CN103990130A - 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103990130A CN103990130A CN201310482687.2A CN201310482687A CN103990130A CN 103990130 A CN103990130 A CN 103990130A CN 201310482687 A CN201310482687 A CN 201310482687A CN 103990130 A CN103990130 A CN 103990130A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- silicon dioxide
- mesoporous silicon
- dioxide nano
- preparation
- nano particle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂包含：多西紫杉醇或8-羟基喹啉、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，所述介孔二氧化硅纳米粒负载多西紫杉醇或8-羟基喹啉，所述脂质双分子层包裹在该载有多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒表面。本发明还公开了该介孔二氧化硅纳米制剂的制备方法和应用。本发明载多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米制剂，不仅能显著提高药物抗肿瘤活性，而且能有效降低肿瘤的复发和非特异性毒性，应用前景非常广阔。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种载8-羟基喹啉（8-HQ）或多西紫杉醇（DTX）的介孔二氧化硅纳米制剂，以及该纳米制剂的制备方法和应用。
背景技术
目前大量事实证明乳腺肿瘤是由肿瘤干细胞所引发，乳腺肿瘤的治愈需要彻底消除肿瘤干细胞。因为肿瘤干细胞对常规化疗药物的耐药性和对放射疗法的抵抗性，以及治疗后残余肿瘤干细胞的增殖，使得肿瘤干细胞在肿瘤治疗和复发中起着关键作用。
8-羟基喹啉是一种选择性针对肿瘤干细胞或起始细胞的化合物，与常规化疗药物联合使用可以显著提高肿瘤的治疗效果同时降低肿瘤的复发。多西紫杉醇为半合成紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络起到抗肿瘤作用，是临床常规化疗药物之一，但由于其难溶性和缺少靶向至肿瘤部位的能力，极大地限制了其临床应用。
纳米给药系统可以显著提高药物的稳定性，能够维持较长的血液循环时间及必需的血药浓度。8-羟基喹啉由于自身的物理性质，常规纳米粒的制备方法不能达到理想的载药量和包封效果，因此国内外至今未见8-羟基喹啉纳米制剂的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂以介孔二氧化硅纳米粒作为8-羟基喹啉的载体材料，在载有8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒表面包覆有脂质膜，该制剂不仅能达到理想的载药量和包封效果，而且还可以修饰有靶头，实现靶向肿瘤干细胞的作用。
此外，还需要提供一种载多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂以介孔二氧化硅纳米粒作为多西紫杉醇的载体材料，在载有多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米粒表面包覆有脂质膜，该制剂不仅能充分发挥多西紫杉醇的药效，而且还具有靶向肿瘤细胞的功能。
为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:
在本发明的一个方面，提供了一种介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂包含：抗肿瘤细胞药物多西紫杉醇、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，所述介孔二氧化硅纳米粒负载多西紫杉醇，所述脂质双分子层包裹在该载有多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米粒表面。
所述介孔二氧化硅纳米粒为氨基化介孔二氧化硅纳米粒。
在本发明的另一方面，提供了一种介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂包含：抗肿瘤干细胞药物8-羟基喹啉、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，所述介孔二氧化硅纳米粒负载8-羟基喹啉，所述脂质双分子层包裹在该载有8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒表面。
本发明的介孔二氧化硅纳米制剂，其结构包含介孔二氧化硅纳米粒核心和脂质双分子外层。其中，介孔二氧化硅纳米粒具有有序排列的介孔结构，用于吸附药物；脂质双分子层包覆后使药物释放行为得到控制，使其在体液pH值条件下基本无释放量，而在细胞内pH环境下快速释放。
所述介孔二氧化硅纳米粒为氨基化介孔二氧化硅纳米粒。
所述脂质双分子层表面还修饰有透明质酸。本发明选择透明质酸（HA）修饰脂质双分子层，是因为HA是一种糖胺聚糖，对肿瘤细胞上的CD44受体有很强的亲和性，HA作为载体系统的靶头，可以将药物特异性靶向肿瘤细胞。同时，HA也是肿瘤干细胞的理想靶头。
在本发明的另一方面，还提供了一种介孔二氧化硅纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
将十六烷基三甲基溴化铵溶于碱性溶液后，加入正硅酸四乙酯反应，得空白介孔二氧化硅纳米粒；
将介孔二氧化硅纳米粒氨基化处理后，加入多西紫杉醇或8-羟基喹啉溶液，经搅拌、离心，得载多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒；
将DOPC、DOPE、胆固醇、18:0PEG2000-PE用氯仿溶解后旋蒸，得脂质膜，再将该脂质膜水化后，用薄膜挤出器过膜多次，得脂质体；
将上述制备的脂质体，加入到载多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒的混悬液中，孵育，离心，得脂质双分子层包裹的载多西紫杉醇或8-羟基喹啉介孔二氧化硅纳米粒。
优选的，所述脂质体在加入到载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒混悬液之前，还包括步骤：将脂质体进行透明质酸修饰。
本发明介孔二氧化硅纳米制剂的上述制备工艺简单，条件温和，能充分保持药物活性，解决了8-羟基喹啉不易被包封的问题。
本发明载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米制剂，对8-羟基喹啉有很好的包封作用，包封率为79.04±0.95%，载药量高达13.65±0.14%。
在本发明的另一方面，还提供了上述介孔二氧化硅纳米制剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
优选的，在给药时，载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米制剂和载多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂联合给药。因为多西紫杉醇主要作用于普通肿瘤细胞，对肿瘤干细胞作用不明显，停药后肿瘤在干细胞作用下会继续增长；而8-羟基喹啉主要作用于肿瘤干细胞，对肿瘤细胞的抑制作用没有多西紫杉醇强，停药后肿瘤体积变化不明显。因此，联合使用8-羟基喹啉和多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂，既能提高抗肿瘤活性，又可以降低肿瘤的复发和非特异性毒性。
本发明载8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂，具有粒径小、分布均匀、包封率高的优势，在中性条件(pH7.4)下显示出较长时间的稳定性，在偏酸性条件(pH5.0)下，药物在12小时内基本完全释放，说明本发明制剂在体循环状态稳定，而在细胞内偏酸环境下药物快速释放。该制剂适用于癌症的治疗，将脂质双分子层用透明质酸修饰后，可以靶向肿瘤细胞，并且该制剂粒径小于200nm，易于进入细胞内部，在细胞内环境中缓慢释放药物。本发明制剂特别适用于乳腺肿瘤细胞和肿瘤干细胞的靶向治疗，具有非常广阔的应用前景。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明的介孔二氧化硅纳米制剂的结构示意图；
图2是本发明的介孔二氧化硅纳米粒的氮气吸附-脱附等温线（图2A）和BJH模型孔径分布曲线图（图2B）；
图3是本发明的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的粒径和电位图；
图4是本发明的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的透射电镜图；
图5是本发明的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的扫描电镜图；
图6是本发明的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的体外释放曲线图；
图7是本发明实施例4的DTX-loaded MSS与DTX原料药对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体生长抑制作用的浓度关系图；
图8是本发明实施例4的8-HQ-loaded HA-MSS与8-HQ原料药对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体生长抑制作用的浓度关系图；
图9是本发明实施例4的空白HA-MSS对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体生长抑制作用的浓度关系图；
图10是本发明实施例5不同处方组裸鼠肿瘤体积随时间的变化图；
图11是本发明实施例5不同处方组裸鼠体重随时间的变化图。
具体实施方式
为了降低抗肿瘤药物的非特异性毒性，本发明研制出了一种载8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂以介孔二氧化硅纳米粒作为内核，介孔孔径可调节易修饰，载药量高；脂质双分子层作为外层，控制纳米粒的递释，并且可以选择靶头修饰，实现靶向肿瘤干细胞的作用。本发明选择透明质酸（HA）修饰脂质双分子层，HA是一种糖胺聚糖，对CD44受体有很强的亲和性，是乳腺肿瘤干细胞的理想靶头。本发明的纳米给药系统可以显著提高药物的稳定性，具有控释和靶向双重作用，能够维持较长的血液循环时间及必需的血药浓度，特异性识别肿瘤细胞或肿瘤干细胞，克服了其他剂型全身给药的无选择性分布和非特异性毒性，而且，特定粒径范围的纳米粒还可以通过细胞的内吞作用实现细胞内给药。本发明载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米制剂和载多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米制剂，联合使用，既能提高药物的抗肿瘤活性，又可以降低肿瘤的复发和非特异性毒性，具有非常广阔的应用前景。
如图1所示，本发明提供了一种载8-羟基喹啉（8-HQ）或多西紫杉醇（DTX）的介孔二氧化硅纳米制剂，该制剂包含：抗肿瘤干细胞药物8-羟基喹啉（图1A）或抗肿瘤细胞药物多西紫杉醇（图1B）、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，介孔二氧化硅纳米粒负载药物8-羟基喹啉或多西紫杉醇，脂质双分子层包裹在该载有8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米粒表面。在载8-羟基喹啉（8-HQ）的介孔二氧化硅纳米制剂表面，还修饰有透明质酸（HA）。
本发明介孔二氧化硅纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
一、介孔二氧化硅纳米粒（MSN）的制备
在装有机械搅拌器、温度计的500mL两口圆底烧瓶中，将一定量的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）溶解于超纯水中，加入一定量2.0M的NaOH溶液，混匀后将混合溶液升温至一定温度维持30min，得到澄清液体。将一定量的正硅酸四乙酯(TEOS)注入到混合溶液中，一定速度搅拌，3min后可见白色沉淀，维持反应温度在一定温度2h。混合溶液冷却至室温，离心分离固体产物(3500rpm,15min)，去除上清，沉淀依次分别用超纯水和乙醇洗三次，将固体产物置于坩埚中，于室温真空箱干燥12h。12h后，在550℃马弗炉中煅烧5h以去除介孔中的表面活性剂，即得到MSN。
反应的各项参数为：
CTAB 0.25-0.75g
超纯水 120-480mL
NaOH 1.5-4.5mL
TEOS 1.25-4.67g
温度25℃-80℃
搅拌速度200rpm-1000rpm
二、氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)的制备
精密称取一定量MSN置于西林瓶，加入一定量无水乙醇和一定量二乙烯三胺基丙基三甲氧基硅烷（AEPTMS），超声分散，室温下磁力搅拌24h，转移至离心管中，10000rpm离心3min，依次用超纯水和乙醇洗涤三次，沉淀室温下真空干燥12h，即得到氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)。
它们的配比为：
MSN 100-300mg
无水乙醇 3.2-9.6mL
AEPTMS 0.8-2.4mL
三、制备载药的介孔二氧化硅纳米粒
分别精密称取药物DTX和8-HQ，加适当溶剂溶解。精密称取一定质量的Ap-MSN，分别加入DTX或8-HQ溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载DTX或8-HQ的Ap-MSN。它们的配比为：
Ap-MSN25-75mg
DTX溶液2.5-7.5mg/mL
8-HQ溶液2.5-7.5mg/mL
四、脂质体的制备
精密称取一定量的DOPC(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,二油酰磷脂酰胆碱)、DOPE(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine,二油酰磷脂酰乙醇胺)、胆固醇、18:0PEG2000-PE(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethyleneglycol)-2000]，甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰甘油磷脂酰乙醇胺)，置于梨形瓶。加入一定量的氯仿溶解，置于旋转蒸发仪旋蒸30min。然后将脂质膜用一定量的0.5×杜氏磷酸缓冲液(D-PBS)充分水化，使用薄膜挤出器，选用200nm膜挤压15次，再用100nm膜挤压20次，得到脂质体。它们的配比为：
DOPC 10-20mg
DOPE 0.75-1.75mg
胆固醇 5.0-10.0mg
18:0PEG2000-PE 0.75-1.75mg
氯仿 1-5mL
0.5×D-PBS 1-5mL
五、脂质体的透明质酸（HA）修饰
精密称取一定量的HA，加超纯水溶解，加入一定量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），用盐酸调至pH4.0，置于恒温振荡箱37℃活化2h，按体积比1:1加入脂质体，用NaOH溶液调至pH8.6，充入氮气，置于37℃恒温振荡箱孵育24h。最后，超速离心(15,000g，4℃，30min)，用超纯水洗三次后重悬，冻干，得透明质酸（HA）修饰的脂质体。它们的配比为：
HA5-15mg
EDC·HCl5-15mg
六、制备载多西紫杉醇的脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（DTX-loaded MSS）
精密称取一定质量的载DTX的Ap-MSN，用超纯水溶解，加入过量的脂质体，室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到DTX-loaded MSS，保存在4℃。它们的配比为：
载DTX的Ap-MSN混悬液浓度5-15mg/mL
脂质体混悬液浓度5-15mg/mL
纳米粒混悬液与脂质体混悬液体积比1:2-1:4
七、制备载8-HQ的透明质酸修饰脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（8-HQ-loadedHA-MSS）
精密称取一定质量的载8-HQ的Ap-MSN，用超纯水溶解，加入过量的透明质酸修饰脂质体，室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到8-HQ-loaded HA-MSS，保存在4℃。它们的配比为：
载8-HQ的Ap-MSN混悬液浓度5-15mg/mL
透明质酸修饰脂质体混悬液浓度5-15mg/mL
纳米粒混悬液与透明质酸修饰脂质体混悬液体积比1:2-1:4
下面通过具体实施例阐述本发明。
仪器和材料：
十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），美国sigma公司；
原硅酸四乙酯(TEOS)，美国sigma公司；
DOPC（二油酰磷脂酰胆碱），美国Avanti Polar Lipid公司；
DOPE（二油酰磷脂酰乙醇胺），美国Avanti Polar Lipid公司；
胆固醇，美国Avanti Polar Lipid公司；
18:0PEG2000-PE（甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰甘油磷脂酰乙醇胺），美国Avanti PolarLipid公司；
氢氧化钠（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；
盐酸（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；
氯仿（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；
乙醇（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），上海卡永生物技术公司；
杜氏磷酸缓冲液(D-PBS)，美国Thermo公司；
薄膜挤出器，美国Avanti Polar Lipid公司；
JW-BK112全自动比表面及孔径分析仪，北京精微高博科学技术有限公司；
透射电子显微镜JEM2100F，日本JEOL公司；
扫描电子显微镜xl30feg，荷兰飞利浦公司；
Zetasizer nano ZS激光粒度分析仪，英国马尔文公司；
岛津高效液相色谱仪LC-20A，日本岛津公司。
实施例1制备载8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒
1.介孔二氧化硅纳米粒（MSN）的制备
在装有机械搅拌器、温度计的500mL两口圆底烧瓶中，将0.75g的CTAB溶解于480mL超纯水中，加入3.5mL2.0M的氢氧化钠水溶液，混匀后将混合溶液升温至80℃维持30min，得到澄清液体。将4.67g TEOS连续快速的注入到混合溶液中，550rpm搅拌，3min后可见白色沉淀，维持反应温度在80℃2h。室温下离心分离固体产物(3500rpm,15min)，去除上清，沉淀依次分别用超纯水和乙醇洗三次，真空干燥12h。12h后，在550℃马弗炉中煅烧5h以去除介孔中的表面活性剂，即得到MSN。
2.氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)的制备
精密称取200mg MSN置于西林瓶，加入6.4mL无水乙醇和1.6mL AEPTMS，超声分散，室温下磁力搅拌24h，转移至离心管中，10000rpm离心3min，依次用超纯水和乙醇洗涤三次，沉淀室温下真空干燥12h，即得到氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)。
3.制备载DTX或8-HQ的介孔二氧化硅纳米粒
精密称取50mg DTX，加乙腈溶解，10mL容量瓶定容。精密称取50mg的Ap-MSN，加入2mL DTX溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载DTX的Ap-MSN。
精密称取50mg8-HQ，加甲醇溶解，10mL容量瓶定容。精密称取50mg的Ap-MSN，加入2mL8-HQ溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载8-HQ的Ap-MSN。
4.脂质体的制备
精密称取15mg DOPC、1.25mg DOPE、7.5mg胆固醇、1.25mg PEG2000-PE，置于梨形瓶。加入3mL氯仿溶解，置于旋转蒸发仪旋蒸30min。然后将脂质膜用2.5mL的0.5×杜氏磷酸缓冲液(D-PBS)充分水化，使用薄膜挤出器，选用200nm膜挤压15次，再用100nm膜挤压20次，得到脂质体。
5.脂质体的透明质酸（HA）修饰
精密称取10mg HA，加10mL超纯水溶解，加入10mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），用盐酸调至pH4.0，置于恒温振荡箱37℃活化2h，按体积比1:1，取其中2mL加入2mL脂质体（10mg/mL），用NaOH溶液调至pH8.6，充入氮气，置于37℃恒温振荡箱孵育24h。最后，超速离心(15,000g，4℃，30min)，用1mL超纯水洗三次后重悬，冻干，得透明质酸（HA）修饰的脂质体。
6.制备载多西紫杉醇的脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（DTX-loaded MSS）
精密称取10mg的载DTX的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入3倍体积的脂质体（脂质体混悬液浓度10mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到DTX-loadedMSS，保存在4℃。
7.制备载8-HQ的透明质酸修饰脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（8-HQ-loadedHA-MSS）
精密称取10mg的载8-HQ的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入3倍体积的透明质酸修饰脂质体（透明质酸修饰脂质体混悬液浓度10mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到8-HQ-loaded HA-MSS，保存在4℃。
实施例2制备载8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒
1.介孔二氧化硅纳米粒（MSN）的制备
在装有机械搅拌器、温度计的500mL两口圆底烧瓶中，将0.25g的CTAB溶解于120mL超纯水中，加入1.5mL2.0M的氢氧化钠水溶液，混匀后将混合溶液升温至60℃维持45min，得到澄清液体。将1.25g TEOS连续快速的注入到混合溶液中，200rpm搅拌，3min后可见白色沉淀，维持反应温度在60℃2h。室温下离心分离固体产物(3500rpm,15min)，去除上清，沉淀依次分别用超纯水和乙醇洗三次，真空干燥12h。12h后，在550℃马弗炉中煅烧5h以去除介孔中的表面活性剂，即得到MSN。
2.氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)的制备
精密称取100mg MSN置于西林瓶，加入3.2mL无水乙醇和0.8mL AEPTMS，超声分散，室温下磁力搅拌24h，转移至离心管中，10000rpm离心3min，依次用超纯水和乙醇洗涤三次，沉淀室温下真空干燥12h，即得到氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)。
3.制备载DTX或8-HQ的介孔二氧化硅纳米粒
精密称取25mg DTX，加乙腈溶解，10mL容量瓶定容。精密称取25mg的Ap-MSN，加入2mL DTX溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载DTX的Ap-MSN。
精密称取25mg8-HQ，加甲醇溶解，10mL容量瓶定容。精密称取25mg的Ap-MSN，加入2mL8-HQ溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载8-HQ的Ap-MSN。
4.脂质体的制备
精密称取10mg DOPC、0.75mg DOPE、5.0mg胆固醇、0.75mg PEG2000-PE，置于梨形瓶。加入1mL氯仿溶解，置于旋转蒸发仪旋蒸30min。然后将脂质膜用1.0mL的0.5×杜氏磷酸缓冲液(D-PBS)充分水化，使用薄膜挤出器，选用200nm膜挤压15次，再用100nm膜挤压20次，得到脂质体。
5.脂质体的透明质酸（HA）修饰
精密称取5mg HA，加10mL超纯水溶解，加入5mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），用盐酸调至pH4.0，置于恒温振荡箱37℃活化2h，按体积比1:1，取其中2mL加入2mL脂质体（10mg/mL），用NaOH溶液调至pH8.6，充入氮气，置于37℃恒温振荡箱孵育24h。最后，超速离心(15,000g，4℃，30min)，用1mL超纯水洗三次后重悬，冻干，得透明质酸（HA）修饰的脂质体。
6.制备载多西紫杉醇的脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（DTX-loaded MSS）
精密称取5mg的载DTX的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入2倍体积的脂质体（脂质体混悬液浓度15mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到DTX-loadedMSS，保存在4℃。
7.制备载8-HQ的透明质酸修饰脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（8-HQ-loadedHA-MSS）
精密称取5mg的载8-HQ的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入2倍体积的透明质酸修饰脂质体（透明质酸修饰脂质体混悬液浓度15mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到8-HQ-loaded HA-MSS，保存在4℃。
实施例3制备载8-羟基喹啉或多西紫杉醇的介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒
1.介孔二氧化硅纳米粒（MSN）的制备
在装有机械搅拌器、温度计的500mL两口圆底烧瓶中，将0.5g的CTAB溶解于300mL超纯水中，加入4.5mL2.0M的氢氧化钠水溶液，混匀后将混合溶液升温至80℃维持30min，得到澄清液体。将3.0g TEOS连续快速的注入到混合溶液中，1000rpm搅拌，3min后可见白色沉淀，维持反应温度在80℃2h。室温下离心分离固体产物(3500rpm,15min)，去除上清，沉淀依次分别用超纯水和乙醇洗三次，真空干燥12h。12h后，在550℃马弗炉中煅烧5h以去除介孔中的表面活性剂，即得到MSN。
2.氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)的制备
精密称取300mg MSN置于西林瓶，加入9.6mL无水乙醇和2.4mL AEPTMS，超声分散，室温下磁力搅拌24h，转移至离心管中，10000rpm离心3min，依次用超纯水和乙醇洗涤三次，沉淀室温下真空干燥12h，即得到氨基化介孔二氧化硅纳米粒(Ap-MSN)。
3.制备载药的介孔二氧化硅纳米粒
精密称取75mg DTX，加乙腈溶解，10mL容量瓶定容。精密称取75mg的Ap-MSN，加入2mL DTX溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载DTX的Ap-MSN。
精密称取75mg8-HQ，加甲醇溶解，10mL容量瓶定容。精密称取75mg的Ap-MSN，加入2mL8-HQ溶液，在常温下磁力搅拌24h。然后转入离心管，置于高速离心机，10000rpm离心10min，即得载8-HQ的Ap-MSN。
4.脂质体的制备
精密称取20mg DOPC、1.75mg DOPE、10.0mg胆固醇、1.75mg PEG2000-PE，置于梨形瓶。加入5mL氯仿溶解，置于旋转蒸发仪旋蒸30min。然后将脂质膜用5.0mL的0.5×杜氏磷酸缓冲液(D-PBS)充分水化，使用薄膜挤出器，选用200nm膜挤压15次，再用100nm膜挤压20次，得到脂质体。
5.脂质体的透明质酸（HA）修饰
精密称取15mg HA，加10mL超纯水溶解，加入15mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），用盐酸调至pH4.0，置于恒温振荡箱37℃活化2h，按体积比1:1，取其中2mL加入2mL脂质体（10mg/mL），用NaOH溶液调至pH8.6，充入氮气，置于37℃恒温振荡箱孵育24h。最后，超速离心(15,000g，4℃，30min)，用1mL超纯水洗三次后重悬，冻干，得透明质酸（HA）修饰的脂质体。
6.制备载多西紫杉醇的脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（DTX-loaded MSS）
精密称取15mg的载DTX的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入4倍体积的脂质体（脂质体混悬液浓度5mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到DTX-loadedMSS，保存在4℃。
7.制备载8-HQ的透明质酸修饰脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（8-HQ-loadedHA-MSS）
精密称取15mg的载8-HQ的Ap-MSN，加1mL超纯水溶解，加入4倍体积的透明质酸修饰脂质体（透明质酸修饰脂质体混悬液浓度5mg/mL），室温下孵育1h。然后置于高速离心机，10,000rpm离心5min，用0.5×D-PBS洗三次，去除过量的脂质。最后用0.5×D-PBS重分散，即得到8-HQ-loaded HA-MSS，保存在4℃。
将实施例1～3制备的空白介孔二氧化硅纳米粒（MSN）、氨基化介孔二氧化硅纳米粒（Ap-MSN）、脂质体、载多西紫杉醇的脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（DTX-loadedMSS）、载8-HQ的透明质酸修饰脂质双分子层包裹的介孔二氧化硅纳米粒（8-HQ-loadedHA-MSS），进行如下的实验验证：
一、介孔二氧化硅纳米粒的性质考察
采用比表面积及孔径分析仪测试实施例1～3中制备的空白介孔二氧化硅纳米粒的比表面积、孔径分布和孔容积等性能参数。样品测试前先在氮气流中于250℃脱气12h。用BET模型计算比表面积，用BJH模型计算孔容积。
图2是MSN的氮气吸附-脱附等温线（图2A）和孔容-孔径分布曲线图（图2B）。经BET模型计算得比表面积为733.726m2/g，经BJH模型计算得孔容积为0.695cm3/g，最可几孔径为1.978nm。图2A曲线属于Langmuir IV型吸附曲线，是典型的介孔结构吸附特征曲线。在低分压段(P/P0<0.3阶段)，吸附量陡增产生突跃，这是N2分子低温下在介孔孔道内产生的毛细凝聚所致，吸附量的急剧增加表明介孔结构的存在并且孔径较均匀。之后N2分子吸附于外表面，曲线(0.3<P/P0<0.9阶段)变化不大，较为平坦，在P/P0约为0.9处又出现突跃，这是颗粒间空隙所造成的毛细管凝聚。样品的吸附-脱附等温线未出现比较明显的滞后环，说明这些样品中存在3D形状规则且孔径高度均一的介孔孔道。
图2B是介孔二氧化硅纳米粒的BJH模型孔径分布曲线（即孔容-孔径微分分布曲线），结果与氮气吸附-脱附等温线一致，也显示样品的孔径是介孔范畴且孔径分布较为集中。
二、粒径及电位的测定
使用Zetasizer nano ZS测得实施例1～3制得的氨基化介孔二氧化硅纳米粒（Ap-MSN）的粒径为101.6±1.237nm，zeta电位为37.1±1.07mv，见图3。
使用Zetasizer nano ZS测得实施例1～3制得的脂质体（Liposomes）的粒径为166.6±0.6506nm，zeta电位为-53.4±1.27mv，见图3。
在图3中，A1和B1:MSN,A2和B2:Ap-MSN,A3和B3:Liposomes,A4和B4:HA-Liposomes,A5和B5:空白MSS,A6和B6:空白HA-MSS。
图3中各种纳米粒材料的粒径和zeta电位的详细数值见下表1。
表1材料的粒径和zeta电位表
三、介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的透射电镜观察
采用透射电子显微镜观察介孔二氧化硅纳米粒和脂质膜包覆的介孔二氧化硅纳米粒的形貌和孔洞结构。将纳米粒用超纯水稀释至5mg/mL，小心滴加样品至TEM碳膜铜网，待样品干燥后即制得TEM样品，上样，抽真空测试，加速电压200kV。介孔二氧化硅是无机材料，直接用透射电镜检测，可以得到清晰的形态细节；但脂质材料是有机物质，经磷钨酸染色后，才能观察到清晰形态。所以用透射电镜分别检测了各组有或没有经磷钨酸染色的样品。结果如图4显示，介孔二氧化硅纳米粒的介孔结构清晰，分布均匀，具有较好的有序性；脂质双分子层清晰可见，并且均匀包覆在介孔二氧化硅纳米粒表面。图4中，B1和B5:MSN；B2和B6：Ap-MSN；B3和B7:空白MSS；B4和B8:空白HA-MSS。
四、介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的扫描电镜观察
采用扫描电子显微镜观察介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的表面形貌和分散情况。将材料用超纯水稀释至5mg/mL，滴加样品至硅片，挥干后表面喷金，上样，抽真空测试，得到MSN（图5C1）、Ap-MSN（图5C2）、空白MSS（图5C3）、和空白HA-MSS（图5C4）的完整形态。如图5所示，各组样品基本规则呈球形且分散较好。
五、载8-HQ或DTX介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的体外释放实验
精密称取2mg载药样品，加入2mL磷酸盐缓冲溶液PBS(pH7.4)或PBS(pH5.0)，置于恒温振荡培养箱中，在37℃、100rpm条件下孵育。分别于一定时间点（第0,1,2,4,8,12,24,48h）将样品以10,000rpm离心5min，小心取出全部上清液，并同时补充2mL新的释放介质。用高效液相法检测释放介质中药物含量。需要指出的是，在DTX的释放实验中，所用释放介质含0.1%体积比的吐温-80作为增溶剂。
结果如图6所示，在中性条件(pH7.4)下载DTX的MSS和载8-HQ的HA-MSS样品则显示出较长时间的稳定性，在3天内未检测到有药物释放。在偏酸性条件(pH5.0)下，载DTX的MSS和载8-HQ的HA-MSS样品在12小时内基本完全释放。图6中，A为8-HQ在PBS(pH7.4)和PBS(pH5.0)中的释放，B为DTX在PBS(pH7.4)和PBS(pH5.0)中的释放。
实施例4载8-HQ或DTX介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的体外细胞毒性评价
利用MTT法对载药纳米粒的体外细胞毒性进行评价。
1.对于贴壁的乳腺癌MCF-7细胞株：
（1）将处于对数生长期的MCF-7细胞株用消化液消化，用含血清培养基重悬，得单细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个/mL，每孔100μL接种于96孔板中，在37℃，5%CO2的条件下适应性培养24h，待细胞生长到合适密度。
（2）在超净台中，按照实验设计向各孔分别加入25μL DTX和DTX-loaded MSS，终浓度分别为0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4,12.8,25.6,51.2,102.4,204.8,409.6nM；分别加入25μL8-HQ和8-HQ-loaded HA-MSS，终浓度分别为20,40,80,160,320,640,1280,2560,5120,10240,20480,40960nM；分别加入25μL空白HA-MSS，终浓度分别为100,500,1000,5000,10000,50000,100000ng Ap-MSN/mL，每组设6个副孔，加药后返回二氧化碳培养箱中继续培养48h。同时设不加细胞的空白溶剂对照孔和不进行任何处理的阴性对照孔。
（3）孵育48h后，小心吸弃上清液，每孔加入含血清培养基100μL，继续孵育24h作为恢复期。
（4）孵育24h恢复期结束后，小心吸弃上清液，每孔加入不含酚红的DMEM100μL。继而每孔加入20μL的MTT液(5mg/mL in1×D-PBS，0.22μm过滤除菌)，将孔板置于37℃孵箱中继续培养4h。
（5）取出96孔板，小心吸弃上清液，每孔加入DMSO150μL，置于摇床上振摇10min，以溶解紫色甲瓒结晶，使其充分溶解混匀，然后置于酶标仪于490和570nm测定各孔OD值。
2.对于悬浮的乳腺肿瘤微球体细胞：
（1）将处于对数生长期的乳腺肿瘤微球体细胞用消化液消化，用无血清培养基重悬，得单细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个/mL，每孔100μL接种于96孔板中，在37℃，5%CO2的条件下适应性培养24h，待细胞生长到合适程度。
（2）在超净台中，按照实验设计向各孔加入25μL DTX和DTX-loaded MSS，终浓度分别为0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4,12.8,25.6,51.2,102.4,204.8,409.6nM；分别加入25μL8-HQ和8-HQ-loaded HA-MSS，终浓度分别为20,40,80,160,320,640,1280,2560,5120,10240,20480,40960nM；分别加入25μL空白HA-MSS，终浓度分别为100,500,1000,5000,10000,50000,100000ng Ap-MSN/mL，每组设6个副孔，加药后返回二氧化碳培养箱中继续培养48h。同时设不加细胞的空白溶剂对照孔和不进行任何处理的阴性对照孔。
（3）孵育48h后，2000rpm离心5min，小心吸弃上清液，每孔加入无血清培养基100μL，继续孵育24h作为恢复期。
（4）孵育24h恢复期结束后，2000rpm离心5min，小心吸弃上清液，每孔加入不含酚红的DMEM/F12100μL。继而每孔加入20μL的MTT液(5mg/mL in1×D-PBS，0.22μm过滤除菌)，将孔板置于37℃孵箱中继续培养4h。
（5）取出96孔板，2000rpm离心5min，小心吸弃上清液，每孔加入DMSO150μL，置于摇床上振摇10min，以溶解紫色甲瓒结晶，使其充分溶解混匀，然后置于酶标仪于490和570nm测定各孔OD值。
最后计算每组3个复孔的平均OD值，按以下公式计算细胞生存率：
细胞生存率（%）＝（实验组OD值－空白组OD值）/（阴性对照组OD值－空白组OD值）×100%。
以药物浓度的自然对数值(ln nM)为横坐标，细胞生存率为纵坐标绘制药物作用曲线，结果见图7和图8。以纳米粒材料浓度的自然对数值(ln ng/mL)为横坐标，细胞生存率为纵坐标绘制作用曲线，结果见图9。应用SSPS13.0软件计算出药物的半数抑制浓度IC50。
体外毒性实验分别检测了DTX-loaded MSS和8-HQ-loaded HA-MSS对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体细胞生长的抑制效应。从图中可以看出，药物DTX和8-HQ对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体细胞生长的抑制效应呈浓度依赖性，即随药物浓度的增加，细胞生长抑制效应也增强（图7和图8）。空白材料HA-MSS在浓度为100ng～100mg Ap-MSN/mL范围内对MCF-7细胞和乳腺肿瘤微球体细胞无显著毒性作用（图9），证明了材料的安全性。
同时也可以看出，DTX对MCF-7细胞的毒性作用要高于对乳腺肿瘤微球体(DTX:IC50 ofMCF-7vs.IC50 of MCF-7mammospheres=4.826±0.469nM vs.90.749±2.101nM,P<0.05;DTX-loaded MSS:IC50 of MCF-7vs.IC50 of MCF-7mammospheres=1.896±0.131nM vs.28.286±2.116nM,P<0.05)，相反8-HQ对MCF-7细胞的毒性作用要低于对乳腺肿瘤微球体(8-HQ:IC50 of MCF-7vs.IC50 of MCF-7mammospheres=9480.677±947.624nM vs.1212.783±108.041nM,P<0.05;8-HQ-loaded MSS:IC50 of MCF-7vs.IC50 of MCF-7mammospheres=3505.483±622.256nM vs.441.6493±39.780nM,P<0.05)。说明乳腺肿瘤微球体对常规肿瘤治疗药物DTX有耐受性，而8-HQ则更针对性的作用于乳腺肿瘤微球体。8-HQ是一种常用金属螯合剂，也被证实可以通过NF-κB信号通路引发肿瘤细胞凋亡，故而可能是由于8-HQ作为NF-κB抑制剂来抑制乳腺肿瘤微球体的生长。8-羟基喹啉是一种选择性针对肿瘤干细胞或起始细胞的化合物，与常规化疗药物联合使用可以显著提高肿瘤的治疗效果同时降低肿瘤的复发。因此为达到体内抗肿瘤的目的，需要联合使用DTX和8-HQ。
结果还表明载DTX的MSS比DTX原料药对细胞的杀伤作用更大(P<0.05)；同样的，载8-HQ的HA-MSS比8-HQ原料药对细胞的杀伤作用更大(P<0.05)。药物载体传递系统的治疗作用决定于细胞摄取、胞内分布和释放药物入细胞的量。与原料药的被动扩散入胞途径不同，MSS和HA-MSS通过细胞摄取和在胞内偏酸环境下的快速释放药物达到更高的细胞毒性作用。
实施例5载8-HQ或DTX介孔二氧化硅脂质靶向纳米粒的体内细胞毒性评价
建立人乳腺肿瘤移植裸鼠模型，当肿瘤体积达到200mm3左右时，将32只裸鼠随机分为8组，每组4只，剪耳法标注，分别给予下述不同处方。
组1：生理盐水对照组。
组2：空白材料组HA-MSS。即称取一定量的HA-MSS加生理盐水至一定体积，于超净台滤器灭菌。
组3：DTX10mg/kg，称取一定量的DTX，加乙醇完全溶解，于超净台滤器灭菌，再加生理盐水稀释至一定体积。
组4：8-HQ50mg/kg，称取一定量的8-HQ，加乙醇完全溶解，于超净台滤器灭菌，再加生理盐水稀释至一定体积。
组5：DTX10mg/kg和8-HQ50mg/kg，称取一定量的DTX和8-HQ，加乙醇完全溶解，于超净台滤器灭菌，再加生理盐水稀释至一定体积。
组6：DTX-loaded MSS10mg/kg，称取一定量的DTX-loaded MSS，加生理盐水至一定体积，于超净台滤器灭菌。
组7：8-HQ-loaded HA-MSS50mg/kg，称取一定量的8-HQ-loaded HA-MSS，加生理盐水至一定体积，于超净台滤器灭菌。
组8：DTX-loaded MSS10mg/kg和8-HQ-loaded HA-MSS50mg/kg，称取一定量的DTX-loaded MSS和8-HQ-loaded HA-MSS，加生理盐水至一定体积，于超净台滤器灭菌。
在接种后第15、18、22和25天尾静脉注射给药，每次注射体积为100μL/只。注射前先用75%酒精棉球酒精棉擦拭鼠尾静脉处，看准静脉位置，几乎平行进针，针在皮下行走，回抽见血，推针无阻力即可，无法推入就退出，缓慢推入注射液，注射后用无菌棉球止血。
用游标卡尺每周测2次肿瘤长径a和垂直于a的最大横径b，计算瘤体积并且绘制肿瘤体积生长曲线。瘤体积=1/2×L×W2。观察各组裸鼠的饮食、活动、皮色等方面的变化，每周2次测量裸鼠体重，观察体重变化情况。计算体重改变率(Mx/M0-1)×100%，其中M0为分组给药时体重，Mx为每次测量时的体重。
结果如图10所示，与生理盐水对照组相比较，空白载体HA-MSS组的肿瘤体积没有显著差异(P>0.05)，说明空白载体HA-MSS没有抗肿瘤作用。与生理盐水对照组相比较，8-HQ组和8-HQ-loaded HA-MSS组的肿瘤体积有显著差异(P<0.05)，但体积差别不大，说明8-HQ有较弱的抗肿瘤作用。与生理盐水对照组相比较，DTX组和DTX-loaded MSS组的肿瘤体积有显著差异(P<0.05)，并且体积差别较大，说明DTX有较强的抗肿瘤作用。与生理盐水对照组相比较，DTX plus8-HQ组与DTX-loaded MSS plus8-HQ-loaded HA-MSS组的肿瘤体积有显著差异(P<0.05)，并且体积变化最大，说明DTX和8-HQ联合应用相比于单独使用有最好的抗肿瘤作用。
8-HQ组和8-HQ-loaded HA-MSS组的肿瘤体积变化有显著差异(P<0.05)，说明通过载体系统将药物8-HQ主动靶向富集至肿瘤部位，增强了抗肿瘤作用。DTX组和DTX-loaded MSS组的肿瘤体积变化有显著差异(P<0.05)，说明通过载体系统将药物DTX被动靶向富集至肿瘤部位，增强了抗肿瘤作用。DTX plus8-HQ组与DTX-loaded MSS plus8-HQ-loaded HA-MSS组的肿瘤体积变化有显著差异(P<0.05)，同样说明通过载体系统将药物DTX和8-HQ靶向富集至肿瘤部位，增强了抗肿瘤作用。
8-HQ组和DTX组的肿瘤体积变化有显著差异(P<0.05)，说明DTX的抗肿瘤作用强于8-HQ。可能是由于8-HQ主要作用于肿瘤干细胞，而对占绝大比例的肿瘤细胞没有显著抑制作用；而DTX作为常规化疗药物，对普通肿瘤细胞有显著的抑制作用，所以表现在整个肿瘤体积上体积抑制明显。
在停药一定时间后，DTX组和DTX-loaded MSS组的肿瘤体积逐渐增加，但DTX plus8-HQ组与DTX-loaded MSS plus8-HQ-loaded HA-MSS组的肿瘤体积没有明显增加，可能是由于DTX主要作用于普通肿瘤细胞，而对肿瘤干细胞作用不明显，导致停药后肿瘤在干细胞作用下继续增长；由于8-HQ的加入能够作用于肿瘤干细胞，停药后肿瘤体积变化不明显，说明8-HQ和DTX的联合使用可以降低肿瘤的复发。
研究体重的改变也是一种广泛使用的反映全身毒性的方法。结果如图11所示，与生理盐水对照组相比较，HA-MSS组体重变化没有显著差异(P>0.05)，说明HA-MSS对裸鼠没有非特异性毒性作用。与生理盐水对照组相比较，DTX组和DTX plus8-HQ组体重变化有显著差异(P<0.05)，体重减轻较为明显，并且给药后裸鼠会颤抖约1min，而其他非DTX组未见此现象，再结合裸鼠的饮食与活动情况，说明DTX通过尾静脉注射治疗对裸鼠有较强的非特异性毒性作用。与生理盐水对照组相比较，DTX-loaded MSS plus8-HQ-loaded HA-MSS组体重变化有显著差异(P<0.05)，但此差异与DTX组的体重减轻不同，可能是由于肿瘤体积变化较小导致的体重增加较小，结合裸鼠的饮食与活动情况，说明联合使用DTX-loaded MSS plus8-HQ-loadedHA-MSS通过尾静脉注射治疗对裸鼠未见明显的非特异性毒性作用。
总体来讲，相比于单独使用DTX或8-HQ，联合使用DTX-loaded MSS plus8-HQ-loadedHA-MSS提高了抗肿瘤活性，降低了肿瘤的复发和非特异性毒性。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种介孔二氧化硅纳米制剂，其特征在于，该制剂包含：多西紫杉醇、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，所述介孔二氧化硅纳米粒负载多西紫杉醇，所述脂质双分子层包裹在该载有多西紫杉醇的介孔二氧化硅纳米粒表面。
2.一种介孔二氧化硅纳米制剂，其特征在于，该制剂包含：8-羟基喹啉、介孔二氧化硅纳米粒、脂质双分子层，所述介孔二氧化硅纳米粒负载8-羟基喹啉，所述脂质双分子层包裹在该载有8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒表面。
3.根据权利要求1或2所述的介孔二氧化硅纳米制剂，其特征在于，所述介孔二氧化硅纳米粒为氨基化介孔二氧化硅纳米粒。
4.根据权利要求2所述的介孔二氧化硅纳米制剂，其特征在于，所述脂质双分子层表面还修饰有透明质酸。
5.权利要求1或2所述介孔二氧化硅纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将十六烷基三甲基溴化铵溶于碱性溶液后，加入正硅酸四乙酯反应，得空白介孔二氧化硅纳米粒；
将介孔二氧化硅纳米粒氨基化处理后，加入多西紫杉醇或8-羟基喹啉溶液，经搅拌、离心，得载多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒；
将DOPC、DOPE、胆固醇、18:0PEG2000-PE用氯仿溶解后旋蒸，得脂质膜，再将该脂质膜水化后，用薄膜挤出器过膜多次，得脂质体；
将上述制备的脂质体，加入到载多西紫杉醇或8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒的混悬液中，孵育，离心，得脂质双分子层包裹的载多西紫杉醇或8-羟基喹啉介孔二氧化硅纳米粒。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述脂质体在加入到载8-羟基喹啉的介孔二氧化硅纳米粒混悬液之前，还包括步骤：将脂质体进行透明质酸修饰。
7.权利要求1所述的介孔二氧化硅纳米制剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物在给药时，与权利要求2所述的介孔二氧化硅纳米制剂联合给药。
9.权利要求2所述的介孔二氧化硅纳米制剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物在给药时，与权利要求1所述的介孔二氧化硅纳米制剂联合给药。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310482687.2A CN103990130A (zh) | 2013-06-24 | 2013-10-15 | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310254408.7 | 2013-06-24 | ||
| CN201310254408 | 2013-06-24 | ||
| CN201310482687.2A CN103990130A (zh) | 2013-06-24 | 2013-10-15 | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103990130A true CN103990130A (zh) | 2014-08-20 |
Family
ID=51304625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310482687.2A Pending CN103990130A (zh) | 2013-06-24 | 2013-10-15 | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103990130A (zh) |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104352480A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 浙江中医药大学 | 载紫杉醇的Angiopep-2修饰介孔二氧化硅脂质囊纳米粒的制备方法 |
| CN104434801A (zh) * | 2014-11-19 | 2015-03-25 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 运载阿霉素的靶向性脂质二氧化硅复合体及制备和应用 |
| CN104474555A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-04-01 | 武汉理工大学 | 介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用 |
| CN105030655A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-11-11 | 暨南大学 | 一种负载cq的纳米金封堵介孔二氧化硅控制释放系统及其制备方法和应用 |
| CN105343895A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-02-24 | 福州大学 | 一种双重靶向的载熊果酸/siRNA的荧光介孔二氧化硅-透明质酸及应用 |
| CN105997881A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-10-12 | 上海应用技术学院 | 一种具有肿瘤细胞靶向性的介孔硅纳米组装体及其制备方法 |
| CN106177982A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-12-07 | 上海应用技术学院 | 一种透明质酸修饰的脂质介孔硅核壳纳米组装体及其制备方法 |
| CN106267248A (zh) * | 2016-09-08 | 2017-01-04 | 重庆医科大学 | 一种载叶酸修饰介孔二氧化硅纳米粒的脂质超声微泡及其制备方法 |
| CN106265624A (zh) * | 2016-08-08 | 2017-01-04 | 中国农业大学 | 治疗乳腺癌的药物组合物、药物传递系统及其制备方法 |
| CN106732476A (zh) * | 2016-11-17 | 2017-05-31 | 南昌大学 | 一种用于分离纯化紫杉醇的氨基改性介孔二氧化硅的制备方法 |
| CN107582543A (zh) * | 2017-09-04 | 2018-01-16 | 杭州普略生物科技有限公司 | 跨血脑屏障磁性纳米药物载体及其制备方法 |
| CN107970242A (zh) * | 2017-12-08 | 2018-05-01 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN108186573A (zh) * | 2018-02-26 | 2018-06-22 | 广东药科大学 | 一种以脂质包裹介孔二氧化硅为载体的羟基喜树碱肝靶向制剂及其制备方法 |
| CN111084759A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-05-01 | 福建师范大学 | 负载抗癌药物的载药体系及其制备和应用 |
| CN112239209A (zh) * | 2019-07-18 | 2021-01-19 | 奈力生医股份有限公司 | 通过孔改性的介孔二氧化硅纳米颗粒进行的药物递送 |
| CN112385654A (zh) * | 2020-09-16 | 2021-02-23 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种抗紫外昆虫病毒包涵体颗粒及其制备方法 |
| CN112618559A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-09 | 福建省立医院 | 一种抗肿瘤制剂及其制备方法 |
| CN113181438A (zh) * | 2021-04-26 | 2021-07-30 | 东南大学 | 一种能自愈合和促骨生长的热敏响应性可吸收骨科器械材料及其制备方法 |
| CN114146188A (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-08 | 河南工业大学 | 一种修饰型LMSNs纳米药物载体的制备方法 |
| CN114774531A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-22 | 青岛大学 | 一种用于在细胞内原位检测microRNA的生物传感器 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102091036A (zh) * | 2011-01-10 | 2011-06-15 | 中国药科大学 | 一种含有抗肿瘤药物的复合脂质体及其制备方法和用途 |
| WO2012149376A2 (en) * | 2011-04-28 | 2012-11-01 | Stc.Unm | Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery and methods of using same |
-
2013
- 2013-10-15 CN CN201310482687.2A patent/CN103990130A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102091036A (zh) * | 2011-01-10 | 2011-06-15 | 中国药科大学 | 一种含有抗肿瘤药物的复合脂质体及其制备方法和用途 |
| WO2012149376A2 (en) * | 2011-04-28 | 2012-11-01 | Stc.Unm | Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery and methods of using same |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DONG WANG ET AL.: "The eradication of breast cancer cells and stem cells by 8-hydroxyquinoline-loaded hyaluronan modified mesoporous silica nanoparticle-supported lipid bilayers containing docetaxel", 《BIOMATERIALS》 * |
| JIANGBING ZHOU ET AL.: "Cancer stem/progenitor cell active compound 8-quinolinol in combination with paclitaxel achieves an improved cure of breast cancer in the mouse model", 《BREAST CANCER RES TREAT》 * |
Cited By (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104352480A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 浙江中医药大学 | 载紫杉醇的Angiopep-2修饰介孔二氧化硅脂质囊纳米粒的制备方法 |
| CN104434801B (zh) * | 2014-11-19 | 2017-07-18 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 运载阿霉素的靶向性脂质二氧化硅复合体及制备和应用 |
| CN104434801A (zh) * | 2014-11-19 | 2015-03-25 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 运载阿霉素的靶向性脂质二氧化硅复合体及制备和应用 |
| CN104474555A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-04-01 | 武汉理工大学 | 介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用 |
| CN104474555B (zh) * | 2014-11-21 | 2017-03-08 | 武汉理工大学 | 介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用 |
| CN105030655A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-11-11 | 暨南大学 | 一种负载cq的纳米金封堵介孔二氧化硅控制释放系统及其制备方法和应用 |
| CN105030655B (zh) * | 2015-05-25 | 2018-06-26 | 暨南大学 | 一种负载cq的纳米金封堵介孔二氧化硅控制释放系统及其制备方法和应用 |
| CN105343895A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-02-24 | 福州大学 | 一种双重靶向的载熊果酸/siRNA的荧光介孔二氧化硅-透明质酸及应用 |
| CN105997881A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-10-12 | 上海应用技术学院 | 一种具有肿瘤细胞靶向性的介孔硅纳米组装体及其制备方法 |
| CN106177982A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-12-07 | 上海应用技术学院 | 一种透明质酸修饰的脂质介孔硅核壳纳米组装体及其制备方法 |
| CN106265624A (zh) * | 2016-08-08 | 2017-01-04 | 中国农业大学 | 治疗乳腺癌的药物组合物、药物传递系统及其制备方法 |
| CN106265624B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-12-13 | 中国农业大学 | 治疗乳腺癌的药物组合物、药物传递系统及其制备方法 |
| CN106267248A (zh) * | 2016-09-08 | 2017-01-04 | 重庆医科大学 | 一种载叶酸修饰介孔二氧化硅纳米粒的脂质超声微泡及其制备方法 |
| CN106267248B (zh) * | 2016-09-08 | 2020-02-07 | 重庆医科大学 | 一种载叶酸修饰介孔二氧化硅纳米粒的脂质超声微泡及其制备方法 |
| CN106732476A (zh) * | 2016-11-17 | 2017-05-31 | 南昌大学 | 一种用于分离纯化紫杉醇的氨基改性介孔二氧化硅的制备方法 |
| CN107582543A (zh) * | 2017-09-04 | 2018-01-16 | 杭州普略生物科技有限公司 | 跨血脑屏障磁性纳米药物载体及其制备方法 |
| CN107582543B (zh) * | 2017-09-04 | 2021-02-26 | 杭州普略生物科技有限公司 | 跨血脑屏障磁性纳米药物载体及其制备方法 |
| CN107970242A (zh) * | 2017-12-08 | 2018-05-01 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN107970242B (zh) * | 2017-12-08 | 2020-11-24 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN108186573A (zh) * | 2018-02-26 | 2018-06-22 | 广东药科大学 | 一种以脂质包裹介孔二氧化硅为载体的羟基喜树碱肝靶向制剂及其制备方法 |
| CN112239209A (zh) * | 2019-07-18 | 2021-01-19 | 奈力生医股份有限公司 | 通过孔改性的介孔二氧化硅纳米颗粒进行的药物递送 |
| CN112239209B (zh) * | 2019-07-18 | 2024-01-12 | 奈力生医股份有限公司 | 通过孔改性的介孔二氧化硅纳米颗粒进行的药物递送 |
| CN111084759A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-05-01 | 福建师范大学 | 负载抗癌药物的载药体系及其制备和应用 |
| CN111084759B (zh) * | 2020-01-17 | 2021-10-08 | 福建师范大学 | 负载抗癌药物的载药体系及其制备和应用 |
| CN112385654A (zh) * | 2020-09-16 | 2021-02-23 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种抗紫外昆虫病毒包涵体颗粒及其制备方法 |
| CN112385654B (zh) * | 2020-09-16 | 2021-09-28 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种抗紫外昆虫病毒包涵体颗粒及其制备方法 |
| CN112618559A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-09 | 福建省立医院 | 一种抗肿瘤制剂及其制备方法 |
| CN113181438A (zh) * | 2021-04-26 | 2021-07-30 | 东南大学 | 一种能自愈合和促骨生长的热敏响应性可吸收骨科器械材料及其制备方法 |
| CN114146188A (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-08 | 河南工业大学 | 一种修饰型LMSNs纳米药物载体的制备方法 |
| CN114146188B (zh) * | 2021-12-14 | 2024-01-26 | 河南工业大学 | 一种修饰型LMSNs纳米药物载体的制备方法 |
| CN114774531A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-22 | 青岛大学 | 一种用于在细胞内原位检测microRNA的生物传感器 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103990130A (zh) | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 | |
| CN101703480B (zh) | 明胶-壳聚糖/蒙脱土载药微球及制备方法 | |
| CN102961750A (zh) | 二氧化硅气凝胶在制药中的应用 | |
| CN104983716B (zh) | 肿瘤细胞膜/核膜双靶向肿瘤纳米药物缓释系统及其制备与应用 | |
| CN105833272A (zh) | 一种多功能纳米药物组合物及其制备方法与应用 | |
| CN102370622A (zh) | 一种载药物纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN104434806A (zh) | 一种具有高载药量及主动靶向效应的脂质混合plga纳米粒 | |
| CN103989631A (zh) | 萝卜硫素制剂及其制备方法和应用 | |
| CN102961341B (zh) | 纳米级盐酸阿霉素及其制备方法 | |
| CN105434437A (zh) | 一种奥沙利铂和伊立替康类药物共载脂质体及其制备方法 | |
| CN113750245A (zh) | 一种双腔型纳米级药物载体、载药系统及其制备方法和应用 | |
| CN103720658A (zh) | 肝素修饰的阿霉素脂质体制剂及其制备方法 | |
| CN106265624B (zh) | 治疗乳腺癌的药物组合物、药物传递系统及其制备方法 | |
| Li et al. | Preparation and Characterization of Baicalein‐Loaded Nanoliposomes for Antitumor Therapy | |
| CN102805729A (zh) | 一种长春氟宁脂质体制剂及其制备方法 | |
| CN107096039B (zh) | 一种磁靶向双载药递释系统及其制备方法 | |
| CN113456614A (zh) | 一种基于plga的粒径可变型抗肿瘤仿生纳米制剂及其制备方法和应用 | |
| CN110664784B (zh) | 一种复合纳米给药系统及其在妇科肿瘤治疗中的应用 | |
| CN108186573B (zh) | 一种以脂质包裹介孔二氧化硅为载体的羟基喜树碱肝靶向制剂及其制备方法 | |
| CN109734921B (zh) | 一种聚乙烯亚胺-b-聚乳酸嵌段共聚物、其制备方法及应用 | |
| CN102716080A (zh) | 含异穿心莲内酯固体脂质纳米粒的混悬液及其制备方法和应用 | |
| CN110917172B (zh) | 一种氧化钼纳米片封堵中空介孔硅纳米材料及其制备和应用 | |
| CN101015526A (zh) | 一种拓扑替康脂质体及其制备方法 | |
| CN107854430A (zh) | 一种紫杉醇口服纳米混悬剂及其制备方法 | |
| CN102961336B (zh) | 纳米级铂类药物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140820 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |