真空中移除甲苯之后，将DMSO中的产物溶液转移至15.5克Teledyne ISCO C18反相管柱中且以0-100％CH3CN-H2O洗脱(30分钟)。将所需馏份汇聚且冷冻干燥，得到19毫克(11.4％产率)白色固体状的螺环加成物。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.43-10.18(m,1H–NH旋转异构物的混合物),7.19-6.72(m,5H),6.41-6.37(t,0.46H，部分旋转异构物)4.98-4.76(m,2H),4.43-4.21(两个d,1H,CH),3.56-3.52(重叠s,2H),3.32(s,DMSO-d6水峰),2.50(DMSO-d6),2.32和2.24(s,6H),1.54-1.46(m,2H),1.07-0.88(m,12H)；MS(ESI)C26H32BFN3O5-([M+2H]+)的计算值为498，实测值为498。
以下的反应使用上述程序进行，得到(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼(第67号化合物)：
2-氟-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯：
将无水二恶烷(90毫升)中的4-溴-2-氟-3-甲基苯甲酸甲酯(2.6克，10.52毫摩尔)、乙酸钾(3.61克，36.8毫摩尔)与二聚物4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-双(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(4.01克，15.79毫摩尔)在RB烧瓶中混合在一起。将混合物抽真空且以氩气再填充三次，并在室温下搅拌。将Pd(dppf)2Cl2.DCM添加至此混合物中，将混合物抽真气且以氩气再填充三次，并将混合物在80℃下加热过夜。将深色的反应混合物冷却，通过短的硅藻土垫过滤且移除溶剂。添加水及EtOAc并萃取混合物。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且移除溶剂。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且以管柱层析术纯化，得到标题化合物SKC-09-031(2.8克，90％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81-7.60(m,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),3.92(s,3H),2.62-2.31(m,3H),1.36(s,12H)。
4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酸：
将NBS(1.20克，6.80毫摩尔)及(E)-1,1’-(二氮烯-1,2-二基)二环己烷甲腈(0.166克，0.68毫摩尔)添加至配备有回流冷凝器的200毫升RB烧瓶中于无水CCl4(80毫升)中的上述酯(2.00克，6.80毫摩尔)的溶液中且将反应混合物在80℃下于氩气下搅拌过夜。在1小时期间内分四次添加NBS(1.20克，6.80毫摩尔)与催化剂(0.166克，0.68毫摩尔)的总量。LCMS显示一个在4.59的主峰。将反应混合物冷却，在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。将固 体悬浮在醚中且过滤，以移除固体。将滤液浓缩，以移除溶剂；以水稀释且以EtOAc萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且在旋转蒸发器上移除溶剂。LCMS(M+2)374.60。
将7％水性KOH(～80毫升)添加至粗制中间物中且在室温下搅拌2小时。以醚萃取，产物进入水性馏份中(以LCMS为基准)，丢弃含有一些杂质的醚层。将水性馏份冷却且以6NHCl缓慢地酸化至pH 3。形成白色沉淀物，以过滤收集沉淀物且在真空下干燥。LCMS显示在2.55的单一峰。LCMS(M+1)197.17。1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.34(s,1H),9.58(s,1H),8.00-7.69(m,1H),7.61(d,J＝7.5Hz,1H),5.11(s,2H)。
二步骤偶合的通用程序：将DMF中的4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酸(1.0当量)、PyBOP(1.0当量)、DIEA(2.0当量)在闪烁小瓶中混合在一起且在40℃下于氩气下搅拌3分钟。将肼盐(1当量)添加至此混合物中且将混合物在40℃下搅拌1-2小时。反应以LCMS监控。使用Genevac移除溶剂。添加7％水性KOH，搅拌15分钟且以醚萃取。收集水性馏份，冷却且以6N HCl酸化至pH 3。立即以EtOAc萃取且收集有机馏份，经无水MgSO4干燥且移除溶剂。最后将粗制混合物使用中性氧化铝管柱(MeOH/DCM的溶剂梯度)或使用RediSep C18管柱在ISCO上(0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化。
在第二步骤中，将TEA(1.2当量)及酰氯(1.0当量)在室温下于氩气下添加至DCM中的上述中间物(1.0当量)的搅拌溶液中且将混合物搅拌35分钟。反应以LCMS监控。移除溶剂且将粗制混合物使用RediSep C18管柱在ISCO上(0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化。
将4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酸(1.0克，5.10毫摩尔)、PyBOP(2.66克，5.10毫摩尔)、DIEA(1.78毫升，10.21毫摩尔)在DMF(15毫升)中混合在一起且添加(R)-(2,2-二甲基-戊-3-基)肼4-甲 基苯磺酸盐(1.54克，5.10毫摩尔)。将反应混合物在40℃下搅拌1.5小时。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。在经通用整理程序之后，最后将粗制混合物使用RediSep C18管柱(100克管柱，0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)在ISCO上纯化，以分离成为无色固体的SKC-09-034(0.820克，52％产率)。LCMS(M+1)308.81。1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.77(s,1H),9.52(s,1H),7.66-7.43(m,2H),5.10(s,2H),4.20-3.58(m,1H),1.56-1.53(m,1H),1.31-1.22(m,1H),1.05-0.86(m,12H)。
第67号化合物使用中间物SKC-09-034(0.600克，1.95毫摩尔)、在DCM(10毫升)中的TEA(0.326毫升)及3,5-二甲基苯甲酰氯(0.328克，1.95毫摩尔)于室温下合成。反应在35分钟之后停止，具有3个峰(以LCMS为基准)，一个主峰具有预期的产物质量(441.91，M+1)。在使用Redisep C18管柱(C18100克，0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化之后，分离出成为第67号化合物的最终DAH(0.575克，67％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.48(d,J＝48.2Hz,1H),9.53(s,1H),7.47(d,J＝7.3Hz,1H),7.21-6.94(m,3H),6.61(t,J＝6.3Hz,1H),5.06(s,2H),4.34(dd,J＝72.7,10.2Hz,1H),2.25(s,6H),1.74-1.39(m,2H),1.10-0.91(m,12H)。
上述反应在室温下于氩气下使用SKC-07-068(0.200克，0.65毫摩尔)、TEA(0.109毫升，0.779毫摩尔)及3,5-双(甲基-d3)苯甲酰氯(0.136克，0.779毫摩尔)于DCM(2毫升)中进行过夜。LCMS显示具有预期的产物质量447.14(M+1)的峰与两个额外的峰。将产物分离。
N’-(叔丁基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼：
依照通用程序，将4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酸(0.500克，2.55毫摩尔)、PyBOP(1.34克，2.55毫摩尔)、DIEA(0.89毫升，5.10毫摩尔)于DMF(6毫升)中混合在一起，接着添加叔丁基肼盐酸盐(0.318克，2.55毫摩尔)且将混合物在40℃下搅拌1小时。LCMS显示在2.43具有预期的产物质量267.01(M+1)的主峰。在经通用整理程序之后，将粗制无水样品(SKC-07-069，0.800克，含有一些DMF)以未进一步纯化而用于下一步骤。
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼：
将TEA(0.210毫升，1.50毫摩尔)及3,5-二甲基苯甲酰氯(0.253克，1.50毫摩尔)在室温下于氩气下经过夜添加至DCM(3毫升)中的上述合成的单B(SKC-7-069，0.400克，1.50毫摩尔)的搅拌溶液中。LCMS显示数个峰与在3.45具有预期的产物质量399.09(M+1)的陡峰。在旋转蒸发器上移除溶剂且将粗制混合物使用制备性HPLC(0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化，得到0.080克产物第65号化合物。LCMS：399.09(M+1)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.70(s,1H),9.51(s,1H),7.46(d,J＝7.3Hz,1H),7.04(d,J＝7.2Hz,3H),6.80-6.66(m,1H),5.05(s,2H),2.25(s,6H),1.49(s,9H)。
N’-(3,5-双(甲基-d3)苯甲酰基)-N’-(叔丁基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼：
标题化合物系在室温下于氩气下使用单B(SKC-07-069粗制物，0.400克，1.50毫摩尔)、TEA(0.210毫升，1.50毫摩尔)及3,5-双(甲基-d3)苯甲酰氯(0.263克，1.50毫摩尔)于DCM(3毫升)中经过夜合成。在以制备性HPLC(0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化之后，分离出0.148克纯产物第66号化合物。LCMS：405.07(M+1)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.70(s,1H),9.51(s,1H),7.46(d,J＝7.3Hz,1H),7.04(dd,J＝8.4,1.6Hz,3H),6.83-6.41(m,1H),5.05(s,2H),2.54(s,1H),1.48(d,J＝5.4Hz,9H)。
N’-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼：
依照通用程序，将4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酸(0.500克，2.55毫摩尔)、PyBOP(1.34克，2.55毫摩尔)、DIEA(0.89毫升，5.10毫摩尔)于DMF(10毫升)中混合在一起，接着添加(2,2-二甲基-1-苯基丙基)酰肼盐酸盐(0.548克)且将混合物在40℃下搅拌1.5小时。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。在经通用整理程序之后，最后将粗制混合物使用RediSep C18管柱于ISCO上(0.1％甲酸于水/乙腈中的溶剂梯度)纯化且分离出成为无色固体的标题化合物SKC-09-041(0.400克，44％产率)。LCMS(M+1)357.25。
N’-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-5-甲酰肼：
将TEA(0.094毫升，0.67毫摩尔)及3,5-二甲基苯甲酰氯(0.095克，0.56毫摩尔)在室温下于氩气下经35分钟添加至DCM(5毫升)中的上述合成的单B(SKC-09-041，0.200克，0.56毫摩尔)的搅拌溶液中。LCMS显示数个峰与具有预期的产物质量的小峰及未反应的起始材料。在旋转蒸发器上移除溶剂，将粗制混合物使用RediSep管柱(C18，13克，0.1％甲酸于水/乙腈中的梯度)纯化且分离出第89号化合物(0.070克，25％产率)。LCMS(M+1)489.28。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.84(s,1H),9.50(s,1H),7.58-7.00(m,9H),6.58-6.45(m,1H),5.69(d,J＝33.9Hz,1H),5.06(s,2H),2.23(s,6H),1.08(s,9H)。
实施例2
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基己-3-基)-2-羟基-9-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,2]氧硼杂环庚三烯(oxaborepine)-8-甲酰肼(第70号化合物)的合成：
步骤1：3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
将3-羟基-2-甲基苯甲酸(15.2克，100毫摩尔)及无水MeOH(400毫升)添加至配备有冷凝器及磁搅拌器的1公升3-颈圆底烧瓶中。将7毫升浓缩H2SO4添加至其中且将混合物在氩气下回流过夜。LCMS显示完全转化成产物。收集反应混合物且在真空下移除溶剂。将粗制混合物以乙酸乙酯稀释。在经水性整理(aqueous work up)且以乙酸乙酯萃取之后，将混合物使用ISCO系统(120克硅胶管柱，己烷：乙酸乙酯的溶剂混合物)纯化，得到84％的分离产率的苯甲酸甲酯衍生物(主峰，以己烷中的～12％EtOAc洗脱)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.57(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.26(t,J＝7.9Hz,1H),7.10(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),5.49(s,1H),4.06(s,3H),2.62(s,3H)。
步骤2：3-(烯丙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
将碳酸钾(42.4克，30.6毫摩尔)在室温下于氩气下添加至1公升圆底烧瓶中于丙酮中的3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(30克，180.0毫摩尔)的搅拌溶液中。将烯丙基溴(39.3克，28.1毫升)添加至其中且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在经水性整理且以乙酸乙酯萃取之后，将粗产物使用ISCO系统(硅胶管柱，己烷：EtOAc的溶剂混合物)纯化，得到成为油的产物(89％产率)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.22-7.08(m,1H),6.97(d,J＝7.9Hz,1H),6.10-6.03(m,1H),5.43(dq,J＝17.3,1.7Hz,1H),5.29(dq,J＝10.6,1.5Hz,1H),4.55(dt,J＝5.0,1.6Hz,2H),3.89(s,3H),2.47(s,3H)。
步骤3：4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
将4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(3.5克，16.97毫摩尔)溶解在微波小瓶中的1-甲基吡咯啶-2-酮(4毫升)中，以盖子密闭且在220℃下随着搅拌进行微波照射(以CEM观察)，最大压力300psi，运行时间5分钟，保持时间50分钟。在冷却之后，将粗制混合物直接装载于硅胶管柱(220克)上且使用ISCO系统(己烷：EtOAc的溶剂混合物，以己烷中的～12％EtOAc洗脱出产物)纯化，得到成为浅黄色固体的2.1克(主峰，60％产率)产物SKC-03-012。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.1Hz,1H),6.04-5.95(m,1H),5.21-5.16(m,3H),3.88(s,3H),3.44-3.43(d,2H),2.47(s,3H)。
步骤4：4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸的合成
将25.3克(316毫摩尔)50w/w％的NaOH水溶液在室温下添加至THF：MeOH的混合物(3：1的比，80毫升)中的4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(6.5克，31.6毫摩尔)的搅拌溶液中且将反应混合物在50℃下搅拌4小时。LCMS显示其为完全的反应。将反应混合物冷却至室温，在旋转蒸发器上移除甲醇且以乙酸乙酯稀释。将粗制反应混合物以1N HCl酸化。沉淀出一些产物。将其以水稀释且使用乙酸乙酯萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物使用ISCO系统(80克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～30％EtOAc洗脱出产物，收集产物馏份且浓缩。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.12-5.78(m,1H),5.30-5.08(m,2H),3.45(d,J＝6.3Hz,2H),2.54(d,J＝3.7Hz,3H)。
步骤5：3-乙酰氧基-4-烯丙基-2-甲基苯甲酸的合成
将4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸(2.0克，10.4毫摩尔)在500毫升圆底烧瓶中于6毫升水中制成浆液，在冰浴中冷却且搅拌。缓慢地添加NaOH水溶液(在6毫升水中的4.2克50％NaOH)。将混合物搅拌数分钟，直到溶液澄清为止。逐滴添加乙酸酐，直到获得pH 6为止，通过该时间使反应混合物变成灰白色的浓浆液。将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物变成白色浓浆液。将pH以浓缩HCl调整至2。形成沉淀物，在真空下过滤且干燥。将合并的干燥产物溶解在DCM中且在ISCO系统上使用40克二氧化硅管柱及己烷/EtOAc 的溶剂梯度纯化。以己烷中的～30％EtOAc洗脱出产物，收集馏份且在真空下干燥，得到(2.4克，98％)SKC-01-116。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.0(br s,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.18(d,J＝8.1Hz,1H),6.03-5.67(m,1H),5.26-4.89(m,2H),3.31(d,J＝6.6Hz,2H),2.44(s,3H),2.37(s,3H)。
步骤6：乙酸(R)-6-烯丙基-3-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-2-甲基苯酯的合成
将无水DCM(10毫升)添加至以干燥试管密闭的250毫升圆底烧瓶中的3-乙酰氧基-4-烯丙基-2-甲基苯甲酸(1.5克，6.40毫摩尔)的溶液中且将反应混合物在室温下搅拌。将过量亚硫酰氯(2毫升)及1滴无水DMF添加至其中且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在以干冰冷却分水器之后，在真空下于40℃的水浴上移除过量亚硫酰氯。添加无水DCM且在真空下移除，使产物干燥。以其原样子用于下一步骤中。
将上述酰氯(1.55克，6.15毫摩尔)溶解在无水DCM(6毫升)中且在室温下于氩气下添加至6毫升无水DCM中的先前合成的(R)-N-(2,2-二甲基己-3-基)-3,5-二甲基苯酰肼(1.7克，6.15毫摩尔，95％ee)的搅拌溶液中。添加无水三乙胺(0.86毫升，6.15毫摩尔)且将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的主峰。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且在真空下干燥。将干燥粉末装载在匣上且使用ISCO系统(40克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～20％EtOAc洗脱出产物，收集产物馏份且浓缩，得到SKC-03-019(2.8克，93％)。以其原样子用于下一脱乙酰化步骤中。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.38(d,J＝63.8Hz,1H),7.22-6.93(m,4H),6.72(dd,J＝45.7,7.8Hz,1H),6.02-5.60(m,1H),5.25-4.91(m,2H),4.45(dd,J＝67.4,10.2Hz,1H),3.19(d,J＝6.7Hz,2H),2.30(s,3H), 2.24(m,2H),1.99(s,6H),1.15-1.41(m,5H),1.04(s,9H),0.88–0.79(m,3H)。
同样地，以下的反应系使用酰氯(400毫克，1.58毫摩尔)、N-(叔丁基)-3,5-二甲基苯酰肼(291毫克，1.32毫摩尔)、TEA(0.184毫升，1.32毫摩尔)于无水醚(25毫升)中进行。LCMS显示具有预期的产物质量的主峰且将粗制混合物使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～35％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份且在真空下干燥，得到SKC-01-120(260毫克，45％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.64(s,1H),7.06(s,2H),7.00(s,1H),6.93(d,J＝7.7Hz,1H),5.93-5.66(m,1H),5.14-4.96(m,2H),3.20(d,J＝6.6Hz,2H),2.29(d,J＝12.3Hz,9H),1.81(br s,3H),1.58(s,9H)。
步骤7：(R)-4-烯丙基-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’(2,2-二甲基己-3-基)-3-羟基-2-甲基苯酰肼的合成
将SKC-03-019(2.7克，5.48毫摩尔)溶解在250毫升圆底烧瓶中的MeOH：H2O的混合物(3：1的比，40毫升)中。将过量碳酸氢钠(6.91克，82毫摩尔)添加至其中且将反应混合物在60℃下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。将反应混合物冷却且在真空下于旋转蒸发器上移除MeOH。在经水性整理且以乙酸乙酯萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤 且浓缩。将粗制混合物溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且干燥，直到其自由流动为止。将其装载在匣上且使用ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中30％EtOAc洗脱出产物，收集馏份且在真空下干燥，得到2.2克(89％)SKC-03-023。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.17(d,J＝65.5Hz,1H),8.37(s,1H),7.10-7.03(m,3H),6.87-6.84(m,1H),6.24-6.23(m,1H),5.90-5.83(m,1H),5.20-4.87(m,2H),4.52-4.42(m,1H),3.64-3.60(m,2H),2.24(d,J＝4.7Hz,6H),1.61-1.78(m,4H),1.41(br s,3H),1.03(d,J＝7.2Hz,9H),0.85(t,J＝6.9Hz,3H)。
同样地，以下的反应使用SKC-01-120(710毫克，1.63毫摩尔)及碳酸氢钠(1.37克，16.26毫摩尔)于MeOH：H2O的混合物(3：1的比，12毫升)中进行且将混合物在45℃下搅拌过夜。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将粗制混合物使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～38％EtOAc洗脱出产物，得到SKC-01-135(320毫克，50％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3+DMSO-d6)δ9.49(s,1H),6.49(d,J＝4.7Hz,2H),6.36(d,J＝3.6Hz,1H),6.17(t,J＝6.8Hz,1H),5.82-5.48(m,1H),5.38-5.11(m,1H),5.40–5.15(m,1H),4.53-4.15(m,2H),3.57-3.09(m,1H),2.72(d,J＝5.0Hz,2H),1.66(s,6H),1.25(d,J＝6.2Hz,3H),0.95(dd,J＝8.7,6.9Hz,9H)。
步骤8：(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基己-3-基)-3-羟基-2-甲基-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)丙基苯酰肼的合成
经烘箱干燥的100毫升两-颈圆底烧瓶装备有经特夫纶(Teflon)涂布的磁搅拌棒及两个橡胶隔膜，隔膜之一具有与氩气/真空歧管连接的针。将SKC-01-140(510毫克，1.13毫摩尔)、无水THF(5毫升)及改性的威尔金森氏(Wilkinson’s)催化剂(40毫克，0.057毫摩尔)装入该以氩气冲洗的圆底烧瓶中。在三次真空/氩气吹扫循环之后，将混合物在室温下搅拌，直到所有的试剂溶解为止(<2分钟)。将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(Bpin-H)(0.494毫升，3.40毫摩尔)经由注射器添加至此搅拌的澄清反应混合物中，接着再以氩气/真空/氩气吹扫。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物的颜色从浅黄色改变成深棕色溶液。在搅拌过夜之后，LCMS显示完全转化成产物。将反应混合物以小心添加的几滴水(<1毫升)及MeOH(5毫升)终止且在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。将干燥的粗产物溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且在真空下干燥。一旦其自由流动时，将其装载在空匣上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。收集产物馏份(以10％EtOAc/己烷)且在真空下干燥(630毫克，96％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.16(d,J＝64.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.92(s,1H),7.11(s,1H),7.03(s,1H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),6.42-6.16(m,1H),4.62-4.24(m,1H),2.25(d,J＝4.5Hz,5H),2.00(s,6H),1.60(s,2H),1.55-1.38(m,4H),1.17(s,9H),1.08(s,9H),1.05-0.99(m,3H),0.88–0.78(m,2H)。
以下的反应使用与上述相同的程序进行。
经烘箱干燥的100毫升两颈圆底烧瓶装备有经特夫纶涂布的磁搅拌棒及两 个橡胶隔膜，隔膜之一具有与氩气/真空歧管连接的针。将4-烯丙基-3-羟基-DAH(320毫克，0.811毫摩尔)、改性的威尔金森氏催化剂(28毫克，0.041毫摩尔)及无水THF(5毫升)装入该以氩气冲洗的圆底烧瓶中。在三次真空/氩气吹扫循环之后，将混合物在室温下搅拌，直到所有的试剂溶解为止(<2分钟)。将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(Bpin-H)(0.354毫升，2.43毫摩尔)经由注射器添加至此搅拌的澄清反应混合物中，接着再以氩气/真空/氩气吹扫。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在搅拌过夜之后，LCMS显示完全转化成产物。将反应混合物以小心添加的几滴水(<1毫升)及MeOH(5毫升)终止且在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。将干燥的粗产物溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且在真空下干燥。一旦其自由流动时，将其装载在空匣上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～30％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份且在真空下干燥(310毫克，73％产率)。重复此实验。(SKC-01-128：63％产率，及SKC-01-134：73％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.24(s,1H),7.13–6.96(m,3H),6.80(d,J＝7.7Hz,1H),6.14(d,J＝7.7Hz,1H),2.26(s,6H),1.74(s,3H),1.51-1.47(m,11H),1.17(s,12H),1.12-1.00(m,2H),0.65(t,J＝7.9Hz,2H)。
步骤9：第70号化合物的合成：
将上述Bpin-DAH(630毫克，1.09毫摩尔)与THF：水的混合物(4：1，20毫升)及高碘酸钠(1.4克，6.53毫摩尔)混合且添加在THF中的HCl的2.0M溶液(1.09毫升，2.18毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示一个主峰。在旋转蒸发器上移除溶剂，将残余物以EtOAc稀释且萃取。将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物吸附在中性氧化铝上且使用ISCO系统(8克中性氧化铝管柱，DCM/MeOH的溶剂混合物)纯化。以 DCM中的～5％MeOH洗脱出产物，收集且干燥。在DMSO-d6中的1H NMR光谱显示至少三种产物的混合物。添加D2O。1H NMR(400MHz，DMSO-d6+D2O)δ7.23-7.00(m,3H),6.98-6.79(m,1H),6.55-6.17(m,1H),4.72-4.17(m,1H),2.30(s,6H),1.91-1.69(m,2H),1.72-1.31(m,9H),1.08(s,9H),0.94-0.83(m,3H),0.67(t,J＝7.8Hz,2H)。
在类似的方式中，第69号化合物系如以下方式制备：
将上述Bpin-DAH(75毫克，0.11毫摩尔)与THF：H2O的混合物(4：1，10毫升)及高碘酸钠(184毫克，0.861毫摩尔)混合，且添加在THF中的HCl的2.0M溶液(0.144毫升，0.287毫摩尔)。将混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示单一峰。在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂，将残余物以EtOAc稀释且萃取。将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物吸附在中性氧化铝上且使用ISCO系统(8克中性氧化铝管柱，DCM/MeOH的溶剂混合物)纯化。以DCM中的～5％MeOH洗脱出单一产物，收集且干燥。产物不溶于CDCl3中，所以将其溶解在1H NMR分析的DMSO-d6中。在DMSO-d6中的1H NMR光谱显示至少三种产物的混合物。添加几滴D2O，使任何可交换质子氘化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6+D2O)δ7.01(s,3H),6.87-6.72(m,1H),6.13(d,J＝7.7Hz,1H),2.47-2.37(m,2H),2.22(s,6H),1.72(s,3H),1.47(d,J＝3.5Hz,11H),0.58(t,J＝7.9Hz,2H)。
实施例3
(R)-(3-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-2-甲氧基-3-甲基苯基)丙基)硼酸(第27号化合物)的合成：
步骤1：(R)-4-烯丙基-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’(2,2-二甲基己-3-基)-3-甲氧基-2-甲基苯酰肼的合成
将无水K2CO3(169毫克，1.22毫摩尔)在室温下于氩气下添加至配备有回流冷凝器的100毫升1-颈圆底烧瓶中于无水丙酮(5毫升)中的SKC-03-023(500毫克，1.11毫摩尔)的溶液中。将反应混合物在50℃下搅拌30分钟。将MeI(0.104毫升，1.66毫摩尔)添加至其中且将反应混合物在50℃下搅拌过夜。LCMS显示其为完全的反应。将反应混合物以EtOAc稀释且过滤，以移除K2CO3。将滤液在真空下干燥。将粗制混合物吸附在二氧化硅上，干燥，使其自由流动，装载在匣上且使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～15％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份且浓缩，得到甲基化产物SKC-03-036(270毫克，52％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.16-6.83(m,4H),6.48(d,J＝7.8Hz,1H),5.92(m,1H),5.08(m,2H),4.66(t,J＝25.6Hz,1H),3.663(s,3H),3.38(d,J＝6.5Hz,2H),2.27(s,6H),1.85-1.76(m,4H),1.54–1.34(m,3H),1.11(d,J＝19.7Hz,9H),0.94-0.86(m,3H)。
步骤2：(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基己-3-基)-3-甲氧基-2-甲基-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)丙基苯酰肼的合成
经烘箱干燥的100毫升两颈圆底烧瓶装备有经特夫纶涂布的磁搅拌棒及两个橡胶隔膜，隔膜之一具有与氩气/真空歧管连接的针。将无水THF(2毫升)中的4-烯丙基-3-羟基-DAH(SKC-03-036，270毫克，0.58毫摩尔)及改性的威尔金森氏催化剂(20.08毫克，0.029毫摩尔)装入该以氩气冲洗的圆底烧瓶中，且进行三次真空/氩气吹扫循环。将混合物在室温下搅拌，直到所有的试剂溶解为止(<2分钟)。将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(Bpin-H)(0.254毫升，1.74毫摩尔)经由注射器添加至此搅拌的澄清反应混合物中，再进行氩气/真空/氩气吹扫且将反应混合物搅拌5小时。反应混合物的颜色从浅黄色转化成深棕色。LCMS显示反应在5小时内完成，但是容许其搅拌过夜。缓慢地添加几滴水。一旦停止冒泡时，则添加MeOH且将反应混合物浓缩。将粗制混合物在ISCO系统上(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以20％EtOAc/己烷洗脱出产物。收集产物馏份且在真空下干燥，得到230毫克(67％)第29号化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.15(s,1H),7.11(s,1H),7.08-6.91(m,3H),6.48(d,J＝7.8Hz,1H),4.53-4.28(m,1H),3.55(d,J＝4.2Hz,3H),2.25(d,J＝4.5Hz,6H),1.79-1.74(m,2H),1.66)s.3H),1.7-1.39(m,6H),1.17(s,12H),1.03(d,J＝5.8Hz,9H),0.93(t,J＝7.1Hz,1H),0.85(t,J＝6.9Hz,3H),0.69(t,J＝7.6Hz,2H)。
步骤3：(R)-(3-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-2-甲氧基-3-甲基苯基)丙基)硼酸(第27号化合物)的合成：
将高碘酸钠(498毫克，2.33毫摩尔)添加至THF/水的混合物(4：1的比，5毫升)中的第29号化合物(230毫克，0.388毫摩尔)的溶液中且接着添加在醚中的2M HCl(0.388毫升，0.776毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌几小时，以LCMS检查且容许反应继续搅拌过夜。将反应混合物过滤，以移除固体，以DCM清洗且在真空下干燥。将粗制反应混合物吸附在中性氧化铝上且干燥。一旦其自由流动时，将其装载在ISCO匣上且纯化(24克中性氧化铝管柱，MeOH-DCM的溶剂混合物)。以DCM中的2％MeOH洗脱出产物，得到130毫克第27号化合物(66％)，>95％ee。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.43-9.78(m,1H),8.35-8.03(m,1H),7.18-6.89(m,4H),6.66-6.38(m,1H),4.67-4.36(m,1H),3.60-3.51(m,3H),3.30(s,3H),3.18(d,J＝5.3Hz,2H),2.64-2.51(m,2H),2.25(d,J＝4.3Hz,6H),1.88-1.16(m,8H),1.03(d,J＝5.9Hz,9H),0.89-0.80(m,3H)。
实施例4
(R)-(3-(2-二氟甲氧基)-4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-3-甲基苯基)丙基)硼酸(第28号化合物)的合成
步骤1：(R)-4-烯丙基-3-(二氟甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基己-3-基)-2-甲基苯酰肼的合成
将3-羟基-4-烯丙基DAH(2.8克，6.21毫摩尔)溶解在配备有回流冷凝器的圆底烧瓶中的DMF/水的混合物(6：1的比，11.6毫升)中。将碳酸铯(4.05克，12.43毫摩尔)及二氟乙酸钠盐(1.42克，9.3毫摩尔)添加至其中。将反应混合物在130℃下搅拌(冷凝器开口朝向大气)2小时30分钟。LCMS显示67％产物及33％起始材料的转化率。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将粗产物使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～18％EtOAc洗脱出产物及以己烷中的25％EtOAc洗脱出起始材料。收集产物馏份且干燥，得到成为无色固体的1.13克纯产物(以反应的SM为基准的64％产率)。回收1.2克起始材料。产物结构系以LCMS数据为基准分配。
步骤2：(R)-3-(二氟甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基己-3-基)-2-甲基-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)丙 基苯酰肼的合成
将催化剂(41.4毫克，0.06毫摩尔)在室温下于氩气下添加至100毫升2-颈圆底烧瓶中于无水THF(6毫升)中的上述合成的4-烯丙基-3-(二氟甲氧基)-DAH(600毫克，1.2毫摩尔)的溶液中。在3次真空/氩气吹扫循环之后，经由注射器添加Bpin-H(0.523毫升，3.60毫摩尔)且再进行2次真空/氩气吹扫循环。将反应混合物搅拌4小时，同时在氩气下回流。反应混合物的颜色在20分钟之内转变成浅棕色。在2小时之后，LCMS显示～46％的产物转化率。将温度下降至76℃且将反应混合物搅拌过夜。LCMS显示额外两个低极性峰与未反应的起始材料及预期的产物。在反应之后，将2毫升MeOH及几滴水添加至反应混合物中，在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂，将粗制混合物溶解在DCM中且吸附在二氧化硅上。一旦其干燥且自由流动时，将其装载在匣上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。在ISCO管柱之后，收集660毫克混合物(以己烷中的～15％EtOAc洗脱，SM+产物，36：62的比)且以其原样子用于下一步骤。
步骤3：(R)-(3-(2-二氟甲氧基)-4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-3-甲基苯基)丙基)硼酸(第28号化合物)的合成：
将上述混合物(660毫克)溶解在THF：水的混合物(4：1，30毫升)及高碘酸钠(1.35克，6.30毫摩尔)中且添加在THF中的2.0M HCl(1.05毫升，2.10毫摩尔)。将反应混合物在40℃下搅拌1小时。LCMS显示预期的产物的主峰。容许反应在40℃下再继续搅拌30分钟及在室温下过夜。在经水性整理且以乙酸乙酯萃取之后，收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物使用制备性HPLC纯化，得到以LCMS数据为基准的第28号化合物(>95％ee)。
实施例5
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第75号化合物)的合成：
步骤1：3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
如实施例1中所述的实验程序。
步骤2：4-溴-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成：
500毫升3-颈圆底烧瓶装备有两个滴液漏斗。将CH2Cl2(140毫升)中的第三丁胺(4.4克，60.2毫摩尔)的溶液添加至其中且将烧瓶冷却至-78℃。从滴液漏斗经30分钟逐滴添加在CH2Cl2(60毫升)中的溴(9.6克，60.2毫摩 尔)的溶液。将混合物在-78℃下再搅拌1小时。从第二滴液漏斗经1小时期间添加在CH2Cl2(25毫升)中的3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(10.0克，60.2毫摩尔)的溶液。(US 2005110979)。容许反应混合物温热至且搅拌过夜。LCMS显示3个峰。经水性整理且以DCM萃取，接着使用ISCO系统(2×80克硅胶管柱，己烷/EtOAc的溶剂混合物)的快速管柱层析术得到产物(第一峰，馏份4-5，3.3克，22％产率)。将副产物分离且表征为二溴及5-溴衍生物。1H NMR(CDCl3)：7.29-7.21(dd,2H),5.64(s,1H),3.81(s,3H),2.45(s,3H)。
步骤2：4-溴-2-甲基-3-2((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯的合成：
将无水K2CO3(1.12克，8.16毫摩尔)在氩气下添加至无水DMF(20毫升)中的4-溴-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(1.0克，4.08毫摩尔)的溶液中且将反应混合物在室温下搅拌2小时。将2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃(1.28克，6.12毫摩尔)添加至该搅拌的混合物中。将反应混合物在60℃下加热4小时。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。停止加热且在室温下继续搅拌过夜。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物使用ISCO系统(40克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～10％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份且浓缩，得到1.48克(97％产率)SKC-02-034。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),4.78(t,J＝3.5Hz,1H),4.22-4.03(m,3H),4.07-3.76(m,5H),3.60-3.52(m,1H),2.61(s,3H),1.98-1.38(m,6H)。
步骤3：4-溴-2-甲基-3-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲酸的合成：
将水性KOH(在10毫升水中的1.0克KOH)添加至2毫升MeOH中的上述甲酯(330毫克，0.884毫摩尔)中且将反应在室温下搅拌6小时。LCMS显示～5％的产物形成。将3毫升MeOH添加至反应混合物中且加热至60℃。LCMS显示单一峰。添加饱和NaHCO3至pH 9。尝试在EtOAc中萃取产物，但是其停留在水性馏份中。将反应混合物在冰浴中冷却且缓慢地添加1N HCl，使其成为pH 4。使用EtOAc萃取产物且两种馏份的LCMS显示几乎相同的产物量。将水性馏份再酸化至pH 0-1，LCMS显示除了主峰以外尚有额外的峰(次峰)。将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物使用ISCO系统(12克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的25％EtOAc洗脱出产物，得到220毫克(70％产率)产物。
以2.2克规模在30毫升MeOH与50毫升10％水性KOH的混合物中重复实验。反应系在55℃下于6小时内完成。添加饱和NaHCO3且将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在冰浴中冷却，缓慢地添加1N HCl，使其成为pH 3-4。使用EtOAc萃取且接着将水性馏份以1N HCl再酸化至pH 1-2。第二次萃取。将合并的有机馏份浓缩且使用ISCO系统(40克二氧化硅金管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的35％EtOAc洗脱出主峰，得到SKC-02-042。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,1H),4.77(t,J＝3.5Hz,1H),4.26-4.02(m,3H),3.91-3.80(m,2H),3.69-3.40(m,1H),2.65(s,3H),2.01-1.39(m,6H)。
步骤4：4-溴-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲酸全氟苯酯的合成
将上述酸(SKC-02-042，770毫克，2.14毫摩尔)在氩气下溶解在200毫升圆底烧瓶中的无水乙酸乙酯(9毫升)中且在室温下搅拌。将五氟酚(434毫克，2.36毫摩尔)及DCM中的1M DCC(2.36毫升，2.36毫摩尔)添加至其中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。以搅拌再经10分钟添加5毫升水。将沉淀物滤出。将滤液以EtOAc和水稀释且以乙酸乙酯萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～8％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份且干燥，得到SKC-02-044(1.1克，98％产率)。 1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.74(t,J＝11.3Hz,1H),4.84(t,J＝3.3Hz,1H),4.26-4.10(m,3H),4.06-3.87(m,2H),3.72-3.55(m,1H),2.74(s,3H),2.03-1.70(m,6H)。
步骤5：4-溴-N’-(叔丁基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼的合成
将EtOAc(4毫升)在室温下添加至200毫升圆底烧瓶中的K2CO3水溶液(25重量％，在3.4毫升水中的600毫克K2CO3)的搅拌溶液中。将叔丁基肼盐酸盐(267毫克，2.14毫摩尔)添加至其中，接着添加溶解在EtOAc(3毫 升)中的Pf酯衍生物(750毫克，1.43毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。为了检查LCMS，将少量样品与微酸性缓冲溶液(pH 6.5，来自Aldrich)混合，以终止任何未反应的游离肼。将粗制混合物以缓冲溶液(pH 6.5)稀释且搅拌几分钟。LCMS显示两个峰，主峰具有预期的产物质量。在一般的水性整理且以乙酸乙酯萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物再溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～45％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份，得到490毫克，80％产率的酰肼产物SKC-02-050。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(s,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,1H),4.89(s,1H),4.72(d,J＝2.8Hz,1H),4.15-4.03(m,3H),3.97-3.73(m,2H),3.51-3.49(m,1H),2.41(s,3H),1.91-1.44(m,6H),1.13(s,9H)。
步骤6：4-溴-N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼的合成
将3,5-二甲基苯甲酰氯(196毫克，1.16毫摩尔)添加至100毫升圆底烧瓶中于DCM(2毫升)中的SKC-02-045(500毫克，1.16毫摩尔)的搅拌溶液中。溶液变澄清。将TEA(0.162毫升，1.16毫摩尔)逐滴添加至其中。将反应混合物在氩气下于室温下搅拌过夜。LCMS显示两个峰，主峰显示预期的产物质量。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(12克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～40％EtOAc洗脱出产物。收集产物馏份，得到560毫克(86％产率)固体产物SKC-02-047。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(s,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝4.2Hz,3H),6.42(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),4.65(t,J＝3.1Hz,1H),4.14-3.58(m,5H),3.55-3.37(m,1H),2.24(s,6H),1.79(s,3H),1.77-1.37(m,15H)。
步骤7：N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼的合成
将乙酸钯(II)(4.0合克，0.018毫摩尔)、膦配体(25.0毫克，0.071毫摩尔)及三乙胺(0.15毫升，1.069毫摩尔)在室温下于氩气下添加至无水1,4-二恶烷(2毫升)中的上述合成的4-溴-DAH(200毫克，0.36毫摩尔)的搅拌溶液中。在3次真空/氩气吹扫循环之后，经由注射器添加Bpin-H(0.16毫升，1.069毫摩尔)，接着再2次真空/氩气吹扫循环。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，接着加热至40℃且搅拌4小时。LCMS显示产物峰。在反应之后，将2毫升MeOH及几滴水添加至反应混合物中且在旋转蒸发器上移除溶剂。将粗制混合物再溶解在DCM中且吸附在二氧化硅上。一旦其干燥且自由流动时，将其装载在匣上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到50毫克SKC-02-048。
步骤8：N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼的合成
将50毫克SKC-02-048在40℃下在含有0.1％甲酸的1：1的水/乙腈的2毫升混合物中搅拌过夜且以LCMS检查。在反应完成之后，在真空下于旋转蒸 发器上移除溶剂，将粗产物以制备性HPLC纯化且冷冻干燥，得到成为纯的干粉末的17毫克第75号化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.49(s,1H),8.39(s,1H),7.57(d,J＝7.8Hz,1H),7.04(s,3H),6.19(d,J＝7.9Hz,1H),4.41-4.18(m,2H),4.16-3.96(m,2H),2.25(s,6H),1.70(s,3H),1.49(s,9H)。
实施例6
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第79号化合物)的合成
步骤1：4-溴-N’-((R)-2,2-二甲基戊-3-基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼的合成
将EtOAc(6毫升)在室温下添加至圆底烧瓶中的25重量％的K2CO3水溶液(800毫克K2CO3于3.2毫升水中)的搅拌溶液中。将叔丁基肼添加至其中，接着添加溶解在EtOAc(4毫升)中的Pf酯化合物(1.0克，1.904毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示单一峰。将粗制混合物以MeOH稀释，浓缩，溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～35％EtOAc洗脱出产物，得到610毫克(68％)产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.66(s,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),4.85(s,1H),4.70(t,J＝3.3Hz,1H),4.06-4.01(m,2H),3.97-3.89(m,1H),3.84-3.70(m,2H),3.51-3.40(m,1H),2.32(s,3H),1.82-1.35(m,8H),1.04(t,J＝7.5Hz,3H),0.93(s,9H)。
步骤2：4-溴-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-((R)-2,2-二甲基戊-3-基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼的合成
将酰氯(111毫克，0.658毫摩尔)添加至2毫升DCM中的SKC-03-034(310毫克，0.658毫摩尔)的溶液中。溶液变澄清。逐滴添加TEA(66.5毫克， 0.092毫升)且将反应混合物在氩气下于室温下搅拌2小时。反应混合物变成无色黏稠浆液且将其搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。将反应混合物吸附在硅胶上且使用ISCO系统(12克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～20％EtOAc洗脱出产物，得到380毫克(96％)SKC-03-037。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.33(d,J＝57.6Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),7.10(s,1H),7.06-6.97(m,2H),6.62-6.41(m,1H),4.70-4.60(m,1H),4.33(dd,J＝82.0,10.4Hz,1H),3.99-3.82(m,3H),3.82-3.71(m,1H),3.71-3.58(m,1H),3.52-3.34(m,1H),2.24(d,J＝4.9Hz,6H),1.83-1.28(m,11H),1.12-0.99(m,12H)。
步骤3：(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第79号化合物)的合成
将乙酸钯(II)(7.07毫克，0.031毫摩尔)、膦配体(44.1毫克，0.126毫摩尔)及三乙胺((0.263毫升，1.889毫摩尔)在室温下于氩气下添加至100毫升2-颈圆底烧瓶中于无水1,4-二恶烷(3毫升)中的SKC-03-037(380毫克，0.630毫摩尔)的溶液中。在3次真空/氩气吹扫循环之后，经由注射器添加 Bpin-H(0.273毫升，1.889毫摩尔)，接着再2次真空/氩气吹扫循环。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，接着温热至40℃且搅拌4小时。LCMS显示产物峰及对应于质子化产物的高极性峰(SKC-03-040-1)。在反应之后，将2毫升MeOH及几滴水添加至将反应混合物中且将其在真空下浓缩。将粗制混合物再溶解在DCM中且吸附在二氧化硅上。一旦其干燥且自由流动时，将其装载在匣上且使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的20％EtOAc洗脱出馏份(第70号化合物)。以己烷中的25％EtOAc洗脱出第二峰(SKC-03-040-1)。将两个产物峰分离。SKC-03-040的1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.33(d,J＝58.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.07(d,J＝25.0Hz,3H),6.70-6.23(m,1H),4.78-4.60(m,1H),4.43(d,J＝9.9Hz,1H),3.99-3.80(m,3H),3.84-3.71(m,1H),3.68(d,J＝3.2Hz,1H),3.50-3.39(m,1H),2.24(d,J＝4.9Hz,6H),1.80-1.34(m,8H),1.09-0.92(m,24H)。
将所获得的Bpin化(Bpinlated)产物(SKC-03-040)与含有0.1％甲酸的1：1的水/乙腈的2毫升混合物在40℃下搅拌过夜。LCMS显示其为完全的反应。移除溶剂，将残余物以制备性HPLC纯化且冷冻干燥，得到成为干粉末的第79号化合物(83毫克；>95％ee)。
将第一步骤所获得的质子化产物亦与含有0.1％甲酸的1：1的水/乙腈的2毫升混合物在40℃下搅拌过夜，得到成为干粉末的41毫克SKC-03-040-2(>95％ee)。
第82号化合物系使用上述程序从SKC-06-005制得：
第82号化合物LCMS[MH+]＝443。
实施例7
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼羰基)-2-(2-甲氧基乙氧基)-3-甲基苯基)硼酸(第26号化合物)的合成：
步骤1：4-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
2-甲基-3-羟基-4-溴甲酯(2.0克，8.16毫摩尔)溶解在配备有回流冷凝器的100毫升圆底烧瓶的无水DMF(20毫升)中且将无水碳酸钾(2.26克，16.32毫摩尔)添加至其中。将反应混合物在室温下于氩气下搅拌15分钟。将1-溴-2-甲氧基乙烷(1.70克，12.24毫摩尔)添加至其中，将反应混合物加热至90℃且在氩气下搅拌过夜。LCMS显示单一峰。将反应混合物冷却。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。其以未进一步纯化而用于下一步骤中。
步骤2：4-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸的合成
50毫升10％的KOH水性溶液添加至上述甲酯SKC-04-011(3.1克粗重量，但是经煅烧至2.0克纯化合物)的MeOH(25毫升)溶液中。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。LCMS显示反应仅完成75％。将反应再加热7小时且接着在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。在真空下移除所有的MeOH。将水性反应混合物在冰浴中冷却且缓慢地添加1N HCl至pH 4-5。沉淀出白色产物。将其过滤且在真空下于40℃下经过夜干燥，得到成为无色粉末的1.34克(70％)酸SKC-04-012。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.15(br s,3H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),4.09-3.90(m,2H),3.73-3.63(m,2H),3.33(s,3H),2.47(s,3H)。
步骤3：4-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸全氟苯酯的合成
将4-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸(SKC-04-012，1.37克，4.74毫摩尔)在氩气下溶解在250毫升圆底烧瓶中的无水EtOAc(20毫升)中且在室温下搅拌。将五氟酚(0.959克，5.21毫摩尔)及DCM中的1M DCC(5.21毫升，5.21毫摩尔)添加至其中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。以搅拌再经10分钟添加2毫升水。将沉淀物滤出。将滤液以EtOAc稀释且萃取。在经水性整理之后，收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的5％EtOAc洗脱出产物馏份，得到成为无色固体的1.79克(83％产率)Pf酯衍生物SKC-04-017。
步骤4：(R)-4-溴-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯酰肼的合成
将EtOAc(12毫升)在室温下添加至圆底烧瓶中的25重量％的K2CO3水溶液(在6.5毫升水中的1.63克K2CO3)的搅拌溶液中。将叔丁基肼盐(1.784克，5.90毫摩尔)添加至其中，接着添加溶解在EtOAc(8毫升)中的上述Pf酯衍生物(1.79克，3.93毫摩尔)中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的主峰。将粗制混合物以酸性缓冲溶液(Aldrich，pH6.5)稀释且以EtOAc萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物再溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～30％EtOAc的混合物洗脱出产物，得到1.6克(99％)SKC-04-026。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.66(d,J＝6.5Hz,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,1H),4.84(dd,J＝6.5,3.3Hz,1H),4.01-3.96(m,2H),3.72-3.63(m,2H),3.34(s,3H),2.38-2.31(m,1H),2.29(s,3H),1.60-1.49(m,1H),1.34-1.21(m,1H),1.03(t,J＝7.5Hz,3H),0.93(s,9H)。
步骤5：(R)-4-溴-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯酰肼的合成
将3,5-二甲基苯甲酰氯(315毫克，1.869毫摩尔)及三乙胺(0.260毫升，1.869毫摩尔)添加至无水DCM(2毫升)中的(R)-4-溴-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯酰肼(SKC-04-026，750毫克，1.869毫摩尔)的溶液中。将反应混合物在室温下于氩气下搅拌过夜。LCMS显示两个主峰。将粗制混合物溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且使用ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的30％EtOAc洗脱出产物馏份，得到
SKC-04-028-3。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.57-10.08(m,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),7.19-6.96(m,3H),6.49(dd,J＝50.2,8.2Hz,1H),4.33(dd,J＝82.0,10.2Hz,1H),3.96-3.78(m,2H),3.62(t,J＝4.6Hz,2H),3.31(s,3H),2.25(s,6H),1.78-1.29(m,5H),1.12-0.92(m,12H)。
步骤6：(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼羰基)-2-(2-甲氧基乙氧基)-3-甲基苯基)硼酸(第26号化合物)的合成
将乙酸钯(II)(8.42毫克，0.037毫摩尔)、膦配体(52.6毫克，0.150毫摩尔)及三乙胺(0.314毫升，2.249毫摩尔)在室温下于氩气下添加至100毫升2-颈圆底烧瓶中于无水1,4-二恶烷(4毫升)中的上述合成的4-溴-DAH(SKC-04-028-3，400毫克，0.750毫摩尔)的溶液中。在3次真空/氩气吹扫 循环之后，经由注射器添加Bpin-H(0.327毫升，2.249毫摩尔)，接着再2次真空/氩气吹扫循环。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，接着加热至40℃且搅拌过夜。LCMS显示Bpin化产物峰及具有对应于质子化产物的质量的高极性峰。在反应之后，将2毫升MeOH及几滴水添加至反应混合物中。在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂，将粗制混合物再溶解在DCM中且吸附在二氧化硅上。一旦其干燥且自由流动时，将其装载在匣上且使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。一起洗脱出两种产物。将馏份合并且使用制备性HPLC纯化。分离出SKC-04-032Pk1(31毫克，>95％ee)。在HPLC纯化期间，Bpin化产物缓慢地水解成硼酸衍生物。在40℃下于HPLC的溶剂混合物(0.1％HCO2H于水/ACN混合物中，2毫升)中搅拌过夜之后，将材料以制备性HPLC再纯化，得到第26号化合物(9毫克)(>95％ee)。
实施例8
(R)-(3-(1-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-(3-甲氧基-2-甲基苯甲酰基)肼羰基)-5-甲基苯基)硼酸(第33号化合物)的合成
步骤1：3-甲基-5-(4,4,5,5,-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰氯的合成：
将3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酸(700毫克，2.67毫摩尔)放入配备有搅拌棒的100毫升圆底烧瓶中。将3.0毫升无水氯仿添加至烧瓶中，接着添加2.0毫升亚硫酰氯及1滴无水DMF。将反应混合物在35℃下搅拌3小时且接着在室温下过夜。在以少量的MeOH终止之后，样品的LCMS显示没有留下酸。在真空下移除溶剂及过量亚硫酰氯，得到SKC-03-071。以未进一步纯化的SKC-03-071用于下一步骤中。
步骤2：(R)-N’-2,2-二甲基戊-3-基)-3-甲氧基-2-甲基-N’-(3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰基)苯酰肼的合成：
将上述酰氯(SKC-03-071，403毫克，1.437毫摩尔)溶解在无水DCM(2毫升)中且在室温下于氩气下添加至3毫升无水DCM中的先前合成的(R)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-3-甲氧基-2-甲基苯酰肼(400毫克，1.437毫摩尔，>95％ee)的搅拌溶液中。添加无水三乙胺(0.200毫升，1.437毫摩尔)且将反应混合物在室温下搅拌3小时。LCMS显示具有预期的产物质量的主峰与一些其它的次峰。将粗制混合物吸附在中性氧化铝上且在真空下干燥。将干粉末装载在匣上且使用ISCO系统(24克中性氧化铝管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以已烷中的～15％EtOAc洗脱出产物与水解产物，得到成为混合物的SKC-03-072(270毫克)。以其原样子用于下一水解步骤。
步骤3：(R)-(3-(1-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-(3-甲氧基-2-甲基苯甲酰基)肼羰基)-5-甲基苯基)硼酸(第33号化合物)的合成
将上述混合物SKC-03-072(270毫克，0.517毫摩尔)与THF：H2O的混合物(4：1，15毫升)及高碘酸钠(221毫克，1.034毫摩尔)混合且添加在THF中的HCl的2.0M溶液(1.55毫升，3.10毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示具有预期的硼酸质量的单一峰。在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物使用制备性HPLC纯化，得到32毫克(14％)第33号化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.51-9.87(m,1H),7.99(br s,1H),7.64(dd,J＝20.2,11.7Hz,2H),7.40-7.25(m,1H),7.13-7.03(m,1H),6.98–6.89(m,1H),6.48-6.17(m,1H),4.58-4.12(m,1H),3.76-3.68(m,3H),2.28(d,J＝6.5Hz,3H),1.49(d,J＝31.9Hz,5H),1.16-0.92(m,12H)。
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-3-氟苯基)硼酸(第13号化合物)系使用上述方法从SKC-07-018制得：
第13号化合物的LCMS[MH+]＝443。
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基-2(2,2-二甲基己-3-基)肼-1-羰基) -3-氟苯基)三氟硼酸钾(第93号化合物)如以下方式从第13号化合物制得：
将氢氟化钾溶液(1.81毫升，5.43毫摩尔，在H2O中的3.0M，来自Aldrich)在室温下添加至第13号化合物(0.300克，0.68毫摩尔)的搅拌溶液中(J.Org.Chem.77:6384-6393(2012))。无色澄清溶液在5分钟内开始缓慢地沉淀且在20分钟内得到浓稠的白色沉淀物。将混合物在室温下搅拌2.5小时且接着减压浓缩，得到白色固体。将丙酮添加至白色固体中且通过过滤漏斗过滤。将滤液在减压下于旋转蒸发器上浓缩，直到观察出少量沉淀为止。将二乙醚添加至所得白色固体中，以助长沉淀。以过滤收集沉淀物，以醚清洗且干燥，得到白色硼酸盐第93号化合物(0.276克，81％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.18(d,J＝56.9Hz,1H),7.00-6.92(m,5H),6.52(dd,J＝14.2,7.1Hz,1H),4.43(dd,J＝58.4,8.6Hz,1H),2.24(s,6H),1.79-1.34(m,4H),1.02(d,J＝3.2Hz,9H),0.88(dt,J＝31.9,6.9Hz,3H)。
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-2-氟苯基)硼酸(第22号化合物)系使用上述方法从SKC-07-055A制得：
第22号化合物的LCMS[MH+]＝443。
(4-(2-(叔丁基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼羰基)-2-氟苯基)硼酸(第23号化合物)使用上述方法从SKC-07-055B制得：
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基己-3-基)肼羰基)-3,5-二氟苯基)硼酸(第24号化合物)使用上述方法从SKC-07-043A制得：
第24号化合物的LCMS[MH+]＝461。
(4-(2-(叔丁基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼羰基)-3,5-二氟苯基)硼酸(第25号化合物)系使用上述方法从SKC-07-043B制得：
实施例9
合成用中间物的制备
步骤1：3-羟基-2-甲基-4-(丙-1-烯-1-基)苯甲酸甲酯的合成
将无水DMSO(20毫升)中的4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(4.12克，20毫摩尔)在室温下于氩气下添加至配备有滴液漏斗的圆底烧瓶中。将1.0M THF中的t-BuOK(5.61克，50毫摩尔)逐滴添加至搅拌溶液中。在添加之后，将反应混合物在55℃下加热过夜。反应系使用LCMS监控。在反应完成之后，将其冷却，以1N HCl酸化且搅拌30分钟。经水性整理且以乙酸乙酯萃取，得到粗制混合物，将其使用ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的溶剂梯度)纯化，得到4.12克(77％)产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42(d,J＝8.2Hz,1H),7.18(d,J＝8.2Hz,1H),6.61(dd,J＝15.9,1.7Hz,1H),6.37-6.13(m,1H),3.90(s,3H),2.50(s,3H),1.96(dd,J＝6.6,1.7Hz,3H)。
步骤2：4-甲酰基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
将高碘酸钠(3.96克，18.51毫摩尔)及在第三丁醇中的2.5重量％的四氧化锇溶液(3.3毫升，2.66毫摩尔)添加至二恶烷/水(280毫升，2.5/1的比)中的3-羟基-2-甲基-4-(丙-1-烯-1-基)苯甲酸甲酯(1.66克，8.05毫摩尔)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将粗产物在ISCO系统(40克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到1.2克(77％产率)醛。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.39(s,1H),9.93(s,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),3.93(s,3H),2.44(s,3H)。
步骤3：4-甲酰基-2-甲基-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯甲酸甲酯的合成
将三氟甲磺酸酐(1.6克，5.66毫摩尔)在-78℃下于氩气下逐滴添加在无水DCM(22毫升)中的4-甲酰基-3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(1.1克，5.66毫摩尔)的搅拌溶液中，接着添加三乙胺(0.79毫升，5.66毫摩尔)。将反应混合物搅拌过夜且容许温热至室温。反应混合物在添加期间由无色转化成黄色且接着经过夜转化成浅棕色。搅拌过夜，LCMS显示单一峰。在一般的水性整理且以DCM萃取之后，收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物吸附在硅胶上且干燥。将其装载在匣上且使用ISCO系统(24克硅胶管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。收集产物馏份且在真空下干燥，得到1.58克(85％的最终产物)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.26(s,1H),7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,1H),3.96(s,3H),2.63(s,3H)。
步骤4：4-(羟甲基)-2-甲基-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯甲酸甲酯的合成
将硼氢化钠(0.183克，4.84毫摩尔)在冰点温度下于氩气下添加至MeOH(10毫升)中的上述化合物(1.58克，4.84毫摩尔)的搅拌溶液中。在2小时之后，LCMS显示新的主峰。将反应以添加水(～2毫升)而终止。在旋转蒸发器上移除MeOH。将反应混合物以EtOAc萃取，经无水MgSO4干燥，过滤，浓缩且使用ISCO系统(24克二氧化硅管柱，己烷-EtOAc的梯度)纯化。收集产物馏份，得到970毫克(61％)最终产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.93(d,J＝8.1Hz,1H),7.56(d,1H),4.84(d,J＝6.2Hz,2H),3.92(s,3H),2.59(s,3H),2.14(t,J＝6.2Hz,1H)。
步骤5：2-甲基-4-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯甲酸甲酯的合成：
将3,4-二氢-2H-吡喃(2.48克，29.5毫摩尔)及对-甲苯磺酸吡锭(371毫克，1.47毫摩尔)添加至圆底烧瓶中于无水DCM(35毫升)中的上述醇(970毫克，2.95毫摩尔)的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下于氩气下搅拌过夜。LCMS显示单一峰。在经水性整理且以DCM萃取之后，将粗制反应混合物使用ISCO系统-硅胶管柱(24克，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到780毫克(64％)最终产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(d,J＝8.1Hz,1H),7.55(d,J＝8.2Hz,1H),4.90(d,J＝13.9Hz,1H),4.75-4.56(m,2H),3.91(s,3H),3.89-3.82(m,1H),3.60-3.48(m,1H),2.59(s,3H),1.93-1.50(m,6H)。
步骤1：3-乙酰氧基-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯的合成：
将10毫升亚硫酰氯及1滴无水DMF添加至500毫升圆底烧瓶中于无水DCM(100毫升)中的上述苯甲酸(15.54克，80.00毫摩尔)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空下移除溶剂及过量亚硫酰氯，得到产物SKC-01-048。以未进一步纯化的SKC-01-048用于下一步骤中。
将硅醇(11.35克，96.00毫摩尔)添加至配备有干燥管的500毫升圆底烧瓶中于无水DCM(100毫升)中的上述酰氯(13.61克，64.00毫摩尔)的搅拌溶液中。将三乙胺逐滴添加至此混合物中。将反应混合物在室温下搅拌4小时。LCMS显示新的主峰。容许反应在温温下搅拌48小时。在经水性整理且以DCM萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物使用ISCO系统(120克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的5％EtOAc洗脱出产物，得到18.84克(77％)SKC-01-049。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.73-7.57(m,1H),7.25-6.98(m,2H),4.37-4.23(m,2H),2.31(s,3H),2.26(s,3H),1.09-1.00(m,2H),-0.00(s,9H)。
步骤2：3-羟基-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯的合成
将上述硅酯(SKC-01-049，14.43克，49.00毫摩尔)与MeOH：水(1：4，100毫升)及碳酸氢钠(20.57克，245.00毫摩尔)混合且在室温下搅拌过夜。LCMS显示单一峰。移除甲醇且将反应混合物以DCM萃取。收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将粗制混合物使用ISCO系统(120克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到12.0(99％)SKC-01-053。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.56(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.26(t,J＝7.9Hz,1H),7.11(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),5.47(s,1H),4.61-4.53(m,2H),2.63(s,3H),1.38-1.18(m,2H),0.25(s,9H)。
步骤3：3-(烯丙基氧基)-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯的合成
将无水碳酸钾(318毫克，2.30毫摩尔)添加至100毫升圆底烧瓶中于无水丙酮(20毫升)中的硅酯(SKC-01-053，290毫克，1.15毫摩尔)的搅拌溶液中，接着添加烯丙基溴(0.15毫升，1.73毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的单一峰。在旋转蒸发器上移除溶剂且将反应混合物以DCM萃取。将粗产物使用ISCO系统(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～5％EtOAc洗脱出产物，得到180 毫克(54％)产物SKC-01-055。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),6.88(d,J＝8.0Hz,1H),6.08-5.88(m,1H),5.40-5.29(m,1H),5.26-5.15(m,1H),4.50-4.41(m,2H),4.35-4.24(m,2H),2.38(s,3H),1.10-0.99(m,2H),-0.00(s,9H)。
步骤4：4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯的合成
将3-(烯丙基氧基)-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯(500毫克，1.70毫摩尔)溶解在微波小瓶中的1-甲基吡咯啶-2-酮(1毫升)中，以盖子密闭且在220℃下随着搅拌进行微波照射(以CEM观察)，最大压力300psi，运行时间5分钟，保持时间15分钟。LCMS显示3个峰，包括具有预期的产物质量的主峰。在冷却之后，将粗制混合物直接装载于硅胶管柱(12克)上且使用ISCO系统(己烷：EtOAc的溶剂混合物，以己烷中的～5％EtOAc洗脱出产物)纯化，得到SKC-01-056。以1-2克规模重复上述实验数次。经分离的产物的总重量为3.6克。
步骤5：3-羟基-2-甲基-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)丙基)苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯的合成
经烘箱干燥的100毫升两颈圆底烧瓶装备有经特夫纶涂布的磁搅拌棒及两个橡胶隔膜，隔膜的一具有与氩气/真空歧管连接的针。将4-烯丙基-3-羟基-2-甲基苯甲酸2-(三甲基硅基)乙酯(1.2克，4.10毫摩尔)、改性的威尔金森氏催化剂(129毫克，0.129毫摩尔)及无水THF(13毫升)装入该以氩气冲洗的圆底烧瓶中。进行三次真空/氩气吹扫循环且将混合物在室温下搅拌，直到所有的试剂溶解为止(<2分钟)。将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(Bpin-H)(1.790毫升，12.31毫摩尔)经由注射器添加至此搅拌的澄清反应混合物中，接着再以氩气/真空/氩气吹扫。在搅拌过夜之后，LCMS显示完全转化成产物。将反应混合物以小心添加的几滴水(<1毫升)及MeOH(5毫升)终止且在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。将干燥的粗产物溶解在DCM中，吸附在二氧化硅上且在真空下干燥。一旦其自由流动时，将其装载在空匣上且使用ISCO系统(40克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～5％EtOAc洗脱出产物，得到SKC-02-014(1.32克，77％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(d,1H),6.95(d,J＝7.9Hz,1H),6.60(s,1H),4.48-4.30(m,2H),2.69-2.54(m,2H),2.50(s,3H),1.76-1.60(m,2H),1.33(s,12H),1.19-1.07(m,2H),1.05-0.83(m,2H),0.14-0.04(m,8H)。
步骤6：(3-(2-羟基-3-甲基-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)苯基)丙基)硼酸的合成
将高碘酸钠(4.03克，18.84毫摩尔)添加至THF/水的混合物(4：1的比，90毫升)中的SKC-02-014(1.32克，3.14毫摩尔)的溶液中且接着添加醚中的2M HCl(3.14毫升，6.28毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物以水稀释且以EtOAc萃取。将粗制反应混合物吸附在硅胶上且干 燥。一旦其自由流动时，将其装载在ISCO匣上(40克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的溶剂混合物)。以己烷中的～32％EtOAc洗脱出产物，得到700毫克(66％)SKC-02-016。最佳的结构为以1H NMR为基准的封闭形式。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.50(d,J＝7.9Hz,1H),7.00(d,J＝7.9Hz,1H),4.44-4.31(m,2H),2.74-2.59(m,2H),2.46(s,3H),2.01-1.82(m,2H),1.21-1.05(m,2H),1.00-0.75(m,2H),0.08(s,9H)。
步骤7：2-羟基-9-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,2]氧硼杂环庚三烯-8-甲酸的合成
将SKC-02-16(150毫克，0.443毫摩尔)在氩气下溶解在配备有含一些5埃分子筛的滴液漏斗及冷凝器的圆底烧瓶中的无水甲苯中。将对-甲苯磺酸单水合物(56.2毫克，0.296)添加至其中。将反应混合物回流1小时且冷却。LCMS显示完全转化。在真空下移除甲苯，将粗产物吸附在硅胶上且在ISCO系统上(使用4克二氧化硅管柱及己烷/EtOAc的溶剂梯度)纯化。以己烷中的30％EtOAc洗脱出产物，得到产物。1H NMR(400MHz，丙酮)δ7.57(d,J＝7.9Hz,1H),7.09(d,J＝7.9Hz,1H),2.69(t,J＝6.8Hz,2H),2.46(s,3H),1.95-1.83(m,2H),0.85-0.71(m,2H)。
实施例10
IXS-1-54-1的合成
步骤1：2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酸
将3-碘-2-甲基-苯甲酸(10克，38.2毫摩尔)、双(戊酰)二硼烷(11.64克，46.0毫摩尔)、乙酸钾(11.23克，112.0毫摩尔)及100毫升无水DMSO添加至配备有冷凝器、磁力搅拌器及惰性气体入口的300毫升圆底三颈烧瓶中。将烧瓶以氮气吹扫15-20分钟。在微正压氮气流下经由开颈添加催化剂二氯[1,1’-双(二苯膦基)二茂铁]钯二氯甲烷(0.85克，1.1毫摩尔)。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。容许反应混合物冷却，接着倒入500毫升水中。在室温下搅拌1小时之后，将棕色沉淀物在烧结的过滤漏斗上过滤且以水清洗。将沉淀物再溶解在200毫升醚中且通过1"厚的硅藻土层过滤，以移除微量Pd。将滤饼以100毫升醚清洗。将合并的醚溶液以4×200毫升2N NaOH清洗。将水相合并且以6N HCl酸化，直到pH＝5-6(约100毫升)。将白色沉淀物在烧结 的滤器上过滤，以200毫升水清洗且在60℃的真空烘箱中经2小时干燥。将滤液放入冰箱中过夜且经由过滤分离出第二收成的白色沉淀物。所获得的产物总量为5.5克(55％产率)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.05(d,1H),7.9(d,1H),7.25(t,1H),2.6(s,3H),1.4(s,12H)。
步骤2：2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酰氯
将2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酸(1.2克，46.0毫摩尔)放入配备有小型搅拌棒的40毫升闪烁小瓶中。添加10.0毫升无水氯仿，接着添加1.8毫升亚硫酰氯及2滴无水DMF。在3小时之后，在真空下蒸发溶剂及过量亚硫酰氯。将棕色残余物以40毫升己烷处理，过滤且浓缩，得到成为绿色油的985毫克(产率＝70.5％)产物。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.15(d,1H),7.95(d,1H),7.3(t,1H),2.75(s,3H),1.4(s,12H)。将反应运作数次及产率在从60至99％的范围内。
步骤3：3-甲氧基-2-甲基-苯甲酸N’-(1-乙基-2,2-二甲基-丙基)-酰肼
反应系在具有迷你型搅拌棒的20毫升闪烁小瓶中进行。将2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酰氯(0.281克，1.0毫摩尔)及过量三乙胺(0.28毫升，2.0毫摩尔)在室温下添加至无水醚(10毫升) 中的2,2-二甲基-戊基肼盐酸盐(0.181克，1.0摩尔)的搅拌悬浮液中。立即形成沉淀物。将反应混合物在室温下搅拌2小时，将沉淀物滤出且以二氯甲烷(20毫升)清洗。将溶剂蒸发且将残余物再溶解在具有几滴醚的20毫升戊烷中。将烧瓶经2小时冷却，得到沉淀物，将其过滤且在真空下经1小时干燥。W1＝0.05克。1H NMR及MS显示其为IXS-1-52-1。将滤液蒸发，再溶解在1毫升二氯甲烷中且在24克ISCO管柱上以己烷/乙酸乙酯的梯度纯化。将产物馏份合并，得到0.110克(产率＝44％)IXS-1-52-2。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.85(d,1H),7.4(d,1H),7.25(t,1H),7.05(s,1H),4.9(m,1H),2.65(s,3H),2.05(d,1H),1.8(m,1H),1.6(m,2H),1.4(s,12H),1.35(s,3H),1.15(m,1H),1.05(s,9H)。MS：[MH+]＝389mv。
步骤4：2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酸N’-(1-叔丁基-丁基)-酰肼
反应系在具有小型搅拌棒的20毫升闪烁小瓶中进行。将3,5-二甲基-苯甲酰氯(0.084克，0.0005摩尔)添加至醚(5毫升)中的2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酸N’-(1-叔丁基-丁基)-酰肼(IXS-1-44-1，0.194克，0.5毫摩尔)的搅拌悬浮液中，接着添加三乙胺(0.07毫升，0.5毫摩尔)。立即形成沉淀物。将反应混合物在室温下搅拌2小时，接着滤出沉淀物且以一些醚(10-20毫升)清洗。在50：50＝己烷：乙酸乙酯中的醚溶液的TLC显示主要的点为具有Rf＝0.6的经单取代的产物。蒸发溶剂，直到几乎干燥为止，且再溶解在20毫升己烷中。形成沉淀物，将其以冷己烷清洗且在真空中经2小时干燥，得到0.177克IXS-1-54-1(产率＝68％)。结构系以1H NMR(CDCl3，400MHz)及MS：([MH+]＝521mv)确认。
实施例11
第58号化合物的合成
步骤1：2-氟-3-碘-4-甲基-苯甲腈的合成
将具有磁搅拌器、温度计、加料漏斗及氮气入口的经烘箱干燥的500毫升3-颈圆底烧瓶以N2吹扫20分钟。将2,2,6,6-四甲基哌啶(41.84毫升，241毫摩尔)经由注射器引入烧瓶中，接着引入100毫升无水THF。将反应混合物冷却至-78℃且经由导管引入n-BuLi(在己烷中的2.5M溶液，102毫升，254毫摩尔)。缓慢地逐滴进行添加，以确定温度停留在-70℃至-80℃的范围内(～40分钟)。将加料烧瓶以100毫升无水THF清洗且将反应混合物经30分钟温热至-50℃，澄清的溶液在此期间变混浊。将反应混合物再冷却至-78℃且将溶解在80毫升无水THF中的2-氟-4-甲基苯甲腈(30克，222毫摩尔)逐滴添加搅拌溶液中，同时使内部温度维持低于-70℃(约20分钟)。将加料漏斗以100 毫升份量的THF清洗一次且将反应混合物经60分钟温热至-50℃。将反应混合物再冷却至-78℃且将100毫升THF中的碘(62克，244毫摩尔)的饱和溶液引入加料漏斗中。逐步进行终止且将所得黄色混合物保持在低于-60℃之内部温度下(约20分钟)。将加料漏斗以50毫升THF清洗两次且接着容许混合物温热至室温。在搅拌过夜之后，将整个混合物添加至1000毫升水中的20克硫代亚硫酸盐的溶液中，搅拌1小时且以乙酸乙酯3×250毫升清洗。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤且浓缩。将残余物使用ISCO系统纯化。将产物馏份合并且浓缩。自醚/己烷再结晶出产物，得到33克(57％)产物。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.50(dd,1H),7.16(d,1H),2.50(s,3H)。LC-MS(M+1)＝262M/Z。
步骤2：2-氟-3-碘-4-甲基苯甲酸的合成
将2-氟-3-碘-4-甲基-苯甲腈(33克，126.4毫摩尔)、70毫升甲醇及70毫升60％水性硫酸添加至配备有冷凝器及磁力搅拌器的500毫升三颈圆底烧瓶中。将烧瓶密封且使温度上升至115℃。将反应混合物在此温度下搅拌过夜。将形成的沉淀物在烧结的滤器上过滤，以1公升水清洗且在真空下经2小时及接着在60℃的真空烘箱中经3小时干燥，得到31.5克IXS-4-95-1。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ13.2(宽s,1H),7.74(t,1H),7.26(d,1H),2.47(s,3H)，及MS[MH+]＝280)。
步骤3：2-氟-3-碘-4-甲基-苯甲酸甲酯的合成
将2-氟-3-碘-4-甲基-苯甲酸(31.5克，112.5毫摩尔)、250毫升甲醇及10毫升硫酸添加至配备有磁搅拌棒及冷凝器的500毫升单-颈烧瓶中。将反应在90℃下加热过夜。LCMS显示反应完成90％。蒸发甲醇，将残余物溶解在乙酸乙酯中且以水清洗。将有机相以水中的25％NaOH溶液缓慢地碱化，直到pH＝9为止。将有机相以2×200毫升水清洗。将分离的水洗液以100毫升乙酸乙酯萃取两次。将所有的有机相合并且浓缩，得到油性残余物，自醚/己烷再结晶。分离出两批晶体，以纯己烷清洗且在真空下经2小时干燥，得到31克(94％)产物。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ7.78(t,1H),7.08(d,1H),3.90(s,3H),2.50(s,3H)，且MS：[MH+]＝295)。
步骤4：2-氟-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯的合成
将2-氟-3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(2.0克，6.80毫摩尔)、10.0毫升无水1,4-二恶烷、二乙酰氧基钯(0.076克，0.340毫摩尔)及[1,1’-联苯基]-2-基二环己膦(0.477克，1.360毫摩尔)在氮气下放入配备有冷凝器、磁搅拌器及氮气入口的100毫升3-颈圆底烧瓶中。经由注射器逐滴添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(2.96毫升，20.40毫摩尔)。将反应混合物在60℃下加热2小时且在室温下搅拌过夜。LCMS显示几乎100％的转化率。移除二噁烷且将残余物在使用乙酸乙酯/己烷的梯度及接着转换成甲醇/DCM的梯度的80克ISCO二氧化硅管柱上纯化，得到1.25克(62.5％)IXS-5-48-1，1.25克(62.5％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.81(t,1H),7.16(d,1H),3.83(s,3H),2.42(s,3H),1.33(s,12H)，及MS：[MH+]＝295)。
步骤5：7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酸的合成
将N-溴琥珀酰亚胺(0.363克，2.040毫摩尔)及(E)-1,1’-(二氮烯-1,2-二基)二环己烷甲腈(0.050克，0.204毫摩尔)添加至40毫升CCl4中的2-氟-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(0.6克，2.040毫摩尔)的溶液中。将混合物在80℃搅拌过夜。将反应混合物以水中的5％KOH(3×20毫升)萃取。将水相搅拌1小时，接着将溶液冷却至0℃且以1N HCl缓慢地酸化至pH<1。将形成的沉淀物在烧结的滤器上过滤且在真空中经过夜干燥，得到0.137克IXS-5-49-1，在DMSO-d6中的1H NMR与所需产物一致。MS[MH+]＝196。
步骤6：N’-(叔丁基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼的合成：
将BOP(197.0毫克，0.663毫摩尔)、HOBt(90.0毫克，0.663毫摩尔)及DIPEA(0.579毫升，3.32毫摩尔)在室温下添加至以氮气吹扫的20毫升闪烁小瓶中于无水DMF(1.5毫升)中的硼氧杂环戊烯羧酸(INX-5-49-1，130.0毫克，0.663毫摩尔)的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌5分钟。将叔丁基肼盐酸盐(105毫克，0.84毫摩尔)添加至其中且将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示硼氧杂环戊烯羧酸完全转化的新峰。使用Genevac移除DMF。将黏稠的粗制混合物溶解在5％水性KOH(50毫升)及EtOAc(50毫升)中且萃取。将合并的含有产物的水性馏份以0.1N HCl中和且接着在旋转蒸发器上移除水。将残余物以DCM中的10％MeOH清洗且使用ISCO系统纯化。以DCM中的～2％MeOH洗脱出产物，得到100毫克(57％)硼氧杂环戊烯甲酰肼 INX-5-57-1，以其用于下一步骤。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.69(d,J＝6.2Hz,1H),7.67(t,J＝7.1Hz,1H),7.27(d,J＝22.8Hz,1H),5.03(s,2H),4.92(d,J＝7.9Hz,1H),1.06(s,9H)。
步骤7：N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第58号化合物)的合成：
将圆底烧瓶中的3,5-二甲基苯甲酰氯(0.076克，0.451毫摩尔)溶解在二乙醚(2.0毫升)中。将N’-(叔丁基)-7-氟-1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(0.100克，0.376毫摩尔)添加至其中，接着添加TEA(0.105毫升，0.752毫摩尔)。在添加三乙胺之后，自溶液出现沉淀物。在搅拌90分钟之后，添加另一等量的TEA且容许反应在室温下搅拌60分钟。蒸发溶剂且将残余物使用制备性HPLC纯化，得到第58号化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.39(s,1H),6.97(d,J＝7.7Hz,1H),6.89-6.83(m,3H),6.72-6.64(m,1H),4.76(s,2H),2.04(d,J＝4.5Hz,6H),1.29(s,9H)。
实施例12
4-羟甲基-2-氟-苯甲酸的合成
步骤1：2-氟-4-甲基-苯甲酸的合成
将1-溴-2-氟-4-甲基-苯(43.0克，227.47毫摩尔)及300毫升无水THF添加至配备有磁搅拌棒、加料漏斗及氮气入口的1公升三-颈圆底烧瓶中。将烧瓶以氮气吹扫30分钟且接着使用丙酮-干冰浴冷却至-78℃。经30分钟逐滴添加在己烷中的T-BuLi的2.5M溶液(100.00毫升，250.00毫摩尔)。将加料漏斗以100毫升无水THF清洗至反应烧瓶中。将所得浅黄色反应混合物在-78℃下搅拌1小时。将整个混合物经由转移导管倒在150毫升THF中的200克干冰上。容许混合物温热至室温，同时搅拌，以500毫升水稀释，转移至分液漏斗且以醚(2×500毫升)萃取。将醚相丢弃。将水相以1N HCl酸化，直到pH<<2为止，接着再以醚(2×500毫升)及乙酸乙酯(2×200毫升)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥且在减压下浓缩。将因此获得的白色结晶残余物在真空中干燥1小时，得到35.06克IXS-4-49粗制物。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ13.04(bs,1H),7.76(t,1H),7.15(t,2H),2.36(s,3H)。总产率为89.55％。
步骤2：2-甲基-3-羟基-苯甲酸甲酯的合成
将2-氟-4-甲基-苯甲酸(10.0克，64.88毫摩尔)、250毫升甲醇及5毫升硫酸添加至配备有磁搅拌棒及冷凝器的500毫升单-颈圆底烧瓶中。将反应在90℃下加热过夜。蒸发甲醇且将残余物在125克Filter Silica ISCO管柱上使用己烷/乙酸乙酯的梯度纯化，得到10.01克IXS-4-52-1。总产率为91.75％。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.80(t,1H),6.95(2d,2H),3.89(s,3H),2.37 (s,3H)。
步骤3：4-溴甲基-2-氟苯甲酸甲酯的合成
将2-氟-4-甲基苯甲酸甲酯(10.01克，59.52毫摩尔)、100毫升四氯化碳、N-溴琥珀酰亚胺(10.70克，60.12毫摩尔)及2,2’-偶氮双异丁腈(AIBN，0.39克，2.38毫摩尔)添加至配备有磁搅拌棒、冷凝器及玻璃塞的250毫升三-颈圆底烧瓶中。将反应在100℃下加热6小时，接着在室温下搅拌过夜。将烧瓶在冰中冷却30分钟，以过滤收集所得沉淀物且以己烷清洗。将滤液储存。将沉淀物再溶解在乙酸乙酯中且添加己烷，直到开始形成固体为止。将烧瓶处于静置1小时。以过滤收集沉淀的固体且干燥。将固体放入锥形瓶中且与100毫升水搅拌3小时。以过滤再分离出固体，以己烷清洗且在60℃的真空烘箱中经2小时干燥，得到4.36克4-溴甲基-2-氟苯甲酸甲酯(IXS-4-53-1)，如以1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.89(t,1H),7.18(2d,2H),4.42(s,2H)3.91(s,3H)所显示。
步骤4：4-羟甲基-2-氟-苯甲酸的合成
将2-氟-4-甲基苯甲酸甲酯(5.94克，24.04毫摩尔)、70毫升乙酸酐及乙酸钠(2.56克，31.26毫摩尔)添加至配备有磁搅拌棒及冷凝器的250毫升单-颈圆底烧瓶中。将反应在150℃下加热过夜。将反应冷却至室温且以TLC检查。小心地添加200毫升水且将反应混合物转移至分液漏斗。将水相以2×100毫 升醚及3×100毫升乙酸乙酯萃取。将有机馏份合并且浓缩。将残余物溶解在50毫升甲醇中且转移至配备有磁搅拌棒的250毫升单-颈烧瓶中。将氢氧化钾(6.75克，120毫摩尔)溶解在20毫升甲醇中，添加至反应烧瓶中且将反应混合物在90℃下加热至过夜。将反应冷却至室温且以TLC检查。小心地添加100毫升水且将反应混合物以3M HCl溶液小心地酸化，直到pH<2为止。将水相以乙酸乙酯萃取。将有机相浓缩且在ISCO系统上以乙酸乙酯/己烷的梯度纯化，得到2.32克IXS-4-60-2。总产率为57.0％。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ13.02(bs,1H),7.80(t,1H),7.21(t,2H),5.44(bs,1H),4.45(s,2H)。
实施例13
N’-苯甲酰基-N’-(叔丁基)-1-丁基-7-氟-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第64号化合物)的合成
步骤1：2-氟-4-甲基苯甲酸的合成
将配备有磁力搅拌棒、加料漏斗、回流冷凝器及氮气入口的经烘箱干燥的1公升3-颈圆底烧瓶以氮气吹扫45分钟。将1-溴-2-氟-4-甲苯(43.0克，227.47毫摩尔)及无水THF(250毫升)装入烧瓶中。将混合物在干冰-丙酮浴中冷却至-78℃且将n-BuLi(在己烷中的2.5M溶液，100.09毫升，250.22毫摩尔)逐 滴添加至搅拌的反应中，同时使温度维持在约-78℃。将加料漏斗以两份10毫升无水THF清洗且接着将反应在-78℃下搅拌1小时。将整个混合物倒在THF(50毫升)中的固态二氧化碳上且容许温热至室温。添加300毫升水且使全部溶解。将所得混合物转移至分液漏斗中且以醚(2×500毫升)萃取。将醚相丢弃。将合并的水相以3N HCl酸化至pH<3且形成白色沉淀物。将水相以醚(2×500毫升)及乙酸乙酯(3×500毫升)萃取。将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩，得到成为粉白色结晶粉末的31.4克IXS-3-48。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ12.99(s,1H),7.77-7.73(t,1H),7.14-7.09(m,2H),2.30(s,3H)。
步骤2：4-(溴甲基)-2-氟苯甲酸的合成
将4-氟-4-甲基苯甲酸(10.0克，64.88毫摩尔)添加至配备有回流冷凝器、磁搅拌棒及干燥管的500毫升3-颈圆底烧瓶中。添加100毫升CCl4且将反应混合物加热至80℃。将NBS称重至20毫升闪烁小瓶中且在4小时期间内使用刮勺分8部分添加。同样地分8部分添加AIBN。将所得混合物在80℃下再搅拌3小时，接着冷却至室温且搅拌过夜。将浅黄色悬浮液在具有约1.5吋硅胶层的过滤漏斗上过滤，接着以1公升二氯甲烷清洗。自滤液出现一些沉淀物，所以添加乙酸乙酯，使其变澄清。将滤液以100毫升等份收集至小的锥形瓶中，以TLC分析。将含有起始材料及其它杂质的等份液丢弃。将产物等份液合并且浓缩。将残余物以50毫升醚湿磨，在烧结的滤器上过滤且在真空下经1小时干燥，得到14.98克粗产物。1H NMR显示其为1：2的产物与琥珀酰亚胺副产物的混合物。将产物转移至烧结的漏斗中，以水和乙烷清洗且在真空下经2小时干燥。1H NMR显示其仍含有20％的琥珀酰亚胺副产物。将混合物使用ISCO系统(40克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到IXS-2-56-3(800毫克)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ12.25(s,1H),6.87-6.83(t,1H),6.42-6.36 (m,2H),3.73(s,2H)。
步骤3：N’-苯甲酰基-4-(溴甲基)-N’-(叔丁基)-2-氟苯酰肼的合成：
将上述苯甲酸(IXS-3-56-3，8.0克，0.034毫摩尔)添加至配备有干燥管的250毫升单-颈圆底烧瓶中。添加50毫升无水氯仿且将反应混合物搅拌。将亚硫酰氯(12.49毫升，0.17毫摩尔)添加至此搅拌的混合物中，接着添加3滴无水DMF。在搅拌过夜之后，在真空下移除溶剂及过量亚硫酰氯，将所得残余物以无水二氯甲烷清洗数次，蒸发且在真空下干燥。添加40毫升己烷且将所得混合物通过烧结的过滤漏斗过滤，得到8.0克绿色油，其以未进一步纯化而用于下一步骤中。
将用于下一步骤的肼(4.89克，25.45毫摩尔)、酰氯(8.0克，31.81毫摩尔)及100毫升醚添加至250毫升单-颈圆底烧瓶中且将反应混合物在室温下搅拌。将三乙胺(4.43毫升，31.81毫摩尔)添加至其中。在搅拌过夜之后，TLC显示完全转化成产物。添加二氯甲烷以溶解所有的沉淀物且将产物使用ISCO系统(2×80克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到8.75克IXS-3-58。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.72(s,1H),7.53-7.28(m,6H),7.23-7.21(d,1H),6.84-6.75(t,1H),4.60(s,2H),1.50(s,9H)。
步骤4：N’-苯甲酰基-N’-(叔丁基)-2-氟-4-(羟甲基)苯酰肼的合成：
将上述4-溴甲基DAH衍生物(8.75克，21.48毫摩尔)、CaCO3(1.08克，10.74毫摩尔)及1：1的二恶烷与水的混合物(140毫升)添加至250毫升单-颈圆底烧瓶中将混合物在85℃下搅拌过夜。在旋转蒸发器上移除大部分的二恶烷。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将有机相合并，经无水MgSO4干燥，过滤且浓缩。将残余物使用ISCO系统(80克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到IXS-3-59-2(6.35克，86％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.56(s,1H),7.41-7.26(m,5H),7.18-7.04(m,2H),6.73-6.69(m,1H),5.37-5.32(t,1h)4.47-4.46(d,2H),1.54(s,9H)。
步骤5：N’-苯甲酰基-N’-(叔丁基)-1-丁基-7-氟-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧硼杂环戊烯-6-甲酰肼(第64号化合物)的合成：
将具有磁搅拌器、温度计、有刻度的压力平衡加料漏斗及氮气入口的经烘箱干燥的250毫升3-颈圆底烧瓶以氮气吹扫20分钟。将2,2,6,6-四甲基哌啶(3.65毫升，21.48毫摩尔)及无水THF(40毫升)装入烧瓶中且在干冰-丙酮浴中冷却至-30℃。将n-BuLi(13.07毫升，20.91毫摩尔)逐滴添加至搅拌的反应中，同时使温度维持在-30℃与-35℃之间(～10分钟)。将加料漏斗以10毫升份量的无水THF清洗两次且将反应混合物冷却至-76℃。将硼酸三异丙酯(5.34毫升，23.23毫摩尔)逐滴添加至搅拌的乳黄色溶液中，同时使内部温度维持在低于
-73℃(～10分钟)。将IXS-3-59-2(2.0克，5.81毫摩尔)溶解在无水THF(10毫升)中，经10分钟逐滴添加反应混合物中。将加料漏斗以10毫升份量的无水THF清洗两次，将反应混合物冷却至-76℃经3.5小时且容许缓慢地温热至室温。在室温下1小时之后，将反应混合物以20毫升在水中的2M H2SO4终止。将所得混合物在室温下搅拌1小时，接着以水和醚稀释。将有机相分离且将水相以醚(2×100毫升)及EtOAc(2×100毫升)清洗。将有机馏份合并， 浓缩且使用ISCO系统(80克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化，得到71毫克第69号化合物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.55(s,1H),7.42-7.39(m,2H),7.34-7.30(m,3H),7.14-7.12(m,1H),6.76-6.66(m,1H),5.10(s,2H),1.55(s,9H),1.40-1.29(m,4H),1.25-1.09(m,2H),0.88-0.83(m,3H)。
实施例14
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-1,2,3,4-四氢苯并[f][1,4,5]氧氮硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第91号化合物)
及
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-1-羟基-6-甲基-1,2,3,4-四氢苯并[f][1,4,5]氧氮硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第92号化合物)的合成
3-乙酰氧基-4-溴-2-甲基苯甲酸
将水(12毫升)添加至锥形瓶中的4-溴-3-羟基-2-甲基苯甲酸(5克，21.6毫摩尔)中且在冰浴中冷却。添加50％的NaOH水溶液(8.06克与12毫升水混合，108毫摩尔)且将混合物搅拌几分钟，直到溶液澄清为止。逐滴添加乙酸酐(2.04毫升，21.6毫摩尔)，直到达到pH5为止；反应混合物在此时变成具有灰白色的黏稠浆液。将混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量的主峰及起始材料的低极性峰。将pH调整至2且将沉淀物过滤。沉淀物的LCMS显示其为预期的乙酸盐与起始酚的3：1的混合物。滤液亦含有一些产物，所以将全部合并，干燥，吸附在二氧化硅上且使用ISCO进行硅胶管柱层析术。收集主峰，移除溶剂且将产物在真空下干燥。1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.27(s,1H),7.81-7.33(m,2H),2.37(s,6H),2.34(s,3H)。
将草酰氯(2.12毫升，24.2毫摩尔)及1滴DMF添加至无水氯仿(12毫升)中的上述酸SKC-09-060(3.3克，12.1毫摩尔)的溶液中。将反应混合物在40℃下搅拌1小时。LCMS显示完全转化成酰氯。在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂且干燥，得到成为固体的乙酸6-溴-3-(氯羰基)-2-甲基苯酯(SKC-09-062)。
乙酸(R)-6-溴-3-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼-1-羰基)-2-甲基苯酯：
将TEA(2.288毫升，16.4毫摩尔)在室温下于氩气下添加至无水DCM(10 毫升)中的(R)-N-(2,2-二甲基戊-3-基)-3,5-二甲基苯酰肼(2.86克，10.9毫摩尔，>95％ee)的搅拌溶液中。将酰氯(3.5克，12.0毫摩尔)的DCM溶液(5毫升)添加至其中且在室温下搅拌。在30分钟之后，LCMS显示反应完成。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且使用ISCO(己烷/EtOAc的梯度)的硅胶管柱层析术纯化。收集主要馏份且干燥，得到无色固体SKC-09-063(2.2克，39％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.47(d,J＝61.1Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(t,J＝15.3Hz,3H),6.70(dd,J＝45.3,8.0Hz,1H),4.33(dd,J＝80.7,9.5Hz,1H),2.34(s,3H),2.24(d,J＝5.5Hz,6H),1.48(d,J＝24.5Hz,4H),1.11-1.02(m,12H),0.91(dt,J＝42.5,7.2Hz,5H)。
乙酸6-溴-3-(2-(叔丁基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-甲基苯酯：
依照相同的程序，标题化合物系以DCM(10毫升)中的N-(叔丁基)-3,5-二甲基苯酰肼(1.37克，6.2毫摩尔)、TEA(1.3毫升，9.4毫摩尔)及酰氯(2.0克，6.9毫摩尔)开始而制得，77％产率(2.29克)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.68(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.04(s,3H),6.56(d,J＝8.2Hz,1H),2.34(s,3H),2.24(s,6H),1.65(s,3H),1.49(s,9H)。
(R)-4-溴-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-3-羟基-2-甲基苯酰肼:
将K2CO3(1.76克，12.8毫摩尔)在室温下添加至20毫升MeOH中的SKC-09-063(2.2克，4.3毫摩尔)的无色悬浮液中。在几分钟之内，反应混合物的颜色转化成浅黄色且乙酸酯开始溶解。以LCMS为基准，反应系在30分钟内完成。过滤以移除固体，以EtOAc冲洗，在减压下移除溶剂且将粗制混合物在ISCO(己烷/EtOAc的梯度)上以硅胶管柱层析术纯化，得到白色粉末的SKC-09-066(1.8克，89％)。LCMS：77.19(M+1)。
4-溴-N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-3-羟基-2-甲基苯酰肼：
依照上述的程序，以20毫升MeOH中的SKC-09-015(2.29克，4.8毫摩尔)及K2CO3(1.99克，14.5毫摩尔)经30分钟，在以戊烷/醚的溶剂混合物湿磨之后，分离出SKC-09-021(1.83克，88％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.47(s,1H),9.32(s,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),7.03(s,3H),6.09(d,J＝8.2Hz,1H),2.24(s,6H),1.73(s,3H),1.48(s,9H)。1H NMR(400MHz，DMSO+2滴D2O)δ7.27(d,J＝8.2Hz,1H),7.01(d,J＝7.1Hz,3H),6.09(d,J＝8.2Hz,1H),2.22(s,6H),1.70(s,3H),1.46(s,9H)。
(R)-4-溴-3-(氰基甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-甲基苯酰肼：
将无水DMF(10毫升)中的SKC-09-066(1.35克，2.8毫摩尔)、K2CO3(0.510克，3.7毫摩尔)及2-溴乙腈(0.24毫升，3.4毫摩尔)在氩气下于圆底烧瓶中混合在一起且在50℃下加热。反应在10分钟内完成(以LCMS为基准)，无色的RM转变成黄色。以水稀释，在EtOAc中萃取且经无水MgSO4干燥，过滤且移除溶剂。将粗制混合物吸附在二氧化硅上且使用ISCO(12克二氧化硅管柱，己烷/EtOAc的梯度)纯化。分离出定量产率的白色固体产物SKC-09-068(1.53克)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.40(d,J＝59.5Hz,1H),7.95(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.16-6.95(m,3H),6.58(dd,J＝46.5,8.2Hz,1H),5.01-4.91(m,2H),4.50-4.17(m,1H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),2.25(d,J＝5.1Hz,6H),1.99(s,1H),1.76-1.62(m,4H),1.62-1.33(m,2H),1.12-0.82(m,14H)。
4-溴-N’-(叔丁基)-3-(氰基甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-甲基苯酰肼：
依照上述的程序，在50℃下使用无水DMF(7毫升)中的SKC-09-021(1.8克，4.2毫摩尔)、K2CO3(0.750克，5.4毫摩尔)及2-溴乙腈(0.35毫升，4.9毫摩尔)。反应在2小时内完成。在层析之后，分离出1.67克产物SKC-09-023，85％产率(LCMS：473,M+1)。
(R)-3-(氰基甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼：
将KOAc(0.876克，8.9毫摩尔)、Pin2B2(1.13克，4.5毫摩尔)添加至1,4-二恶烷(10毫升)中的SKC-09-068(1.53克，2.9毫摩尔)的溶液中。将混合物抽真空且以氩气回充，将此过程重复三次。添加PdCl2[dppf].DCM(0.097克，0.119毫摩尔)。将RM快速抽真空且以氩气回充共三次，将反应在氩气下于80℃下搅拌过夜，冷却，过滤且蒸发。将水添加至粗混合物中且以乙酸乙酯萃取。将残余物在硅胶以使用ISCO(己烷/EtOAc的溶剂梯度)的管柱层析术纯化且分离出SKC-09-071(0.600克，36％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.39(dd,J＝62.5,11.4Hz,1H),7.64-7.38(m,1H),7.15-6.97(m,3H),6.57(dd,1H),4.95-4.68(m,2H),4.33(dd,J＝82.4,10.3Hz,1H),2.25(d,J＝5.9Hz,6H),1.71-1.62(m,3H),1.29(s,12H),1.14-0.91(m,15H)。
N’-(叔丁基)-3-(氰基甲氧基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼：
将KOAc(0.748克，7.6毫摩尔)、Pin2B2(0.968克，3.8毫摩尔)添加至1,4-二恶烷(8毫升)中的SKC-09-023(1.20克，2.5毫摩尔)的溶液中。将混合物抽真空且以氩气回充，将此过程重复三次。添加PdCl2[dppf].DCM(0.062克，0.076毫摩尔)。将RM快速抽真空且以氩气回充共三次，将反应在氩气下于80℃下搅拌过夜，冷却，过滤且蒸发。将水添加至粗混合物中且以乙酸乙酯萃取。将残余物在硅胶以使用ISCO(己烷/EtOAc的溶剂梯度)的管 柱层析术纯化且分离出SKC-09-071(0.650克，49％产率，LCMS：520.41，M+1)。
将Boc-酐及NiCl2.六水合物添加至氩气下在100毫升2-颈圆底烧瓶中的甲氧基腈(SKC-09-028，0.200克，0.39毫摩尔)的冰冷的MeOH(8毫升)溶液中。将RM快速抽真空且以氩气回充共三次，并在0℃下搅拌5分钟。将硼氢化钠分三次添加至其中。澄清的无色溶液在几分钟内转化成黑色，亦注意到许多气泡的形成。将反应混合物继续搅拌过夜，容许其温热至RT。LCMS显示3个峰，低极性峰具有预期的产物质量。藉由添加几滴水而终止反应。在真空下移除MeOH。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，收集有机馏份，经无水MgSO4干燥，过滤且在旋转蒸发器上移除溶剂。最后将粗制混合物以C18RediSep管柱(100克)使用乙腈/水的溶剂梯度纯化。分离出三个峰，且低极性峰系以1H NMR及LCMS为基准而经特征化为预期的经N-Boc保护的胺(SKC-09-035；0.040克)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.60-10.35(m,1H),7.47-7.26(m,1H),7.01(d,J＝20.0Hz,3H),6.46–6.31(m,1H),3.82-3.58(m,2H),3.24(dt,J＝14.4,5.6Hz,2H),2.25(s,5H),1.72(d,J＝7.5Hz,3H),1.48(d,J＝6.4Hz,9H),1.38(s,9H),1.33-1.25(m,12H)。
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-1-羟基-6-甲基-1,2,3,4-四氢苯并[f][1,4,5]氧氮硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第92号化合物)：
将规格化雷尼(Raney)-Ni(在以MeOH冲洗在水中的市场上可取得的雷尼-Ni样品数次之后)添加至氢化瓶中于MeOH(20毫升)中的SKC-09-071(0.500克，0.89毫摩尔)的溶液中。将混合物在帕尔(Parr)摇动器中经24小时氢化(H2，50psi)。以LCMS检查，其显示两个主峰，一个峰具有预期的产物质量及第二个峰为酚化合物，如流程中所示。将粗制混合物(pH8.0)通过短的硅藻土垫过滤且在真空下移除溶剂。以水稀释且将反应混合物以乙酸乙酯萃取。产物进物水性馏份中，而副产物(酚衍生物)仍留在有机馏份中。将水性馏份在冰浴上酸化至pH～3，立即以乙酸乙酯萃取。产物进入EtOAc馏份中，经无水MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。最后将粗制混合物使用反相管柱以ISCO(C18管柱，CH3CN/水的溶剂梯度)纯化，得到第92号化合物(0.233克，56％产率)。LCMS：466.3(M+1)。
1H NMR光谱示意化合物为混合物；其可能为不同的互变异构物及/或以开放及封闭形式平衡。在添加2滴D2O至相同的样品之后，取得另一1H NMR。 1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.49-9.90(m,1H),8.35-7.51(m,1H),7.37-6.87(m,4H),6.66-5.99(m,2H),4.52-3.83(m,4H),3.29-2.76(m,2H),2.26(dd,J＝19.3,14.3Hz,6H),1.76-1.33(m,5H),1.15-0.90(m,12H)。 1H NMR(400MHz，DMSO+2滴D2O)δ8.37-7.15(m,2H),7.15-6.94(m,3H),6.59-6.22(m,1H),4.29(dd,J＝79.9,10.3Hz,1H),4.07(s,1H),3.89(d,J＝4.8Hz,1H),3.19-2.88(m,2H),2.44-2.11(m,6H),1.79-1.27(m,5H),1.14-0.72(m,12H)。
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-1,2,3,4-四氢苯并[f][1,4,5]氧氮硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第91号化合物)
依照上述的程序，第91号化合物(0.040克)系在氢气下(50psi)于帕尔摇动器中以SKC-09-028(240毫克)、雷尼-Ni开始而制得。LCMS：24(M+1)。 1H NMR光谱示意化合物为混合物；其可能为不同的互变异构物和/或以开放及封闭形式平衡。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.54-10.09(m,1H),7.81(dt,J＝26.6,11.2Hz,1H),7.29-6.94(m,4H),6.52-6.03(m,1H),4.11(s,2H),2.95(d,J＝26.1Hz,3H),2.28-2.14(m,6H),1.78-1.68(m,3H),1.48(d,J＝4.2Hz,9H)。
实施例15
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼(第94号化合物)；
(3-(2-叔丁基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-氟-6-(甲氧基甲基)苯基)硼酸(第88号化合物)；
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼(第87号化合物)；及
(R)-(3-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼-1-羰基)-2-氟-6-(甲氧基甲基)苯基)硼酸(第86号化合物)的合成：
2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯：
将100毫升在MeOH中的NH3的冷溶液(来自Aldrich)在室温下添加至DCM(40毫升)中的SKC-10-014(2克，5.4毫摩尔)的搅拌溶液中。LCMS显示反应在15分钟内完成。在减压下于旋转蒸发器上移除溶剂，以水及EtOAc稀释，将反应混合物在冰浴上冷却且以6N HCl缓慢地酸化。将冷混合物立即以EtOAc萃取，经无水MgSO4干燥，过滤且移除溶剂。将粗混合物使用RediSep C18管柱(乙腈/水的梯度)纯化。经分离的主要产物的1H NMR确认其为甲氧基甲基衍生物(SKC-10-015-Pk2，1.34克，74％产率)，而不是如预期的苯甲基胺化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(t,J＝7.8Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,1H),4.55(s,2H),3.89(s,3H),3.33(s,3H),1.37(s,12H)。 13C NMR(101MHz，CDCl3)δ166.34,164.98,150.36,150.27,133.42,122.36,122.33,84.28,77.36,77.05,76.73,73.51,58.17,52.21,24.85。
2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸：
将10毫升7％水性KOH添加至冰浴中于水(2毫升)中的上述酯SKC-10-015-Pk2(620毫克，1.9毫摩尔)的搅拌悬浮液中。在5分钟之后，LCMS显示所有的起始材料反应了且观察到具有预期的产物质量的新极性峰。将6N HCl缓慢地添加至0℃下搅拌的反应混合物中，调整至pH～2，形成白色沉淀物。将其立即通过过滤漏斗过滤，收集沉淀物，以水并接着以戊烷冲洗，在真空下干燥，得到成为白色粉末的SKC-10-016(460毫克，78％产率)。
对应的酰氯(SKC-10-017)系藉由将SKC-10-016(350毫克，1.1毫摩尔)、草酰氯(0.19毫升，2.3毫摩尔)在2毫升氯仿及1滴DMF中于0℃下反应而制得。反应系在<30分钟内完成。在减压下于旋转蒸发器上移除溶剂，在高真空下干燥且以其原样子用于下一步骤。1HNMR(400MHz，DMSO)δ13.15(s,1H),7.84(t,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,1H),4.49(s,2H),3.26(s,3H),1.31(s,12H)。1H NMR(400MHz，DMSO+2滴D2O)δ7.82(s,1H),7.19(d,J＝7.9Hz,1H),4.46(s,2H),3.24(s,3H),1.29(s,12H)。
N’-(叔丁基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼(第94号化合物)及(3-(2-叔丁基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-氟-6-(甲氧基甲基)苯基)硼酸(第88号化合物)：
将TEA(0.17毫升，1.25毫摩尔)在氩气下添加至无水DCM(2毫升)中的N-(叔丁基)-3,5-二甲基苯酰肼(0.300克，0.83毫摩尔)的搅拌溶液中。将反应混合物在冰水浴上冷却。将上述制备的酰氯(SKC-10-019)添加至其中且将混合物搅拌几分钟。在5分钟之后，LCMS显示在4.02分钟的主峰，具有预期的产物质量513(M+1)，在2.98的次峰，其具有相当于对应的硼酸质量431(M+1)的质量，且消耗掉所有的起始材料。在真空下移除溶剂，吸附在二氧化硅上且以管柱层析术(RediSep管柱，二氧化硅24克)纯化，以己烷/EtOAc的梯度先洗脱出Bpin产物第94号化合物，随后改变溶剂为含有2％NH4OH的DCM/MeOH，分离出第二产物(第88号化合物)。收集馏份，在减压下于旋转蒸发器上移除溶剂且最后冷冻干燥，得到成为粉末的第94号化合物(0.220克，52％产率)及第88号化合物(0.120克，34％产率)。第94号化合物：1HNMR(400MHz，DMSO)δ10.58(s,1H),7.05(dd,J＝26.3,13.0Hz,4H),6.86(t,J＝7.5Hz,1H),4.41(s,2H),3.21(s,3H),2.24(s,6H),1.47(s,9H), 1.29(s,12H)。1H NMR(400MHz，DMSO+2滴D2O)δ7.03(dd,J＝24.9,10.3Hz,4H),6.84(t,J＝7.5Hz,1H),4.39(s,2H),3.19(s,3H),2.22(s,6H),1.46(s,9H),1.27(s,12H)。第88号化合物：1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.49(s,1H),8.22(s,2H),7.14-6.89(m,4H),6.72(t,J＝7.5Hz,1H),4.38(s,2H),3.22(s,3H),2.24(s,6H),1.48(s,9H)。
(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-氟-4-(甲氧基甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼(第87号化合物)及(R)-(3-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼-1-羰基)-2-氟-6-(甲氧基甲基)苯基)硼酸(第86号化合物)：
依照上述的程序，将(R)-N-(2,2-二甲基戊-3-基)-3,5-二甲基苯酰肼(0.254克，0.97毫摩尔，>96％ee)、TEA(0.202毫升，1.45毫摩尔)在DCM(2毫升)中混合在一起，接着添加酰氯SKC-10-017(0.350克，1.07毫摩尔)且搅拌10分钟，最后使用管柱层析术纯化，得到第87号化合物(0.070克)，且在RedeisepC18管柱上(具有0.1％甲酸的水/乙腈作为溶剂混合物)第二次纯化之后，得到第86号化合物(0.100克)。第87号化合物：1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.36(d,J＝60.2Hz,1H),7.20-6.92(m,4H),6.64(t,J＝7.4Hz,1H),4.48-4.20(m,3H),3.21(s,3H),2.24(s,6H),1.75-1.50(m,2H),1.29(s,12H),1.04-0.84(m,12H)。1H NMR(400MHz，DMSO+D2O)δ7.13-6.94(m,4H),6.63(t,J＝7.3Hz,1H),4.44-4.00(m,3H),3.18(s,3H),2.22(s,6H),1.68-1.51(m,2H),1.28(d,J＝12.5Hz,12H),1.03-0.81(m,12H)。第86号化合物：1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.29(d,J＝54.2Hz,1H),8.21(d,J＝23.6Hz,2H),7.22-6.92(m,4H),6.54(dd,J＝13.1,5.7Hz,1H),4.43-4.34(m 3H),3.22(s,3H),2.25(s,6H),1.76-1.38(m,2H),1.09-0.95(m,12H)。1H NMR(400MHz，DMSO+2滴D2O)δ7.14-6.86(m,4H),6.55 (t,J＝7.5Hz,1H),4.44-4.15(m,3H),3.20(s,3H),2.23(s,6H),1.68-1.48(m,2H),1.06-0.91(m,12H)。
实施例16
(R)-(4-(2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-(2,2-二甲基戊-3-基)肼-1-羰基)-3-氟苯基)硼酸(第85号化合物)的合成
步骤1
将7毫升CH2Cl2中的(R)-N-(2,2-二甲基戊-3-基)-3,5-二甲基苯酰肼(1.317克，5.02毫摩尔)及蒸馏水(4毫升)中的碳酸钾(1.388克，10.04毫摩尔)的溶液添加至配备有磁搅拌棒的25毫升圆底烧瓶中，在0-4℃的冰浴中冷却且搅拌10分钟。添加在3.5毫升二氯甲烷中的2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰氯(1.714克，6.02毫摩尔)的溶液。将反应在0-4℃下搅拌30分钟，移除冰浴且将混合物在室温下搅拌16小时。以LCMS分析反应且显示反应完成。将有机层使用Biotage相分离器管柱分离且转移至ISCOHPLC系统上的40克Redisep SiO2管柱中。以0-100％EtOAc-己烷及接着以10％MeOH-CH2Cl2洗脱出化合物。将所欲馏份合并且在旋转蒸发器上浓缩，得到成为灰白色泡沫的所欲化合物(1.518克，59％产率)。MS(ESI) C29H40BFN2O4([M+H]+)的计算值511，实测值511。
步骤2
将THF(24毫升)及水(6毫升)中的(R)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-N’-(2,2-二甲基戊-3-基)-2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酰肼(1.518克，2.97毫摩尔)的溶液以高碘酸钠(2.148克，10.04毫摩尔)及HCl(2.0M)(3.77毫升，7.53毫摩尔)处理且将所得黄色混合物在室温下搅拌16小时。将混合物过滤且将固体以EtOAc清洗。将滤液以10毫升H2O稀释且以EtOAc(2×20毫升)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤且在旋转蒸发器上浓缩。在ISCO HPLC系统上以0-100％EtOAc-己烷及接着以10％MeOH-CH2Cl2洗脱出所得残余物。将所欲馏份合并且在减压下于旋转蒸发器上浓缩，以供给成为白色粉末的第85号化合物(1.25克，58％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.47-10.30(d,1H),8.33(s,2H),7.57-7.49(m,2H),7.17-7.00(m,3H),6.63-6.60(t,1H),4.44-4.24(d,1H),2.26(s,6H),1.66-1.46(br m,2H),1.11-0.96(m,12H)；MS(ESI)C23H30BFN2O4([M+H]+)的计算值429，实测值429。
实施例17
N’-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼(第83号化合物)的合成
4-溴-N’-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼：
将EtOAc(6毫升)添加至室温下于圆底烧瓶中的25重量％的K2CO3水溶液(在6毫升水中的0.947克K2CO3)的搅拌溶液中。将(2,2-二甲基-1-苯基丙基)肼盐酸盐(0.736克，3.43毫摩尔)添加至其中，接着添加溶解在EtOAc(6毫升)中的Pf酯化合物(SKC-05-069，1.20克，2.28毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示在4.77的主峰，其具有521.14的质量。在经水性整理且以EtOAc萃取之后，将有机馏份经无水MgSO4干燥，过滤且在真空下于旋转蒸发器上移除溶剂。最后以使用RediSep管柱的管柱层析术(二氧化硅40克，己烷/EtOAc的溶剂梯度)纯化且分离出预期的产物1.15克SKC-06-023(1.15克，97％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.43(d,J＝5.8Hz,1H),7.54-7.13(m,6H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),5.39(dd,J＝5.5,4.3Hz,1H),4.78-4.46(m,1H),3.97-3.59(m,6H),3.44(dd,J＝10.6,5.4Hz,1H),1.96(s,3H),1.78-1.38(m,7H),1.24(s,1H),0.93(s,9H)。
4-溴-N’-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-2-甲基-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯酰肼：
将酰氯(0.195克，1.16毫摩尔)添加至3毫升DCM中的SKC-06-023(0.600克，1.16毫摩尔)的溶液中。溶液变澄清。逐滴添加TEA(0.161毫升，1.16毫摩尔)且将反应混合物在氩气下于室温下搅拌过夜。LCMS显示具有预期的产物质量651.09(M+1)的峰及具有569.01的质量的另一峰。将反应混合物吸附在硅胶上且使用ISCO系统(RediSep管柱，二氧化硅24克，己烷/EtOAc的梯度)纯化。以己烷中的～30％EtOAc洗脱出产物，得到0.230克(30％产率)的预期产物SKC-06-025。以己烷中的～40％EtOAc洗脱出化合物SKC-06-025-峰4且经特征化为2-羟基乙氧基衍生物(0.450克，69％产率)。重复反应，在RediSep管柱(Al2O3pH＝7，24克)上进行纯化且分离出预期产物(46％产率)。在此例子中未观察到THP基团的去保护。SKC-06-025的1H NMR；(400MHz，DMSO)δ10.67(s,1H),7.48(dd,J＝7.4,3.7Hz,3H),7.36-7.19(m,4H),7.14(s,2H),7.01(s,1H),6.66(dd,J＝8.3,3.9Hz,1H),6.14(d,J＝5.4Hz,1H),5.77(s,1H),4.73-4.53(m,2H),3.97-3.59(m,6H),3.52-3.38(m,2H),2.24(s,6H),1.78-1.42(m,9H),1.35(s,3H),1.08(s,9H)。SKC-06-025PK4的1H NMR；(400MHz，DMSO)δ10.67(s,1H),7.57-7.43(m,3H),7.37-7.25(m,3H),7.15(s,2H),7.04(s,1H),6.64(d,J＝8.3Hz,1H),5.77(br s,1H),4.85(s,1H),3.68(dd,J＝24.1,4.7Hz,4H),2.24(s,6H),1.37(s,4H),1.08(s,10H)。
(4-2-(2,2-二甲基-1-苯基丙基)-2-(3,5-二甲基苯甲酰基)肼-1-羰基-3- 甲基-2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)硼酸：
将KOAc(0.185克，1.88毫摩尔)、Pin2B2(0.240克，0.94毫摩尔)添加至1,4-二恶烷(2毫升)中的SKC-06-025(0.410克，0.63毫摩尔)的溶液中。将混合物抽真空且以氩气回充，将此过程重复三次。添加PdCl2[dppf].DCM加成物(0.015克，0.02毫摩尔)。将RM快速抽真空且以氩气回充共三次，将反应搅拌且设定加热至80℃。温度突然地变成190℃且使反应混合物从浅红色转变成深棕色。反应在10分钟内停止。LCMS显示在5.35的主峰，具有预期的Bpin化的化合物的产物质量(697.32，M+1)，及在4.80的次峰，具有相当于没有附着的硼的副产物的质量571.34。将反应混合物冷却，过滤且在真空下移除溶剂。将粗制混合物吸附在中性氧化铝上且使用RediSep管柱(Al2O3pH＝7，24克)纯化。以己烷中的～15％EtOAc洗脱出副产物及以己烷中的90％EtOAc洗脱出主要产物，获得0.041克标题化合物SKC-09-029。其似乎为已水解成硼酸的Bpin(以LCMS为基准：615.24M+1)。再以MeOH/DCM的梯度运作相同的管柱且分离出另外0.196克硼酸衍生物(SKC-06-029，总共0.237克，61％产率)。LCMS：615.24(M+1)。以其原样子用于下一步骤。
N’-2,2-二甲基-1-苯基丙基)-N’-(3,5-二甲基苯甲酰基)-1-羟基-6-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[c][1,5,2]二氧硼杂环庚三烯-7-甲酰肼：
将上述合成的硼酸衍生物(SKC-06-030，0.236克)与10毫升含有甲酸的水/乙腈的混合物(10毫升水；20毫升乙腈；及0.5毫升甲酸)在40℃下搅拌过夜。LCMS显示其为完全的反应，在4.22的单一峰，具有预期的产物质量515.28(M+1)。移除溶剂且将残余物使用RediSep管柱(Al2O3pH＝7，24克，二氯甲烷/MeOH的溶剂梯度)纯化。以DCM中的～7％MeOH的混合物洗脱出产物。在馏份干燥之后，分离出成为固体的第83号化合物(0.140克，71％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.63(s,1H),8.37(s,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.55-6.78(m,8H),6.44(d,J＝7.9Hz,1H),5.76(s,1H),4.24(d,J＝4.4Hz,3H),4.08(d,J＝4.4Hz,2H),2.25(s,6H),1.26(s,3H),1.08(d,J＝12.0Hz,9H)。
实施例18
试管内活性
代表性本发明化合物在试管内基因开关试验中测试生物活性(表1和1A)。基因开关试验公开于例如美国专利案号8,076,517；7,456,315；7,304,161；及6,258,603中。
稳定的细胞系的制造
在的控制下使用编码萤火虫荧光素酶(fLUC)的质粒(RS-1，图1)稳定地转染CHO-K1细胞，得到稳定的细胞系CHO-K1_RS-1。制得约100个小瓶的种源细胞库，每小瓶含有5X106个细胞。在各体外效力筛选之前，将一个小瓶的CHO-K1_RS-1解冻且培养两周。显示各组分位置的RS-1的核酸序列示于图2A-2E中。
效力筛选
在对对照物及试验化合物处理之前24小时，将CHO-K1_RS-1细胞在30微升培养基中以每孔3,600个细胞接种在白色不透明的384-孔培养板中。将细胞在37℃下于加湿的CO2培养箱中孵育，直到化合物处理为止。
化合物在100％无水DMSO中制备成25mM，且在后续的稀释及测试之前，在室温下贮存在密封的1毫升试管中。在处理细胞的当天，分选含有对照物及 试验化合物的试管且将配体转移至96-孔聚丙烯板，以供后续稀释。将化合物使用Biomek FX自动化液体处置器以100％无水DMSO稀释，所述稀释为25mM至2.5nM的8点、10倍稀释系列。
接着将稀释的化合物以一式4份转移至384-孔聚丙烯板的各孔中，使得单一384-孔板具有四个重复的各化合物稀释液在板的不同方位中。在384-孔板上的各孔接受20微升稀释的化合物。将含有稀释的化合物的384-孔板及含有培养细胞的盘装载于Biomek FX上且将30毫微升化合物使用384-头V&P Scientific Pin Tool输送至含有细胞的各孔。所得1000-倍稀释液(30纳升至30微升)于0.1％DMSO中产生25μM至2.5pM的最终剂量范围。制造两个重复的板，以供给用于荧光素酶表达试验及APH细胞存活率试验的专用板。
将细胞在37℃下于加湿的CO2培养箱中与化合物孵育24小时。在孵育之后，使用Promega的Steady Glo试验测定细胞的荧光素酶表达(fLUC试验)。在添加试剂之前，将细胞至室温平衡15分钟。将30微升试验试剂使用Biomek FX添加至384-孔板的各孔中。在Molecular Devices Spectramax L光亮度计上读取之前，将试剂与细胞孵育10-120分钟。试验试剂系依照制造商的指示制备。
数据分析
荧光素酶表达数据以来自单独的DMSO处理的细胞的基准信号予以标准化。将来自经处理的细胞对经载剂处理的细胞的信号比绘图且使用Graph Pad Prism软件进行非线性回归。产生EC50、(log)EC50及Hill斜率数据。报告基因表达(例如，荧光素酶表达)适合作为感兴趣的基因的表达的代替物。参见例如US 2009/0123441和WO 2011/119773。
在表1中所使用的缩写提供于表2中。
表2
表1A
实施例19
药代动力学(PK)研究
代表性本发明化合物(图表1)及不含有硼原子的代表性DAH(图表2)的药代动力学根据以下的方案测定：
动物给药
在经由灌食进行口服给予化合物(10毫克/公斤；媒剂＝2毫克/毫升的Capryol90/三乙酸甘油酯(Triacetin)(1：1，v/v)；3只动物/化合物)之前，将雌性Sprague Dawley大鼠禁食至少8小时(过夜)且在给药前秤重。以每日的(动物)体重为基准给予正确体积的适当调配物。记录每只动物的体重、剂量体积及给药时间。在给予激活因子配体之后，使动物至少4小时不进食。
收集血浆
在各时间点自EDTA管中的导管样品点收集来自每只动物的约200微升/血液样品。记录每只动物确实的血液收集时间。血液样品在收集之后立即开始保存在4℃下(湿冰)且从收集起15分钟之内在2500rpm下离心12分钟。在离心之后，将血浆样品贮存在-80℃下，直到试验为止。样品时间如下：第0日：0、0.5、1、2、3、4、6及8小时；第1日：24小时。
测定血浆中的化合物
LC-MS/MS方法：使用具有蛋白质沉淀方法的串联的液相层析与质谱来定量从以配体给药的所有动物所收集的大鼠血浆样品中的化合物。线性范围从1毫微克/毫升至1000毫微克/毫升，具有大于0.99的校正曲线的相关系数，且分析物在所有的校准物浓度下定量在±15％的目标范围内。
测定药代动力学(PK)参数
在血浆中的化合物的以下的PK参数使用5.3版或更新的WinNonlin软件的非隔室方法计算：最大浓度(Cmax)、最大浓度的时间(Tmax)、半生期(t1/2)、从时间0至最后样品的曲线下的面积(AUC0-t)及口腔清除率(oral clearance)。
统计分析
使用描述性统计(平均、标准偏差[SD]、变异系数[CV％]、中间值、最小值及最大值)总结在所有群组中的化合物的PK参数(未显示出数据)。
结果及讨论
血浆配体浓度通过软件程序所产生的标准曲线外推样品的曲线值下的面积计算而来。使用代表所有动物的血浆样品的毫微克/毫升值来产生药代动力学(PK)参数。如表3中所示，与不含有硼原子的DAH相比，本发明化合物意外地具有更高的Cmax和Tmax值，及意外地具有更低的清除率。
图表1
图表2
表3
实施例20
在小鼠中的活体内Ad-RTS-fLUC表达
在雌性CD1小鼠中经肌肉内(IM)注射Ad-RTS-fLUC及经口灌食代表性本发明化合物之后，根据以下的方案测定fLUC表达：
化合物调配
将化合物在Capryol90/三乙酸甘油酯(1：1，v/v)中调配成20毫克/毫升的浓度且以100毫克/千克的剂量经口灌食来进行口服给药。
DNA
将Ad-RTS-fLUC(1.1×1012vp/毫升的起始浓度)贮存在A195贮存缓冲液中(10mMTris，pH 7.4、0.1mM EDTA、1mM MgCl2、10mM组氨酸、75mM NaCl、5％蔗糖、0.02％Ps-80及0.5％EtOH)(Evans等1997)。在此研究中的Ad-RTS-fLUC的给药途径为经由右及左小腿肌肉(腓肚肌(gastrocnemius))上的IM。
给予剂量
雌性CD1小鼠根据下表给药。
GOI构建体
本发明化合物(经口灌食)
体内研究的总结
在研究的第1天，小鼠在右及左小腿肌肉上各以50微升经IM接受1×1010vp(总共100微升)的Ad-RTS-fLUC的剂量。
单一给予的试验化合物在最后设定的Ad-RTS-fLUC注射后24小时开始的第0日以指定的群组的体重为基准经口灌食给药。
IVIS
IVIS系在最后的灌食/给药的第0日后6、24及48小时进行。一旦动物经适当地麻醉时，将150毫克/千克的荧光素(在PBS中稀释)以IP途径给药。将动物放入IVIS表面上的头锥中。凭经验测定成像参数及校准曲线(Caliper Life Sciences Living Image Software)。影像在注射后约15分钟取得。在成像之后，将动物放回其笼子中且监控，直到从麻醉完全恢复为止。
数据分析及影像重建系使用4.0版Living Image Software进行。发光程度通过测量在感兴趣的范围附近以手动绘制标记物个别的感兴趣的区域(ROI)而定量。这类标记物隔离出ROI，滤出任何不希望的表达程度。使用软件校正工具移除背景干扰及像素化溢波(bleed over)，以降低可变性。表面辐射量(从组织表面发射的光强度)以每秒由ROI发射的光子粒的量(粒子/秒)来测量。这类值以最大辐射量(Max Radiance)或总通量(TotalFlux)表示。
统计分析
总结及比较在处理群组之间的IVIS数据，以评估fLUC可诱导性。结果示于图3中。数据显示代表性本发明化合物在体内激活Rheoswitch。从类似的研究取得图3中描述的安慰剂数据。
应了解前述的实施方式和实施例不旨在限制任何关于本发明的范围，且本文提出的申请专利范围旨在包含所有的实施方式和实施例，不论是否于本文明确地提出。
本文所引用的所有专利及公开案都通过引用全文纳入本文。

Claims (28)

1.一种具有式I的化合物：
其中：
R1和R2各自独立地选自：氢、烷基和卤代烷基；或
R1和R2与彼此连接的碳原子一起形成4-至8-元环烷基；
R3选自：氢、烷基、卤代烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R4选自：
X1选自：-O-和-N(R8a)-；
Y1为-(CR9aR9b)m-；
Z1选自：-O-和-N(R8b)-，或Z1不存在；
R6a选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6a形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7a和R7b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R7a’和R7b’各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8a和R8b各自独立地选自：氢和烷基；
R9a和R9b各自独立地选自：氢和烷基；
m为1、2、3或4；
X2选自：-O-和-N(R8c)-；
Y2为-(CR9cR9d)n-；
Z2选自：-O-和-N(R8d)-，或Z2不存在；
R6b选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6b形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7c和R7d各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8c和R8d各自独立地选自：氢和烷基；
R9c和R9d各自独立地选自：氢和烷基；
n为1、2、3或4；
X选自：-O-和-N(R8e)-；
R6c选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6c形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7e和R7f各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8e选自：氢和烷基；
R6d选自：羟基、烷基和烷氧基；或
R6d形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R6f选自：氢、烷基、氨基和羟基；
X5选自：-O-和-N(R8k)-；
R7g和R7h各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8k选自：氢和烷基；
X6选自：-O-和-N(R8l)-；
X7选自：-O-和-N(R8n)-；
R8l选自：氢和烷基；
R8m选自：氢和烷基；
R8n选自：氢和烷基；
R10a选自：氢和-(CR11aR11b)o-B(R12a)(R12b)；且
R10b、R10c和R10d各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、杂烷基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；或
R10b选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、-N(H)CHO、-N(H)CN、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、杂烷基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；和/或
R10c和R10d与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；
R11a和R11b各自独立地选自：氢和烷基；
R12a和R12b选自：羟基和烷氧基；或
R12a与R12b一起形成键联-O(CR13aR13b)pO-；或
-B(R12a)(R12b)形成氟化物加成物；
R13a和R13b各自独立地选自：氢和C1-4烷基；
o为0、1、2、3、4或5；
p为2、3或4；
R5为R4-3、R4-4、R4-8、R4-9或R4-10；或R5选自：
X3选自：-O-和-N(R8f)-；
Y3为-(CR9eR9f)q-；
Z3选自：-O-和-N(R8g)-，或Z3不存在；
R6e选自：羟基和烷基；或
R6e形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7i和R7j各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8f和R8g各自独立地选自：氢和烷基；
R9e和R9f各自独立地选自：氢和烷基；
q为1、2、3或4；
X4选自：-O-和-N(R8h)-；
Y4为-(CR9gR9h)r-；
Z4选自：-O-和-N(R8i)-，或Z4不存在；
R6g选自：羟基和烷基；或
R6g形成羟基酸加成物或氨基酸加成物；
R7k和R7l各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基和烷硫基；
R8h和R8i各自独立地选自：氢和烷基；
R9g和R9h各自独立地选自：氢和烷基；
r为1、2、3或4；
R10e选自：氢和-(CR11cR11d)s-B(R12c)(R12d)；且
R10f、R10g和R10h系独立地选自由下列者所组成之群组：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；或
R10f选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；且
R10g和R10h与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；或
R11c和R11d各自独立地选自：氢和烷基；
R12c和R12d选自：羟基和烷氧基；或
R12c和R12d一起形成键联-O(CR13cR13d)tO-；或
-B(R12c)(R12d)形成氟化物加成物；
R13c和R13d各自独立地选自：氢和C1-4烷基；
s为0、1、2、3、4或5；
t为2、3或4；
R14a和R14b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；
R15a和R15b各自独立地选自：氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、-N(H)CHO、-N(H)CN、烷基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、-COR16、-SO2R17、-N(R18)COR19、-N(R18)SO2R20或N(R18)C＝N(R21)-氨基；
R16选自：氢、羟基、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基和芳基烷氧基；
R17选自：卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R18选自：氢、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R19选自：氢、卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基和氨基；
R20选自：卤代烷基、羟烷基、芳基烷基、烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和氨基；
R21选自：氢、烷基、芳基、氰基和硝基；
前提是：
a)当R4为R4-5、R4-6或R4-7，且R5为R5-3时，则R10a或R10e中之一不为氢；且
b)当R4为R4-5、R4-6或R4-7，且R5为R5-4或R5-5时，则R10a不为氢，
或其药学上可接受的盐；
其中，所述“烷基”是指未取代的含有1至12个碳原子的直链或支链脂族烃基；
所述“卤代烷基”是指经一或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的含有1-12个碳原子的直链或支链脂族烃基；
所述〝羟烷基〞指经一、二或三个羟基取代的含有1-12个碳原子的脂族烃基；
所述〝烷氧基烷基〞指经烷氧基取代的含有1-12个碳原子的脂族烃基；
所述术语“杂烷基”指含有1至10碳原子及至少两个杂原子的稳定的直链或支链烃基，该杂原子可相同或不同且选自O、N或S，其中：1)氮原子及硫原子可随意地氧化；及/或2)氮原子可随意地季铵化，和所述杂原子可位于杂烷基的任何内部位置上或杂烷基连接至分子的其余部分的位置上；
所述术语“任选取代的杂芳基”指未经取代或经取代的具有5至14个环原子及1、2、3或4个独立选自氧、氮和硫的杂原子的单环及双环芳族环系统；
所述术语“任选取代的杂环和杂环基”指含有一、二或三个环、具有从3至14个环员及至少一个杂原子的饱和及部分不饱和环基团，各杂原子独立地选自氧、硫和/或氮原子，其中，1)硫原子可随意地氧化；及/或2)氮原子可随意地季铵化。
2.如权利要求1所述的化合物，其中：
R4为R4-5；
R5为R5-3；且
R10e为-(CR11cR11d)s-B(R12c)(R12d)，
或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1所述的化合物，其具有式II：
其中R5选自：R5-3、R5-4和R5-5，或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求3所述的化合物，其中o为0，
和R10b和R10c各自独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、烷氧基烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基，
或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1所述的化合物，其具有式III：
或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求5所述的化合物，其中s为0且
R10b、R10c和R10d独立地选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；或
R10b选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；及
R10c和R10d与两个相邻的碳原子一起形成稠合的任选取代的环烷基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基，或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求1所述的化合物，其具有式V：
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求1所述的化合物，其具有式VI：
或其药学上可接受的盐。
9.如权利要求7或8中任一项所述的化合物，其中R7a选自：氢、卤素和烷基，Z1不存在，或为-O-，X1为-O-，或-N(H)-，或其药学上可接受的盐。
10.如权利要求1所述的化合物，其中R9a和R9b选自：氢和甲基，Z1不存在，及m为1、2或3，或其药学上可接受的盐。
11.如权利要求1所述的化合物，其具有式VIII：
或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求1所述的化合物，其中R7c选自：氢、卤素和烷基，Z2不存在，R9c和R9d选自：氢和甲基，及n为1、2或3，或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1所述的化合物，其中：
R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；且
R10e为氢，
或其药学上可接受的盐。
14.如权利要求13所述的化合物，其中：
R7a选自：氢、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤烷氧基；
R8a选自：氢和C1-4烷基；且
R6f选自：氢、C1-4烷基、羟基和-NH2，
或其药学上可接受的盐。
15.如权利要求1所述的化合物，其中：
R1为任选取代的C1-6烷基；
R2选自：氢和任选取代的C1-6烷基；且
R3为任选取代的C1-6烷基，
或其药学上可接受的盐。
16.如权利要求15所述的化合物，其中R2为氢及R3为叔丁基，或其药学上可接受的盐。
17.如权利要求1所述的化合物，其中R1、R2和R3各自为甲基，或其药学上可接受的盐。
18.如权利要求1所述的化合物，其具有式XI：
其中R1不等于R3，或其药学上可接受的盐。
19.如权利要求18所述的化合物，其中：
R4选自：
R5选自：R5-3、R5-4和R5-5；且
R10e为氢，
或其药学上可接受的盐。
20.如权利要求1所述的化合物，其选自：
或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求20所述的化合物，其特征在于，选自：
或其药学上可接受的盐。
22.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载剂。
23.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制造治疗癌症、代谢相关性病症、肾脏病、自体免疫疾病、眼部病症、血液病症、神经性病症、肺部病症、心脏病症、肝病症、风湿性病症或传染病的药剂中的用途。
24.如权利要求23所述的用途，其特征在于，用于治疗癌症。
25.如权利要求24所述的用途，其特征在于，所述癌症选自乳腺癌、淋巴瘤、胰腺癌、结肠癌、黑色素瘤、胶质瘤、非小细胞肺癌、头颈癌、肺癌、宫颈癌、肾细胞癌、蕈样肉芽肿病、白细胞、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、卡波西肉瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。
26.如权利要求23所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗贫血。
27.一种控制昆虫的方法，所述方法包含使所述昆虫或其栖息处与杀昆虫有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。
28.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
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