CN104474555A - 介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用，包括有以下步骤：1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球；2)制备透明质酸-巯基多肽-阿霉素(HA-RGD-DOX)；3)制备介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇(MSNs-HA-RGD-DOX—PTX)；4)制备荧光标记物修饰的介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇复合物(MSNs-HA-RGD-DOX—PTX)。本发明有益效果在于：1)多靶向协同给药，多重杀伤肿瘤细胞和组织，具有较好的逆转耐药性；2)优良的血液稳定性；3)良好的隐形性、释药性和控释性能；4)良好的体内示踪功能；5)本系统的广泛适用性。
Description
技术领域
本发明涉及药品领域，具体涉及一种介孔纳米硅球复合物靶向给药系统，该系统的制备方法及该系统的应用。
背景技术
近年来，随着癌症的发病率和死亡率的不断上升，癌症已成为致死率最高的疾病之一，目前对恶性肿瘤的治疗采用手术加化疗的综合治疗为主，其中化疗是必须使用的治疗手段。耐药性是癌症治疗的一大难题，也是目前化疗药普遍存在的问题，研究表明，超过90％的恶性肿瘤病人都死于多药耐药性(Multi-drug resistance,MDR)。
基于肿瘤细胞多药耐药性的产生机制，用单一的某种药物对癌症进行大量的重复治疗会导致细胞多药耐药性的产生，与此同时想要达到同样的化疗效果就需要使用更高剂量的药物，这会导致对人类健康的毒副作用更强。组合治疗通过共同装载不同的药物，使不同的药物同时发挥作用，由于不同的药物具有不同的作用机制，在细胞成长和分裂的不同阶段发挥作用，因此可以高效地抑制肿瘤细胞的多药耐药性，提高治疗效率，在一定程度上克服细胞的多药耐药性。研究表明，纳米组合治疗有助于克服传统抗癌药物对正常组织的系统毒性和副作用。近年来，配体-受体靶向转运系统已经成为新药研发的重点。受体介导靶向利用肿瘤细胞表面可以特异性地表达一些受体而实现主动靶向，能将药物更精确地输送到靶部位，可增强药物的肿瘤选择性并减少药物的不良反应。受体介导靶向给药系统通过在药物载体表面结合特殊靶向性配体，依靠受体-配体之间特异性的相互作用诱导给药系统内化进入肿瘤细胞，可以将药物有效的运送至靶组织、靶器官、靶细胞以及细胞内的特定部位,提高了治疗效果，同时可以保护机体正常组织和细胞不受伤害。
透明质酸(hyaluronic acid,HA)，又名玻尿酸，是由双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖类，广泛分布在软结缔组织细胞外基质中。具有良好的生物相容性，生物降解性和隐形性，是一种理想的生物医用高分子材料，偶联有HA组分的纳米粒子能有效避免药物突释，可用于药物的缓控释。在临床医学中具有广泛的应用。研究发现大部分实体肿瘤组织外周的透明质酸增高，同时肿瘤细胞表面的透明质酸受体——CD44表达上调，利用透明质酸/CD44受体介导作用可以提高抗瘤药物的主动靶向。
精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽是许多细胞表面某些整合素分子特异性配体之一。一般认为，肿瘤血管生成是肿瘤生长的关键过程，研究表明，整合素αVβ3受体在肿瘤血管内皮细胞生成中发挥着关键作用，目前已发现25余种不同的整合素受体亚型。近年来，RGD肽与整合素αVβ3受体之间相互作用的研究逐渐成为生物材料研究的热点，通过在生物材料表面引入RGD肽，有望实现细胞识别，促进信号传递，抑制肿瘤新血管生成，提高细胞与生物材料表面的粘连，加速细胞对载体的内吞，达到更有效、精确和安全治疗肿瘤的目的。
荧光示踪技术在蛋白质、核酸、细胞检测及免疫分析等方面显现出巨大的潜能，目前常使用的荧光探针主要有荧光素类、罗丹明类、香豆素类等化合物。其中含活性基荧光素衍生物因能与其它分子发生某些特异反应而显示出巨大的吸引力,一直是化学及生物领域中研究的热点。异硫氰酸荧光素(FITC)是最常用的蛋白质标记试剂之一，具有较高的荧光量子产率，常温下性质稳定,低温和干燥条件下能保存多年。除此之外，它还广泛用于免疫荧光技术以及DNA序列分析中，一直是化学及生物领域中研究的热点。FITC是以荧光素为荧光基团，以异硫氰酸根为反应基团,通过反应基与氨基相结合形成硫脲，从而实现对药物载体的衍生标记。通过将有机突光染料异硫氰酸(FITC)通过化学键接在纳米药物载体中，可以利用荧光检测仪监测到载体进入细胞的过程以及进入细胞后作用于什么部位(细胞核还是细胞质)等等问题，从而实现对药物转运过程的监控。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供介孔纳米硅球复合物靶向给药系统及其制备方法和应用，该靶向给药系统在杀伤高表达CD44和整合素αvβ3受体的卵巢癌、乳腺癌、肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、肺癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等癌症时，对正常组织的毒性较低，具有多药协同治疗的效果，且该靶向给药系统在活体内实时阅读药物与细胞以及细胞的多生物分子相互作用的信息，可研究药物的转运过程及动态监测药物多靶点过程。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案：介孔纳米硅球复合物靶向给药系统，其为异硫氰酸荧光素-介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇复合物(FITC-MSNs-HA-GCGRGDS-DOX--PTX)，其中，其各组分含量按重量份数计为：紫杉醇(PTX)200-4000重量份，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)300-8000重量份，氟化铵(NH4F)300-6000重量份，原硅酸四乙酯(TEOS)2000-40000重量份，3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)30-600重量份，透明质酸(HA)100-2000重量份，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)12-800重量份，N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺4-80重量份，巯基肽(GCGRGDS)1-30重量份，阿霉素(DOX)100-1000重量份，异硫氰酸酯荧光素(FITC)2-20重量份。
所述的介孔纳米硅球复合物靶向给药系统的制备方法，包括有以下步骤：
1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将200-4000重量份紫杉醇(PTX)和300-8000重量份CTAB加入蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟至溶液澄清，加入300-6000重量份NH4F，立即以0.45mL/min的速度加入2000-40000重量份TEOS，滴加到20分钟，反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，离心，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥得载药介孔二氧化硅微球白色粉末白色粉末(PTX-MSNs)；
取前一步制备得到的PTX-MSNs，向其中加入无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入30-600重量份APTES，80℃回流反应24h，离心，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，真空干燥，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)；
2)制备透明质酸-巯基多肽-阿霉素(HA-RGD-DOX)
将100-2000重量份透明质酸加入到蒸馏水中，搅拌溶解，加入3-200重量份EDC、2-40重量份N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥，得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)；
取前一步制备得到的甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)、1-30重量份GCGRGDS巯基肽分别溶解于适量蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时，得到白色絮状的透明质酸-巯基多肽(HA-RGD)；
将100-1000重量份阿霉素的DMSO溶液在3-200重量份EDC条件下与前述步骤制备得到的白色絮状的透明质酸-巯基多肽(HA-RGD)偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到透明质酸-巯基多肽-阿霉素(HA-RGD-DOX)；
3)制备介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇(MSNs-HA-RGD-DOX—PTX)
将1)步制备得到的氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)在3-200重量份EDC存在的条件下与2)步制备得到的透明质酸-巯基多肽-阿霉素(HA-RGD-DOX)偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇(MSNs-HA-RGD-DOX--PTX)；
4)制备荧光标记物修饰的介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇复合物(MSNs-HA-RGD-DOX—PTX)
取前一步制备得到的介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇(MSNs-HA-RGD-DOX--PTX)，2-20重量份FITC和适量吡啶置于圆底烧瓶中，加入适量DMSO溶解，于室温避光搅拌6h，HPLC分析，反应液中加入乙醚，有深红偏黑色沉淀产生，离心，洗涤，将产物室温避光真空干燥，得异硫氰酸荧光素-介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇固体复合物(FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX)。
所述的介孔纳米硅球复合物靶向给药系统应用于制备抗肿瘤药物。
本发明以阳离子表面活性剂CTAB作为模板剂，植物类(天然类)抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)作为模型药物，软模板法制备得到载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs)，然后以3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)作为氨基硅烷偶联剂，后接法制备得到氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)；透明质酸(HA)甲基丙烯酸酯化后与GCGRGDS巯基多肽发生迈克尔加成反应，制备得到HA-RGD，然后再与模型药物抗生素类抗肿瘤药物阿霉素(DOX)反应，制备得到HA-RGD-DOX；将HA-RGD-DOX与氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)表面的氨基作用，制备得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX；最后将FITC与MSNs-HA-RGD-DOX--PTX进行偶合，得到FITC标记的产物FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。
本发明制备工艺所涉及的反应方程式如下：
本发明的有益效果在于：
(1)多靶向协同给药，多重杀伤肿瘤细胞和组织，具有较好的逆转耐药性
CD44是一种高效内吞HA受体，该系统中的HA可特异识别受体并与之结合；整合素αvβ3是一种高效内吞RGD肽受体，该系统中的RGD巯基肽可特异识别受体并与之结合，双受体使药物高效主动靶向肿瘤细胞；紫杉醇抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效；阿霉素为广谱抗肿瘤药，对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用。临床上用于治疗乳腺癌、卵巢癌、肝癌等，协同给药治疗在一定程度上能克服细胞的多药耐药性，从而达到协同的治疗效率，能有效避免多药耐药性逆。
(2)优良的血液稳定性
HA在体内主要被透明质酸酶降解，透明质酸酶为一种酸敏感性酶，最适pH值为3.5-4.0，在血液中，较高的pH值(7.35-7.45)使得酸性型透明质酸酶失活，HA不被降解，在肿瘤部位(组织或细胞)，较低的pH值使HA能够被透明质酸酶有效水解，从而使药物定位释放，有助于增强HA负载的药物在肿瘤部位的积累。MSNs、GCGRGDS、DOX与HA相连接的化学键，MSNs与FITC均稳定，可保障给药系统在血液循环过程中药物不被释放。
(3)良好的隐形性、释药性和控释性能
MSNs具有非常优异的性质，如非常好的生物相容性，表面羟基可修饰性，良好的单分散性，形貌、粒径与孔道的可调节性，非常大的比表面积，天生的药物的缓释性及良好的水溶性。该系统偶联了HA可避免网状内皮系统的吞噬而具有较好的隐形性。酸性型透明质酸酶仅在肿瘤组织中或其周围有活性。该系统进入肿瘤细胞后，在透明质酸酶作用下，HA被降解，引发药物释放。
(4)良好的体内示踪功能
异硫氰酸荧光素(FITC)具有肿瘤成像功能，能动态观察药物载体是否达到肿瘤细胞和发挥疗效。可以利用荧光检测仪监测到载体进入细胞的过程以及进入细胞后作用于什么部位(细胞核还是细胞质)等等问题，从而实现对药物转运过程的实时监控。
(5)本系统的广泛适用性
本发明的靶向给药系统通过HA活性基团连接含-NH2反应基团的不同物质，如巯基多肽、抗肿瘤化疗药和介孔微球等，具有广泛适用性。该给药系统有望解决植物类(天然类)抗肿瘤药物制剂和抗生素类抗肿瘤药物制剂在治疗肿瘤方面存在的细胞选择性差、不良反应严重、有效治疗浓度低和耐药等问题。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例1
1.FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX组分的制备
(1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将抗癌药物PTX0.4270g和CTAB1.8232g加入500mL蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟得澄清溶液，加入NH4F1.4816g，立即以0.45mL/min的速度加入TEOS8.4592g，滴加到20分钟。反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，13000rpm，-4℃离心15min，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液(150mL：2mL)和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h得白色粉末(PTX-MSNs)，FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
取前一步制备得到的PTX-MSNs、30mL无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入0.1419g APTES，80℃回流反应24h。反应混合液13000rpm，-4℃下离心15min，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，60℃下真空干燥箱干燥24h，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
(2)制备HA-RGD-DOX
将0.50g透明质酸加入到10mL蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.012gEDC、0.009gN-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥。得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)。FTIR、NMR、MS等表征。
取前一步制备得到的HA-Meth，巯基肽(GCGRGDS)6.50mg分别溶解于17.5mL蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时。得到白色絮状HA-RGD。FTIR、NMR、MS等表征。
抗癌药物阿霉素(DOX)是目前较为常用的抗药药物之一。将0.50gDOX在0.012gEDC条件下与适量的HA-RGD偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到HA-RGD-DOX复合物，FTIR、NMR、MS等表征。
(3)制备MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取(1)步制备得到的PTX--MSNs-NH2在0.012gEDC存在的条件下与(2)步制备得到的HA-RGD-DOX偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FTIR、NMR、MS等表征。
(4)制备荧光标记物修饰的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取前一步制备得到的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FITC9.6mg和30μL吡啶置于10mL圆底烧瓶中，加入0.5mLDMSO溶解，于室温避光搅拌6h，取样用HPLC分析，表明原料反应完全。将反应液分装于6个1.50mL小塑料管，均加入1mL乙醚，涡旋1min，有深红偏黑色沉淀产生，离心，去上清液，沉淀用丙酮(1mL×3)洗涤，将产物室温避光真空干燥48h，得固体FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
2.双受体介导的多药协同异硫氰酸荧光素示踪靶向给药系统的MTT实验(乳腺癌MCF7细胞)
(1)收集对数期乳腺癌MCF7细胞，调整细胞悬液浓度，铺96孔板，每孔加入100ul细胞培养液，细胞数为8000个，边缘孔用无菌PBS填充。
(2)将平板置5％CO2，37℃孵育24h后，弃去上清液，加入各个细胞样品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，浓度梯度为15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/mL，每孔200μL，设6个复孔。用空白的细胞培养液(无材料加入)作为对照。5％CO2，37℃再孵育24h。
(3)每孔加入新配制50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h，使MTT还原为甲瓒。当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时，小心吸去孔内培养液，每孔加入220μl二甲基亚砜。置平板摇床上低速振荡10min。在酶标仪波长492nm处测定各孔OD值，按公式计算样品的细胞存活率和抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
紫杉醇(Paclitaxel,PTX)抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效。紫杉醇抗癌疗效确切，应用前景广阔。
阿霉素(doxorubici,DOX)，又叫羟基红比霉素或羟基柔红霉素。抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等。
实施例2
1.FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX组分的制备
(1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将抗癌药物PTX0.2135g和CTAB0.6116g加入500mL蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟得澄清溶液，加入NH4F0.7208g，立即以0.45mL/min的速度加入TEOS4.2296g，滴加到20分钟。反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，13000rpm，-4℃离心15min，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液(150mL：2mL)和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h得白色粉末(PTX-MSNs)，FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
取前一步制备得到的PTX-MSNs、30mL无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入0.0710g APTES，80℃回流反应24h。反应混合液13000rpm，-4℃下离心15min，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，60℃下真空干燥箱干燥24h，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
(2)制备HA-RGD-DOX
将0.25g透明质酸加入到10mL蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.024gEDC、0.005gN-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥。得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)。FTIR、NMR、MS等表征。
取前一步制备得到的HA-Meth、巯基肽(GCGRGDS)6.50mg分别溶解于17.5mL蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时。得到白色絮状HA-RGD。FTIR、NMR、MS等表征。
抗癌药物阿霉素(DOX)是目前较为常用的抗药药物之一。0.25gDOX在0.024gEDC条件下与适量的HA-RGD偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到HA-RGD-DOX复合物，FTIR、NMR、MS等表征。
(3)制备MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取(1)步制备得到的PTX--MSNs-NH2在0.024gEDC存在的条件下与(2)步制备得到的HA-RGD-DOX偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FTIR、NMR、MS等表征。
(4)制备荧光标记物修饰的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取前一步制备得到的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FITC4.8mg和30μL吡啶置于10mL圆底烧瓶中，加入0.5mLDMSO溶解，于室温避光搅拌6h，取样用HPLC分析，表明原料反应完全。将反应液分装于6个1.50mL小塑料管，均加入1mL乙醚，涡旋1min，有深红偏黑色沉淀产生，离心，去上清液，沉淀用丙酮(1mL×3)洗涤，将产物室温避光真空干燥48h，得固体FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
2.双受体介导的多药协同异硫氰酸荧光素示踪靶向给药系统的MTT实验(乳腺癌MCF7细胞)
(1)收集对数期乳腺癌MCF7细胞，调整细胞悬液浓度，铺96孔板，每孔加入100ul细胞培养液，细胞数为8000个，边缘孔用无菌PBS填充。
(2)将平板置5％CO2，37℃孵育24h后，弃去上清液，加入各个细胞样品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，浓度梯度为15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/mL，每孔200μL，设6个复孔。用空白的细胞培养液(无材料加入)作为对照。5％CO2，37℃再孵育24h。
(3)每孔加入新配制50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h，使MTT还原为甲瓒。当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时，小心吸去孔内培养液，每孔加入220μl二甲基亚砜。置平板摇床上低速振荡10min。在酶标仪波长492nm处测定各孔OD值，按公式计算样品的细胞存活率和抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
紫杉醇(Paclitaxel,PTX)抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效。紫杉醇抗癌疗效确切，应用前景广阔。
阿霉素(doxorubici,DOX)，又叫羟基红比霉素或羟基柔红霉素。抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等。
实施例3
1.FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX组分的制备
(1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将抗癌药物PTX0.8540g和CTAB1.8232g加入500mL蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟得澄清溶液，加入NH4F2.9632g，立即以0.45mL/min的速度加入TEOS8.4592g，滴加到20分钟。反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，13000rpm，-4℃离心15min，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液(150mL：2mL)和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h得白色粉末(PTX-MSNs)，FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
取前一步制备得到的PTX-MSNs、30mL无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入0.2838g APTES，80℃回流反应24h。反应混合液13000rpm，-4℃下离心15min，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，60℃下真空干燥箱干燥24h，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
(2)制备HA-RGD-DOX
将0.50g透明质酸加入到10mL蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.048gEDC、0.009gN-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥。得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)。FTIR、NMR、MS等表征。
取前一步制备得到的HA-Meth、巯基肽(GCGRGDS)13.0mg分别溶解于25.0mL蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时。得到白色絮状HA-RGD。FTIR、NMR、MS等表征。
抗癌药物阿霉素(DOX)是目前较为常用的抗药药物之一。1.0gDOX在0.048gEDC条件下与适量的HA-RGD偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到HA-RGD-DOX复合物，FTIR、NMR、MS等表征。
(3)制备MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取(1)步制备得到的PTX--MSNs-NH2在0.048gEDC存在的条件下与(2)步制备得到的HA-RGD-DOX偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FTIR、NMR、MS等表征。
(4)制备荧光标记物修饰的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取前一步制备得到的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FITC4.8mg和30μL吡啶置于10mL圆底烧瓶中，加入0.5mLDMSO溶解，于室温避光搅拌6h，取样用HPLC分析，表明原料反应完全。将反应液分装于6个1.5mL小塑料管，均加入1mL乙醚，涡旋1min，有深红偏黑色沉淀产生，离心，去上清液，沉淀用丙酮(1mL×3)洗涤，将产物室温避光真空干燥48h，得固体FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
2.双受体介导的多药协同异硫氰酸荧光素示踪靶向给药系统的MTT实验(乳腺癌MCF7细胞)
(1)收集对数期乳腺癌MCF7细胞，调整细胞悬液浓度，铺96孔板，每孔加入100ul细胞培养液，细胞数为8000个，边缘孔用无菌PBS填充。
(2)将平板置5％CO2，37℃孵育24h后，弃去上清液，加入各个细胞样品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，浓度梯度为15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/mL，每孔200μL，设6个复孔。用空白的细胞培养液(无材料加入)作为对照。5％CO2，37℃再孵育24h。
(3)每孔加入新配制50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h，使MTT还原为甲瓒。当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时，小心吸去孔内培养液，每孔加入220μl二甲基亚砜。置平板摇床上低速振荡10min。在酶标仪波长492nm处测定各孔OD值，按公式计算样品的细胞存活率和抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
紫杉醇(Paclitaxel,PTX)抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效。紫杉醇抗癌疗效确切，应用前景广阔。
阿霉素(doxorubici,DOX)，又叫羟基红比霉素或羟基柔红霉素。抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等。
实施例4
1.FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX组分的制备
(1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将抗癌药物PTX0.4270g和CTAB3.6464g加入500mL蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟得澄清溶液，加入NH4F2.9632g，立即以0.45mL/min的速度加入TEOS8.4592g，滴加到20分钟。反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，13000rpm，-4℃离心15min，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液(150mL：2mL)和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h得白色粉末(PTX-MSNs)，FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
取前一步制备得到的PTX-MSNs、30mL无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入0.1419g APTES，80℃回流反应24h。反应混合液13000rpm，-4℃下离心15min，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，60℃下真空干燥箱干燥24h，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
(2)制备HA-RGD-DOX
将1.00g透明质酸加入到10mL蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.096gEDC、0.018gN-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥。得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)。FTIR、NMR、MS等表征。
取前一步制备得到的HA-Meth、巯基肽(GCGRGDS)3.25mg分别溶解于12.0mL蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时。得到白色絮状HA-RGD。FTIR、NMR、MS等表征。
抗癌药物阿霉素(DOX)是目前较为常用的抗药药物之一。1.0gDOX在0.096gEDC条件下与适量的HA-RGD偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到HA-RGD-DOX复合物，FTIR、NMR、MS等表征。
(3)制备MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取(1)步制备得到PTX--MSNs-NH2在0.096gEDC存在的条件下与(2)步制备得到的HA-RGD-DOX偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FTIR、NMR、MS等表征。
(4)制备荧光标记物修饰的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取前一步制备得到的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FITC4.8mg和30μL吡啶置于10mL圆底烧瓶中，加入1.0mLDMSO溶解，于室温避光搅拌6h，取样用HPLC分析，表明原料反应完全。将反应液分装于6个1.5mL小塑料管，均加入1mL乙醚，涡旋1min，有深红偏黑色沉淀产生，离心，去上清液，沉淀用丙酮(1mL×3)洗涤，将产物室温避光真空干燥48h，得固体FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
2.双受体介导的多药协同异硫氰酸荧光素示踪靶向给药系统的MTT实验(乳腺癌MCF7细胞)
(1)收集对数期乳腺癌MCF7细胞，调整细胞悬液浓度，铺96孔板，每孔加入100ul细胞培养液，细胞数为8000个，边缘孔用无菌PBS填充。
(2)将平板置5％CO2，37℃孵育24h后，弃去上清液，加入各个细胞样品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，浓度梯度为15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/mL，每孔200μL，设6个复孔。用空白的细胞培养液(无材料加入)作为对照。5％CO2，37℃再孵育24h。
(3)每孔加入新配制50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h，使MTT还原为甲瓒。当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时，小心吸去孔内培养液，每孔加入220μl二甲基亚砜。置平板摇床上低速振荡10min。在酶标仪波长492nm处测定各孔OD值，按公式计算样品的细胞存活率和抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
紫杉醇(Paclitaxel,PTX)抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效。紫杉醇抗癌疗效确切，应用前景广阔。
阿霉素(doxorubici,DOX)，又叫羟基红比霉素或羟基柔红霉素。抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等。
实施例5
1.FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX组分的制备
(1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将抗癌药物PTX0.8540g和CTAB3.6464g加入500mL蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟得澄清溶液，加入NH4F1.4816g，立即以0.45mL/min的速度加入TEOS16.9184g，滴加到20分钟。反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，13000rpm，-4℃离心15min，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液(150mL：2mL)和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h得白色粉末(PTX-MSNs)，FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
取前一步制备得到的PTX-MSNs、30mL无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入0.2838g APTES，80℃回流反应24h。反应混合液13000rpm，-4℃下离心15min，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，60℃下真空干燥箱干燥24h，制得氨基化的载药介孔二氧化硅微球(PTX--MSNs-NH2)。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
(2)制备HA-RGD-DOX
将0.50g透明质酸加入到10mL蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.006gEDC、0.018gN-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的EDC和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥。得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸(HA-Meth)。FTIR、NMR、MS等表征。
取前一步制备得到的HA-Meth、巯基肽(GCGRGDS)13.0mg分别溶解于12.0蒸馏水和Hepes缓冲液(含TCEP)中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时。得到白色絮状HA-RGD。FTIR、NMR、MS等表征。
抗癌药物阿霉素(DOX)是目前较为常用的抗药药物之一。0.50gDOX在0.006gEDC条件下与适量的HA-RGD偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到HA-RGD-DOX复合物，FTIR、NMR、MS等表征。
(3)制备MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取(1)步制备得到的PTX--MSNs-NH2在0.006gEDC存在的条件下与(2)步制备得到的HA-RGD-DOX偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FTIR、NMR、MS等表征。
(4)制备荧光标记物修饰的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX
取前一步制备得到的MSNs-HA-RGD-DOX--PTX，FITC9.6mg和30μL吡啶置于10mL圆底烧瓶中，加入1.0mLDMSO溶解，于室温避光搅拌6h，取样用HPLC分析，表明原料反应完全。将反应液分装于6个1.5mL小塑料管，均加入1mL乙醚，涡旋1min，有深红偏黑色沉淀产生，离心，去上清液，沉淀用丙酮(1mL×3)洗涤，将产物室温避光真空干燥48h，得固体FITC-MSNs-HA-RGD-DOX--PTX。FTIR、SEM、TEM、XRD等表征。
2.双受体介导的多药协同异硫氰酸荧光素示踪靶向给药系统的MTT实验(乳腺癌MCF7细胞)
(1)收集对数期乳腺癌MCF7细胞，调整细胞悬液浓度，铺96孔板，每孔加入100ul细胞培养液，细胞数为8000个，边缘孔用无菌PBS填充。
(2)将平板置5％CO2，37℃孵育24h后，弃去上清液，加入各个细胞样品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，浓度梯度为15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/mL，每孔200μL，设6个复孔。用空白的细胞培养液(无材料加入)作为对照。5％CO2，37℃再孵育24h。
(3)每孔加入新配制50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h，使MTT还原为甲瓒。当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时，小心吸去孔内培养液，每孔加入220μl二甲基亚砜。置平板摇床上低速振荡10min。在酶标仪波长492nm处测定各孔OD值，按公式计算样品的细胞存活率和抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
紫杉醇(Paclitaxel,PTX)抗肿瘤谱广，是临床上治疗卵巢癌和乳腺癌的首选药物，且治疗指数高，对肺癌、脑癌、非小细胞肺癌、直肠癌等亦有良好的疗效。紫杉醇抗癌疗效确切，应用前景广阔。
阿霉素(doxorubici,DOX)，又叫羟基红比霉素或羟基柔红霉素。抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病、何杰金和非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、成骨肉瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、膀胱瘤、甲状腺瘤、绒毛膜上皮癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等。
Claims (3)
1.介孔纳米硅球复合物靶向给药系统，其为异硫氰酸荧光素-介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇复合物，其中，其各组分含量按重量份数计为：紫杉醇200-4000重量份，十六烷基三甲基溴化铵300-8000重量份，氟化铵300-6000重量份，原硅酸四乙酯2000-40000重量份，3-氨基丙基三乙氧基硅烷30-600重量份，透明质酸100-2000重量份，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺12-800重量份，N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺4-80重量份，巯基肽1-30重量份，阿霉素100-1000重量份，异硫氰酸酯荧光素2-20重量份。
2.权利要求1所述的介孔纳米硅球复合物靶向给药系统的制备方法，包括有以下步骤：
1)制备氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球
将200-4000重量份紫杉醇和300-8000重量份十六烷基三甲基溴化铵加入蒸馏水中，密封条件下，80℃剧烈搅拌数分钟至溶液澄清，加入300-6000重量份氟化铵，立即以0.45mL/min的速度加入2000-40000重量份原硅酸四乙酯，滴加到20分钟，反应1h后，得到半透明的胶体状态溶液，离心，弃去上层清液，分别用乙醇和浓盐酸的混合溶液和蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥得载药介孔二氧化硅微球白色粉末；
取前一步制备得到的载药介孔二氧化硅微球白色粉末，向其中加入无水甲苯，在N2保护下搅拌混合均匀，缓慢升温至80℃，待温度稳定后，加入30-600重量份3-氨基丙基三乙氧基硅烷，80℃回流反应24h，离心，分别用无水乙醇和去离子水洗涤三次，真空干燥，制得氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球；
2)制备透明质酸-巯基多肽-阿霉素
将100-2000重量份透明质酸加入到蒸馏水中，搅拌溶解，加入3-200重量份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、2-40重量份N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，溶液pH调节至5.3，缓慢搅拌，室温下反应2小时后，再次加入等剂量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-3-氨基丙基甲基丙烯酰胺，调节pH值至5.3，缓慢搅拌，室温下继续反应2小时，去离子水中透析至中性，冷冻干燥，得到甲基丙烯酸酯化的透明质酸；
取前一步制备得到的甲基丙烯酸酯化的透明质酸、1-30重量份巯基肽分别溶解于适量蒸馏水和Hepes缓冲液中，混合，将溶液pH调节至8.8，缓慢搅拌，室温下反应2小时，得到白色絮状的透明质酸-巯基多肽；
将100-1000重量份阿霉素的DMSO溶液在3-200重量份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺条件下与前述步骤制备得到的白色絮状透明质酸-巯基多肽偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到透明质酸-巯基多肽-阿霉素；
3)制备介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇
将1)步制备得到的氨基功能化的载药介孔二氧化硅微球在3-200重量份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在的条件下与2)步制备得到的透明质酸-巯基多肽-阿霉素偶联，反应物以透析袋透析进行纯化，得到介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇；
4)制备荧光标记物修饰的介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇复合物
取前一步制备得到的介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇，2-20重量份异硫氰酸荧光素和适量吡啶置于圆底烧瓶中，加入适量DMSO溶解，于室温避光搅拌6h，HPLC分析，反应液中加入乙醚，有深红偏黑色沉淀产生，离心，洗涤，将产物室温避光真空干燥，得异硫氰酸荧光素-介孔微球-透明质酸-巯基多肽-阿霉素--紫杉醇固体复合物。
3.权利要求1所述的介孔纳米硅球复合物靶向给药系统的在制备抗肿瘤药物方面的应用。
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Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105343895A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-02-24 | 福州大学 | 一种双重靶向的载熊果酸/siRNA的荧光介孔二氧化硅-透明质酸及应用 |
| CN105395491A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-16 | 东华大学 | 一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法 |
| CN105617392A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-01 | 武汉理工大学 | 金纳米复合靶向给药系统制备方法 |
| CN105641710A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-08 | 武汉理工大学 | Ha/rgd修饰的靶向氧化石墨烯双载药复合材料制备方法 |
| CN105688221A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-22 | 武汉理工大学 | Ha/rgd双受体介导多靶点给药系统的制备方法 |
| CN106310283A (zh) * | 2015-07-02 | 2017-01-11 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种硫醇-烯点击化学法制备具有香豆素光控分子开关的介孔二氧化硅纳米粒子的方法 |
| CN106620696A (zh) * | 2016-10-08 | 2017-05-10 | 黄冈师范学院 | 具有光热效应的纳米介孔颗粒药物载体及其制备方法 |
| CN106943985A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-07-14 | 南昌大学 | 用于分离纯化紫杉醇的氨基改性介孔二氧化硅的制备方法 |
| CN107049991A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-08-18 | 大连理工大学 | 一种新型双重靶向抑制肿瘤细胞迁移与侵袭的介孔二氧化硅纳米给药系统及其制备方法 |
| CN107412194A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-12-01 | 武汉理工大学 | 具有刺激响应和分仓智能载药释药特性的介孔硅纳米粒子及其制备方法 |
| CN107970242A (zh) * | 2017-12-08 | 2018-05-01 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN108619527A (zh) * | 2018-05-22 | 2018-10-09 | 大连理工大学 | 一种抗肿瘤耐药的介孔二氧化钛纳米药物组合物及其制备方法 |
| CN109223730A (zh) * | 2018-10-01 | 2019-01-18 | 嘉兴德扬生物科技有限公司 | 一种多响应靶向介孔硅基智能载体的制备方法 |
| CN109439723A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-08 | 王瑞明 | 一种多层纳米复合粒子的毒性测试方法 |
| CN109718381A (zh) * | 2019-03-08 | 2019-05-07 | 山东大学 | 一种亚细胞靶向的纳米药物递送系统 |
| CN111184909A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-05-22 | 湖北翎美生物科技有限公司 | 一种透明质酸缓释填充物及制备方法 |
| CN111363739A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-03 | 江南大学 | 一种利用醛基阿拉伯胶修饰的介孔氧化硅固定化酶的方法 |
| CN113018453A (zh) * | 2021-03-19 | 2021-06-25 | 河南省人民医院 | 一种靶向药物共递送纳米系统及其制备方法和应用 |
| CN115317401A (zh) * | 2022-05-26 | 2022-11-11 | 西安博鸿生物技术有限公司 | 护肤组合物及其制备方法与应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103751857A (zh) * | 2014-01-22 | 2014-04-30 | 同济大学 | 一种载药二氧化硅栓塞微球及其制备方法 |
| CN103990130A (zh) * | 2013-06-24 | 2014-08-20 | 中国人民解放军第二军医大学 | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 |
-
2014
- 2014-11-21 CN CN201410673636.2A patent/CN104474555B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103990130A (zh) * | 2013-06-24 | 2014-08-20 | 中国人民解放军第二军医大学 | 介孔二氧化硅纳米制剂及其制备方法和应用 |
| CN103751857A (zh) * | 2014-01-22 | 2014-04-30 | 同济大学 | 一种载药二氧化硅栓塞微球及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| D. FERRIS ET AL.: "《synthesis of biomolecule-modified mesoporous silica nanoparticles for targeted hydrophobic drug delivery to cancer cells》", 《SMALL》 * |
| 袁丽等: "《介孔二氧化硅纳米粒子应用于可控药物传输系统的若干新进展》", 《有机化学》 * |
Cited By (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106310283A (zh) * | 2015-07-02 | 2017-01-11 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种硫醇-烯点击化学法制备具有香豆素光控分子开关的介孔二氧化硅纳米粒子的方法 |
| CN106310283B (zh) * | 2015-07-02 | 2019-01-25 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种硫醇-烯点击化学法制备具有香豆素光控分子开关的介孔二氧化硅纳米粒子的方法 |
| CN105343895A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-02-24 | 福州大学 | 一种双重靶向的载熊果酸/siRNA的荧光介孔二氧化硅-透明质酸及应用 |
| CN105395491A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-16 | 东华大学 | 一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法 |
| CN105395491B (zh) * | 2015-12-30 | 2018-04-10 | 东华大学 | 一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法 |
| CN105688221B (zh) * | 2016-01-15 | 2019-01-18 | 武汉理工大学 | Ha/rgd双受体介导多靶点给药系统的制备方法 |
| CN105617392A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-01 | 武汉理工大学 | 金纳米复合靶向给药系统制备方法 |
| CN105641710A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-08 | 武汉理工大学 | Ha/rgd修饰的靶向氧化石墨烯双载药复合材料制备方法 |
| CN105688221A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-22 | 武汉理工大学 | Ha/rgd双受体介导多靶点给药系统的制备方法 |
| CN106620696A (zh) * | 2016-10-08 | 2017-05-10 | 黄冈师范学院 | 具有光热效应的纳米介孔颗粒药物载体及其制备方法 |
| CN106943985A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-07-14 | 南昌大学 | 用于分离纯化紫杉醇的氨基改性介孔二氧化硅的制备方法 |
| CN107412194A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-12-01 | 武汉理工大学 | 具有刺激响应和分仓智能载药释药特性的介孔硅纳米粒子及其制备方法 |
| CN107049991B (zh) * | 2017-06-15 | 2020-05-19 | 大连理工大学 | 一种新型双重靶向抑制肿瘤细胞迁移与侵袭的介孔二氧化硅纳米给药系统及其制备方法 |
| CN107049991A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-08-18 | 大连理工大学 | 一种新型双重靶向抑制肿瘤细胞迁移与侵袭的介孔二氧化硅纳米给药系统及其制备方法 |
| CN107970242B (zh) * | 2017-12-08 | 2020-11-24 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN107970242A (zh) * | 2017-12-08 | 2018-05-01 | 福州大学 | 一种负载紫杉醇/厄洛替尼的介孔二氧化硅-透明质酸混合靶向纳米颗粒 |
| CN108619527A (zh) * | 2018-05-22 | 2018-10-09 | 大连理工大学 | 一种抗肿瘤耐药的介孔二氧化钛纳米药物组合物及其制备方法 |
| CN109223730A (zh) * | 2018-10-01 | 2019-01-18 | 嘉兴德扬生物科技有限公司 | 一种多响应靶向介孔硅基智能载体的制备方法 |
| CN109439723A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-08 | 王瑞明 | 一种多层纳米复合粒子的毒性测试方法 |
| CN109718381A (zh) * | 2019-03-08 | 2019-05-07 | 山东大学 | 一种亚细胞靶向的纳米药物递送系统 |
| CN111184909A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-05-22 | 湖北翎美生物科技有限公司 | 一种透明质酸缓释填充物及制备方法 |
| CN111363739A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-03 | 江南大学 | 一种利用醛基阿拉伯胶修饰的介孔氧化硅固定化酶的方法 |
| CN111363739B (zh) * | 2020-03-31 | 2022-07-05 | 江南大学 | 一种利用醛基阿拉伯胶修饰的介孔氧化硅固定化酶的方法 |
| CN113018453A (zh) * | 2021-03-19 | 2021-06-25 | 河南省人民医院 | 一种靶向药物共递送纳米系统及其制备方法和应用 |
| CN115317401A (zh) * | 2022-05-26 | 2022-11-11 | 西安博鸿生物技术有限公司 | 护肤组合物及其制备方法与应用 |
| CN115317401B (zh) * | 2022-05-26 | 2023-09-05 | 西安博鸿生物技术有限公司 | 护肤组合物及其制备方法与应用 |
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