CN102695416B - 激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一组新蛋白激酶抑制剂(吡啶并[4，3‑d]嘧啶‑5‑酮衍生物)及其药学上可接受的盐，可用于治疗细胞增殖性疾病或障碍性疾病，如癌症、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病和神经退行性疾病和障碍性疾病。本发明提供了用于合成蛋白激酶抑制剂化合物的方法及该化合物的给药方法。本发明还提供了包含至少一种该蛋白激酶抑制剂化合物以及适用于该化合物的药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的药物制剂。本发明还提供了在吡啶并[4，3‑d]嘧啶‑5‑酮衍生物的合成过程所产生的有用中间体。

Description

激酶抑制剂
相关申请
本申请要求于2009年10月29日提交的美国临时专利申请第61/256,222号的权益。上述申请的全部公开内容以引用方式并入本文。
背景技术
蛋白激酶包括一大组在结构上相关的磷酰基转移酶(phosphoryl transferase)，该酶对末端磷酸基从ATP向蛋白的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸羟基的转移起着催化作用。根据其磷酸化的底物，将蛋白激酶分类成各族蛋白激酶，例如蛋白酪氨酸激酶(PTK)和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。
经由蛋白激酶进行的磷酸化，可通过改变酶活性、细胞定位或与其它蛋白质的结合而导致靶蛋白(底物)的功能变化。蛋白激酶不仅在控制细胞生长和分化中起着重要的作用，而且还在对种类广泛的细胞信号转导通路的调节中发挥着至关重要的作用。其中蛋白激酶有效地调节生长因子和各种细胞因子(如肿瘤坏死因子(TNF)-α)的产生。蛋白酪氨酸激酶的例子包括：SYK、PYK2、FAK、ALK、AXL、CSF1R、FLT3、JAK2(JH1结构域-催化)、JAK3(JH1结构域-催化)、KIT、KIT(D816V)、KIT(V559D，T670I)、PDGFRB、RET、TYK2和ZAP70。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶的例子包括：PIM1、AURKA、AURKB、BMPR2、JNK1、JNK2、JNK3、LKB1、LRRK2、LRRK2(G2019S)、MLK1、PAK4、PLK4、RSK2(Kin.Dom.1-N-末端)、SNARK、SRPK3和TAK1。
这些蛋白激酶的错误调节牵涉到许多疾病和障碍性疾病，例如中枢神经系统疾病(例如，阿尔茨海默氏病)、炎性疾病和自身免疫性疾病(例如，哮喘、类风湿性关节炎、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、炎症性肠病综合症、和银屑病)、骨病(例如，骨质疏松症)、代谢紊乱(例如，糖尿病)、血管增生障碍性疾病、眼病、心血管疾病、癌症、再狭窄症、疼痛感、移植排斥、和感染性疾病。尽管业内已经了解蛋白激酶的生物和临床上的重要性，但仍需要抑制蛋白激酶的化合物，以为与蛋白激酶有关或由其介导的疾病提供有效且安全的临床治疗。而且，业内还需要向有此需要的患者或受试者施用该化合物、药物制剂和药剂的方法。
发明内容
本发明提供了具有式(I)的化合物、及其药学上可接受的盐、N-氧化物衍生物、前药衍生物、经保护的衍生物、单一的同分异构体、和同分异构体的混合物。
下面对R1、X、Y和Z进行详细描述。
式(I)化合物可用于抑制一种或多种蛋白激酶，以及用于治疗由蛋白激酶介导的疾病和障碍性疾病，例如癌症、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病、和神经退行性疾病。
在一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物和药学上可接受载剂的药物组合物。在某些实施例中，将这种药物组合物调配，以进行静脉内给药、皮下给药、吸入、经口给药、直肠给药、胃肠外给药、玻璃体内给药、肌肉内给药、鼻内给药、皮肤给药、局部给药、耳内给药、眼内给药、颊内给药、气管给药、支气管给药、或经舌下给药。在其它实施例中，将这种药物组合物调配成：片剂、丸剂、胶囊、液剂、吸入剂、鼻喷雾剂、栓剂、溶液、凝胶、乳剂、软膏、滴眼剂、或滴耳剂。
在一个方面，本发明提供了在体内或体外抑制SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、或TYK2信号转导的方法，该方法包括给所述受试者施用有效量的权利要求1所述的化合物。
在一个方面，本发明提供了用于治疗细胞增殖性疾病或病况(例如癌症)的方法，该方法包括向需要此治疗的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或药剂；其中所述细胞增殖性疾病或病况包括：例如淋巴瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、结直肠癌、甲状腺癌、卵巢癌、胰腺癌、神经元癌、肺癌、子宫癌、或胃肠癌。在一个方面，本发明提供了使用根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐来抑制癌细胞生长的方法。
在另一方面，本发明提供了一种包含治疗有效量的式(I)化合物的药剂，用于治疗患者的由SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、或TYK2所介导的疾病、障碍性疾病或病况。
在另一方面，本发明提供了式(I)化合物在药剂制造中的用途，所述药剂用于治疗由SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、或TYK2所介导的疾病、障碍性疾病或病况。
在另一方面，本发明提供了用于抑制蛋白激酶的方法，该方法包括向有需要治疗的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物。所述蛋白激酶包括但不限于：SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、或TYK2激酶。
在另一方面，本发明提供了用于抑制蛋白激酶的方法，该方法包括使细胞与式(I)化合物接触。在某些实施例中，式(I)化合物有效地抑制选自以下一种或多种激酶的活性：SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、和TYK2。
在另一方面，本发明提供了用于治疗由蛋白激酶所介导疾病或病况的方法，该方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或药剂。所述蛋白激酶包括但不限于：SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、和TYK2。
在某些实施例中，由蛋白激酶介导的疾病或病况是炎症性疾病或病况、呼吸道疾病、或自身免疫性疾病或病况，例如：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、支气管炎、皮肤炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化症、癌症、乳腺癌、艾滋病毒(HIV)相关疾病、或狼疮。
在另一方面，本发明提供了治疗神经系统/神经退行性疾病或病况的方法，该方法通过向受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或药学上可接受的盐来实现。在某些实施例中，所述神经系统/神经退行性疾病或病况包括：例如阿尔茨海默氏病、脑水肿、脑缺血、多发性硬化症、神经病变、帕金森氏症、钝挫伤或手术创伤(包括术后认知功能障碍、脊髓或脑干损伤)、以及障碍性疾病的神经方面(如退变性椎间盘疾病和坐骨神经痛)。
在另一方面，本发明提供了治疗心血管疾病的方法，该方法通过向受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或药学上可接受的盐来实现。所述心血管疾病影响心脏或血管，包括：例如动脉粥样硬化、心律失常、心绞痛、心肌缺血、心肌梗塞、心脏动脉瘤或血管动脉瘤、血管炎、中风、肢体或器官或组织的周围动脉阻塞、器官或组织缺血后的再灌注损伤、内毒素休克或外科休克或创伤性休克、高血压、心脏瓣膜病、心力衰竭、血压异常、血管收缩、血管异常、或炎症。
在另一个方面，本发明提供了治疗由激酶所介导疾病或病况的方法，该方法通过向受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或药学上可接受盐以及第二治疗试剂来实现。
在使用本发明化合物的上述方法中，向包括细胞或组织在内的系统施用式(I)化合物或药学上可接受的盐。在某些实施例中，向人或动物受试者施用式(I)化合物、其药学上可接受的盐、药物组合物或药剂。
具体实施方式
本发明提供了一组吡啶并[4，3，-d]嘧啶-5-酮衍生物及其药学上可接受的盐，用于抑制一种或多种蛋白激酶、且用于治疗由所述蛋白激酶介导的疾病或障碍性疾病，例如，细胞增殖性疾病、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病、和神经退行性疾病。本发明还提供了吡啶并[4，3，-d]嘧啶-5-酮衍生物的合成和给药方法。本发明提供了包含至少一种所述化合物以及用于此目的的药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的药物制剂。本发明还提供了在吡啶并[4，3，-d]嘧啶-5-酮衍生化合物的合成过程中产生的有用的中间体。
本文中公开的是用于抑制蛋白激酶的一类新型具有式(I)的化合物、及其药学上可接受的盐、N-氧化物衍生物、前药衍生物、经保护衍生物、单一的同分异构体和同分异构体的混合物。
当R1是H、并且X是NR2R3或NR4R5时，则
Y是NHR6，且
Z选自H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代；其中：
R2和R3与它们所键结的氮原子一起形成：
i)除R2和R3所键结的氮原子外不含杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中所述3-8元饱和或部分饱和的单环基独立地在一个或多个碳原子处经1-2个R7取代、并且任选地在一个或多个碳原子处经0-4个R8取代；其中R7是羟基、杂环烷基或者NR9R9，并且R8是羟基(C1-C6)烷基、芳基、COOR9、(CH2)nNR9R9、或(CH2)nNR9R10，其中各n独立地为1、2或3，并且芳基任选地经卤素取代；或者
ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；
各R9独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6炔基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C3-C6环烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、或杂芳基；其中烷基、炔基、烷基氰基、烷基砜、磺酰胺、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、或杂芳基任选地经R25取代；
R10是C(O)R9、COOR9、C(O)NR9R9、或S(O)nR9，其中n为1或2；
R4选自H、C1-C6烷基、或羟基(C1-C6)烷基；
R5是芳基(C1-C3)烷基，其中芳基独立地在一个或多个碳原子处经1-3个R11取代，其中R11独立地选自OR9、NR9R9、NR9COR9、或NR9S(O)nR9，其中n为1或2；
R6选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、或杂芳基；其中R6的杂环烷基、芳基、或杂芳基任选地经芳基取代，其中芳基选自以下基团所组成的组：
i)5-6元单环芳基；
ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；
iii)含0-5个杂原子的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；以及
iv)含羰基、甲酰胺、或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基；或者
R6的杂环烷基、芳基、杂芳基也可以任选地在一个或多个碳原子处经R12取代，其中各R12独立地选自C1-C6烷基、CF3、OCF3、S(O)n(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、杂芳基、卤素、卤代烷基、SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、NO2、CN、C(O)R13、C(O)C(O)R13、C(O)NR13R13、CONR15R16、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2，并且烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代，其中R12的芳基和杂芳基独立地选自：
i)5-6元单环芳基；
ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜或砜；
iii)含0-5个杂原子的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；或者
iv)含羰基、甲酰胺、或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基；
各R13独立地选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、烷基氰基、烷基砜、烷基磺酰胺、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代；
R14是C(O)R13、COOR13、C(O)NR13R13、SO2NR13R13、或S(O)nR13，其中n为1或2；
R15和R16与它们所键结的氮原子一起形成：
i)3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R25取代；
ii)8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R25取代；
iii)含1-3个杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中杂原子选自氮、氧、硫、砜、或亚砜，其中含1-2个杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R13或R14取代；或者
iv)含1-3个杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中杂原子选自氮、氧、硫、砜或亚砜，其中含1-3个杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R13或R14取代；并且
各R25独立地选自羟基、羟基(C1-C6)烷基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基(C1-C6)烷基、芳基、卤素、卤代烷基、氧代基、肟、CF3、SR13、OCF3、OR13、OC(O)CH2R13、NR13R13、NR13R14、NHC(O)R13、(CH2)nNR13R13、COOR13、CN、C(O)R13、C(O)CF3、CONR15R16、CONH2、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2，并且杂环烷基任选地经C1-C3烷基取代。
当R1是H，并且Y是NHR17或R17时，则，
X是OR18、NR15R16、NHR18、NR18R19、或NR19R20，并且，
Z是H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、炔基、环烷基、芳基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代，其中：
R17选自芳基(C1-C6)烷基、芳基、或杂芳基，其中芳基、或杂芳基在一个或多个碳原子处经至少1个R21和0-2个R22取代，并且所述芳基(C1-C6)烷基的芳基任选地经卤素取代；
R21独立地选自氨基、羟基、CF3、OCF3、O-芳基、S(O)nR13、或NR15R16(R15R16如上所述)；
R22独立地为H、C1-C6烷基、CF3、OCF3、S(O)n(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、杂芳基、卤素、SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、NO2、CN、C(O)R13、C(O)C(O)R13、C(O)NR13R13、CONR15R16、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、NR13C(O)NR13R13、NR13C(O)R13、NR13(COOR13)、NR13S(O)nR13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2，其中烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代；
R18选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、羟基(C2-C6)烷基、氨基(C2-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代；
各R19独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、羟基(C2-C6)烷基、氨基(C2-C6)烷基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基；其中烷基、烯基、炔基、烷基氰基、烷基砜、磺酰胺、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代；
R20是C(O)R19COOR19、C(O)NR19R19或S(O)nR19，其中n为1或2；
各R25独立地选自羟基、羟基(C1-C6)烷基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基(C1-C6)烷基、芳基、卤素、卤代烷基、氧代基、肟、CF3、SR13、OCF3、OR13、OC(O)CH2R13、NR13R13、NR13R14、NHC(O)R13、(CH2)nNR13R13、COOR13、CN、C(O)R13、C(O)CF3、CONR15R16、CONH2、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2，并且杂环烷基任选地经C1-C3烷基取代。
当R1是CH3时，则
X是NH2或NHR6，如上所述，
Y是NHR6或R6，如上所述，且
Z是H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。
在某一方面，R1是H，X是NR2R3，Y是NHR6。Z可以是H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。NHR6如下所述。
NR2R3是除R2和R3所键结的氮原子外不含杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中所述3-8元饱和或部分饱和的单环基独立地在一个或多个碳原子处经1-2个R7取代、并且任选地在一个或多个碳原子处经0-4个R8取代。R7是羟基、杂环烷基、或NR9R9，并且R8是羟基(C1-C6)烷基、芳基、COOR9、(CH2)nNR9R9、或(CH2)nNR9R10，其中各n独立地为1、2、或3。芳基任选地经卤素取代。所述3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经羟基或氨基取代。在一个实施例中，所述3-8元饱和或部分饱和的单环基是氮杂环丁烷、哌啶或吡咯烷；其中氮杂环丁烷、哌啶或吡咯烷独立地经1-3个羟基或氨基取代、并且任选且独立地在一个或多个碳原子处经羟基甲基取代。在另一个实施例中，NR2R3是含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜。
在某些方面，R1是H，X是NR4R5，Y是NHR6。Z可以是H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。NHR6如下所述。
R4选自H、C1-C6烷基、或羟基(C1-C6)烷基，R5是芳基(C1-C3)烷基。R5的芳基(C1-C3)烷基的芳基独立地在一个或多个碳原子处经1-3个R11取代。R11独立地选自OR9、NR9R9、NR9COR9、或NR9S(O)nR9，其中n为1或2。R9独立地选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C3-C6烷基砜、C3-C6环烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、烷基氰基、烷基砜、磺酰胺、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代。
在某些方面，Y是NHR6。R6选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、或杂芳基；其中烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代。
在一个实施例中，R6的芳基为任选地经取代的芳基，所述经取代的芳基选自由以下基团所组成的组：i)5-6元单环芳基；ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；iii)含0-5个杂原子8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮，氧、硫、亚砜或砜；以及，iv)含羰基、甲酰胺、或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基。R6的芳基任选地在一个或多个碳原子处经R12取代。R6的芳基是苯基，其中苯基任选地在一个或多个碳原子处经R12取代。
在一个实施例中，R12独立地选自C1-C6烷基、OCF3、CF3、S(O)n(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、杂芳基、卤素、卤代烷基、SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、NO2，CN、C(O)R13、C(O)C(O)R13、C(O)NR13R13、CONR15R16、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2；其中烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代。在一个实施例中，R12独立地选自C1-C6烷基、CF3、OCF3、S(O)n(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、杂芳基、卤素、SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、NO2、CN、C(O)R13、C(O)NR13R13、CONR15R16、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2。在一个实施例中，R12独立地选自CF3、OCF3、COOCH3、甲氧基、甲基、氟、氯、溴、碘、S(O)2CH3、吗啉基、哌嗪基、或乙酰哌嗪基。在一个实施例中，R12的芳基独立地选自：i)5-6元单环芳基；ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；iii)含0-5个杂原子的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；或者，iv)含甲酰胺或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基。
在一个实施例中，R12可以是SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、CN、C(O)R13、C(O)NR13R13、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各R13独立地选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、烷氧基、芳基(C1-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基，并且R14是C(O)R13、COOR13、C(O)NR13R13、SO2NR13R13、或S(O)nR13，其中n为1或2，并且烷基、烯基、炔基、烷基氰基、烷基砜、烷基磺酰胺、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、烷氧基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代。
在一个实施例中，R12是NR15R16，其中R15和R16与它们所键结的氮原子一起形成：i)3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R25取代；ii)8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R25取代；iii)含1-3个选自氮、氧、硫、砜或亚砜的杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中含1-2个杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R13或R14取代；或者，iv)含1-3个选自氮、氧、硫、砜或亚砜的杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中含1-3个杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R13或R14取代。
在一个实施例中，R6是任选经取代的5-6元单环芳基或9-10元二环芳基。在一个实施例中，所述任选经取代的5-6元单环芳基是苯基。在另一个实施例中，9-10元二环芳基是萘基、喹啉基、吲唑基、吲哚基、或二氢苯并二噁英基。在一个实施例中，R6的苯基任选地经1-4个下列基团取代：甲基(-CH3)、甲氧基(-OCH3)、甲基砜(-S(O)2CH3)、氨基(NH2)、羟基(-OH)、CF3、OCF3、卤素(F、Br、I、或Cl)、苯基、苯氧基、哌嗪基、乙酰哌嗪基、或吗啉基。
在一个实施例中，R1是H；Y是NHR17或R17；X是NHR18。Z选自H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基；其中烷基、环烷基、芳基、炔基或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。
在一个实施例中，R17是芳基(C1-C6)烷基、芳基或杂芳基，其中R17的芳基或杂芳基在2个或2个以上的碳原子处经至少1个R21和0-2个R22取代。
在一个实施例中，R21是氨基、羟基、CF3、OCF3、O-芳基、S(O)nR13、或NR15R16。
在一个实施例中，R22可以独立地选自H、C1-C6烷基、CF3、OCF3、S(O)n(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、C2-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基C1-C6烷基、杂芳基、卤素、卤代烷基、SR13、OR13、OC(O)R13、NR13R13、NR13R14、COOR13、NO2、CN、C(O)R13、C(O)C(O)R13、C(O)NR13R13、S(O)nR13、S(O)nNR13R13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2；并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、杂芳基烷基、或杂芳基任选地经R25取代；并且所述芳基(C1-C6)烷基的芳基任选地经卤素取代。
在一个实施例中，R21的O-芳基的芳基独立地选自：i)5-6元单环芳基；ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；iii)含0-5个杂原子的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；或者，iv)含甲酰胺或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基。
在一个实施例中，R17的芳基或杂芳基是在一个或多个碳原子处经至少一个选自CF3、OCF3、O-芳基、或NR15R16的基团取代的5-6元单环芳基。在一个实施例中，所述单环芳基是苯基，该苯基在一个或多个碳原子处经至少一个选自CF3、OCF3、O-芳基、或NR15R16的基团取代，其中NR15R16是任选经取代的吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基、或吡咯烷基。所述哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、或吡咯烷基任选地在一个或多个碳原子处经1、2或3个R25取代、或者在1个氮原子处经R13或R14取代。
R18选自C1-C6烷基、C3-C6烯基、C3-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C8杂环烷基、C4-C6环烯基、芳基、芳基(C1-C6)烷基、卤代烷基、或杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、卤代烷基、或杂芳基任选地经R25取代。
在一个实施例中，R18是C1-C6烷基，其中C1-C6烷基任选地经一个或多个芳基、烷基、卤素、R23或R24取代。各R23独立地为CF3、OCF3、SR13、OR13、NR13R13、S(O)nNR13R13、S(O)nR13、或NR15R16，各n独立地为1或2。各R24选自含1-3个杂原子的5-8元单环基、含1-5个杂原子的8-12元二环基、或者含1-8个杂原子的11-14元三环基。R24的杂原子独立地为氧、氮、或硫，并且R24任选地经R13或R14取代。R24的0、1、2、3或4个原子任选且独立地经R13取代。在一个实施例中，与R18的C1-C6烷基相连的芳基任选且独立地在一个或多个碳原子处经1-3个R11取代，其中R11独立地选自OR9、NR9R9、NR9COR9、或NR9S(O)nR9，其中n为1或2。在一个实施例中，R18的C1-C6烷基是C2-C4烷基，其中C2-C4烷基任选地经1-3个选自氨基、羟基、苯基、苄基、或吗啉基的基团取代。
在另一个实施例中，R18是C3-C6烯基，其中C3-C6烯基任选地经一个或多个芳基、烷基、卤素、R23、或R24取代。各R23独立地选自CF3、OCF3、SR13、OR13、NR13R13、S(O)nNR13R13、S(O)nR13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2。各R24独立地选自：含1-3个杂原子的5-8元单环基；含1-5个杂原子的8-12元二环基；或者，含1-8个杂原子的11-14元三环基，并且R24的杂原子独立地选自氧、氮或硫。R24任选地经R13或R14取代。在一些实施例中，R24的0、1、2、3、或4个原子任选且独立地经R13取代。
在又一个实施例中，R18是C3-C6环烷基，其中C3-C6环烷基任选地经一个或多个芳基、烷基、卤素、R23或R24取代。各R23独立地选自CF3、OCF3、SR13、OR13、NR13R13，(CH2)nNR13R13、S(O)nNR13R13、S(O)nR13、或NR15R16，其中各n独立地为1或2。各R24独立地选自含1-3个杂原子的5-8元单环基、含1-5个杂原子的8-12元二环基、或者含1-8个杂原子的11-14元三环基，并且R24的杂原子独立地选自氧、氮或硫。R24任选地经R13或R14取代。在一个实施例中，R24的0、1、2、3或4个原子任选且独立地经R13取代。
在又一个实施例中，R18是C3-C8杂环烷基。在一个实施例中，所述C3-C8杂环烷基是含杂原子的5-7元单环。其中杂原子独立地选自氧、氮、硫、或砜，并且氮原子任选地经R19取代。R19独立地选自羟基(C2-C6)烷基、氨基(C2-C6)烷基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、或C4-C8杂环烷基。在一个实施例中，所述5-7元单环任选地是取代的吗啉、四氢呋喃、硫代吗啉、哌嗪、或高哌嗪。
在某些方面，R1是H，Y是NHR17或R17，X是OR18。Z是H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基；其中烷基、环烷基、芳基、炔基、或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。R17和R18如上所述。
在某些方面，R1是H；Y是NHR17或R17；X是NR18R19。Z选自H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。R17和R18如上所述。R19独立地选自羟基(C2-C6)烷基、氨基(C2-C6)烷基、C2-C6烷基氰基，C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、或C4-C8杂环烷基。
在某些方面，R1是H；Y是NHR17或R17；X是NR19R20。Z选自H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基；其中烷基、环烷基、芳基、炔基或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。R17如上所述。R19独立地选自羟基(C2-C6)烷基、氨基(C2-C6)烷基、C2-C6烷基氰基、C2-C6烷基砜、C2-C6磺酰胺、C3-C6环烷基、或C4-C8杂环烷基。R20选自C(O)R19、COOR19、C(O)NR19R19、或S(O)nR19，其中n为1或2。
在一个实施例中，R1是H；Y是NHR17或R17；X是NR15R16。Z选自H、卤素、C1-C3烷基、C2-C4炔基、芳基、杂芳基、或C3-C8环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、炔基或杂芳基任选地经卤素、烷基、或氰基取代。R17如上所述。NR15R16的R15和R16与它们所键结的氮原子一起形成：i)3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R25取代；ii)8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R25取代；iii)含1-3个杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基，其中杂原子选自氮、氧、硫、砜或亚砜，其中含1-2个杂原子的3-8元饱和或部分饱和的单环基任选地经R13或R14取代；或者，iv)含1-3个杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基，其中杂原子选自氮、氧、硫、砜或亚砜，其中含1-3个杂原子的8-12元饱和或部分饱和的二环基任选地经R13或R14取代。
在一个实施例中，NR15R16是4-6元饱和单环基，其中4-6元饱和单环基任选且独立地在一个或多个碳原子处经1-4个R25取代。在一个实施例中，所述4-6元饱和单环基选自哌啶或吡咯烷，其中哌啶或吡咯烷任选地经1-4个选自羟基、氨基、C1-C6烷基、羟基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C6)烷基、或苯基的基团取代。
在另一个实施例中，NR15R16是含1-2个杂原子的5-8元饱和杂环基，其中杂原子选自氮、氧、硫、砜、或亚砜；其中所述5-8元饱和杂环基任选地在一个或多个碳原子或氮原子处经羟基、氨基、C1-C6烷基、或苯基取代。所述5-8元饱和杂环基选自吗啉、硫代吗啉、哌嗪或高哌嗪，其中吗啉、硫代吗啉、哌嗪或高哌嗪任选地经1-4个选自羟基、氨基、C1-C6烷基、和苯基的基团取代，其中各C1-C6烷基任选地经一个或多个氨基或羟基取代。其中1-2个杂原子是氮，并且氮原子独立地经C1-C6烷基、C(O)C1-C3烷基、或S(O)2C1-C3烷基取代，其中烷基任选且独立地经氨基或羟基取代。
在一个实施例中，R25的芳基选自：i)5-6元单环芳基；ii)含0-5个杂原子的8-10元二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；iii)含0-5个杂原子的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基，其中杂原子独立地选自氮、氧、硫、亚砜、或砜；或者，iv)含羰基、甲酰胺、或磺胺的8-10元不饱和或部分不饱和的二环芳基。
在一个实施例中，R1是甲基，X选自NH2或NHR6，Y选自R6或NHR6。
在一个实施例中，Z是H、卤素、C1-C3烷基、炔基或苯基。
本发明的实例包括：
4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3，-d]嘧啶-6(6H)-酮；
4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-吗啉基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
1-(4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-4-羟基哌啶-4-羧酸甲酯；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(S)-2-(吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-三氟甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，4R)-4-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(2-吗啉基乙氧基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-(2-((5-氧代-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)甲磺酰胺；
(S)-2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
N-(1-(5-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-基)环丙烷磺酰胺；
2-(哌啶-4-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(S)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-吗啉基-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，4R)-4-羟基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氧代哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(3-(3-(三氟甲基)苯基)-6，7-二氢-[1，2，3]三唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(环丙基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(环戊基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(3-(三氟甲基)-5，6-二氢-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(苄基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(苄基(甲基)氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-2-(1-(4-氟苯基)乙基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氟苄基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(哌啶-4-基甲基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(1，4-二氮杂庚烷-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(噻唑烷-3-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-(2-((5-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)甲磺酰胺；
(S)-2-(1-环己基乙基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(环己氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(1-甲基吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(1-异丙基吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1-甲基哌啶-4-基)甲基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1-异丙基哌啶-4-基)甲基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-((二甲氨基)甲基)哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-甲基噻唑-2-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-2-(1-(甲基磺酰基)吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
1-(5-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸乙酯；
2-(4-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(4-(羟甲基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1S，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1S，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(2-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(2-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，4R)-4-氨基环己氨基)-4-(2-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(2-吗啉基乙基氨基)-4-(3(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(3-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(吗啉基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-乙酰哌嗪-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(2-羟基-1-苯基乙基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-2-(2-羟基-1-苯基乙基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(1-羟基-3-苯基丙烷-2-基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-2-(1-羟基-3-苯基丙烷-2-基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
1-(5-氧代-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺；
(R)-2，2，2-三氟-N-(1-(5-氧代-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)吡咯烷-3-基)乙酰胺；
2-(4-(4-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1S，2S)-2-(苯基磺酰基)环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1S，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-硫代吗啉基-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-磺酰基吡啶并)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-吗啉基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-((1R，2S)-2-(5-氧代-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)环己基)乙酰胺；
N-((1R，4R)-4-(5-氧代-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)环己基)乙酰胺；
2-((1R，2R)-2-(二甲氨基)环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3-溴苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3-溴苯基氨基)-2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-4-(3-溴苯基氨基)-2-(4-(1-羟基丙烷-2-基氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(4-(3-氨基吡咯烷-1-基)哌啶-1-基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3-溴苯基氨基)-2-(3-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(4-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(S)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(4-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(4-溴苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(4-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(S)-4-(3-溴苯基氨基)-2-(4-(1-羟基丙烷-2-基氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-溴苯基氨基)-2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(间-甲苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(间-甲苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(2-((1R，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮与(2-((1S，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-吗啉基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-((1r，4r)-4-羟基环己氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(2-氨基苯基氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(S)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(吡咯烷-3-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(哌啶-4-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(1-甲基吡咯烷-3-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基-2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(2-羟基乙基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-((1r，4r)-4-(4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)环己基)乙酰胺；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(3-氧代哌嗪-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(哌嗪-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
1-(4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-4-羟基哌啶-4-羧酸甲酯；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，4R)-4-氨基环己氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(羟基亚氨基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-4-(苯氧基苯基氨基)-2-(吡咯烷-3-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-(2-((4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)甲烷磺酰胺；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-2-(4-吗啉基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(甲基磺酰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
N-(2-((4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)环丙烷磺酰胺；
N-甲基-N-(2-((4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)环丙烷磺酰胺；
(S)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基氨基)-2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(S)-4-(4-吗啉基苯基氨基)-2-(吡咯烷-3-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-磺酰基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基氨基)-2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-(5-氧代-2-(哌啶-4-基甲基氨基)-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉4-氧化物盐酸盐；
4-(4-吗啉基苯基氨基)-2-(哌啶-4-基甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
N-甲基-N-(2-((4-(4-吗啉基苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)环丙烷磺酰胺；
N-(2-((4-(4-吗啉基苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)环丙烷磺酰胺；
N-(2-((4-(4-吗啉基苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基氨基)甲基)苯基)甲烷磺酰胺；
2-(2-氨基苄基氨基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(苯并[d][1，3]二氧-5-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，5-二甲基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-氯-5-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-溴-5-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-6-甲基-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
6-甲基-4-(苯基氨基)-2-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(6-甲基-2-吗啉基-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基氨基)苯甲酸甲酯；
6-甲基-2-(甲基氨基)-4-(4-(哌嗪-1-羰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(6-甲基-2-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基氨基)苯甲酸甲酯；
2-氨基-6-甲基-4-(苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氟苄基氨基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
6-甲基-2-(甲基氨基)-4-(苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-甲氧基苄基氨基)-6-甲基-4-(苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基环己氨基)-6-甲基-4-(苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基苯基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氨基苯基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
1-(4-氟苯基)-3-(4-(6-甲基-2-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基)苯基)脲；
8-溴-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-溴-3-甲基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
8-溴-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-溴-3-甲基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
8-溴-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，4-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-溴-4-甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3，4-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-溴-4-甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-氨基哌啶基-1-基)-8-溴-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-碘-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-8-碘吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)-8-碘吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-8-碘-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-溴-4-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐；
4-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3-溴-5-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
(R)-6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-碘-8-(4-(三氟甲基)苯基氨基)异喹啉-1(2H)-酮盐酸盐；
(R)-6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-溴-8-(4-(三氟甲基)苯基氨基)异喹啉-1(2H)-酮盐酸盐；
(S)-6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-溴-8-(4-(三氟甲基)苯基氨基)异喹啉-1(2H)-酮盐酸盐；
4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英-6-基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(萘-2-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(喹啉-5-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3H-吲哚-2-基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮；以及
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)-8-苯基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮。
单独使用或者作为较大基团(如“芳基烷基”或“环烷基”)的一部分时，术语“烷基”指含1至15个碳原子(除非另有说明)的直链或支链的烃基，包括：例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基等。烷基可以是未取代的或者经一个或多个合适的取代基取代。
术语“环烷基”是指单环或多环的烃环基，包括：例如环丙基、环庚基、环辛基、环癸基、环丁基、金刚烷基、降蒎烷基、十氢萘基、冰片基、环己基、环戊基等。环烷基可以是未取代的、或者被一个或多个合适的取代基取代。
术语“杂”是指用至少1个杂原子(如N、S和O)取代环系统中的至少一个碳原子。
术语“杂环烷基”表示包含碳原子和氢原子及至少1个杂原子的非芳香的单环或多环，其中杂原子优选为1-4个选自N、O、S、砜、或亚砜的杂原子。杂环烷基在环基中可以具有一个或多个碳-碳双键或碳-杂原子双键，条件是这些双键的存在不会使该环基具有芳香性。杂环烷基的例子包括：氮杂环丁烷、氮杂环丙烷基、吡咯烷基(pyrrolidinyl)、吡咯烷基(pyrrolidino)、哌啶基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、哌嗪基、吗啉基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基、四氢呋喃基、四氢硫代呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基等。杂环烷基可以是未取代的、或者经一个或多个合适的取代基取代。
本文中使用的术语“卤”包括氟、氯、溴、和碘。
本文中使用的术语“烯基”是指含2-6个碳原子和1个双键的直链和支链的烃基，包括：乙烯基、3-丁烯-1-基、2-乙烯基丁基、3-己烯-1-基等。烯基可以是未取代的、或者经一个或多个合适的取代基取代。
本文中使用的术语“炔基”是指含2-6个碳原子和一个三键的直链和支链的烃基，包括：乙炔基、3-丁炔-1-基、丙炔基、2-丁炔-1-基、3-戊炔-1-基等。炔基可以是未取代的、或者经一个或多个合适的取代基取代。
本文中使用的术语“烷氧基”是指上述经过氧而键结的烷基，例子包括：甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。此外，烷氧基还指聚醚类，例如-O-(CH2)2-O-CH3等。烷氧基可以是未取代的、或者经一个或多个合适的取代基取代。
本文中使用的术语“芳基”是指未取代的或者经取代的芳香性单环基或多环基，包括例如苯基和萘基。术语“芳基”还包括与非芳香的碳环或杂环基稠和的苯环。术语“芳基”可与“芳环”、“芳基”和“芳香族芳环”互换地使用。杂芳基含4-14个原子，其中的1-9个原子独立地选自由O、S和N所组成的组。杂芳基在5-8元芳基中含1-3个杂原子。芳基或杂芳基可以是单环芳基或二环芳基。典型的芳基和杂芳基包括：例如苯基、喹啉基、吲唑基、吲哚基、二氢苯并二噁英基、3-氯苯基、2，6-二溴苯基、吡啶基、3-甲基吡啶基、苯并噻吩基、2，4，6-三溴苯基、4-乙基苯并噻吩基、呋喃基、3，4-二乙基呋喃基、萘基、4，7-二氯萘基、吡咯、吡唑、咪唑、噻唑等。芳基或杂芳基可以是未取代的、或者经一个或多个合适的取代基取代。
本文中使用的术语“单环芳基”指未取代或经取代的芳基，包括例如苯基。
本文中使用的术语“卤代烷基”指一个或多个氢原子被卤素原子取代的任何烷基。卤代烷基的例子包括：-CF3、-CFH2、-CF2H等。
本文中使用的术语“芳基烷基”指一个或多个氢原子被芳基取代的任何烷基。芳基烷基的例子包括苄基(C6H5CH2-)等。
本文中使用的术语“羟基烷基”指任何烷基的羟基衍生物。术语“羟基烷基”包括一个或多个氢原子被-OH基取代的任何烷基。
本文中使用的术语“激酶面板(kinase panel)”是指一系列激酶，包括但不限于：磷酸化的ABL1(E255K)、磷酸化的ABL1(T315I)、磷酸化的ABL1、ACVR1B、ADCK3、AKT1、AKT2、ALK、AURKA、AURKB、AXL、BMPR2、BRAF、BRAF(V600E)、BTK、CDK11、CDK2、CDK3、CDK7、CDK9、CHEK1、CSF1R、CSNK1D、CSNK1G2、DCAMKL1、DYRK1B、EGFR、EGFR(L858R)、EPHA2、ERBB2、ERBB4、ERK1、FAK、FGFR2、FGFR3、FLT1、FLT3、FLT4、GSK3B、IGF1R、IKK-α、IKK-β、INSR、JAK2(JH1结构域-催化)、JAK3(JH1结构域-催化)、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、KIT(V559D、T670I)、LKB1、LRRK2、LRRK2(G2019S)、MAP3K4、MAPKAPK2、MARK3、MEK1、MEK2、MET、MKNK1、MKNK2、MLK1、MTOR、p38-α、p38-β、PAK1、PAK2、PAK4、PCTK1、PDGFRA、PDGFRB、PDPK1、PIK3C2B、PIK3CA、PIK3CG、PIM1、PIM2、PIM3、PKAC-α、PLK1、PLK3、PLK4、PRKCE、PYK2、RAF1、RET、RIOK2、ROCK2、RSK2、SNARK、SRC、SRPK3、SYK、TAK1、TGFBR1、TIE2、TRKA、TSSK1B、TYK2(JH1结构域-催化)、ULK2、VEGFR2、YANK3和ZAP70。可在市场上购得包含本文所述激酶的激酶检验面板，用于对激酶抑制剂的选择性抑制进行生物化学谱型分析。
本文中使用的术语“皮肤科障碍性疾病”是指皮肤障碍性疾病。这种皮肤科障碍性疾病包括但不限于皮肤的增殖或炎症性障碍性疾病，例如：特应性皮炎、大疱性障碍性疾病、胶原性疾病、接触性皮炎和湿疹、川崎病(Kawasaki Disease)、酒渣鼻、薛格连氏综合症(Sjogren-Larsso Syndrome)、和荨麻疹。
本文中使用的术语“神经生长疾病”或者“神经系统障碍性疾病”指改变脑、脊髓或周围神经系统的结构或功能的病况，包括但不限于：阿尔茨海默氏病、脑水肿、脑缺血、多发性硬化症、神经病变、帕金森氏症、钝挫伤或手术创伤后发现的疾病(包括手术后认知功能障碍以及脊髓或脑干损伤)、以及障碍性疾病的神经方面(如退行性椎间盘疾病和坐骨神经痛)。首字母缩略词“CNS”是指中枢神经系统(脑和脊髓)。
本文中使用的术语“呼吸道疾病”是指影响参与呼吸的器官(例如鼻、咽喉、喉、气管、支气管、和肺)的疾病。呼吸道疾病包括但不限于：哮喘、成人呼吸窘迫综合症、变应性(外源性)哮喘、非变应性(内源性)哮喘、急性重症哮喘、慢性哮喘、临床哮喘、夜间哮喘、变应原引起的哮喘、阿司匹林敏感性哮喘、运动诱发性哮喘、等二氧化碳过度通气、儿童时期开始的哮喘、成人时期发病的哮喘、咳嗽变异性哮喘、职业性哮喘、糖皮质激素激素抵抗性哮喘、季节性哮喘、季节变应性鼻炎、常年变应性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病(包括慢性支气管炎或肺气肿)、肺高血压、间质性肺纤维化和/或气道炎症和囊性纤维化、以及缺氧。
本文中使用的术语“癌症”是指细胞的异常生长，且细胞往往以不受控制的方式增殖、并且在一些情况下发生转移。癌症的类型包括但不限于：实体肿瘤(例如膀胱、肠、脑、乳腺、子宫内膜、心脏、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺的肿瘤)、或者其它内分泌器官(甲状腺)、前列腺、皮肤(黑色素瘤)的肿瘤、或血液肿瘤(诸如白血病)。
本文中使用的术语“纤维化”或者“纤维障碍性疾病”是指发生在急性和慢性炎症之后病况，且与细胞和/或胶原的异常聚集有关，包括但不限于单一器官或组织(如心脏、肾脏、关节、肺、或皮肤)的纤维化，并且包括以下障碍性疾病，例如：特发性肺纤维化、和致纤维化性肺泡炎。
本文中使用的术语“炎症障碍性疾病”指特征为具有一种或多种以下体征的疾病或病况：疼痛(痛，由于有害物质的产生和对神经的刺激引起)、热(发热，由于血管舒张引起)、发红(红，由于血管舒张和血流量增加引起)、肿胀(肿瘤，由于液体的过多流入或受限制流出引起)、和功能丧失，这些体征可以是部分的或完全的、暂时的或持续的。炎症有多种形式，包括但不限于下列炎症中的一种或多种：急性炎症、粘连性炎症、萎缩性炎症、卡他性炎症、慢性炎症、硬化性炎症、弥漫性炎症、扩散性炎症、渗出性炎症、纤维素性炎症、纤维性炎症、病灶性炎症、肉芽肿性炎症、增生性炎症、肥大性炎症、间质性炎症、转移性炎症、坏死性炎症、闭塞性炎症、实质性炎症、增生性(plastic)炎症、增生性炎症(productiveinflammation)、增殖性炎症、假膜性炎症、化脓性炎症、硬化性炎症、浆液组织形成性炎症、浆液性炎症、单纯性炎症、特异性炎症、亚急性炎症、化脓性炎症、中毒性炎症、外伤性炎症、和/或溃疡性炎症。炎症障碍性疾病进一步包括而不限于影响血管(多动脉炎、颞动脉炎)、关节(关节炎：结晶性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、类风湿性关节炎、莱特氏(Reiter’s)关节炎)、胃肠道、皮肤(皮肤炎)、或者多种器官和组织(系统性红斑狼疮)的炎症。
本文中使用的术语“心血管疾病”指影响心脏或血管或者两者都受影响的疾病，包括但不限于：动脉粥样硬化、心律失常、心绞痛、心肌缺血、心肌梗塞、心脏动脉瘤或血管动脉瘤、血管炎、中风、肢体或器官或组织的周围动脉阻塞、器官或组织缺血后的再灌注损伤、内毒素或手术性或创伤性休克、高血压、心脏瓣膜病、心力衰竭、血压异常、血管收缩、血管异常、或者炎症。
本文中使用的术语“骨病”表示骨的疾病或病况，包括但不限于不适当的骨重建、骨丢失或骨量增加、骨质减少、骨软化症、骨纤维变性、骨质疏松症、和帕哲氏(Paget’s)病。
本文中使用的术语“抑制剂”指抑制一种或多种本文中所述激酶的化合物。例如，术语“SYK抑制剂”是指抑制SYK受体或者降低信号转导效果的化合物。
本文中使用的术语“药学上可接受的材料”是指一种不减弱本文中所述化合物的生物活性或性质的材料，例如载剂或稀释剂。在将这种材料用于个体时，不会引起不良生物学效应、或者以有害的方式与含该材料组合物中的任何成分发生相互作用。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”是指一种化合物的制剂，不对所给药生物体产生显著刺激、并且不减弱本文中所述化合物的生物活性或性质。
本文中使用的术语“药物组合”表示通过将多于一种的活性成分加以混合或者合并所形成的产物。
本文中使用的术语“药物组合物”是指本文中所述化合物与其它化学组分(例如载剂、稳定剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、增稠剂、和/或赋形剂)的混合物。
本文中使用的术语“前药”是指在体内被转化成母体药物的药物。
本文中使用的术语“由蛋白激酶介导的疾病”或者“由不适当的蛋白激酶活性所介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由本文中所述蛋白激酶所介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、支气管炎、皮肤炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、大疱性皮肤病、胶原性皮肤病、接触性皮炎和湿疹、川崎病、酒渣鼻、Sjogren-Larsso氏综合症、类风湿性关节炎、多发性硬化症、炎症性肠病综合症、HIV、狼疮，淋巴瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、卵巢癌、胰腺癌、神经元癌、肺癌、子宫癌、胃肠癌、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、骨质疏松症、骨质减少、骨软化症、骨纤维变性、帕哲氏病、糖尿病、血管增生性疾病、眼病、心血管疾病、再狭窄、纤维化、动脉粥样硬化、心律失常、心绞痛、心肌缺血、心肌梗塞、心脏动脉瘤或血管动脉瘤、血管炎、中风、周围动脉阻塞、器官或组织的缺血后的再灌注损伤、内毒素休克、外科休克或创伤性休克、高血压、心脏瓣膜病、心力衰竭、血压异常、血管收缩、血管异常、移植排斥、以及感染性疾病(包括病毒感染和真菌感染)。
本文中使用的术语“由激酶介导的疾病”或者“由激酶介导的疾病”或者“由不适当的激酶活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由激酶机制介导或调控的任何疾病状态。例如“由SYK介导的疾病”是指由SYK机制介导或调控的任何疾病状态。这种由SYK介导的疾病状态包括但不限于：炎症性疾病、呼吸道疾病和自身免疫性疾病，例如(仅仅是举例)：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ADS)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、支气管炎、皮肤炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化症、癌症、HIV相关疾病、和狼疮。
本文中使用的术语“由PYK2介导的疾病”或者“由不适当PYK2活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由PYK2激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：骨质疏松症、关节炎、髓样白血病、低渗压、肉瘤、原始细胞危象、神经胶质瘤、红白血病、和癌症。
本文中使用的术语“由ZAP70介导的疾病”或者“由不适当的ZAP70活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由ZAP70激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：特征为选择性缺乏CD8阳性T细胞的免疫缺陷病。
本文中使用的术语“由FAK介导的疾病”或者“由不适当的FAK活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由FAK激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：癌症、黄斑变性、或者与血管新生水平异常增加相关的病况。
本文中使用的术语“由PIM1介导的疾病”或者“由不适当PIM1活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由PIM1激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：癌症、骨髓增生性疾病、自身免疫性疾病、变应性反应、和器官移植排斥综合症。
本文中使用的术语“由FLT3介导的疾病”或者“由不适当的FLT3活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由FLT3激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：包括急性髓细胞白血病在内的白血病、或者与FLT3激酶的含量异常增加相关的病况。
本文中使用的术语“由RET介导的疾病”或者“由不适当RET活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由RET激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于甲状腺癌(一种与RET激酶含量异常增加相关的病况)。
本文中使用的术语“由JAK2介导的疾病”或者“由不适当JAK2活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由JAK2激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、其它骨髓增生障碍性疾病、癌症、或者与JAK2激酶含量异常增加相关的病况。
本文中使用的术语“由LRRK2介导的疾病”或者“由不适当LRRK2活性介导的障碍性疾病或疾病或病况”是指由LRRK2激酶机制介导或调控的任何疾病状态。这种疾病状态包括但不限于：帕金森氏症、其它神经退行性疾病、或者与血管新生程度异常增加相关的病况。
本文中使用的术语“治疗有效量”是指具有如下效果的化合物的任意量：与相应的未接受该量药物治疗的受试者相比，可导致疾病、障碍性疾病或副作用在治疗、康复、预防上的改善，或者降低疾病或障碍性疾病的发展速度。该术语在其范围内还包括有效增强正常生理功能的量。
本文中使用的术语“治疗(treat、treating或treatment)”是指如下方法：减轻、减少或改善疾病或病况症状，预防其它症状，改善或预防症状潜在的代谢性原因，抑制疾病或病况，阻止疾病或病况的发展，缓解疾病或病况，导致疾病或病况恢复，缓解由该疾病或病况引起的状态，或者预防性和/或治疗性地中止疾病或病况的症状。
本文中使用的术语“溶剂合物”是指由溶质(在本发明中，是式(I)化合物或其药学上可接受的盐)与溶剂按可变的化学计量配比所形成的复合物。用于本发明的这种溶剂不会干扰溶质的生物活性。合适溶剂的非限制性例包括：水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。优选地，所使用的溶剂是药学上可接受的溶剂。合适的药学上可接受溶剂的非限制性例包括：水、乙醇和乙酸。
本文中使用的术语“受试者”或者“患者”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于：人、黑猩猩、猿猴、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的例子包括但不限于鸟、鱼等。
本文中使用的术语，即标的化合物的“给药(administration或administering)”是指给需要治疗的受试者提供本发明的化合物和/或其前药。
本文中使用的术语“载剂”指促进本文所述的化合物渗入细胞或组织的化学化合物或试剂。
与本文中所使用制剂、组合物或成分有关的本文所使用术语“可接受的”表示对受治疗的受试者的一般健康没有持续的有害作用。
本文中使用的术语“稀释剂”是指用于在给药之前稀释本文所述化合物的化学化合物。稀释剂也可用于稳定本文中所述的化合物。
本文中使用的术语“有效量”或者“治疗有效量”是指所施用的本文所述化合物的足够的量，能够一定程度地缓解一种或多种被治疗的疾病或病况的症状。结果可以是体征、症状或病因的减轻和/或缓解，或者生物系统的任何其它期望的改变。例如，用于治疗用途的“有效量”是指包含本文所公开化合物的组合物使疾病症状的有临床意义减轻所需的量。在任何单独的情况下，可利用一些技术(如剂量递增研究)来确定合适的“有效”量。
1、人蛋白激酶
蛋白激酶在对种类广泛的细胞过程的调节以及维持对细胞功能的控制中起到核心作用。蛋白激酶催化并调节磷酸化过程，激酶响应于多种细胞外信号，从而使磷酸根以共价键形式与蛋白或脂质相结合。此刺激的例子包括：激素、神经递质、生长和分化因子、细胞周期事件、环境应激、和营养性应激。细胞外刺激可影响：与细胞生长、迁移、分化有关的一种或多种细胞反应，激素分泌，转录因子的激活，肌肉收缩，葡萄糖代谢，蛋白合成的控制，和细胞周期调节。
基于针对激酶面板中的抑制至少一种激酶的活性，对本发明的化合物进行筛选。激酶的例子包括但不限于：SYK、ZAP70、PYK2、FAK、ALK、AXL、CSF1R、FLT3，JAK2(JH1结构域-催化)、JAK3(JH1结构域-催化)、PDGFRB、RET、PIM1、AURKA、AURKB、BMPR2、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、KIT(V559D，T670I)、LKB1、LRRK2、LRRK2(G2019S)、MLK1、PAK4、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1和TYK2激酶、及其突变形式。因此，本发明的化合物和组合物可用于治疗如下的疾病或障碍性疾病：其中，上述激酶导致与上述激酶有关疾病或障碍性疾病的病状和/或症状。所述疾病或障碍性疾病包括但不限于：胰腺癌、甲状腺乳头状癌、卵巢癌、人腺样囊性癌、非小细胞肺癌、分泌型乳腺癌、先天性纤维肉瘤、先天性中胚叶肾瘤、急性髓细胞白血病、银屑病、转移、与癌症有关的疼痛和神经母细胞瘤、自身免疫性疾病、炎症性疾病、骨病、代谢病、神经系统疾病和神经退行性疾病、癌症、心血管疾病、呼吸道疾病、变应反应和哮喘、阿尔茨海默氏病、和激素相关疾病、良性和恶性的增殖障碍性疾病、由于免疫系统不适当的激活所导致的疾病和由于神经系统不适当的激活所导致的疾病、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、糖尿病性视网膜病变、由于年龄相关性黄斑变性所导致的脉络膜新生血管性疾病、银屑病、关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、关节炎中的滑膜血管翳入侵、多发性硬化症、重症肌无力症、糖尿病、糖尿病血管病变、早产儿视网膜病变、婴儿血管瘤、非小细胞肺癌、膀胱和头颈癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和胰腺癌、银屑病、纤维化、动脉粥样硬化、再狭窄、自身免疫性疾病、过敏症、呼吸道疾病、哮喘、移植排斥反应、炎症、血栓形成、视网膜血管增生、炎症性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、骨病、移植或骨髓移植排斥、狼疮、慢性胰腺炎、恶病质、感染性休克、纤维增生性和分化性皮肤病、中枢神经系统疾病、神经退行性疾病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、与脑损伤或脊髓损伤后的神经损伤和轴索变性有关的障碍性疾病或病况、急性或慢性癌症、眼病、病毒感染、心脏病、肺病或肾病和支气管炎。
本文中所述的化合物是激酶活性的抑制剂，并且在治疗与不适当的激酶活性有关的障碍性疾病(特别是在治疗或预防由激酶介导的疾病状态)中具有治疗效果。因此，本发明提供了对激酶在其中发挥作用的信号转导途径进行调节(特别是抑制)的方法。该方法一般涉及向受试者施用或者使表达激酶的细胞接触有效量的本文所述化合物、其前药、或可接受盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物和/或组合物，从而调节或抑制信号转导途径。该方法还用于调节(特别是抑制)通过激活特定激酶信号转导途径所引起的下游过程或者细胞反应。作为治疗或预防其特征是由激酶依赖性信号转导途径的激活所导致或者与之相关的疾病的治疗方式，该方法还应用于体外环境或者体内环境。
2、药物组合物
本发明所提供的化合物(包括式(I)化合物、或者其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和同分异构体)的治疗用途而言，单独地或者作为药物组合物的一部分、以治疗有效量施用所述化合物。因此，本发明提供的是药物组合物，该药物组合物包含至少一种本文所提供化合物(包括至少一种式(I)化合物、其药学上可接受的盐和/或溶剂合物)、以及一种或多种药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或赋形剂。此外，所述化合物和组合物是单独施用或者与一种或多种其它的治疗试剂组合施用。所述化合物和组合物的给药方法包括但不限于：静脉内给药、吸入、经口给药、直肠给药、胃肠外给药、玻璃体内给药、皮下给药、肌肉内给药、鼻内给药、皮肤给药、局部给药、眼部用药、颊内给药、气管给药、支气管给药、经舌下给药、或耳部给药。本文提供的化合物是通过以下已知药物制剂的形式给药，包括：用于经口给药的片剂、胶囊或酏剂；用于直肠给药的栓剂；用于胃肠外给药或肌肉内给药的无菌溶液或悬浮液；用于局部给药的洗剂、凝胶、软膏或乳膏等。
治疗有效量尤其将视表现的疾病、疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、给药化合物的效力、给药方式和期望的治疗而变化。所需剂量还将视给药方式、要治疗的特定病况和期望的效果而变化。
药学上可接受的盐形式包括：药学上可接受的酸式盐/阴离子盐、或者碱式盐/阳离子盐。药学上可接受的酸式盐/阴离子盐包括：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、氢溴酸盐、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、盐酸盐、柠檬酸盐、二氢盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(glyceptate)、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯砷酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、氢碘酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、单宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、和三乙基碘盐。药学上可接受的碱式盐/阳离子盐包括：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、二乙醇胺盐、N-甲基-D-萄糖胺盐、L-赖氨酸盐、L-精氨酸盐、铵盐、乙醇胺盐、哌嗪盐和三乙醇胺盐。
药学上可接受的酸加成盐是通过游离碱形式的式(I)化合物与合适的无机酸或有机酸反应而形成；其中有机酸或有机酸包括但不限于：氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸(如2-萘磺酸)、或己酸。式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可以包括或者是：例如氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)、或者己酸盐。
可分别由相应的碱加成盐或酸加成盐形式制备游离酸或游离碱形式的本发明化合物。例如，可通过用合适的碱(例如，氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理，而使酸加成盐形式的本发明化合物转化成相应的游离碱。可通过用合适的酸(例如盐酸等)处理，而使碱加成盐形式的本发明化合物转化成相应的游离酸。
在0℃至80℃、合适的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、二氧六环等)中，用还原剂(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理本发明化合物的N-氧化物，由此可制备非氧化物形式的本发明化合物。
可利用本领域技术人员已知的方法制备本发明化合物的前药衍生物(例如，更详细内容参见Saulnier等人(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，Vol.4，p.1985；其整个教示内容以引用方式并入本文中)。
可利用本领域技术人员已知的方法制造本发明化合物的经保护衍生物。适用于保护基产生和去除的详细描述和技术可见T.W.Greene的《有机化学中的保护基团(第3版)》(Protecting Groups in Organic Chemistry，3rd edition)，约翰威立国际出版公司(John Wiley and Sons，Inc.)，1999(其整个教示内容以引用方式并入本文中)。
可通过如下方法制备单一立体异构体形式的本发明化合物：使化合物的外消旋混合物与光学活性拆分剂反应而形成一对非对映异构体化合物，分离该非对映异构体，并回收光学纯的对映体。可通过使用本发明化合物的共价键结合的非对映异构体衍生物、或者使用可分离的复合物(例如，结晶性非对映异构体盐)来完成对映异构体的拆分。非对映异构体具有不同的物理性质(例如，熔点、沸点、溶解性、反应活性等)，并且可利用这些不同点而容易地加以分离。可利用色谱法、或者利用基于溶解度差异的分离/拆分技术来分离非对映异构体。然后，利用不会导致外消旋化的任何实用方法，与拆分剂一起回收光学纯的对映体。适用于从外消旋混合物中拆分出化合物立体异构体的技术的更详细描述可见JeanJacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen的《对映异构体、外消旋体及拆分》(Enantiomers，Racemates and Resolutions)，约翰威立国际出版公司，1981(其整个教示内容以引用方式并入本文中)。
利用本文和实施例中所描述的方法制备式(I)化合物。在某些实施例中，通过如下方法制备式(I)化合物：
(a)任选地，将本发明化合物转化成药学上可接受的盐；(c)任选地，将本发明化合物的盐形式转化成非盐形式；(d)任选地，将本发明化合物的非氧化形式转化成药学上可接受的N-氧化物；(e)任选地，将本发明化合物的N-氧化物形式转化成非氧化形式；(f)任选地，从同分异构体的混合物中拆分出本发明化合物的单一的同分异构体；(g)任选地，将非衍生物化的本发明化合物转化成药学上可接受的前药衍生物；以及(h)任选地，将本发明化合物的前药衍生物转化成其非衍生物化的形式。
所有专利的公开内容、公布的专利申请和所引用参考文献的全部内容均以引用的方式并入本文中。
实例
通过以下用于说明本发明式(I)化合物制备的实例来进一步举例说明本发明。这些实例仅仅是以说明为目的，并非旨于也不应被理解成以任何方式限制本发明。
方案1
方案2
实例1
4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(6H)-酮的合成
实例1a：(1-二甲基氨基-亚乙基)-2-甲基-异硫脲
向硫脲(13.6g，178.6mmol)溶解于130mL二氯甲烷(DCM)的浆料中加入N，N-二甲基乙酰胺二甲基乙缩醛(25g，187.6mmol)。将反应混合物于室温下搅拌5小时。将混合物在减压下浓缩，获得橙色的残留物。向该残留物中加入100mL四氢呋喃(THF)，产生橙色的悬浮液。在冰浴中向该悬浮液中加入碘甲烷(14.5mL)，且将该悬浮液升温到室温。于室温下将混合物再搅拌2小时，产生沉淀物。利用薄层色谱(TLC)监测反应。对从该溶液中获得的沉淀物进行过滤，用冷的四氢呋喃洗涤，而产生淡褐色的固体(44.89g，87.5％)。
实例1b：4-羟基-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向(1-二甲基氨基-亚乙基)-2-甲基-异硫脲(25g，7.1mmol)溶解于200mL二氯甲烷的浆料中加入3-氯-氧代-丙酸乙酯(15.7g，104.5mmol)。在冰浴中使该反应混合物冷却。向该溶液中缓慢地逐滴加入三乙胺(30.3mL，220mmol)，且将该混合物于室温下再搅拌2-3小时。将该反应混合物用水、2N HCl溶液洗涤。用MgSO4干燥分离的有机层，且在减压下浓缩，产生黄色残留物。从乙酸乙酯(EtOAC)对残留物进行重结晶，而产生淡黄色固体(6.49g，33％)。MS m/z：229.1(M+H)+。
实例1c：4-氯-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向100mL圆底烧瓶中添加溶解于14mL POCl3的4-羟基-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(6.49g，28.4mmol)。向该溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2mL)，且将反应混合物于80℃-90℃搅拌2小时。将该混合物在减压下浓缩，产生深褐色的残留物。向该残留物中加入水，然后用二氯甲烷和饱和NaHCO3水溶液稀释。将分离的有机层用MgSO4干燥。利用旋转蒸发器除去溶剂，从而获得深褐色的油状产物(6.76g，96％)。MS m/z：246.9(M+H)+，248.9(同位素)。
实例1d：4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向200mL圆底烧瓶中添加溶解于40mL乙腈的4-氯-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(2.76g，11.1mmol)。向该溶液中添加3，5-二甲氧基苯胺(1.784g，11.4mmol)和浓HCl溶液(494μL，5.6mmol)，将反应混合物于60℃-70℃搅拌2小时。然后，将该混合物用乙酸乙酯和饱和NaHCO3水溶液稀释。再搅拌5分钟。将分离的有机层用MgSO4干燥，且在减压下浓缩，从而形成残留物。利用乙腈对残留物进行重结晶，减压干燥，从而获得淡黄色的固体(2.92g，72％)。MS m/z：364.1(M+H)+。
实例1e：(E)-4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-6-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-6-甲基-2(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(2.7g，7.4mmol)溶解于30mL DMF的溶液中加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(1.58mL，11.1mmol)。将反应混合物于130℃搅拌2小时。在利用TLC监测反应后，冷却到室温，然后用二氯甲烷和水将该混合物稀释。在用二氯甲烷从水层中进行3次萃取后，将混合的有机层用MgSO4干燥。对该溶液进行减压浓缩，从而产生粗混合物(3.16g)。在没有进一步纯化的情况下，将该混合物用于下一步骤。
实例1f：4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
将(E)-4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-6-(2-(二甲氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(3.16g)的粗产物溶解于45mL乙醇(EtOH)中。向该溶液中加入30％NH4OH溶液(5.2mL)，然后将反应混合物于75℃-85℃搅拌10小时。随后，将该混合物冷却到室温。对从溶液中产生的固体进行过滤。对该滤液进行减压浓缩，形成固体残留物。用乙酸乙酯对残留物进行重结晶。且将混合的固体在减压下干燥，产生淡黄色固体(1.47g)。MS m/z：344.9(M+H)+。
实例1g：4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(6H)-酮
于-20℃，向20mL反应容器中添加溶解于7mL DMF的4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(151mg，0.44mmol)。将该溶液于此温度下保持30分钟。然后，于此温度下向该溶液中加入间-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)(146.4mg，1.32mmol)，再搅拌30分钟，同时升温到室温。利用液相色谱-质谱(LC-MS)监测反应，以确认相应的氧化物。向反应混合物中加入三乙胺(354μL，1.32mmol)和4-羟基哌啶(134mg，1.32mmol)，且于此温度下搅拌2小时。利用LC-MS检测该反应。利用旋转蒸发器除去溶剂，以产生淡褐色的残留物。向残留物中加入乙腈(10mL)，而获得标题化合物4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3，-d]嘧啶-6(6H)-酮(131mg，75％)。MS m/z：398(M+H)+。
实例2
4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)吡啶并[4，3d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
于-20℃向20mL反应容器中添加溶解于7mL DMF中的4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(70mg，0.32mmol)。将该溶液于此温度下保持30分钟。然后于此温度下向该冷的溶液中加入m-CPBA(148mg，0.60mmol)，再搅拌30分钟，同时升温到室温。利用LC-MS监测该反应，以确认相应的氧化物。向反应混合物中加入三乙胺(83μL，0.6mmol)和4-羟基哌啶-4-羧酸甲酯(96mg，0.60mmol)，且于此温度下搅拌2小时。利用LC-MS监测该反应。随后，利用旋转蒸发器除去溶剂，而产生淡黄色固体的1-(4-羟基-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-4-羟基哌啶-4-羧酸甲酯(57mg，63％)。在20mL反应容器中，将得到的淡黄色固体溶解于8mL干燥的THF中。于0℃向该混合物中加入溶解于甲苯(1.95mL，1.95mmol)的1.0M二异丁基氢化铝(DIBAL)，且于此温度下搅拌2小时。然后，用20mL MeOH淬灭该反应混合物。利用旋转蒸发器除去溶剂，从而产生淡黄色残留物。将该残留物溶解于MeOH和DCM的混合物中，从而产生白色沉淀物。过滤，且在减压下浓缩滤液，而获得白色粉末的标题化合物(26mg，24％)。MS m/z：458(M+1)+。
实例3
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的合成
以实例1g中所述的方式，以4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(40mg，0.29mmol)和4-(叔丁氧羰基-氨基)哌啶作为起始物，用溶解于二氧六环(17mg)的4N HCl进行处理，由此制备本标题化合物(化合物3；MS m/z：398(M+H)+)。
依照与实例1g中所描述的相似步骤，由4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺制备下面的4-(3，5-二甲氧基苯基氨基)-2-(氨基取代的)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例6
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
实例6a：4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯
以实例1d中所述的方式，以4-氯-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.2g，4.86mmol)和3-(三氟甲基)苯胺(611μL，4.86mmol)作为起始物，且持续反应直到反应产生深褐色固体的(4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.76g，97.4％))，从而制备标题化合物。MS m/z：372.2(M+H)+。
实例6b：(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯
以实例1e中所述的方式，以4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.76g，4.74mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(947μL，7.1mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生粗的标题化合物，从而制备标题化合物。在不进一步纯化的情况下将该标题化合物用于下一步骤。
实例6c：2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
以实例1f中所述的方式，以(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯和30％NH4OH溶液作为起始物，且持继续反应直到反应产生褐色固体的2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(912mg)，来制备本标题化合物。MS m/z：353.1(M+H)+。
实例6d：2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
以实例1g中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(100mg，0.26mmol)和4-羟基哌啶作为起始物，以产生呈白色固体的本标题化合物(73mg)。MS m/z：406(M+H)+，1H核磁共振(NMR)(300MHz)，δppm 1.21-1.35(m，4H)，3.76-3.78(m，1H)，4.26-4.28(m，4H)，6.17(d，J＝7.2Hz，1H)，7.38-7.68(m，4H)，7.90(s，1H)，8.61(s，1H)，11.42(s，1H)，12.10(s，1H)。
实例7
(R)-2-(3-氨基吡咯烷-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的合成
以实例1g中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(100mg，0.28mmol)和(R)-(+)-(boc-氨基)吡咯烷(107mg，0.57mmol)(93mg，93％)作为起始物，且用溶解于二氧六环的4N HCl进行处理，从而制备本标题化合物(化合物编号7)。MS m/z：405.2(M+1)+。1H NMR(300MHz，二甲基亚砜(DMSO)-d6)δppm 12.46(d，9Hz，1H)，8.37(s，3H)，7.94-7.52(m，3H)，6.75(d，36.6Hz，1H)，4.00-3.86(m，5H)，2.40-2.09(m，2H)。
实例8
(S)-2-(吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-三氟甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(160mg，0.45mmol)和(S)-(-)-1-boc-3-氨基吡咯烷(167mg，0.90mmol)作为起始物，且用溶解于二氧六环的4N HCl进行处理，从而产生标题化合物编号8(110mg，57％)。MS m/z：391(M+1)+。
依照与实例6d中所述相似的步骤，由4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺，制备下面的4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(氨基取代的)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例84
2-(4-氨基哌啶-1-基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)酮盐酸盐的合成
以实例1g中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(3-溴苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(80mg，0.23mmol)和4-(boc-氨基)哌啶(70mg，0.35mmol)作为起始物，且用溶解于二氧六环的4N HCl进行处理，从而产生标题化合物84(15mg，15％)。MS m/z：405.2(M+1)+。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.12(s，1H)，11.92(s，1H)，8.24(s，1H)，8.09(s，3H)，7.59-7.50(m，2H)，7.40-7.36(m，2H)，6.48(s，1H)，4.70(s，2H)，2.08-0.87(m，7H)。
依照与实例84中所示相似的步骤，由4-(3-溴苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺制备下列4-(3-溴苯基氨基)-2-(氨基取代)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例100
2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
实例100a：4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
以实例1d中所描述的方式，以4-氯-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.2g，4.86mmol)和3，5-二(三氟甲基)苯胺(777μL，4.86mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生褐色固体的标题化合物4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.53g，70.2％)。MS m/z：440.1(M+1)+。
实例100b：(E)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
以实例1e中所述的方式，以4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.52g，3.6mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(743μL，5.2mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生粗的标题化合物(E)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-(2-(二甲氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯。在不进一步纯化的情况下，将所产生的化合物用于下一步骤。
实例100c：4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
以实例1f中所述的方式，以(E)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-6-(2-(二甲氨基)乙烯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯和NH4OH水溶液作为起始物，持续反应，直到反应产生淡黄色固体的标题化合物(537mg)。MS m/z：421.1(M+1)+。
实例100d：2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
以实例1g中所述的方式，以4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(100mg，0.24mmol)和(±)-反式-1，2-二氨基环己烷作为起始物，持续反应，直到反应产生标题化合物2-((1R，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮。MS m/z：487(M+1)+。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm1.25-1.97(m，10H)，6.10(d，J＝7.2Hz，1H)，7.41-7.44(m，3H)，7.41-7.76(m，4H)，8.47(s，2H)，12.49(s，1H)。
实例101
(2-((1R，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和(2-(1S，2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例2d中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(100mg，0.26mmol)、(1R，2S)-2-氨基环己胺作为起始物，持续反应，直到反应产生白色固体的标题化合物(2-((1R，2S)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(92mg，77.4％)。MS m/z：419.3(M+H)+。
实例102
4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所述的方式，以4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(70mg，0.17mmol)和4-羟基哌啶(20.6mg，0.2mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生淡褐色固体的化合物编号102(60mg，76％)。MS m/z：，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 474.1(M+1)+，12.27(s，1H)，8.47(s，2H)，7.74(s，1H)，7.41(d，J＝7.2Hz，1H)，6.17(d，J＝7.2Hz，1H)，4.24(b，2H)，3.78(m，1H)，3.45-3.39(m，2H)，1.81-1.77(m，2H)，1.38(m，2H)。
依照与实施例100d中所描述的相似的步骤，由4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺制备下列4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(氨基取代)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例125
(S)-4-(苯氧基苯基氨基)-2-(吡咯烷-3-基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的合成
以实例1g中所述的方式，以2-(甲硫基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(87mg，0.23mmol)和(S)-(-)-1-boc-3-氨基吡咯烷(129mg，0.69mmol)作为起始物，且用溶解于二氧六环的4N HCl进行处理，持续反应，直到反应产生标题化合物编号125(54mg，52％)。MS m/z：415(M+1)+。
实施例126
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所描述的方式，以4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(60mg，0.17mmol)和4-羟基哌啶(34.1mg，0.33mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生黄色固体的化合物编号126(39mg，57％)。MS m/z：416.4(M+1)+。
依照与实例126中所描述的相似的步骤，由4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺制备下列4-(4-(甲基磺酰基)苯基氨基)-2-(氨基取代)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例134
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
于-20℃，向20mL反应容器中添加溶解于7mL DMF的2-(甲硫基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(74mg，0.20mmol)和4-羟基哌啶(60.6mg，0.60mmol)。将该溶液于该温度下保持30分钟。且于该温度下向该溶液中加入m-CPBA(148mg，0.6mmol)，再进一步搅拌30分钟，同时升温到室温。利用LC-MS监测该反应，以确认相应的氧化物。然后，向该反应混合物中加入三乙胺(354μL，1.32mmol)和4-羟基哌啶(134mg，1.32mmol)，且于该温度下搅拌2小时。利用LC-MS检测反应。利用旋转蒸发器除去溶剂，从而产生淡褐色残留物。将该残留物溶解于10mL THF中，且向该溶液中加入CuI(0.4mmol，76.2mg)和二异丙基乙胺(69μL，0.4mmo1)。然后，将混合物于室温下搅拌30分钟。将该混合物用EtOAC稀释，再用30％氢氧化铵溶液洗涤。随后，将分离的有机层用硫酸钠干燥。利用旋转蒸发器除去溶剂，从而形成褐色的残留物。向该残留物中加入乙腈(10mL)，以形成沉淀物。过滤，减压干燥，从而获得黄色固体(9mg，11％)。MS m/z：423.2(M+1)+。
依照与实例134中所描述的相似的步骤，由4-(4-吗啉基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和相应的胺制备下列4-(4-吗啉基苯基氨基)-2-(氨基取代)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮化合物。
实例149
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基氨基)吡啶并[4，3d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所描述的方式，以4-(3，4，5-三甲氧基苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(112mg，0.30mmol)和4-羟基哌啶(91mg，0.90mmol)作为起始物，获得淡褐色的固体(112mg，87％)。MS m/z：428(M+1)+。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.16-1.81(m，6H)，3.64(s，3H)，3.80(s，6H)，4.35(d，J＝13.2Hz，2H)，4.80(d，J＝4.2Hz，1H)，6.14(d，J＝7.2Hz，1H)，7.08(s，2H)，7.36(d，J＝6.9Hz，1H)，11.35(s，1H)，11.87(s，1H)。
实例150
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所描述的方式，以4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(70mg，0.18mmol)和4-羟基哌啶(55mg，0.54mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生淡黄色的固体(57mg，73％)，从而制备化合物编号150。MS m/z：436(M+1)+。
实例151
2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例1g中所描述的方式，以4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(70mg，0.18mmol)和4-哌啶甲醇(67mg，0.54mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生淡黄色固体(67mg，83％)，从而制备化合物编号151。MS m/z：450.4(M+1)+。
实例152
2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
于-20℃，向20mL反应容器中添加溶解于7mL DMF的4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)-2-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(70mg，0.18mmol)，且将该溶液于该温度下保持30分钟。然后，于该温度下向该冷溶液中加入m-CPBA(133mg，0.54mmol)，再搅拌30分钟，同时升温到室温。利用LC-MS监测该反应，以确认相应的氧化物。向该反应混合物中加入三乙胺(75μL，1.32mmol)和4-羟基哌啶-4-羧酸甲酯(57mg，0.36mmol)，且于该温度下搅拌2小时。利用LC-MS检测该反应。然后，利用旋转蒸发器除去溶剂，以产生淡黄色固体的4-羟基-1-(4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)-5-氧代-5，6-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(65mg，73％)。在20mL反应容器内，将该得到的化合物溶解于8mL干燥的THF中，且于0℃向该混合物中加入溶解于甲苯的1.0M二异丁基氢化铝(DIBAL)(1.95mL，1.95mmol)，然后将该溶液于该温度下搅拌2小时。随后，用20mL甲醇(MeOH)淬灭该反应混合物。利用旋转蒸发器除去溶剂，以产生淡黄色的残留物。将该残留物溶解于甲醇与DCM的混合物中，以产生白色沉淀物。过滤，且对滤液进行减压浓缩，从而获得白色粉末的标题化合物(25mg，41％)。MS m/z：466(M+1)+。
依照与实例151和实例152中所描述的相似的步骤，制备下列化合物。
实例168
2-(4-羟基哌啶-1-基)-6-甲基-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例2d中所描述的方式，以6-甲基-2-(甲硫基)-4-(3-三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(90mg，0.24mmol)和4-羟基哌啶(35mg，0.35mmol)作为起始物，持续反应，直到反应产生标题化合物(35mg，33％)，从而制备化合物编号168。MS m/z：420(M+1)+。
依照与实例159中所描述的相似的步骤制备下列化合物。
实例178
4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)的合成
实例178a：4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向20mL反应容器中添加溶解于10mL二氧六环的4-氯-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.00g，4.06mmol)、4-(叔丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.00g，4.22mmol)、和四(三苯基膦)钯(0)(0.17g，0.15mmol)。边搅拌边向反应混合物中吹入氮气，持续25分钟。然后，向该混合物中加入溶解于4mL水中的碳酸钾(1.17g，8.44mmol)。向该两相混合物中吹入氮气，持续10分钟。随后，将该混合物于90℃搅拌14小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释，再用水洗涤。将分离的有机层用Na2SO4干燥。利用旋转蒸发器除去溶剂，以产生褐色的油状残留物。利用硅胶柱层析法，使用溶解于二氯甲烷的梯度0-5％甲醇对残留物进行纯化，从而获得白色固体(1.12g，68％)。MS m/z：319(M+1)+。
实例178b：(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
向4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(0.67g，1.75mmol)溶解于5mL DMF的溶液中加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(0.32mL，2.50mmol)。将该反应混合物于130℃搅拌2小时。在利用TLC监测反应后，冷却到室温，然后用DCM和水稀释该混合物。在用DCM从水层中萃取3次后，将混合的有机层用MgSO4干燥。随后，对溶液进行减压浓缩，从而产生粗混合物(467mg)。在不进一步纯化的情况下，将该混合物用于下一步骤。
实例178c：4-(4-甲氧基苯基氨基)-6-甲基-(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
将(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-6-(4-甲氧基苯基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(467mg)的粗产物溶解于45mL乙醇(EtOH)中。在向该溶液中加入30％氨水溶液(3.0mL)后，将反应混合物于90℃搅拌10小时。然后，将该混合物冷却到室温。对从溶液中产生的固体进行过滤。利用硅胶柱层析法，使用溶解于二氯甲烷的0-5％甲醇梯度对该固体进行纯化，从而获得淡黄色固体(246mg，46％用于两个步骤)。MS m/z：344.9(M+H)+。
实例178d：4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-(甲基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
于-20℃，向20mL反应容器中添加溶解于4mL DMF的(4-甲氧基苯基氨基)-6-甲基(甲硫基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(69mg，0.23mmol)。将该溶液于该温度下保持30分钟。然后，于该温度下向该溶液中加入m-CPBA(170mg，0.69mmol)，再搅拌30分钟，同时升温到室温。利用LC-MS监测该反应，以确认相应的氧化物。随后，向反应混合物中加入三乙胺(96μL，0.69mmol)和4-羟基哌啶(70mg，0.69mmol)，且于该温度下搅拌2小时。利用LC-MS监测该反应。利用旋转蒸发器除去溶剂，以产生淡褐色的残留物。向该残留物中加入乙腈(10mL)，从而产生沉淀。过滤，且减压干燥，从而获得呈淡黄色固体的标题化合物(56mg，69％)。MS m/z：353(M+H)+。
依照与实例178中所描述的相似的步骤制备下列化合物。
实例183
8-溴-2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
实例183a：8-溴-2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
向20mL反应容器中添加溶解于7mL干燥DMF中的2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(135mg，0.38mmol)、和N-溴代丁二酰亚胺(68mg，0.38mmol)。将该反应混合物于室温下搅拌2小时。然后，减压下除去溶剂，从而产生黄色的残留物。用乙腈对该残留物进行重结晶，从而获得黄色固体(100mg，74％)。MS m/z：431，433(M+H)+。
实例183b：2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮
以实例1g中所描述的方式，以8-溴-2-(甲硫基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(60mg，0.26mmol)和4-羟基哌啶作为起始物，持续反应，直到反应产生呈灰色固体的标题化合物(40mg，60％)。MS m/z：484和486(M+H)+。
实例184
8-溴-2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
以实例183a中所描述的方式，以2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和N-溴代丁二酰亚胺作为起始物，持续反应，直到反应产生呈淡褐色固体的标题化合物。MS m/z：544和546(M+H)+。
依照与实例183和实例184中所描述的相似的步骤制备下列化合物。
实例221
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)-8-苯基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮的合成
向20mL反应容器中添加溶解于8mL干燥DMF中的2-(甲硫基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(221a，182mg，0.48mmol)和N-碘代丁二酰亚胺(158mg，0.70mmol)，且将该反应混合物于60℃搅拌2小时。在用乙腈(210mg，87％)进行重结晶后，减压下除去溶剂，以产生淡褐色的固体(221b)。向20mL反应容器中添加溶解于6mL二氧六环中的8-碘-2-(甲硫基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(221b，52mg，0.10mmol)、苯基硼酸(18mg，0.15mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(6mg，0.005mmol)、和2.0M碳酸钠水溶液。向该混合物吹入氮气，持续30分钟。然后，将反应混合物于80℃加热3小时。随后减压下除去溶剂，以产生褐色残留物。利用硅胶柱层析法，使用溶解于二氯甲烷的0-5％甲醇梯度对残留物进行纯化，产生化合物221。则以实例1g中所述的方法，以2-(甲硫基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)-8-苯基吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮和4-羟基哌啶作为起始物，来获得标题化合物221。MS m/z：506(M+H)+。
生物检验
1、激酶抑制检验
对本发明化合物进行检验，以测量它们抑制激酶面板的能力；所述激酶面板包括但不限于：脾脏酪氨酸激酶(SYK)、ζ链相关蛋白激酶70(ZAP70)、PTK2B蛋白酪氨酸激酶2(PYK2)、粘着斑激酶(FAK)、马洛尼(maloney)前病毒整合激酶1(PIM1)、转染重排激酶(RET)、Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)、Janus激酶2(JAK2)、和富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)。
FLT3是Ⅲ型受体酪氨酸激酶(RTK)家族的成员。FLT3的配体是由骨髓基质细胞和其它细胞表达，并且与其它生长因子相互协同来刺激干细胞、祖细胞、树突状细胞、和自然杀伤细胞的增殖。FLT3涉及是前恶性障碍性疾病的造血障碍性疾病，包括骨髓增生障碍性疾病，例如血小板增多症、原发性血小板增多症(ET)、血管生成的骨髓组织化生、骨髓纤维变性(MF)、具有骨髓组织化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性原发性骨髓纤维化症(IMF)、和真性红细胞增多症(PV)、血球减少、和前恶性脊髓发育不良综合症。血液恶性肿瘤包括：白血病、淋巴瘤(非何杰金氏淋巴瘤)、何杰金氏病(也称为何杰金氏淋巴瘤)、和骨髓癌，例如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化型白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、青少年髓囊肿性白血病(JMML)、成人T细胞ALL、具有骨髓三系脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合性白血病(MLL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、骨髓增生性疾病(MPD)、多发性骨髓瘤(MM)和髓样肉瘤。已文献记载，在成人和儿童白血病(包括急性髓细胞白血病(AML)、具有骨髓三系脊髓发育不良的AML(A ML/TMDS)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、和骨髓增生异常综合症(MDS))中均有异常表达的FLT3。
RET是细胞外信号分子(GFL’s)的源自神经胶质细胞系的神经元营养因子(GDNF)家族成员的受体。RET信号转导对于肾和肠神经系统的正常发育非常重要。RET功能丧失性突变与先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease)的发生有关；而RET功能获得性突变与各种类型的癌症发生有关，其中包括甲状腺髓样癌和II型和III型多发性内分泌肿瘤。
脾酪氨酸激酶(SYK)是酪氨酸激酶SYK家族的成员，所述酪氨酸激酶是非受体细胞质酪氨酸激酶，具有由连接域分开的特有双SH2结构域。SYK在传递来自包括CD74、Fc受体和整联蛋白等多种细胞表面受体的信号中具有重要作用。SYK功能异常涉及造血系统的恶性肿瘤事件。业内知道数种转化病毒例如易普斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒、牛白血病病毒和小鼠乳房肿瘤病毒皆含有导致SYK激活的“免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)”。
ZAP70是属于蛋白酪氨酸激酶家族的酶，且在胸腺细胞发育、T-细胞发育和淋巴细胞激活方面具有重要作用。在T-细胞抗原受体(TCR)受到刺激之后，ZAP70在酪氨酸残基上发生磷酸化，且在TCR介导的信号转导的初始步骤中与Src家族激酶、Lck和Fyn组合发挥作用。ZAP70基因突变造成选择性T-细胞缺陷，这是一种由CD8-阳性T-细胞选择性缺失为表征的严重组合免疫缺陷疾病。
PYK2是细胞质蛋白酪氨酸激酶，参与钙致离子通道调节和促细胞分裂原活化蛋白(MAP)激酶信号转导通路的激活。该编码的蛋白可在增加钙流的神经肽激活受体或神经递质与调节神经元活性的下游信号间担当重要的信号转导中间体。该编码的蛋白响应细胞内钙浓度增加、烟酰胺乙酰胆碱受体激活、膜去极化或蛋白激酶C的活化，而发生快速的酪氨酸磷酸化，从而被激活。PYK2的活化与促进c-Jun N-末端激酶活性高度相关。PYK2涉及到诸如下列疾病：骨质疏松症、关节炎、骨髓性白血病、低渗压症、肉瘤、原始细胞危象、胶质瘤、红白血病、和癌症。
FAK(由基因PTK2编码)是非受体酪氨酸激酶，整合来自整联蛋白和生长因子受体的信号。FAK在调节细胞存活、生长、伸展、迁移和侵袭中具有重要作用。由在多个酪氨酸残基发生磷酸化而调节并激活FAK。FAK的mRNA和/或蛋白的过表达涉及到乳腺、结肠、甲状腺和前列腺等的癌症。与正常组织相比，恶性组织中FAK的磷酸化增加。
JAK1是蛋白-酪氨酸激酶(PTK)家族的成员，其特征是紧跟PTK结构域的N-末端存在第二个磷酸转移酶相关结构域。JAK1参与干扰素-α/β和-γ的信号转导通路。干扰素-α通路中JAK1与TYK2活性间的互补相互依赖关系、干扰素-γ通路中JAK1与JAK2间的互补相互依赖关系可反映出在干扰素受体复合体正确组合中对这些激酶的需求。
JAK2涉及由II型细胞因子受体家族(例如干扰素受体)、巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体家族(IL-3R、IL-5R和GM-CSF-R)、gp130受体家族(例如IL-6R)和单链受体(例如Epo-R、Tpo-R、GH-R、PRL-R)成员进行的信号转导。已在白血病患者中发现了JAK2基因融合TEL(ETV6)(TEL-JAK2)和PCM1基因。此外，JAK2的突变涉及真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和其它骨髓增生障碍性疾病。该JAK2的突变是在617位的缬氨酸突变为苯丙氨酸，从而使得造血细胞对如红细胞生成素和血小板生成素等生长因子更敏感。
JAK3是Janus家族的酪氨酸激酶，主要在免疫细胞中表达。JAK3经由白介素受体介导发生酪氨酸磷酸化，从而被激活，且JAK3响应该激活进行信号转导。消除Janus激酶(JAK3)功能的突变引起常染色体严重联合免疫缺陷疾病(SCID)。不表达JAK3的小鼠具有对各种细胞因子都不响应的T-细胞和B-细胞。由于JAK3主要在造血细胞中表达，因此认为JAK3在细胞因子信号转导中的作用比其它JAK具有更多的限制。JAK3通过受体参与信号转导，该受体具体I型细胞因子受体家族(例如IL-2R、IL-4R、IL-7R、IL-9R、IL-15R和IL-21R)的常见γ链(γC)。
已确定马洛尼前病毒整合激酶(PIM-激酶)为常见原癌基因的一种，能由小鼠中发生的马洛尼反转录病毒整合事件而被转录激活，从而使受感染的小鼠出现淋巴瘤。PIM1、PIM2和PIM3是丝氨酸/苏氨酸激酶，通常响应于生长因子和细胞因子而对造血细胞的存活和增殖产生作用。过表达PIM1或PIM2的转基因小鼠表现出T-细胞淋巴瘤的发病率增加，而PIM1或PIM2与c-myc组合过表达则与B-细胞的发病率相关。异常的PIM表达在包括前列腺癌、肝细胞癌和胰腺癌在内的多种人恶性肿瘤中皆有所报导。PIM激酶参与辅助性T-细胞的早期分化过程，其中辅助性T-细胞在自身免疫性疾病、变应性反应和组织移植排斥中协同免疫应答。除在癌症治疗和骨髓增生性疾病中具有潜在作用外，PIM抑制剂可用来控制免疫细胞在其它例如自身免疫性疾病、变应性反应和器官移植排斥综合症等病理条件下的扩增。
方法
酶SYK、ZAP70、PYK2、FAK、PIM1、RET、FLT3、JAK2和LRRK2激酶活性的抑制
将本发明化合物在100％二甲基亚砜(DMSO)(CALBIOCHEMTM)中初始稀释至10mM，用于储存，且制备得到化合物浓度为1μM至10μM范围内的激酶缓冲溶液。将本发明化合物的系列稀释液分配到96-孔板(GREINER BIOSCIENCESTM)中，每孔6μL。将纯化的人全长SYK、ZAP70、PIM1、PYK2和截短的人FAK、RET、FLT3、JAK2和LRRK2(CARNA BIOSCIENCESTM)在激酶缓冲液中稀释，并添加到化合物溶液中，在室温下预孵育30分钟(对于PYK2预孵育1小时)。接着，将ATP(TEKNOVATM)和底物溶液添加(每孔12μL)到含有化合物溶液和酶的孔中；其中底物溶液为PerkinElmerTM建议的制造底物，例如：用于SYK的UlightTM-TK肽，用于ZAP70、FAK和PYK2的UlightTM-PolyGT，且用于PIM1的UlightTM-CREBtide(PERKINELMERTM)。将反应混合物孵育1小时(对于PYK2孵育2小时)。孵育后，添加用乙二胺四乙酸(EDTA)、水和Lance检测缓冲液(PERKINELMERTM)制备的终止溶液(每孔12μL)，以终止磷酸化作用。添加终止溶液，且摇动5分钟后，将检测溶液添加(每孔12μL)到反应混合物中，再孵育50分钟；其中检测溶液含有经铕标记的抗体(PerkinElmerTM建议的制造底物，例如，用于SYK、ZAP70、PYK2和FAK的PT66，且用于PIM1的Anti-Creb)、水和Lance检测缓冲液。在添加检测溶液且孵育50分钟后，底物磷酸化是测量的665nm处发射的函数。
结果
式(I)化合物呈现出有用的药理特性。如本文所用，0％抑制表示对激酶活性没有抑制(例如，在未经抑制剂处理的对照样品中所见)，而100％抑制表示完全抑制激酶活性。
式(I)化合物对面板上的蛋白激酶呈现出不同的抑制程度。某些化合物对于一种或多种激酶在1μM浓度下显示大于80％的抑制率，如表2中所示。
例如，式(I)化合物6，即2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮在1μM的浓度下显示抑制SYK(88％)、Zap70(49％)、PYK2(83％)、FAK(78％)和PIM1(32％)的激酶活性，以及抑制RET(IC50，94.2nM)和LRRK2(IC50，54nM)的激酶活性，见表2。表2示出了式(I)代表性化合物对SYK、ZAP70、PYK2、FAK、PIM1、RET、FLT3、JAK2和LRRK2的抑制百分率/摩尔抑制。
表2对各种激酶活性的抑制
化合物编号 SYK ZAP70 PYK2 FAK PIM1
6 88％ 49％ 83％ 78％ 32％
7 92.6％ 42.0％ 84.9％ 83.5％ 51.4％
9 84％ 32％ 89％ 83％ 64％
84 95.7％ 54.6％ 92.8％ 92.9％ 71.2％
100 37.7％ 9％ 88.4％ 21.9％ n.d.
101 90％ 45％ 85％ 77％ 61％
126 95.1％ 49.3％ 39.5％ 80.8％ 12.7％
151 8.2nM n.d. 90.2nM 216.9nM n.d.
152 2.7nM n.d. 84.3nM 337.1nM n.d.
168 3％ 6.2％ 1％ 4.9％ 7.3％
R406 96.8％ 58.5％ 74.3％ 46.5％ n.d.
RET FLT3 JAK2 LRRK2
1 200.2nM 242.1nM 59.4nM n.d.
2 363.2nM 367.6nM 73.8nM n.d.
6 94.2nM n.d. n.d. 54nM
8 2.6nM 0.2nM 12.7nM n.d.
102 n.d. n.d. n.d. 325nM
125 3.4nM 0.6nM 24.9nM n.d.
134 7.3nM n.d 3.7nM n.d.
136 1.3nM 0.1nM 3.9nM n.d.
137 5.8nM 12.4nM 1.6nM n.d.
139 4.1nM 9.1nM 1.6nM n.d.
149 32.7nM 151.1nM 151nM n.d.
150 115.3nM 106nM 65.3nM n.d.
178 7.5uM 4.8uM n.d. n.d.
星形孢菌素 2.2nM 0.2nM 0.3nM 7.8nM
*n.d.，未测定
2、肿瘤坏死因子(TNF)-α释放检验
测试本发明化合物对人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)中的TNF-α释放的影响，以阐释本发明化合物在细胞水平上的效果。TNF-α是参与全身炎症的细胞因子，且是刺激急性期反应的一组细胞因子中的成员。TNF-α的主要作用在于调节免疫细胞。已知TNF-α诱导凋亡性细胞死亡和炎症，并抑制早期肿瘤生成和病毒复制。TNF-α的失调、尤其是过度生成涉及多种人类疾病、自身免疫性疾病、炎症、关节炎和癌症。
由细胞响应的刺激类型控制TNF-α的生成或释放。而SYK活性参与介导TNF-α的生成。当由IgG刺激时，细胞以SYK依赖的方式增加TNF-α的生成(即，SYK依赖通路)。然而，当由脂多糖(LPS)刺激时，细胞以SYK非依赖的方式生成TNF-α。
方法
测试本发明化合物对THP-1细胞中TNF-α释放的影响。对于SYK依赖的TNF-α释放检验(即，经由IgG刺激)，使用源自人单核细胞的THP-1细胞，该THP-1细胞得自美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)(ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州(VA))。这种细胞系用含有10％胎牛血清(FBS；GIBCOTM)和0.05mM 2-巯基乙醇的洛斯维公园纪念研究所(RPMI)培养液(GIBCOTM)培养。将THP-1细胞以1 x 105个细胞/100μL/孔接种在人IgG(10μg/孔，INVITROGENTM)涂布的96孔培养板中，且随后添加系列稀释的化合物。在37℃下培养18小时后，收集上清液，由酶联免疫吸附实验(ELISA)测定TNF-α水平。剩余细胞则进行MTT(黄色四唑盐)检验，以测定化合物的细胞毒性效应。
对于SYK非依赖的TNF-α释放检验(即经由脂多糖(LPS)-刺激)，使用源自人单核细胞的THP-1细胞，该THP-1细胞得自美国模式培养物保藏所(ATCC，马纳萨斯，VA)。这种细胞系用含有10％胎牛血清(FBS，GIBCOTM)和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI培养液(GIBCOTM)培养。将THP-1细胞以1 x 105个细胞/100μL/孔接种在96-孔培养板中，且用脂多糖(1μg/mL)处理，并随后添加系列稀释的化合物。在37℃下培养18小时后，收集上清液，由ELISA测定TNF-α水平。剩余细胞则进行MTT检验，以测定化合物的毒性效应。
结果
式(I)化合物显示有用的药理特性。本文中使用的无抑制剂的对照样品显示TNF-α释放的0％抑制作用。
在某些实施例中，式(I)化合物在0.3μM浓度下以SYK依赖性方式(例如，IgG刺激)显示大于50％的抑制百分率。具体地，在SYK依赖性TNF-α释放检验(即，由IgG刺激的释放)中，在0.3μM浓度下，本发明的化合物6和化合物151显示高于R406(一种广为人知的激酶抑制剂)的抑制百分率。此外，在SYK非依赖性TNF-α释放检验(即，LPS刺激的释放)中，本发明的化合物6显示高于或等于地塞米松(一种公知的TNF-α抑制剂)的抑制百分率。
例如，在0.3μM的浓度下，式(I)化合物152，即2-(4-羟基-4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(见表3，化合物151)显示以SYK依赖性方式对TNF-α释放具有更高的抑制百分率。将式(I)代表性化合物的百分率抑制数据示于表3中。
表3 TNF-α释放的抑制
n.d.，未测定
3、细胞存活率检验：RET抑制
测试了本发明化合物对各种人癌细胞系(如MTC-TT)的细胞存活率的影响，以阐释本发明的效能。
RET原癌基因编码受体酪氨酸激酶，用于接受细胞外信号分子源自神经胶质细胞系的神经元营养因子家族成员。RET功能丧失性突变与Hirschsprung’s疾病有关，而功能获得性突变则涉及人多种类型癌症的发生，包括甲状腺髓样瘤、多发性内分泌肿瘤2A(MEN2A)和2B(MEN2B)型、嗜铬细胞瘤和甲状旁腺增生。
方法
为对RET依赖的细胞存活率进行论述，使用甲状腺髓样癌细胞系(代表MEN2A的MTC-TT)来测试本发明化合物。在含有15％小牛血清(ThermoTM的HyclonTM)且补充有2mM L-谷氨酰胺的RPMI培养液中培养MTC-TT细胞。使细胞以5 x 104个细胞/100μL/孔的密度一式两份在96-孔板中生长1天，并用不同浓度的测试化合物处理。药物处理2天后，根据生产商的说明书使用单溶液96孔细胞增殖检测试剂盒(Cell Titer 96 Aqueous One SolutionReagent)(PromegaTM)测量MTC-TT的细胞存活率。除非另有说明，在Gradpad Prism 5中计算测试化合物的IC50值。
结果
本文中所使用的无抑制剂的对照样品显示对细胞存活率的50％抑制浓度(IC50)。
式(I)化合物在IC50浓度下显示大于100nM的抑制范围。特别是，在由RET引起的癌细胞系中，本发明的化合物8和化合物136显示高于公知的激酶抑制剂凡德他尼(Vandetinib)和舒尼替尼(Sunitinib)的抑制水平。
例如，式(I)化合物8，即(S)-2-(吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐，在IC50测量中显示比凡德他尼(AstraZenecaTM)和舒尼替尼(PfizerTM)(血管内皮生长因子受体(VEGFR)和表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂)高6倍的抑制率，见表4。将本发明的式(I)代表性化合物的IC50抑制数据示于表4中。
表4通过抑制RET激酶得到的细胞存活率
4、细胞存活率检验：FLT3-内部串联重复(ITD)-阳性细胞的抑制
在人急性白血病细胞系(MV4-11)中，测试本发明化合物对FLT3-ITD抑制的影响。FLT3主要在未成熟造血祖细胞以及成熟髓样细胞中表达，属于包括KIT、FMS和PDGFR等的III型受体酪氨酸激酶(RTK)家族。FLT3通过与配体(FL)结合而激活，导致激酶活性增加，从而激活包括STAT5、Ras和PI3激酶等的下游信号转导通路。
FLT3-ITD(内部串联重复)在近膜结构域中发生突变是在急性骨髓性白血病(AML)中最经常观察到的分子缺陷。FLT3-ITD诱导配体非依赖的二聚化、自磷酸化和组成型激活，并能转化造血细胞。临床上，已知FLT3-ITD增强白细胞增多症、增加原始细胞计数、增高复发率、降低无病存活率和较差的总存活率。因此，FLT3-ITD是AML治疗中极具吸引力的分子靶点。
方法
测试本发明化合物对MV4-11细胞的细胞存活率的影响。用于细胞存活率检验的表达人FLT3-ITD的MV4-11细胞得自美国模式培养物保藏所(ATCC，马纳萨斯，VA)。这种细胞系用含有10％小牛血清(BCS；HycloneTM)且补充有铁的RPMI培养液(HyCloneTM)培养。将MV4-11细胞以2 x 104个细胞的浓度接种在96-孔培养板中，并随后添加系列稀释的化合物。在37℃下培养72小时后，使用基于活细胞ATP定量的ATP精简1步检验(ATPLite lstep assay)(Perkin-ElmerTM)测量细胞的存活率。同时，平行进行细胞效价液态检验(CellTiterAqueous assay)(PromegaTM)作为正交检验。使用非线性回归计算IC50值，并将IC50值定义为：与未经处理的对照细胞相比，使经处理的细胞在荧光或吸光率降低50％所需的浓度(PrismTM软件)。
结果
式(I)化合物在IC50浓度下显示高于10nM的抑制。特别是，在由FLT3 ITD诱导的癌细胞系中，本发明的化合物8和化合物136显示高于凡德他尼和舒尼替尼的抑制水平。
例如，式(I)化合物8，即(S)-2-(吡咯烷-3-基氨基)-4-(4-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐，显示比舒尼替尼(辉瑞公司(Pfizer))和PKC-412(诺华公司(Novartis))高10-30倍的抑制(IC50)，其中舒尼替尼和PKC-412是公知的血管内皮生长因子受体(VEGFR)和外皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂。将式(I)代表性化合物(例如，化合物6和化合物136)的IC50抑制数据示于表5中。
表5 FLT3-ITD诱导的癌细胞系的细胞存活率
5、细胞存活率检验：JAK2抑制
测试本发明化合物对人红白血病细胞系(HEL)中JAK2抑制的影响，以阐释本发明化合物在细胞水平上的效能。由四种不同蛋白酪氨酸激酶JAK1、JAK2、JAK3和TYK2组成的Janus相关激酶(JAK)家族在细胞存活、增殖和分化中具有重要作用。JAK2基因的单一突变体编码缬氨酸-至-苯丙氨酸的取代体(V617F)，产生组成型激酶活性，并促成造血失调。通常在骨髓增生障碍性疾病(MPD)中检测到JAK2 V617F，所述骨髓增生障碍性疾病是一组造血干细胞克隆障碍性疾病，包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和特发性骨髓纤维化(IMF)，这些疾病全部都有可能转化为急性骨髓性白血病。JAK2 V617F被组成性磷酸化，且能够在没有细胞因子刺激时激活下游信号转导。
JAK2还是多种细胞因子和生长因子受体下游信号转导的关键传递者。具体而言，JAK2可磷酸化蛋白的信号转导与转录激活因子(STAT)家族。STAT磷酸化后，发生二聚化，并转移到核中，且在核中结合DNA并调节靶基因的表达。已知JAK2/STAT信号转导涉及驱动细胞周期调节和抗细胞凋亡通路。
方法
测试本发明化合物对HEL细胞存活率的影响。用于细胞存活率检验的表达人JAK2V617F的HEL细胞得自美国模式培养物保藏所(ATCC，马纳萨斯，VA)。这种细胞系用含有10％小牛血清(BCS；HycloneTM)且补充有铁的RPMI培养液(HyCloneTM)培养。将HEL细胞以2 x104个细胞的浓度接种在96孔培养板中，并随后添加系列稀释的化合物。在37℃下培养72小时后，使用基于活细胞ATP定量的ATP精简1步检验(Perkin-ElmerTM)测量细胞的存活率。同时，平行进行细胞效价液态检验(PromegaTM)作为正交检验。使用非线性回归计算IC50值，并将IC50值定义为：与未经处理的对照细胞相比，使经处理的细胞在荧光或吸光率降低50％所需的浓度(PrismTM软件)。
结果
式(I)化合物显示在IC50浓度下大于10nM的抑制范围。特别是，本发明的化合物137和化合物139显示的抑制水平高于索拉非尼(Sorafenib)(拜耳公司(Bayer))的抑制水平，其中索拉非尼是已知的癌细胞系中Raf、VEGFR和PDGFR的激酶抑制剂。
例如，在IC50测量中，化合物139，即2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮(见表6，化合物139)显示比索拉非尼(Bayer)高大约10倍的抑制。将本发明的式(I)代表性化合物的IC50抑制数据示于表6。
表6通过抑制JAK2激酶得到的细胞存活率
化合物编号 HEL(IC50nM) 化合物编号 HEL(IC50nM)
139 152 索拉非尼 ＞1000
137 89
6、通过LRRK2的抑制对LRRK2介导的多巴胺能细胞死亡的神经保护
帕金森氏症(PD)是一种在超过65岁的人群中大约1％发生的进行性神经退行性疾病。黑质中多巴胺能神经元的退化是主要的帕金森氏症病理表型，其导致多巴胺分泌下降。近十年来，已确定超过10个PARK基因座在染色体中的位置，并且已确认数个基因(如LRRK2、α-突触核蛋白(synuclein)，PINK1、Parkin和DJ-1)是与这些PARK基因座相对应的基因。
最近，已确认LRRK2是与PARK8基因座相对应的PD致病基因。因为由LRRK2突变导致的PD症状与特发性PD病例最相似的，因此LRRK2特别重要。LRRK2蛋白主要存在于细胞质中，但是也与线粒体外膜相关联。突变LRRK2的表达导致神经母细胞瘤细胞和小鼠皮质神经元中的凋亡性细胞死亡。LRRK2中的一些突变(例如G2019S)显示与PD有关。
方法
分别于37℃，将小鼠多巴胺能细胞系SN4741培养在含有10％FBS的DMEM中。将SN4741细胞(1.5×104/孔)接种于48孔培养板中，培养1天后，通过标准CaCl2沉淀法，用1μg的载体、LRRK野生型cDNA、LRRK G2019S cDNA的pcDNA3.1质粒进行瞬时转染。转染2天后，用100μM过氧化氢对细胞进行1天处理，然后利用结晶紫检验来测量细胞存活率。就化合物处理而言，以0.05μM、0.5μM和5μM加入测试化合物，且细胞先培养1小时后再加入过氧化氢。
结果
用含有LRRK2野生型或G2019S的质粒转染SN4741细胞，培养2天，接着加入100μM的过氧化氢处理24小时，以使它们对氧化应激敏感化。利用结晶紫检验细胞存活率。如表7中所示，在过氧化氢处理后，与未经氧化应激的细胞相比，用空载体转染的细胞中大约49％-51％的细胞死亡。过表达LRRK2野生型和G2019S的细胞显示细胞死亡率分别增加35.7％-40.4％和29.1％-30.8％，这与以前的数据一致：LRRK2野生型或G2019S的表达与氧化应激的结合协同地增加细胞死亡，且在G2019S中观察到最强的作用。
如表中所示7，在过表达LRRK2野生型或LRRK2 G2019S的SN4741细胞中，式(I)化合物6即2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮、和化合物102即4-(3，5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-5(6H)-酮，在0.05μM下显示对LRRK2相关细胞死亡的增加的保护效果，且与载体对照、DMSO或H2O2对照相比具有更高的保护效果。
表7细胞死亡百分率
N.T，无化合物、仅使用H2O2进行处理
7、体外激酶抑制
已在人体中确认了多达518种不同的激酶，它们作用于如脂质、碳水化合物、氨基酸、和核酸等的小分子。为了确定式(I)代表性化合物对已知激酶的抑制范围，在体外测试了化合物6对104种市售激酶(Ambit BiosciencesTM)的抑制作用。这104种激酶包括：磷酸化的ABL1(E255K)、磷酸化的ABL1(T315I)、磷酸化的ABL1、ACVR1B、ADCK3、AKT1、AKT2、ALK、AURKA、AURKB、AXL、BMPR2、BRAF、BRAF(V600E)、BTK、CDK11、CDK2、CDK3、CDK7、CDK9、CHEK1、CSF1R、CSNKID、CSNK1G2、DCAMKL1、DYRK1B、EGFR、EGFR(L858R)、EPHA2、ERBB2、ERBB4、ERK1、FAK、FGFR2、FGFR3、FLT1、FLT3、FLT4、GSK3B、IGF1R、IKK-α、IKK-β、INSR、JAK2(JH1结构域-催化)、JAK3(JH1结构域-催化)、JNK1、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、KIT(V559D、T670I)、LKB1、LRRK2、LRRK2(G2019S)、MAP3K4、MAPKAPK2、MARK3、MEK1、MEK2、MET、MKNK1、MKNK2、MLK1、MTOR、p38-α、p38-β、PAK1、PAK2、PAK4、PCTK1、PDGFRA、PDGFRB、PDPK1、PIK3C2B、PIK3CA、PIK3CG、PIM1、PIM2、PIM3、PKAC-α、PLK1、PLK3、PLK4、PRKCE、PYK2、RAF1、RET、RIOK2、ROCK2、RSK2、SNARK、SRC、SRPK3、SYK、TAK1、TGFBR1、TIE2、TRKA、TSSK1B、TYK2(JH1结构域-催化)、ULK2、VEGFR2、YANK3和ZAP70。
结果
将化合物6的抑制活性报告为对照样品的百分比，其中较小的数字表示更强的活性。表8总结了其活性被化合物6显著性抑制的29种不同的激酶。照惯例，低于对照样品的35％即被认为激酶活性受到显著性抑制，因为经常使用数值35％作为阈值。
表8低于对照样品35％的激酶抑制分析
激酶 ％抑制 激酶 ％抑制
ALK 29 LRRK2 2.2
AURKA 31 LRRK2(G2019S) 2.2
AXL 11 MLK1 2.8
BMPR2 0 PAK4 21
CSF1R 5.2 PDGFRB 19
FAK 34 PLK4 13
FLK3 28 PYK2 32
JAK2 3 RET 16
JAK3 4.4 RSK2 18
JNK1 4.8 SNARK 3.6
JNK2 25 SRPK3 2.6
JNK3 7 SYK 8.4
KIT 11 TAK1 1
KIT(D816V) 9.3 TYK2 16
LKB1 18
8、对癌细胞系的生长抑制
本发明化合物对各种癌细胞系显示有效的抑制作用。使用美国国立卫生研究院(NIH)的60种细胞系(美国卫生和人类服务部)对化合物进行测试。测试的癌细胞系包括：例如CCRF-CEM、HL-60(TB)、K-562、MOLT-4、RPMI-8226、SR、A549/ATCC、EKVX、HOP-62、HOP-92、NCI-H226、NCI-H23、NCI-H322M、NCI-H460、NCI-H522、COLO 205、HCC-2998、HCT-116、HCT-15、HT29、KM12、SW-620、SF-268、SF-295、SF-539、SNB-19、SNB-75、U251、LOX IMVI、MALME-3M、M14、MDA-MB-435、SK-MEL-28、SK-MEL-5、UACC-257、UACC-62、OVCAR-3、OVCAR-4、OVCAR-5、OVCAR-8、NCI/ADR-RES、SK-OV-3、786-0、A498、ACHN、CAKI-1、RXF 393、SN12C、TK-10、UO-31、PC-3、DU-145、MCF7、MDA-MB-231/ATCC、HS 578T、BT-549、T-47D、和MDA-MB-468。
结果
测试了化合物6在生长抑制(IC50)中的效力以及对所列出60种NIH细胞系的细胞毒性(LC50)。化合物6在nM到μM的浓度范围内显示的其效力。如表9中所示，化合物6抑制与白血病、肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、和乳腺癌相关的细胞系的增殖。
表9通过化合物6的细胞存活率及其抑制(摩尔浓度)
*NSCLC：非小细胞肺癌；GI：生长抑制；LC：致死浓度；TGI：全生长抑制。
尽管对本发明进行了具体展示和阐述以例示其实施例，但本领域技术人员应了解，在不背离由随附权利要求书所涵盖的本发明保护范围的情况下可于其中做出各种形式和细节的变化。

Claims (3)

1.一种化合物或者其药学上可接受的盐：
所述化合物选自：
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R,4R)-4-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R,2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3,5-二(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1R,2S)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-((1S,2R)-2-氨基环己氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
4-(3,5-二(三氟甲基)苯基氨基)-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；
2-(4-羟基哌啶-1-基)-4-(4-吗啉基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮；或
2-(4-羟基哌啶-1-基)-6-甲基-4-(3-(三氟甲基)苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮。
2.一种药物制剂，所述药物制剂包含根据权利要求1的化合物以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
3.权利要求1所述的有效量的化合物在制备组合物中的用途，所述组合物为有需要的受试者抑制SYK、PYK2、FAK、ZAP70、PIM1、FLT3、RET、JAK2、JAK3、LRRK2、LRRK2(G2019S)、ALK、AURKA、AXL、BMPR2、CSF1R、JNKl、JNK2、JNK3、KIT、KIT(D816V)、LKB1、MLK1、PAK4、PDGFRB、PLK4、RSK2、SNARK、SRPK3、TAK1、或TYK2信号转导。
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