CN102369187B - 用作wnt信号调节剂的n-(杂)芳基、2-(杂)芳基取代的乙酰胺类 - Google Patents

用作wnt信号调节剂的n-(杂)芳基、2-(杂)芳基取代的乙酰胺类 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式1和2的化合物采用这些化合物调节Wnt信号通路的方法，其中A1、A2、B、Y都代表环。

Description

用作WNT信号调节剂的N-(杂)芳基、2-(杂)芳基取代的乙酰胺类
相关申请的交叉参考
本申请要求了于2009年3月2日提交的美国临时申请号61/156,599和于2009年9月23日提交的美国临时申请号61/245,187的权益，将它们整体引入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及调节Wnt信号通路的组合物和方法。
背景
Wnt基因家族编码一大类与Int1/Wnt1原癌基因和果蝇(Drosophila)wingless(“Wg”)(一种果蝇Wnt1同源物)相关的分泌性蛋白(Cadigan等人(1997)Genes & Development 11：3286-3305)。Wnts在许多种组织和器官中表达并在许多发育进程中起主要作用，所述发育进程包括果蝇中的分节；线虫(C.elegans)中的内胚层发育；和哺乳动物的肢极性(limb polarity)的确立、神经管嵴的分化、肾形态形成、性别决定和脑发育(Parr，等人(1994)Curr.Opinion Genetics & Devel.4：523-528)。Wnt通路在动物发育中是主要的调节器，不管是胚胎形成期间还是在发育成熟的生物体中(Eastman，等人(1999)Curr Opin Cell Biol 11：233-240；Peifer，等人(2000)Science287：1606-1609)。
Wnt信号通过七跨膜区受体的Frizzled(“Fz”)家族来传导(Bhanot等人(1996)Nature 382：225-230)。Wnt配体与Fzd结合，并因此，活化细胞质蛋白质Disheveled(在人类和小鼠中的Dvl-1、2和3)(Boutros，等人(1999)Mech Dev 83：27-37)和磷酸化LRP5/6。从而产生信号，其阻止犰狳(Armadillo)/β(beta)-联蛋白(catenin)的磷酸化和降解，进而导致β-联蛋白的稳定(Perrimon(1994)Cell 76：781-784)。这种稳定是通过与轴蛋白(Axin)相关联的Dvl导致的(Zeng等人(1997)Cell 90：181-192)，轴蛋白是一种与各种蛋白质包括GSK3、APC、CK1和β-联蛋白一起形成β-联蛋白破坏复合体的支架蛋白。
无翅型(Wnt)Frizzled蛋白受体通路涉及重要的调节基因，该基因载有与原发癌相关的多态现象。在下游信号过程中，胞质β-联蛋白蓄积、转移至细胞核中，然后通过与其它转录因子复合来增强基因表达(Uthoff等人，Mol Carcinog，31：56-62(2001))。在缺乏Wnt信号情况下，游离的胞质β-联蛋白被掺入到由轴蛋白、腺瘤性结肠息肉病(APC)基因产物和糖原合酶激酶(GSK)-3β组成的复合体中。通过GSK-3β的轴蛋白、APC和β-联蛋白的连结(Conjunctional)磷酸化表明泛素途径的和被蛋白酶体降解的β-联蛋白Uthoff等人，Mol Carcinog，31：56-62(2001)；Matsuzawa等人，Mol Cell，7：915-926(2001)。
Disheveled(Dvl)是位于frizzled受体的下游和β联蛋白上游的Wnt信号的正性调节器。GSK-3磷酸化Wnt通路中的数种蛋白质，并且是β联蛋白下游调节中的工具。基因APC中的突变是散发性和遗传性结肠直肠肿瘤形成中的引发事件。APC突变体与肿瘤形成相关，因为该异常蛋白质是Wnt-信号级联的组成部分。该蛋白质产物含有充当β联蛋白的结合和降解位点的数个功能结构域。出现在β联蛋白的氨基端片断中的突变通常与磷酸化依赖性、泛素介导的降解有关，并因此稳定β联蛋白。当稳定的细胞质-联蛋白蓄积时，其转移至核中，与调节癌基因例如c-myc的表达的转录因子的Tcf/Lef高迁移率组相互作用。
已知Wnt/β-联蛋白信号在各种细胞类型中促进细胞存活，Orford等人，J Cell Biol，146：855-868(1999)；Cox等人，Genetics，155：1725-1740(2000)；Reya等人，Immunity，13：15-24(2000)；Satoh等人，Nat Genet，24：245-250(2000)；Shin等人，Journal of Biological Chemistry，274：2780-2785(1999)；Chen等人，J Cell Biol，152：87-96(2001)；Ioannidis等人，Nat Immunol，2：691-697(2001)。据认为Wnt信号通路还与肿瘤形成和/或恶化相联系(Polakis等人，Genes Dev，14：1837-1851(2000)；Cox等人，Genetics，155：1725-1740(2000)；Bienz等人，Cell，103：311-320(2000)；You等人，JCell Biol，157：429-440(2002))。Wnt信号通路的异常活化与许多与c-Myc的过表达或扩增相关的人类癌症有关(Polakis等人，Genes Dev，14：1837-1851(2000)；Bienz等人，Cell，103：311-320(2000)；Brown等人，Breast Cancer Res，3：351-355(2001)；He等人，Science，281：1509-1512(1998)；Miller等人，Oncogene，18：7860-7872(1999)。此外，c-Myc被鉴定为结直肠癌细胞中的β-联蛋白/Tcf的转录靶点之一(He等人，Science，281：1509-1512(1998)；de La Coste等人，Proc Natl Acad Sci USA，95：8847-8851(1998)；Miller等人，Oncogene，18：7860-7872(1999)；You等人，J Cell Biol，157：429-440(2002))。
因此，需要有调节Wnt信号通路从而治疗、诊断、预防和/或改善Wnt信号相关的病症的物质和方法。
发明内容
本发明涉及用于调节Wnt信号通路的组合物和方法。
在一方面，本发明提供了式(1)或(2)化合物和其溶剂化物、水合物、n-氧化物衍生物或药物前体：
Figure BDA0000088274920000031
或其生理学上可接受的盐；其中：
环E是任选取代的芳基或杂芳基；
A1和A2独立地是C1-5杂环、喹啉基或选自以下的杂芳基：
其中A1和A2的任何杂环可任选被-LC(O)R10取代；
其中氮可任选被氧化(参见，例如，表1的化合物156)；
B是苯并噻唑基、喹啉基或异喹啉基，它们各自任选被1-3个R6基团取代；
X1、X2、X3和X4独立地是CR7或N；
Y是苯基或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；
Z是芳基、C1-5杂环或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；
Y和Z各自任选被1-3个R6基团取代；
R1和R5独立地是H或C1-6烷基；
R2和R3独立地是H、C1-6烷基或卤素；
R4是卤素、氰基、C1-6烷氧基或C1-6烷基，其任选被卤素、烷氧基或氨基取代；
R6是氢、卤素、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)OR10、-C(O)R10、-C(O)NR8R9、C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；卤素、CN、-L-W、NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；
R7是H、卤素、C1-6烷氧基、-L-S(O)2R10、氰基、C1-6烷氧基、C1-6烷基，其任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；
R8和R9独立地是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；或R8和R9与它们所连接的原子一起可以形成环；
R10是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；
L是键或(CR2)1-4，其中R是H或C1-6烷基；
W是C3-7环烷基、C1-5杂环、芳基或杂芳基；
m是0-4；n是0-3；并且p是0-2。
在上面的式(1)中，Y是苯基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基，它们各自任选被1-2个R6基团取代。在其它的实例中，Z是苯基、吡啶基、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪基、哌啶基、吗啉基、吡唑或1，2，3，6-四氢吡啶，它们各自任选被1-2个R6基团取代。
在一个实施方案中，本发明提供了式(3)化合物：
Figure BDA0000088274920000051
其中R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、A2和R6如上述所定义。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(4)化合物：
Figure BDA0000088274920000052
其中R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、A1和Z如上述所定义。
在任何上述的式(1)、(2)、(3)或(4)中，A1和A2独立地是吗啉基、哌嗪基、喹啉基、
Figure BDA0000088274920000053
或选自下述基团的杂芳基：
Figure BDA0000088274920000061
其中A1和A2的任何杂环可任选被-C(O)CH3取代；其中R4和n如上述所定义。
在一些实例中，在任何上述的式(1)、(2)、(3)或(4)中的环E是苯基、吡啶基或嘧啶基，它们各自任选被R7取代，其中R7如上述所定义。在特别的实例中，R7可以是H、卤素、氰基或任选被卤素取代的C1-6烷基。
在另外的一个实施方案中，本发明提供了式(5)化合物：
Figure BDA0000088274920000062
其中A1是-C(O)CH3取代的哌嗪基、
Figure BDA0000088274920000063
或选自：
Figure BDA0000088274920000064
环E是苯基，或X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7；
X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CR11；
Z是6-元杂环或6-元杂芳基，各自含有1-2个氮杂原子且它们各自任选被1-2个R6基团取代；
R1、R2和R3是H或C1-6烷基；
R4和R6独立地是氢、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；
R10是C1-6烷基或-L-W；
L是键或(CR2)1-4，其中R是H或C1-6烷基；
W是C3-7环烷基；
R7和R11独立地是H、卤素、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10或任选被卤素取代的C1-6烷基；且m和n独立地是0-1。
在另一个实施方案中，对于式(5)，A1是-C(O)CH3取代的哌嗪基、
Figure BDA0000088274920000071
或者选自：
Figure BDA0000088274920000072
环E是苯基，或X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7；
X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CR11；Z是6-元杂环或6-元杂芳基，各自含有1-2个氮杂原子且它们各自任选被1-2个R6基团取代；R1、R2和R3是H或C1-6烷基；R4和R6独立地是氢、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、C1-6烷基，其任选被卤素、C2-6烯基或C2-6炔基取代；R10是C1-6烷基或-L-W；L是键或(CR2)1-4其中R是H或C1-6烷基；W是C3-7环烷基；R7和R11独立地是H、卤素、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10或任选被卤素取代的C1-6烷基；且m和n独立地是0-2。
在一些实例中，式(5)中的R10是C1-6烷基。在其它的实例中，式(5)中的Z是含有2个氮杂原子的6-元杂芳基或含有2个氮杂原子的6-元C4杂环。在另外其它的实例中，X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7。
在另外的一个实施方案中，本发明提供了式(6)化合物：
Figure BDA0000088274920000081
其中X1、X2、X3和X4选自N和CR7；X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CH；X9选自N和CH；Z选自苯基、吡嗪基、吡啶基和哌嗪基；其中Z的苯基、吡嗪基、吡啶基或哌嗪基各自任选被R6基团取代；R1、R2和R3是氢；m是1；R4选自氢、卤素、二氟甲基、三氟甲基和甲基；R6选自氢、卤素和-C(O)R10；其中R10是甲基；且R7选自氢、卤素、氰基、甲基和三氟甲基。
在任何上述的式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)中，R1、R2和R3可以是H。在其它的实例中，R4和R6独立地选自氢、卤素、三氟甲基、甲基和-C(O)CH3。
本发明的化合物的实例包括但不仅限于：4-(5-{2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰氨基}吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(喹啉-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[6-(喹啉-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-(6-甲磺酰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[6-(吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲基嘧啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[4-(吡啶-2-基)-1，3-噻唑-2-基]-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[4-(吡啶-4-基)-1，3-噻唑-2-基]-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[2-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；N-(异喹啉-3-基)-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-(6-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[4-(吡啶-4-基)苯基]-N-(喹啉-2-基)乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[5-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-2-基]乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[5-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(4-苯基吡啶-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[6-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噻唑-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(5-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-乙基吡啶-4-基)苯基]-N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)乙酰胺；2-[2-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；N-[4-(4-甲氧基苯基)-1，3-噻唑-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[4-(4-氟苯基)-1，3-噻唑-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[4-(3，4-二氟苯基)-1，3-噻唑-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；N-(5-苯基吡啶-2-基)-2-[4-(哒嗪-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(4-甲基苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(3-甲氧基苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(2-甲氧基苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(4-甲氧基苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(5-苯基吡嗪-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(吡啶-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]-N-(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；N-[5-(3-甲基苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(吡啶-3-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(吡啶-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(6-苯基哒嗪-3-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(4-苯基苯基)乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(2-苯基嘧啶-5-基)乙酰胺；2-[4-(1H-咪唑-1-基)苯基]-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺；N-(6-苯基吡啶-3-基)-2-[4-(哒嗪-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(4-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-{5-[(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-基]吡啶-2-基}-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[4-(吡啶-3-基)苯基]乙酰胺；N-(6-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)-2-[4-(哒嗪-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-(5-苯基嘧啶-2-基)乙酰胺；N-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N-甲基-2-[4-(吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(哒嗪-4-基)苯基]-N-[4-(吡啶-3-基)苯基]乙酰胺；N-(6-苯基哒嗪-3-基)-2-[4-(哒嗪-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(嘧啶-5-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[4-(哒嗪-4-基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[5-甲基-6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(吡啶-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基]-N-[5-(吡啶-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-[5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基]乙酰胺；N-[5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基]-2-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]-N-[5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[5-甲基-6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基]乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)吡啶-2-基]-2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[5-甲基-6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-[5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；N-(6-苯基吡啶-3-基)-2-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[6-(1-乙酰基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；4-(5-{2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰氨基}吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-1-甲酸甲酯；N-[6-(1-甲磺酰基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；2-[5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]-N-[5-(吡啶-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]-N-[5-(吡啶-2-基)吡啶-2-基]乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(5-苯基嘧啶-2-基)乙酰胺；N-[5-(3-氟苯基)嘧啶-2-基]-2-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；4-(5-{2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰氨基}吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-1-甲酸乙酯；4-(5-{2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰氨基}吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-1-甲酸丙-2-基酯；4-(5-{2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰氨基}吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-1-甲酸1-甲基环丙基酯；2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]-N-[6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[5-甲基-6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]乙酰胺；N-[6-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[6-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基]-2-[4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基]乙酰胺；N-[6-(3-氟苯基)吡啶-3-基]-2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；N-(6-苯基哒嗪-3-基)-2-[6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基]乙酰胺；2-[6-(2-甲基吡啶-4-基)吡啶-3-基]-N-(6-苯基哒嗪-3-基)乙酰胺；和N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)-2-(6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；N-(6-(1-(2-氨基-2-氧代乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；4-(5-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯；N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺；N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；N-(2-(3-氟苯基)嘧啶-5-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯；N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(6-(1-乙酰基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)-2-(6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸甲酯；2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(3-氧代哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺；4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺；N-(5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)-N-(5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-((3S，5R)-4-乙酰基-3，5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(4-(1-乙酰基哌啶-4-基)苯基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(4-(吡嗪-2-基)苯基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(4-(哒嗪-3-基)苯基)乙酰胺；2-(2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰氨基)-5-(吡嗪-2-基)吡啶1-氧化物；2′，3-二甲基-5-(2-氧代-2-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基氨基)乙基)-2，4′-联吡啶1′-氧化物；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(6-(吡嗪-2-基)吡啶-3-基)乙酰胺；N-(5-(4-异丁酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；(R)-N-(6-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；(S)-N-(6-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；(S)-N-(6-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；(R)-N-(6-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-((3S，5R)-4-乙酰基-3，5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；4-(6-(2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸甲酯；4-(6-(2-(3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸甲酯；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；4-(6-(2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸乙酯；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(4-丙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-(氰基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-氰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氯吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-(吡嗪-2-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲氧基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；(S)-N-(5-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；(R)-N-(5-(4-乙酰基-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；4-(6-(2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸异丙酯；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基嘧啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(5-氟嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(甲基磺酰基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(6-甲基嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(5-氟嘧啶-4-基)-3-甲基苯基)乙酰胺；2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺；2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；和2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺；或其生理学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，化合物选自：
Figure BDA0000088274920000161
在另一个实施方案中，其为具有式(10)或(11)的化合物：
Figure BDA0000088274920000162
或其生理学上可接受的盐；其中：
环E是任选取代的芳基或杂芳基；
A1和A2独立地是C1-5杂环、喹啉基或选自下列的杂芳基：
Figure BDA0000088274920000171
其中A1和A2的任一杂环可任选被-LC(O)R10取代；
其中氮可任选被氧化(参见，例如，表1的化合物156)。
B是苯并噻唑基、喹啉基或异喹啉基，它们各自任选被1-3个R6取代；
X1、X2、X3和X4独立地是CR7或N；
Y是苯基或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；
Z是芳基、C1-5杂环或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；
每一Y和Z任选被1-3个R6基团取代；
R1和R5独立地是H或C1-6烷基；
R2和R3独立地是H、C1-6烷基或卤素；
R4是卤素、氰基、C1-6烷氧基或C1-6烷基，其任选被卤素、烷氧基或氨基取代；
R6是氢、卤素、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)OR10、-C(O)R10、-C(O)NR8R9、C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；卤素、CN、-L-W、NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；
R7是H、卤素、C1-6烷氧基、-L-S(O)2R10、氰基、C1-6烷氧基、C1-6烷基，其任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；
R8和R9独立地是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；或R8和R9与它们所连接的原子一起可以形成环；
R10是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；
L是键或(CR2)1-4，其中R是H或C1-6烷基；
W是C3-7环烷基、C1-5杂环、芳基或杂芳基；
m是0-4；n是0-3；且p是0-2；和其溶剂化物、水合物、n-氧化物衍生物或药物前体。
在另一个实施方案中，为选自以下的式10和11化合物：N-(6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-2-(3-(吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；N-(6-苯基吡啶-3-基)-2-(3-(吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；N-(6-苯基吡啶-3-基)-2-(3-(哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺；2-(3-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(4-(哒嗪-3-基)苯基)乙酰胺；2-(3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(4-(吡嗪-2-基)苯基)乙酰胺；2-(3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-(吡嗪-2-基)吡啶-3-基)乙酰胺；2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-6-基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；2-(4-氰基-3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-苯基吡啶-3-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-氰基-3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺；2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺；N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)乙酰胺；和N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-氰基-2′-甲基-3，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了包含式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)的化合物和其生理学上可接受的载体的药物组合物。
在又一个方面，本发明提供了抑制细胞中Wnt信号的方法，其包括使细胞与有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)的化合物或其药物组合物接触。
在又一个方面，本发明提供了抑制细胞中Porcupine基因的方法，其包括使细胞与有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)的化合物或其药物组合物接触。
本发明还提供了在患有Wnt-介导的病症的哺乳动物中治疗、改善或预防Wnt-介导的病症的方法，其包括给哺乳动物施用治疗有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)的化合物或其药物组合物，并任选组合施用第二治疗剂。或者，本发明提供了式(1)、(2)、(3)、(4)、(5)或(6)的化合物任选与第二治疗剂组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗Wnt介导的病症。
本发明的化合物可以施用于例如患有Wnt-介导的病症的哺乳动物，该Wnt-介导的病症选自瘢痕瘤、纤维化如皮肤纤维化、特发性肺纤维化、肾间质纤维化和肝纤维化；蛋白尿、肾移植排斥、骨关节炎、帕金森病、黄斑囊样水肿(CME)如眼色素层炎相关的CME；视网膜病如糖尿病性视网膜病或早产儿视网膜病；黄斑变性和与异常的Wnt信号活性相关的细胞增殖性病症。
在特定的实例中，本发明的化合物可以单独使用或者与化疗剂组合使用来治疗细胞增殖性病症，包括但不限于结肠直肠癌、乳腺癌、头颈鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤、肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤(chondosarcoma)、尤因(Ewing’s)肉瘤、横纹肌肉瘤(rhabdomysarcoma)、脑肿瘤、维尔姆斯(Wilm’s)瘤、基底细胞癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌和前列腺癌。
定义
“烷基”是指一个基团和其它基团例如卤素取代的烷基和烷氧基的结构单元，并可以是直链的或支链的。本文所用的任选取代的烷基、烯基或炔基可以是任选被卤素取代的(例如，CF3)，或者可以具有一个或多个被杂原子如NR、O或S取代或替代的碳(例如，-OCH2CH2O-、烷基硫醇(alkylthiol)、硫代烷氧基(thioalkoxy)、烷基胺等)。
本文所用的“碳环”是指含有碳原子的饱和或部分不饱和的单环、稠合二环或桥连多环，其可以任选被例如＝O取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、亚环丙基、环己酮等。
本文所用的“杂环”是其中一个或多个环碳是杂原子的上文所定义的碳环。例如，杂环可以是含有N、O、S、-N＝、C(O)(参见例如，化合物141，表1)、-S-、-S(O)、-S(O)2-或-NR-其中R可以是氢、C1-4烷基或保护基团。杂环的实例包括但不限于吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶基酮、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基等。
如本文所用，任何取代基(例如，CH2)中的H原子包括所有合适的同位素变体，例如H、2H和3H。
“Wnt蛋白质”是Wnt信号通路组分(component)的配体，其与Frizzled受体结合从而活化Wnt信号。Wnt蛋白质的具体的实例包括至少19个成员，包括：Wnt-1(RefSeq.：NM_005430)、Wnt-2(RefSeq.：NM_003391)、Wnt-2B(Wnt-13)(RefSeq.：NM_004185)、Wnt-3(ReSeq.：NM_030753)、Wnt3a(RefSeq.：NM_033131)、Wnt-4(RefSeq.：NM_030761)、Wnt-5A(RefSeq.：NM_003392)、Wnt-5B(RefSeq.：NM_032642)、Wnt-6(RefSeq.：NM_006522)、Wnt-7A(RefSeq.：NM_004625)、Wnt-7B(RefSeq.：NM_058238)、Wnt-8A(RefSeq.：NM_058244)、Wnt-8B(RefSeq.：NM_003393)、Wnt-9A(Wnt-14)(RefSeq.：NM_003395)、Wnt-9B(Wnt-15)(RefSeq.：NM_003396)、Wnt-10A(RefSeq.：NM_025216)、Wnt-10B(RefSeq.：NM_003394)、Wnt-11(RefSeq.：NM_004626)、Wnt-16(RefSeq.：NM_016087))。而每个成员具有不同程度的序列同一性，各自含有23-24个保守的半胱氨酸残基，其显示高保守的空间结构(spacing)。McMahon，AP等人，Trends Genet.8：236-242(1992)；Miller J R.，Genome Biol.3(1)：3001.1-3001.15(2002)。对于本发明的目的而言，Wnt蛋白质及其活性变体是与Frizzled ECD或Frz ECD的CRD组分相结合的蛋白质。
“Wnt-介导的病症”是以异常的Wnt信号为特征的病症、疾患或疾病状态。在一具体的方面，异常的Wnt信号是超过在类似的非患病的细胞或组织中的Wnt信号水平的在疑似患病的细胞或组织中的Wnt信号水平。在一个具体方面，Wnt-介导的病症包括癌症。
术语“癌症”是指典型地以细胞生长/增殖失调为特征的哺乳动物的生理状况。癌症的实例包括但不限于：癌、淋巴瘤、胚细胞瘤和白血病。癌症的更具体的实例包括但不限于：慢性淋巴细胞白血病(CLL)、肺癌，包括非小细胞肺癌(NSCLC)、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肠的类癌(intestinal carcinoid)、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肝癌(肝细胞癌)、肝胚细胞瘤、食道癌、肺腺癌、间皮瘤、滑囊肉瘤、骨肉瘤、头颈鳞状细胞癌、青少年鼻咽血管纤维瘤、脂肉瘤、甲状腺癌、黑色素瘤、基底细胞癌(BCC)、髓母细胞瘤和硬纤维瘤。
“治疗”或“缓解”既指治疗性处理，又指预防性或防止性措施，其中目的是防止或减缓(减少)目标病理学疾病或疾患或病症。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些以及易于患病症的那些或需要防止(预防)病症的那些。当Wnt-介导的病症是癌症时，如果在根据本发明的方法接受治疗量的Wnt拮抗剂后患者就下列一种或多种情况而言表现出可观察到的和/或可测量的减轻或者缺失，则个体或哺乳动物被成功地“治疗”或者表现出肿瘤负荷减轻：癌细胞数量减少或者癌细胞缺失；肿瘤尺寸减小；癌细胞向周围器官浸润(包括癌症向软组织和骨的扩散)的抑制；肿瘤转移的抑制；在一定程度上肿瘤生长的抑制；和/或一种或多种与特定癌症相关的症状在一定程度上的缓解；发病率和死亡率降低，以及改善生活质量。就Wnt拮抗剂可阻止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞而言，其可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。这些体征或症状的减轻也可以被患者感觉到。
“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物以及动物园动物、体育动物或宠物，如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。在某些实施方案中，所述哺乳动物是人。
与一种或多种其它治疗剂“组合”施用包括同时(并行)和以任意顺序连续施用。
本文所用的术语“药物组合产品”是指通过混合或组合活性成分获得的产品，包括活性成分的固定组合和非固体组合。术语“固定组合”意指活性成分例如式(1)的化合物和共用活性剂(co-agent)以单个实体或剂量的形式被同时施用至患者。术语“非固定组合”意指活性成分例如式(1)的化合物和共用活性剂以分开的实体的形式被同时、并行或无特定时间限制地相继施用至患者，其中这类施用在患者体内提供治疗有效水平的活性成分。后者也应用于鸡尾酒疗法(cocktail therapy)，例如施用三种或更多种活性成分。
本文所用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，其在所用的剂量和浓度下对与其接触的细胞或哺乳动物是无毒的。生理学上可接受的载体常常是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；和/或非离子型表面活性剂，如
Figure BDA0000088274920000221
聚乙二醇(PEG)和
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化合物(例如，Wnt拮抗剂)的“有效量”是足以实现所述的具体目的的量。“有效量”可以凭经验和以与所述的目的有关的常规方式确定。
术语“治疗有效量”是指有效“治疗”个体或哺乳动物的Wnt-介导的病症的Wnt拮抗剂的量。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可以减少癌细胞的数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即，在一定程度上减慢或停止)癌细胞浸润入周围器官；抑制肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状。参见本文“治疗”的定义。就药物可阻止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞而言，其可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括：烷化剂，如塞替派和
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环磷酰胺；烷基磺酸酯，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙烯亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和trimethylolomelamine；番荔枝乙酰精宁类(acetogenins)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，
Figure BDA0000088274920000231
)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇；秋水仙碱类；桦木酸；喜树碱类(包括合成的类似物托泊替康
Figure BDA0000088274920000232
CPT-11(伊立替康，
Figure BDA0000088274920000233
)、乙酰基喜树碱、scopolectin和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；cryptophycins(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀；多卡米星(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；五加苷素(sarcodictyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥类，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，如烯二炔类抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Agnew，Chem Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))；dynemicin，包括dynemicin A；埃斯波霉素；以及新制癌菌素生色团和有关的色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、去甲柔红霉素(caminomycin)、嗜癌霉素、色霉素(chromomycinis)、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、
Figure BDA0000088274920000234
多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基(pyrrolino)-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类药物，如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺药(anti-adrenals)，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比山群；edatraxate；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfomithine；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；类美坦素(maytansinoids)，如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；
Figure BDA0000088274920000241
多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生；根霉素；sizofuran；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙基胺；单端孢菌素(尤其是T-2毒素、verracurinA、杆孢菌素(roridin)A和anguidine)；乌拉坦；长春地辛(
Figure BDA0000088274920000243
)；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；塞替派；紫杉烷类，例如
Figure BDA0000088274920000244
紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANETM不含聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)的白蛋白结合型(albumin-engineered)紫杉醇纳米粒制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Ill.)和
Figure BDA0000088274920000245
多西他赛(-Poulenc Rorer，Antony，法国)；chloranbucil；吉西他滨6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春碱
Figure BDA0000088274920000248
铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱
Figure BDA0000088274920000249
奥沙利铂；leucovovin；长春瑞滨
Figure BDA00000882749200002410
诺消灵；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素，如视黄酸；卡培他滨
Figure BDA0000088274920000251
以上药物中任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及以上药物中的两种或更多种的组合，如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙组合治疗的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和leucovovin组合治疗方案的缩写)。
此外，“化疗剂”可以包括用于调节、减少、阻断或抑制能促进癌症生长的激素的作用的抗激素药物；常常是系统性或全身性治疗的形式。它们本身可以是激素。实例包括抗雌激素药物和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括
Figure BDA0000088274920000252
他莫昔芬)、
Figure BDA0000088274920000253
雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮和
Figure BDA0000088274920000254
托瑞米芬；抗孕酮药物；雌激素受体减量调节物(ERD)；起压制或停止卵巢工作作用的物质，例如促黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂如
Figure BDA0000088274920000255
和
Figure BDA0000088274920000256
醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、醋酸布舍瑞林和曲普瑞林(tripterelin)；其它抗雄激素药物如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；和抑制芳香酶(其调节雌激素在肾上腺中的产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑类化合物、氨鲁米特、
Figure BDA0000088274920000257
醋酸甲地孕酮、
Figure BDA0000088274920000258
依西美坦、福美司坦(formestanie)、法倔唑、
Figure BDA0000088274920000259
伏氯唑、
Figure BDA00000882749200002510
来曲唑和
Figure BDA00000882749200002511
阿那曲唑。另外，所述化疗剂定义还包括双膦酸盐如氯膦酸盐(例如，
Figure BDA00000882749200002512
或
Figure BDA00000882749200002513
)、
Figure BDA00000882749200002514
依替膦酸盐、NE-58095、
Figure BDA00000882749200002515
唑来膦酸/唑来膦酸盐、
Figure BDA00000882749200002516
阿仑膦酸盐、帕米膦酸盐、
Figure BDA00000882749200002518
替鲁膦酸盐或利塞膦酸盐；以及曲沙他滨(一种1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖中涉及的信号通路中的基因表达例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)的那些；疫苗，如疫苗和基因疗法疫苗，例如
Figure BDA00000882749200002521
疫苗、
Figure BDA00000882749200002522
疫苗和
Figure BDA00000882749200002523
疫苗；
Figure BDA00000882749200002524
拓扑异构酶1抑制剂；
Figure BDA00000882749200002525
rmRH；二甲苯磺酸拉帕替尼(一种ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016)；和以上药物中任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
实施本发明的方式
本发明涉及调节Wnt信号通路的组合物和方法。
在一方面，本发明提供了具有式(1)或(2)的化合物：
Figure BDA0000088274920000261
或其生理学上可接受的盐；其中：环E是任选被取代的芳基或杂芳基；A1和A2独立地是C1-5杂环、喹啉基或选自下述基团的杂芳基：
其中A1和A2的任一杂环可任选被-LC(O)R10取代；B是苯并噻唑基、喹啉基或异喹啉基，它们各自任选被1-3个R6取代；X1、X2、X3和X4独立地是CR7或N；Y是苯基或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；Z是芳基、C1-5杂环或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基；Y和Z各自任选被1-3个R6取代；R1和R5独立地是H或C1-6烷基；R2和R3独立地是H、C1-6烷基或卤素；R4是卤素、氰基、C1-6烷氧基或C1-6烷基，其任选被卤素、烷氧基或氨基取代；R6是氢、卤素、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)OR10、-C(O)R10、-C(O)NR8R9、C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可以任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；卤素、CN、-L-W、NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；R7是H、卤素、C1-6烷氧基、-L-S(O)2R10、C1-6烷基，其任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)NR8R9、OR10；-L-S(O)2R10或-L-S(O)2NR8R9；R8和R9独立地是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；或R8和R9与它们所连接的原子一起可以形成环；R10是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自可任选被卤素、氨基、羟基、烷氧基或氰基取代；L是键或(CR2)1-4其中R是H或C1-6烷基；W是C3-7环烷基、C1-5杂环、芳基或杂芳基；m是0-4；n是0-3；且p是0-2。
在另一个方面，Y是苯基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基，它们各自任选被1-2个R6基团取代且R6如本发明公开内容中所定义。
在另一个方面，Z是苯基、吡啶基、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪基、哌啶基、吗啉基、吡唑或1，2，3，6-四氢吡啶，它们各自任选被1-2个R6基团取代且R6如本发明公开内容中所定义。
在另一个方面，A1和A2独立地是吗啉基、哌嗪基、喹啉基、
Figure BDA0000088274920000271
或选自下述基团的杂芳基：
其中A1和A2的任一杂环可任选被-C(O)CH3取代；R4、m、n和p如本发明公开内容中所定义。
另外一方面是式(3)化合物：
Figure BDA0000088274920000281
其中R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、A2和R6如本发明公开内容中所定义。
另外一方面是式(4)化合物：
Figure BDA0000088274920000282
其中R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、A1和Z如本发明公开内容中所定义。
在另一个方面，环E是苯基、吡啶基或嘧啶基，它们各自任选被R7取代。
在另一个方面，R7是H、卤素、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10或任选被卤素取代的C1-6烷基。
另外一方面是式(5)化合物：
Figure BDA0000088274920000283
其中A1是被-C(O)CH3取代的哌嗪基、
Figure BDA0000088274920000284
或选自：
Figure BDA0000088274920000291
环E是苯基，或X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7；X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CR11；Z是6-元杂环或6-元杂芳基，各自含有1-2个氮杂原子且它们各自任选被1-2个R6基团取代；R1、R2和R3是H或C1-6烷基；R4和R6独立地是氢、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10、-C(O)NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、C1-6烷基，其任选被卤素、C2-6烯基或C2-6炔基取代；R10是C1-6烷基或-L-W；L是键或(CR2)1-4，其中R是H或C1-6烷基；W是C3-7环烷基；R7和R11独立地是H、卤素、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10或任选被卤素取代的C1-6烷基；且m、n和p独立地是0-2。
在另一个方面，A1是被-C(O)CH3取代的哌嗪基、
Figure BDA0000088274920000292
或者选自：
Figure BDA0000088274920000293
且m是0-2；n是0-2；且p是0-1。
在另一方面，X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7。
另外一方面是式(6)化合物：
Figure BDA0000088274920000301
其中X1、X2、X3和X4选自N和CR7；X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CH；X9选自N和CH；Z选自苯基、吡嗪基、吡啶基和哌嗪基；其中Z的苯基、吡嗪基、吡啶基或哌嗪基各自任选被R6基团取代；R1、R2和R3是氢；m是1；R4选自氢、卤素和甲基；R6选自氢、卤素和-C(O)R10；其中R10是甲基；且R7选自氢、甲基和三氟甲基。
在另一个方面，R1、R2和R3是H；且R4和R6独立地选自氢、卤素、甲基和-C(O)CH3。
在上面的各式中，任何不对称碳原子均可以以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。因此所述化合物可以以异构体的混合物形式或者以纯异构体的形式存在，例如以纯对映体或非对映体的形式存在。本发明还包括本发明的化合物的可能的互变异构体。
本发明也包括本发明化合物或其药学上可接受的盐的所有适当的同位素变体。本发明化合物或其药学上可接受的盐的同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但原子质量不同于自然界中通常发现的原子质量的原子所替代的化合物。可引入本发明的化合物和其药学上可接受盐中的同位素的实例包括但不仅限于氢、碳、氮和氧的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、35S、18F、36Cl和123I。本发明化合物和其药学上可接受的盐的某些同位素变体，例如引入放射性同位素如3H或14C的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。
在特定的实例中，因为它们易于制备和检测，可以使用2H、3H和14C同位素。在其它的实例中，用同位素如2H取代可以因更好的代谢稳定性而获得一些治疗优势，如增加体内半衰期或减少剂量需求。本发明化合物或其药学上可接受的盐的同位素变体通常可以通过常规方法使用适当试剂的合适的同位素变体来制备。化合物的同位素变体有可能改变化合物的代谢归宿和/或使物理性质如疏水性等等产生小的改变。同位素变体有可能增强效力和安全性，提高生物利用度和半衰期，改变蛋白结合，改变生物分布，增加活性代谢物的比例和/或减少反应性的或毒性的代谢物的形成。
本发明还提供抑制细胞中Wnt-信号的方法，该方法包括使细胞与有效量的Wnt拮抗剂接触。在一个实施方案中，所述细胞包含在哺乳动物中，且施用的量是治疗有效量。在一个实施方案中，Wnt信号的抑制进一步导致细胞生长的抑制。在另一实施方案中，细胞是癌症细胞。
采用本领域技术人员已知的方法测定细胞增殖的抑制。例如，测定细胞增殖的便利测定法是CellTiter-GloTM发光细胞生存测定(CellTiter-GloTMLuminescent Cell Viability Assay)，其可商购自Promega(Madison，Wis.)。该测定法基于对存在的ATP定量来测量培养物中存活细胞的数目，ATP是代谢活性细胞的指示物。参见Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88，U.S.专利6,602,677。该测定法可以在96或384孔板中进行，使得其能够用于自动高通量筛选(HTS)。参见Cree等人(1995)AntiCancerDrugs 6：398-404。该测定方法包括将单一试剂(
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试剂)直接加到培养的细胞中。这导致细胞溶解并产生通过萤光素酶反应而产生的发光信号。该发光信号与存在的ATP的量成正比，ATP的量与培养物中存在的存活细胞的数目直接成正比。可以用发光计或CCD照像显像装置记录数据。发光输出量以相对光单位(RLU)表示。还可以采用本领域已知的集落形成测定法测量细胞增殖的抑制。
此外，本发明提供了在患有Wnt-介导的病症的哺乳动物中治疗Wnt-介导的病症的方法，该方法包括将治疗有效量的Wnt拮抗剂施用至哺乳动物。在一个实施方案中，所述病症是与Wnt信号活性的异常例如增加的表达相关的细胞增殖性病症。在另一个实施方案中，病症是由Wnt蛋白质的表达增加引起的。在另外的一个实施方案中，细胞增殖性病症是癌症，例如，结肠癌症、结肠直肠癌、乳腺癌、与各种HSC相关病症有关的癌症，例如白血病和各种其它血液相关癌症，及与神经元增殖性病症相关的癌症包括脑瘤如神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、许旺细胞瘤(Schwannomas)、垂体瘤、原发性神经外胚瘤(PNET)、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、松果体区肿瘤，和皮肤癌症包括基底细胞癌和鳞状细胞癌。
通过施用Wnt拮抗剂的细胞增殖性病症的治疗导致下列一种或多种的可观察到的和/或可测量的减少或缺失：癌细胞数量减少或者癌细胞缺失；肿瘤尺寸减小；癌细胞向周围器官浸润(包括癌症向软组织和骨的扩散)的抑制；肿瘤转移的抑制；在一定程度上肿瘤生长的抑制；和/或一种或多种与特定癌症相关的症状在一定程度上的缓解；发病率和死亡率降低，以及改善生活质量。就Wnt拮抗剂可阻止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞而言，其可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。这些体征或症状的减轻也可以被患者感觉到。
用于评价疾病的成功治疗和改善的上述参数可通过医生熟悉的常规方法容易地测量。对于癌症治疗，例如可以通过评价疾病恶化的时间(TDP)和/或测定响应率(RR)来测量效力。可以通过分期试验、骨扫描、测试钙水平和确定向骨扩散的其它酶来测定转移。还可以进行CT扫描以发现向骨盆和该区域中的淋巴结的扩散。胸透和通过已知方法测定肝酶水平分别用于发现向肺和肝的转移。用于监测疾病的其它常规方法包括经直肠超声检查(TRUS)和经直肠穿刺针活检(TRNB)。在一个具体实施方案中，Wnt拮抗剂的施用降低肿瘤负荷(例如减小癌症的尺寸或严重程度)。在另外的一个具体实施方案中，Wnt拮抗剂的施用杀死癌症。
药理学和用途
本发明涉及调节Wnt信号通路的组合物和方法。在特定实施方案中，本发明提供了通过调节Wnt通路的活化抑制Wnt信号转导活性并进而治疗、诊断、预防和/或缓解Wnt信号相关的病症的组合物和方法。
用于开发Wnt信号相关的病症的疗法的当前模式依赖于靶向β-cat或β-cat的Wnt通路组分下游。然而，最近的研究表明细胞外配体-受体相互作用组分的抑制有效降低致肿瘤性，即使启动Wnt信号的事件可能已经在下游发生。此外，不活动的frizzled受体(Frz7胞外域)向癌细胞系(SK-CO-1)中的转染恢复正常β-联蛋白表型。由于纯合子APC-/-突变，该细胞系具有活化的Wnt信号。当转移体内时，此类细胞也没有证实肿瘤形成。Vincan等人，Differentiation 2005；73：142-153。这表明在胞外水平的Wnt信号抑制能够下调由下游细胞内Wnt信号通路组分的活化而引起的Wnt信号。这进一步表明Wnt信号通路的抑制剂可以用于治疗任何Wnt-介导的病症，不管Wnt信号被活化的具体方式。
与Wnt信号活动相关的病症
在编码不同的Wnt信号通路组分的基因中的体细胞突变可以导致Wnt信号通路的失常。例如，已经将异常的Wnt信号活动与非小细胞肺癌(NSCLC)[You等人，Oncogene 2004；23：6170-6174]、慢性淋巴细胞白血病(CLL)[Lu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2004；101：3118-3123]、胃癌[Kim等人，Exp.Oncol.2003；25：211-215；Saitoh等人，Int.J.Mol.Med.2002；9：515-519]、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)[Rhee等人，Oncogene 2002；21：6598-6605]、结肠直肠癌[Holcombe等人，J.Clin.Pathol-Mol.Pathol.2002；55：220-226]、卵巢癌[Ricken等人，Endocrinology 2002；143：2741-2749]、基底细胞癌(BCC)[Lo Muzio等人，Anticancer Res.2002；22：565-576]和乳腺癌中的Wnt配体过表达相联系。此外，已经将不同的Wnt配体调节分子如sFRP和WIF-1的减少与乳腺癌[Klopocki等人，Int.J.Oncol.2004；25：641-649；Ugolini等人，Oncogene 2001；20：5810-5817；Wissmann等人，J.Pathol 2003；201：204-212]、膀胱癌[Stoehr等人，LabInvest.2004；84：465-478；Wissmann等人，见上]、间皮瘤[Lee等人，Oncogene 2004；23：6672-6676]、结直肠癌[Suzuki等人，Nature Genet..2004；36：417-422；Kim等人，Mol.Cancer Ther.2002；1：1355-1359；Caldwell等人，Cancer Res.2004；64：883-888]、前列腺癌[Wissman等人，见上]、NSCLC[Mazieres等人，Cancer Res.2004；64：4717-4720]和肺癌[Wissman等人，见上]相联系。
已经将由Frz-LRP受体复合体不同组分的过表达引起的异常Wnt信号和某些癌症相联系。例如，已经将LRP5过表达和骨肉瘤相联系[Hoang等人，Int.J.Cancer 2004；109：106-111]，同时已经将Frz过表达与癌症如前列腺癌[Wissmann等人，见上]、HNSCC[Rhee等人，Oncogene 2002；21：6598-6605]、结肠直肠癌[Holcombe等人，见上]、卵巢癌[Wissman等人，见上]、食管癌[Tanaka等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998；95：10164-10169]和胃癌[Kirikoshi等人，Int.J.Oncol.2001；19：111-115]相联系。另外，已经将Wnt信号通路组分如Dishevelled的过表达与癌症如前列腺癌[Wissman等人，见上]、乳腺癌[Nagahata等人，Cancer Sci.2003；94：515-518]、间皮瘤[Uematsu等人，Cancer Res.2003；63：4547-4551]和宫颈癌[Okino等人，OncolRep.2003；10：1219-1223]相联系。已经将Frat-1过表达与癌症如胰腺癌、食管癌、宫颈癌、乳腺癌和胃癌相联系[Saitoh等人，Int.J.Oncol.2002；20：785-789；Saitoh等人，Int.J.Oncol 2001；19：311-315]。已经将轴蛋白功能缺失(LOF)突变与肝细胞癌[Satoh等人，Nature Genet.2000；24：245-250；Taniguchi等人，Oncogene 2002；21：4863-4871]和髓母细胞瘤[Dahmen等人，Cancer Res.2001；61：7039-7043；Yokota等人，Int.J.Cancer 2002；101：198-201]相联系。
此外，已经将许多癌症与通过“降解复合体”的破裂(如在β-联蛋白中的功能获得性突变或在APC中的功能缺失性突变)而激活β-联蛋白相联系。β-联蛋白降解的减少导致细胞中含有更大量的功能β-联蛋白，其然后导致目标基因转录的增加，致使异常的细胞增殖。例如，已经将编码β-联蛋白的基因中的突变(即CTNNB1)与癌症如胃癌[Clements等人，Cancer Res.2002；62：3503-3506；Park等人，Cancer Res.1999；59：4257-4260]、结肠直肠癌[Morin等人，Science 1997；275：1787-1790；Ilyas等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997；94：10330-10334]、肠的类癌[Fujimori等人，Cancer Res.2001；61：6656-6659]、卵巢癌[Sunaga等人，Genes Chrom.Cancer 2001；30：316-321]、肺腺癌[Sunaga等人，见上]、子宫内膜癌[Fukuchi等人，CancerRes.1998；58：3526-3528；Kobayashi等人，Japan.J.Cancer Res.1999；90：55-59；Mirabelli-Primdahl等人，Cancer Res.1999；59：3346-3351]、肝细胞癌[Satoh等人，见上.；Wong等人，Cancer 2001；92：136-145]、肝胚细胞瘤[Koch等人，Cancer Res.1999；59：269-273]、髓母细胞瘤[Koch等人，Int.J.Cancer 2001；93：445-449]、胰腺癌[Abraham等人，Am.J.Pathol 2002；160：1361-1369]、甲状腺癌[Garcia-Rostan等人，Cancer Res.1999；59：1811-1815；Garcia-Rostan等人，Am.J.Pathol 2001；158：987-996]、前列腺癌[Chesire等人，Prostate 2000；45：323-334；Voeller等人，Cancer Res.1998；58：2520-2523]、黑色素瘤[Reifenberger等人，Int.J.Cancer 2002；100：549-556]、毛母质瘤[Chan等人，Nature Genet.1999；21：410-413]、维尔姆斯瘤[Koesters等人，J.Pathol 2003；199：68-76]、胰腺母细胞瘤[Abraham等人，Am.J.Pathol 2001；159：1619-1627]、脂肪肉瘤[Sakamoto等人，Arch.Pathol.Lab Med.2002；126：1071-1078]、青少年鼻咽血管纤维瘤[Abraham等人，Am.J.Pathol.2001；158：1073-1078]、硬纤维瘤[Tejpar等人，Oncogene 1999；18：6615-6620；Miyoshi等人，Oncol.Res.1998；10：591-594]、滑膜肉瘤[Saito等人，J.Pathol 2000；192：342-350]相联系。而且已经将功能缺失性突变与癌症如结肠直肠癌[Fearon等人，Cell 1990；61：759-767；Rowan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2000；97：3352-3357]、黑色素瘤[Reifenberger等人，Int.J.Cancer 2002；100：549-556；Rubinfeld等人，Science 1997；275：1790-1792]、髓母细胞瘤[Koch等人，Int.J.Cancer2001；93：445-449；Huang等人，Am.J.Pathol 2000；156：433-437]和硬纤维瘤[Tejpar等人，Oncogene 1999；18：6615-6620；Alman等人，Am J.Pathol.1997；151：329-334]相联系。
与异常的Wnt信号相关的其它病症包括但不仅限于骨质疏松症、骨关节炎、多囊肾病、糖尿病、精神分裂症、血管疾病、心脏病、不形成肿瘤的增生疾病和神经变性疾病如阿尔茨海默病。
癌症和白血病中的异常Wnt信号
通过β-联蛋白的稳定，异常的Wnt通路活化在许多结肠直肠癌的肿瘤形成中起重要作用。据估计80％的结肠直肠癌(CRC)隐匿有肿瘤抑制物APC的失活突变，其致使连续的Wnt信号。此外，越来越多的证据表明Wnt-通路活化可能与黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、和其他癌症有关。
失调的Wnt信号通路活化还是白血病的先兆。实验证据表明骨髓和淋巴谱系的致癌生长依赖于Wnt信号。Wnt信号已牵涉于调节慢性和急性髓样白血病。来自慢性髓性白血病患者的粒细胞-巨噬细胞祖细胞(GMP)和来自对治疗耐受的患者的原始细胞危象(blast crisis)细胞都显示活化的Wnt信号。此外，在体外，通过轴蛋白的异位表达抑制β-联蛋白降低白血病细胞的更替(replating)能力，表明慢性髓性白血病前体依赖于Wnt信号来生长和更新。Wnt过表达还导致GMP获得长期自我更新的干细胞样性质，这支持了以下假设：Wnt信号对血液谱系的正常发育是重要的，但异常的Wnt信号导致祖细胞的转变。
最近的研究还表明淋巴瘤形成也可能受Wnt信号的影响。Wnt-16在载有E2A-PbX易位的前B细胞白血病细胞系中过表达，表明自分泌Wnt活性可以促成癌发生。McWhirter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：11464-11469(1999)。Wnt信号在正常的B细胞前体的生长和生存中的作用进一步支持该观点。Reya等人，Immunity 13：15-24(2000)；Ranheim等人，Blood 105：2487-2494(2005)。还已经提出对Wnt的自分泌依赖调节多发性骨髓瘤的生长，多发性骨髓瘤是一种末端分化的B细胞的癌症。Derksen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101：6122-6127(2004)。还发现原发性骨髓瘤和骨髓瘤细胞系稳定表达(即独立于降解复合体)。虽然在Wnt信号组分不存在突变，但是数种组分包括Wnt-5A和Wnt-10B的过表达表明肿瘤依赖性和癌症自我更新不一定依赖于Wnt信号通路组分中所出现的突变，而是仅依赖于通路自身的组成性活化。
多能干细胞向骨髓祖细胞的自我更新转变伴随着Wnt信号的下调。Reya等人，Nature 423：409-414(2003)。类似地，在淋巴祖细胞中的β-联蛋白的稳定表达恢复多重分化选择，虽然此类细胞缺乏通常与任一细胞类型相关的标记。Baba等人，Immunity 23：599-609(2005)。
在神经病症中的异常的Wnt信号
已经观察到通过β-联蛋白活化Wnt信号能够增加神经祖细胞(progenitors)的循环和扩增，并且该信号的缺失能够导致祖细胞间隔(progenitor compartment)的缺失。Chenn等人，Science 297：365-369(2002)；Zechner等人，Dev.Biol.258：406-418(2003)。正如正常的Wnt信号活化可以促进神经元干细胞的自我更新，异常的Wnt通路活化在神经系统中可以是致瘤的。支持该结论的实验证据是髓母细胞瘤的发现，髓母细胞瘤是一种小脑的小儿脑瘤，包含β-联蛋白和轴蛋白两者的突变，因此表明髓母细胞瘤来自响应不受控制的Wnt信号而发生转变的原始的祖细胞。Zurawel等人，Cancer Res.58：896-899(1998)；Dahmen等人，Cancer Res.61：7039-7043(2001)；Baeza等人，Oncogene 22：632-636(2003)。因此，强烈地表明本发明的Wnt拮抗剂对Wnt信号的抑制可以有效治疗不同的神经元增殖性疾病，包括脑瘤如神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、许旺细胞瘤、垂体瘤、原发性神经外胚瘤(PNET)、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、松果体区瘤和非癌性神经纤维瘤病。
造血干细胞中的Wnt信号
在来自全能造血干细胞(HSC)的谱系定型祖细胞的过程中，造血干细胞致使产生循环系统中的成熟血细胞。也显然地，Wnt信号促进自我更新和HSC的维持，并且功能失调的Wnt信号对于由HSC导致的各种疾病如白血病和各种其他血液相关的癌症负有责任。Reya等人，Nature 434：843-850(2005)；Baba等人，Immunity 23：599-609(2005)；Jamieson等人，M.Engl.J.Med.351(7)：657-667(2004)。由于干细胞转化成定型的骨髓祖细胞，Wnt信号正常地被减少。Reya等人，Nature 423：409-414(2003)。
不仅Wnt配体自身通过HSC产生，而且Wnt信号也是活化的，因此表明自分泌或旁分泌调节。Rattis等人，Curr.Opin.Hematol.11：88-94(2004)；Reya等人，Nature 423：409-414(2003)。另外，β-联蛋白和Wnt3a都促进小鼠HSC和祖细胞自我更新，而且在体外实验中将Wnt-5A应用至人类造血祖细胞促进非分化的祖细胞的扩增。Reya等人，，见上.；Willert等人，Nature 423：448-452(2003)；Van Den Berg等人，Blood 92：3189-3202(1998)。
除了HSC之外，显然，胚胎干细胞、表皮干细胞和上皮干细胞应答或依赖于Wnt信号来维持在未分化、增殖的状态下。Willert等人，见上；Korinek等人，Nat.Genet.19：379-383(1998)；Sato等人，Nat.Med.10：55-63(2004)；Gat等人，Cell 95：605-614(1998)；Zhu等人，Development 126：2285-2298(1999)。因此，本发明的Wnt拮抗剂对Wnt信号的抑制可以治疗由功能失调的造血作用引起的疾病，如白血病和各种血液相关的癌症，如急性、慢性、淋巴性和髓性白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增殖性病症。这些包括骨髓瘤、淋巴瘤(例如，霍奇金氏和非霍奇金氏)慢性和非进行性贫血、进行性和具有征候的血细胞缺乏、真性红细胞增多症、自发性或原发性血小板增多症、特发性骨髓纤维化、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、套细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症(macroglobinemia)。
衰老中的Wnt信号
Wnt信号通路还可能在衰老和年龄相关的病症中起决定性作用。如在Brack A S，等人，Science，317(5839)：807-10(2007)中报道，观察到来自年老小鼠的肌肉干细胞随它们开始增殖而从肌源性谱系转化为纤维发生的谱系。该种转化与年老的肌源性祖细胞中的规范的Wnt信号通路活性的增加相关，并且可以被Wnt抑制剂所抑制。此外，来自年老小鼠的血清的组分与Frizzled蛋白质结合，并且可以解释年老细胞中升高的Wnt信号。注射Wnt3A到年轻的再生肌肉中减少增殖，并增加结缔组织的沉积。
在使用加速衰老的Klotho小鼠模型的研究中(其中确定Klotho蛋白质与Wnt蛋白质在物理上相互作用并抑制Wnt蛋白质)，已经将Wnt信号通路与衰老过程相关联。Liu H，等人，Science，317(5839)：803-6(2007)。在细胞培养模型中，Wnt-Klotho相互作用导致Wnt生物活性的抑制，而来自Klotho-缺损动物的组织和器官显示Wnt信号增强的证据。
施用和药物组合物
一般而言，本发明的化合物通过本领域已知的任何通常的且可接受的方式以治疗有效量单独施用或与一种或多种治疗剂组合施用。治疗有效量可在宽范围内变化，这取决于疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其它因素。一般而言，表明约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量全身性地获得令人满意的结果。较大的哺乳动物例如人的推荐日剂量在约0.5mg至约100mg的范围内，其例如以每天至多4次的分剂量或以迟缓形式被方便地施用。用于口服施用的合适的单位剂型包含约1-50mg活性成分。
本发明的化合物可以通过任何常规的途径以药物组合物的形式被施用；特别是：肠内施用，如口服施用，例如以片剂或胶囊剂的形式施用；胃肠外施用，例如以注射液或混悬剂的形式施用；或者局部施用，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式施用，或者以鼻用形式或栓剂形式施用。
包含游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明的化合物以及至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物可以通过混合、制粒、包衣方法以常规方式制备。例如，口服组合物可以是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分和a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬酯酸、它的镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂，还有c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、tragamayth、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和或聚乙烯吡咯烷酮；且如果需要，d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或它的钠盐，或泡腾合剂；和/或e)吸收剂，着色剂，矫味剂和增甜剂。可注射用组合物可以是等张水溶液或混悬液，且栓剂可以从含脂肪的乳液或混悬液制备。
组合物可以是已灭菌的和/或包含辅料，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们也可包含其它治疗上有价值的物质。经皮肤应用的适合制剂包含有效量的本发明化合物和载体。载体可包括可吸收的药理学上可接受的溶剂来帮助通过宿主的皮肤。例如，经皮肤的装置是绷带的形式，其包括被衬部件、含有化合物和任选的载体的贮库、用于在延长时间段内使化合物以可控的和预订的速度递送到宿主的皮肤的任选的速率控制阻挡层，和将装置固定在皮肤上的手段(means)。还可以使用基质透皮制剂。局部应用(例如应用到皮肤和眼)的合适制剂可以是本领域已知的水溶液、软膏剂、乳膏剂或凝胶剂。这些可以包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本发明的化合物可以以治疗有效量和一种或多种治疗剂组合施用(药物组合产品)。例如，在本发明化合物和化学剂组合使用时，可以发生协同效应。当本发明化合物与其它治疗组合施用时，当然共同施用的化合物的剂量将由使用的共用药物(co-drug)的类型、使用的特定药物、被治疗的病症等等来决定。
本发明还提供了药物组合产品，例如药盒，其包含a)第一药物，其是游离形式或药学上可接受的盐形式的本文所公开的本发明的化合物，和b)至少一种共用药物。所述药盒可以包含其施用说明书。
制备本发明的化合物的方法
通常，具有式(1)的化合物可以通过如下面的实施例中所述的合成方法中的任何一种来制备。在所述的反应中，如果反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、硫基(thio)或羧基是终产物中所需要的，可对这些基团进行保护以避免它们参与不希望的反应。可根据标准实践(参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wileyand Sons，1991)使用常规保护基团。在所述的合成方法中使用的合适的离去基团包括卤素离去基团(例如氯或溴)和本领域技术人员已知的其它常规离去基团。
本发明的化合物(包括它们的盐)也可以以水合物的形式获得，或者它们的晶体可以包含例如用于结晶的溶剂(以溶剂合物的形式存在)。通常能将盐转化成游离形式的化合物，例如通过用合适的碱性物质例如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物如碳酸钾或氢氧化钠处理而将盐转化成游离形式的化合物。通过用合适的酸(例如盐酸等)处理可以将碱加成盐形式的本发明的化合物转化成相应的游离酸。鉴于游离形式的新化合物与其盐形式(包括例如在所述新化合物的纯化或鉴定中可以作为中间体使用的那些盐)之间的密切关系，任何对游离化合物的指称在适宜时应理解为也指称相应的盐。
具有成盐基团的本发明的化合物的盐可以以本身已知的方式制备。因此通过用酸或者用合适的阴离子交换试剂处理可以获得式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)化合物的酸加成盐。可以由具有碱性氮原子的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物例如与有机酸或无机酸以酸加成盐形式形成本发明的化合物的药学上可接受的盐。
合适的无机酸包括但不限于氢卤酸如盐酸、硫酸或磷酸。合适的有机酸包括但不限于羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸如谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、苯二酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷磺酸或乙烷磺酸、2-羟基乙烷磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸或其它有机质子酸如抗坏血酸。对于分离或纯化目的而言，也可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途而言，仅使用药学上可接受的盐或游离化合物(在以药物制剂的形式应用时)。
通过于0-80℃在合适的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、含水二氧六环等)中用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理可以由本发明的化合物的N-氧化物制备未氧化形式的本发明的化合物。
本发明的化合物的前药衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备(例如，关于进一步的细节，参见Saulnier等人，(1994)，Bioorganicand Medicinal Chemistry Letters，第4卷，1985页)。例如，可以通过使未衍生化的本发明的化合物与合适的氨甲酰化试剂(例如，氯甲酸1，1-酰氧基烷基酯(1，1-acyloxyalkylcarbanochloridate)、碳酸对硝基苯基酯(para-nitrophenyl carbonate)等)反应来制备适宜的前药。
可以用本领域普通技术人员已知的方法制备本发明的化合物的被保护的衍生物。可用于产生和除去保护基团的技术的详细描述可在T.W.Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry”，第3版，John Wileyand Sons，Inc.，1999中找到。
可以通过以下方法将本发明的化合物制备成其单独的立体异构体：使化合物的外消旋混合物与光学活性拆分剂反应，形成一对非对映异构体化合物，分离该非对映体并回收光学纯的对映体。可以使用本发明的化合物的共价非对映体衍生物或者通过使用可离解的复合物(例如结晶性非对映体盐)进行对映体的拆分。非对映体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解性、反应性等)，利用这些差异可以将其容易地分离。可以通过分步结晶、色谱法或者通过基于溶解性差异的分离/拆分技术分离非对映体。然后通过任何不会导致外消旋化的实用方法回收光学纯对映体以及拆分试剂。可用于从其外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细的描述可在Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions”，John Wiley And Sons，Inc.，1981中找到。
概括而言，本发明的化合物可以通过实施例中所述的方法制备；和
(a)任选将本发明的化合物转化为药学上可接受的盐；
(b)任选将本发明的化合物的盐形式转化为非盐形式；
(c)任选将本发明的化合物的未氧化的形式转化为药学上可接受的N-氧化物；
(d)任选将本发明的化合物的N-氧化物形式转化为其未氧化的形式；
(e)任选从异构体的混合物中拆分出本发明的化合物的单个异构体；
(f)任选将未衍生化的本发明的化合物转化为药学上可接受的前药衍生物；和
(g)任选将本发明的化合物的前药衍生物转化为其未衍生化的形式。
在没有具体描述原料的制备的情况下，所述化合物是已知的或者能用类似于本领域中已知的方法或如下面的实施例中所公开的那样制备。本领域技术人员应当理解的是，上面的转化仅仅是制备本发明的化合物的方法的代表，能够类似地使用其它已知的方法。下面的实施例举例说明了本发明的化合物的制备，它们是对本发明的进一步举例，不用于限制本发明。
实施例1
N-(6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(3)
Figure BDA0000088274920000431
在搅拌下，向2-(4-(吡啶-4-基)苯基)乙酸3-1(45mg，0.21mmol)、6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-胺3-2(36mg，0.20mmol)和DIEA(32mg，0.25mmol)的DMF(0.5mL)混合物中加入HATU(84mg，0.22mmol)。将溶液搅拌2小时后，将其通过反相HPLC进行纯化，得到化合物3，为白色固体。MS m/z 376.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ12.60(s，1H)，8.70(m，2H)，7.87(m，2H)，7.78(m，2H)，7.72(d，1H，J＝8.8Hz)，7.63(d，1H，J＝2.8Hz)，7.58(m，2H)，7.11(dd，1H，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz)，3.96(s，2H)，3.86(s，3H).
实施例2
2-(3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(4-苯基噻唑-2-基)乙酰胺(24)
Figure BDA0000088274920000441
步骤1：在室温下，向3-甲基-4-溴苯甲酸24-1(2.15g，10mmol)的甲苯(15mL，无水的)的混悬液中加入SOCl2(1.4mL，～1.9eq)和3滴DMF。将混合物搅拌下回流2小时。冷却至室温后，将反应混合物在减压下浓缩。将得到的残留物溶解在THF(25mL，无水的)中，然后在0℃下加入NEt3(2.2mL)和TMSCHN2(8.2mLx2.0M，在己烷中)。搅拌12小时后将混合物倾入饱和的NaHCO3溶液(60mL)中，并用乙酸乙酯萃取(3x60mL)。将合并的萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发得到粗中间体24-3。将该粗中间体分小份地加入到在搅拌下回流的NEt3(4.2mL)、PhCO2Ag(0.70g)的叔丁醇(50mL)和甲苯(20mL)溶液中。回流1小时后，将反应混合物冷却至室温。将活性碳粉末加入到反应混合物中，然后将其通过硅藻土(Celite)过滤。将滤液用乙酸乙酯(100mL)稀释并用盐水洗涤。用Na2SO4干燥后，将得到的溶液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶色谱法采用DCM-EtOAc(30∶1)作为洗脱液进行纯化，得到叔丁酯24-4。
步骤2：将酯24-4(810mg，2.84mmol)溶解在DCM(16mL)中，并加入三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂DCM并将残留物溶解在乙酸乙酯(50mL)中并将该有机溶液用Na2CO3溶液(10％水溶液，50mL)萃取。将水相用HCl溶液酸化至pH2并将沉淀物用乙酸乙酯(50mL)萃取。用Na2SO4干燥后，蒸发有机溶剂得到酸24-5。
步骤3：向化合物24-5(92mg，0.4mmol)、4-苯基-2-氨基噻唑24-6(76mg，0.44mmol)和HATU(167mg，0.44mmol)的DMF(1.6mL)混合物中加入DIEA(100uL，0.58mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将其在乙酸乙酯(50mL)和水(40mL)中重新分配。将有机相用Na2SO4干燥并蒸发溶剂。将残留物通过硅胶色谱法纯化得到化合物24-7。
步骤4：在氩气下，将化合物24-7(33mg，0.085mmol)、2-甲基吡啶-4-基硼酸(23mg，0.17mmol)、Pd(PPh3)4(9.8mg，0.0085mmol)和K3PO4(36mg，0.17mmol)的二氧六环(0.6mL)和水(0.06mL)混合物在96℃下搅拌过夜。将其冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(50mL)稀释，并将有机溶液用水(50mLx2)洗涤，并用Na2SO4干燥。蒸发后，将得到的残留物通过反相HPLC纯化得到化合物24，为白色固体。MS m/z400.14(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ12.58(s，1H)，8.56(d，1H，J＝5.6Hz)，7.92(m，2H)，7.63(s，1H)，7.46(m，2H)，7.36(m，1H)，7.33(m，4H)，7.24(d，1H，J＝8.0Hz)，3.83(s，2H)，2.56(s，3H)，2.27(s，3H).
实施例3
2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺(26)
Figure BDA0000088274920000451
步骤1：向封闭管中，加入2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶(2.2g，10mmol)、2-(4-碘苯基)乙酸乙酯26-1(2.9g，10mmol)、Pd(PPh3)4(0.231g，0.2mmol)、甲苯(30mL)、乙醇(10mL)和2M Na2CO3(10mL)。将反应混合物用氮气冲洗并在90℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将反应混合物用200mL乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，然后通过旋转蒸发处理至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸乙酯26-2，为油状物。MS m/z 256.1(M+1).
步骤2：将2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸乙酯26-2(1.81g，7.1mmol)、LiOH(0.17g，7.1mmol)的THF(30mL)、甲醇(10mL)和H2O(10mL)的混合物在60℃下搅拌1小时。冷却至0℃后，在0℃下将混合物用1N HCl中和，然后通过旋转蒸发处理至干，得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸26-3。产物不需要进一步纯化用于下一步骤使用。MS m/z228.1(M+1).
步骤3：在室温下，将2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸26-3(50mg，0.2mmol)、5-苯基吡啶-2-胺(41mg，0.24mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(114mg，0.3mmol)的1.5mLDMF混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(DIEA，104μL，0.6mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺26，为白色固体。MS m/z 380.17(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.84(s，1H)，8.60(d，1H，J＝2.4Hz)，8.42(d，1H，J＝6.4Hz)，8.10(d，1H，J＝8.8Hz)，8.04(dd，1H，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz)，7.70(m，2H)，7.65(m，2H)，7.51(m，1H)，7.44(m，5H)，7.33(m，1H)，3.76(s，2H)，2.46(s，3H).
实施例4
N-(5-苯基吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺(37)
Figure BDA0000088274920000471
步骤1：向封闭管中加入4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)苯基硼酸37-2(310mg，1.5mmol)、4-溴哒嗪37-1(158mg，1mmol)、Pd(PPh3)4(70mg，0.1mmol)、甲苯(4mL)、乙醇(1mL)和2M Na2CO3(1.5mL)。将反应混合物冒泡通入氮气2分钟并在90℃下搅拌10小时。冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，然后通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸乙酯37-3，为淡黄色固体。MS m/z 243.1(M+1)
步骤2：将2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸乙酯37-3(150mg，0.62mmol)和NaOH(120mg，3mmol)混合在二氧六环(1.5mL)和H2O(1.5mL)中，并在80℃下搅拌1小时。冷却至0℃后，将混合物用1N HCl水溶液处理至pH 1，并通过旋转蒸发处理至干。将粗产物用乙酸乙酯(100mLx3)萃取。将合并的有机相浓缩得到2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸37-4，为淡黄色固体。MS m/z 215.1(M+1)
步骤3：在室温下，向2-(4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸37-4(43mg，0.2mmol)、5-苯基吡啶-2-胺(41mg，0.24mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(117mg，0.3mmol)的DMF(1mL)混合物中加入DIEA(104μL，0.6mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到N-(5-苯基吡啶-2-基)-2-2(4-哒嗪-4-基)苯基)乙酰胺37，为白色固体。MS m/z 367.1(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ9.45-9.44(m，1H)，9.22(dd，1H，J1＝1.2Hz，J2＝11.2Hz)，8.44(d，1H，J＝2.4Hz)，8.29(d，1H，J＝8.8Hz)，7.92(dd，1H，J1＝16.8Hz，J2＝2.4Hz)，7.70-7.66(m，3H)，7.56-7.51(m，4H)，7.46-7.43(m，2H)，7.39-7.35(m，1H)，3.85(s，2H).
实施例5
2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺(46)
Figure BDA0000088274920000481
步骤1：向含有3-三氟甲基-4-溴苄腈46-1(5.0g，20mmol)的烧瓶中加入水(20mL)，并滴加浓硫酸(20mL)。将反应混合物在100℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将反应混合物倾入二氯甲烷(150mL)和水(100mL)中。将混合物用碳酸钠粉末中和至pH 9。将水层用1N盐酸水溶液酸化至pH 1，并用乙酸乙酯萃取(50mLx3)。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后通过旋转蒸发处理至干，得到4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸46-2，为白色固体。MS m/z 269.1(M+1)
步骤2：在0℃下，向4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸46-2(1.35g，5mmol)的THF(10mL)溶液中缓慢地加入1M BH3·THF的THF溶液(20mL)。将混合物升至室温并搅拌4小时。在0℃下，将反应用水淬灭。蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯(100mL)中，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)甲醇46-3，为白色固体。MS m/z 237.1(M+1)
步骤3：在10℃下，向(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)甲醇46-3(956mg，3.75mmol)和三乙胺(455mg，4.5mmol)的THF(9mL)溶液中，缓慢地加入甲磺酰氯(430mg，3.75mmol)的THF(1mL)溶液。将混合物搅拌1小时。将固体过滤并用乙醚洗涤。蒸发滤液得到甲磺酸4-溴-3-(三氟甲基)苄酯46-4，为淡黄色固体。MS m/z 233.1(M+1)
步骤4：向甲磺酸4-溴-3-(三氟甲基)苄酯46-4(1.295g，3.75mmol)的乙醇(10mL)溶液中，加入氰化钾(364mg，5.6mmol)的水(2mL)溶液。将混合物回流2小时。将混合物冷却至室温后，蒸发所有溶剂，并将残留物再溶解在二氯甲烷(50mL)中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩至干，得到2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙腈46-5，为深褐色油状物，其直接用于下一步骤。MS m/z 264.1(M+1)
步骤5：向含有2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙腈46-5(880mg，3.3mmol)的烧瓶中加入水(4.5mL)，并滴加浓硫酸(4.5mL)。将反应混合物在115℃下搅拌4小时。冷却至室温后，将反应混合物倾入水(100mL)中。将得到溶液用碳酸钠粉末中和至pH 12，用1N HCl水溶液处理至pH约2，用二氯甲烷萃取(50mLx3)。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后通过旋转蒸发处理至干，得到2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酸46-6，为淡黄色固体。MS m/z 283.1(M+1)
步骤6：在室温下，向2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酸46-6(71mg，0.25mmol)、5-苯基吡啶-2-胺(64mg，0.38mmol)和HATU(148mg，0.38mmol)的DMF(1mL)混合物中加入DIEA(125μL，0.75mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺46-7，为淡黄色固体。MS m/z 435.2(M+1)
步骤7：向封闭管中加入2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺46-7(73mg，0.17mmol)、2-甲基吡啶-4-基硼酸(35mg，0.255mmol)、Pd(PPh3)4(12mg，0.017mmol)、甲苯(0.8mL)、乙醇(0.2mL)和2MNa2CO3(0.5mL)。将反应混合物用氮气冒泡通入2分钟并在90℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过反相HPLC纯化得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺46，为白色固体。MS m/z 448.1(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.48-8.45(m，2H)，8.28(d，1H，J＝8.4Hz)，7.92(dd，1H，J1＝8.4Hz，J2＝2.4Hz)，7.75(s，1H)，7.61(dd，1H，J1＝8.0Hz，J2＝1.2Hz)，7.54-7.52(m，2H)，7.47-7.43(m，2H)，7.39-7.37(m，1H)，7.28(d，1H，J＝7.6Hz)，7.14(s，1H)，7.10(d，1H，J＝5.2Hz)，3.86(s，2H)，2.59(s，3H).
实施例6
2-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺(53)
Figure BDA0000088274920000501
步骤1：在室温下，向2-(4-碘苯基)乙酸53-1(816mg，3.14mmol)、5-苯基吡啶-2-胺53-2(534mg，3.14mmol)和HATU(1.19g，3.14mmol)的DMF(1mL)溶液中加入DIEA(1.57mL，9.42mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-碘苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺53-3，为淡黄色固体。MS m/z 415.2(M+1)
步骤2：在干燥氩气气氛下，将2-(4-碘苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺53-3(41mg，0.1mmol)、咪唑(10mg，0.15mmol)、磷酸钾(41mg，0.3mmol)、CuI(2mg，0.01mmol)和L-脯氨酸(2.3mg，0.02mmol)的DMSO(0.5mL)混合物在100℃下搅拌10小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到2-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-N-(5-苯基吡啶-2-基)乙酰胺53，为白色固体。MS m/z 355.1(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.47-8.46(m，1H)，8.29(d，1H，J＝8.8Hz)，7.99(s，1H)，7.92(dd，1H，J1＝16.8Hz，J2＝2.4Hz)，7.88(s，1H)，7.55-7.53(m，2H)，7.49-7.38(m，6H)，7.29(s，1H)，7.23(s，1H)，3.83(s，2H).
实施例7
N-(5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(65)
Figure BDA0000088274920000511
步骤1：在室温下，向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸65-1(300mg，1.3mmol)、5-碘吡啶-2-胺(344mg，1.6mmol)和HATU(590mg，1.6mmol)的DMF(8mL)溶液中加入DIEA(503mg，3.9mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3溶液洗涤，然后用盐水洗涤。将有机相用MgSO4干燥。除去溶剂并将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化得到N-(5-碘吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺65-2，为类白色固体。MS m/z 430.1(M+1).
步骤2：将N-(5-碘吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺65-2(20mg，0.046mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(13.5mg，0.07mmol)和Pd(PPh3)4(5mg，0.004mmol)混合在甲苯(3mL)/乙醇(1mL)/Na2CO3(2M，1mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌10小时。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物溶解在DMSO中。通过过滤除去无机盐。将在DMSO中的粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺65，为类白色固体。MS m/z370.2(M+1).
实施例8
2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(6-吗啉代吡啶-3-基)乙酰胺(73)
Figure BDA0000088274920000521
在室温下，将2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸73-1(40mg，0.18mmol)、6-吗啉代吡啶-3-胺(40mg，0.22mmol)和HATU(80mg，0.21mmol)的2mL DMF混合物中加入DIEA(104μL，0.6mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到标题化合物73，为白色固体。MS m/z 389.19(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.30(s，1H)，8.82(d，1H，J＝6.4Hz)，8.57(d，1H，J＝2.4Hz)，8.35(m，1H)，8.24(dd，1H，J1＝6.4Hz，J2＝1.6Hz)，8.19(dd，1H，J1＝10.0Hz，J2＝2.8Hz)，8.02(m，2H)，7.63(m，2H)，7.42(d，2H，J＝9.6Hz)，3.87(s，2H)，3.75(m，4H)，3.66(m，4H)，2.80(s，3H).
实施例9
N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)-2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺(74)
步骤1：在0℃下，向(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)甲醇74-1(1.57g，10mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中缓慢地滴加亚硫酰氯(3.6mL，50mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，用二氯甲烷(100mL)和水(100mL)稀释，用碳酸钠粉末中和至pH 8。再将水层用二氯甲烷(50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干，得到2-氯-5-(氯甲基)-3-甲基吡啶74-2，为淡黄色固体，其直接用于下一步骤。MS m/z 176.1(M+1)
步骤2：将2-氯-5-(氯甲基)-3-甲基吡啶74-2(1.64g，9.4mmol)、氰化钠(1.85g，37mmol)和15-冠-5(0.1mL，0.47mmol)的乙腈(30mL)混合物在40℃下搅拌4小时。将混合物冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯(100mL)中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩至干，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙腈74-3，为淡红色固体，其不需要进一步纯化用于下一步骤。MS m/z 167.1(M+1)
步骤3：向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙腈74-3(1.12g，6.75mmol)的烧瓶中加入水(9.0mL)并滴加浓硫酸(9.0mL)。将反应混合物在100℃下搅拌4小时。冷却至室温后，将反应混合物倾入水(100mL)中。将得到的溶液用碳酸钠粉末中和至pH约为3，用乙酸乙酯萃取(50mLx3)。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥然后通过旋转蒸发处理至干，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸74-4，为淡黄色固体，其直接用于下一步骤。MS m/z 186.1(M+1)
步骤4：在室温下，向2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸74-4(222mg，1.2mmol)、5-苯基吡啶-2-胺(336mg，1.8mmol)和HATU(684mg，1.8mmol)的DMF(5mL)混合物中加入DIEA(600μL，3.6mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺74-5，为暗黄色固体。MS m/z 356.1(M+1).
步骤5：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺74-5(54mg，0.15mmol)、4-(三丁基锡烷基)哒嗪(55mg，0.15mmol)和Pd(PPh3)4(16mg，0.015mmol)的反应管中加入DMF(0.8mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)-2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)乙酰胺74，为白色固体。MS m/z 400.1(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ9.42(dd，1H，J1＝4.8Hz，J2＝1.2Hz)，9.29(dd，1H，J1＝10.4Hz，J2＝1.2Hz)，8.56(d，1H，J＝1.6Hz)，8.46(d，1H，J＝1.6Hz)，8.28(d，1H，J＝8.8Hz)，7.90(dd，1H，J1＝17.6Hz，J2＝2.4Hz)，7.72(d，1H，J＝1.6Hz)，7.70(dd，1H，J1＝10.8Hz，J2＝2.0Hz)，7.44-7.39(m，1H)，7.32-7.30(m，1H)，7.25-7.21(m，1H)，7.09-7.04(m，1H)，3.82(s，2H)，2.44(s，3H).
实施例10
2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(86)
Figure BDA0000088274920000541
步骤1：向封闭管中加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺86-1(2.2g，10mmol)、2-碘哌嗪86-2(2.06g，10mmol)、Pd(PPh3)4(577mg，0.5mmol)、甲苯(70mL)、乙醇(15mL)和2M Na2CO3(15mL)。将反应混合物用氮气冒泡2分钟并在90℃下搅拌10小时。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在二氯甲烷(200ml)中，并用1MHCl水溶液(50mL)处理。将两层分离并将水层用10％NaOH水溶液处理调整pH至约为13。将得到的混悬液用乙酸乙酯萃取(100mLx3)。将合并的有机相用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3，为白色固体。MS m/z 173.1(M+1)；1H NMR400MHz(DMSO-d6)δ9.12(d，1H，J＝1.6Hz)，8.73(m，1H)，8.60(m，1H)，8.46(d，1H，J＝2.8Hz)，8.12(dd，1H，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz)，6.55(d，1H，J＝8.8Hz)，6.46(s，2H).
步骤2：向封闭管中加入5-溴-2-氯-3-甲基吡啶86-4(4.69g，22.72mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)的乙醚溶液86-5(50mL，25mmol)、Pd(dba)2(262mg，0.45mmol)、Q-phos(320mg，0.45mmol)和THF(75mL)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在70℃下搅拌4小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯86-6，为红色油状物。MS m/z 242.1(M+1)
步骤3：将2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯86-6(7.8g，32mmol)和TFA(32mL)的DCM(32mL)混合物在室温下搅拌3小时。用碳酸钠将溶液调节至pH约为12，并用二氯甲烷萃取。将水相用1N HCl水溶液酸化至pH 3并搅拌15分钟。将混悬液用二氯甲烷萃取(100mL X3)。将合并的有机相用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后干燥得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸86-7，为淡黄色固体。MS m/z 186.1(M+1)；1H NMR 400MHz(CD3Cl)δ8.17(d，1H，J＝2.0Hz)，7.55(d，1H，J＝2.0Hz)，3.63(s，2H)，2.38(s，3H).
步骤4：将2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸86-7(3.0g，16.2mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(2.80g，16.2mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(4g，19.44mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(324mg，3.24mmol)的DMF(45mL)混合物在室温下搅拌10小时。将反应混合物过滤除去固体并将滤液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(6氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺86-8，为淡黄色固体。MS m/z 340.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.09(s1H)，9.31(d，1H，J＝1.6Hz)，9.11(d，1H，J＝1.6Hz)，8.72(m，1H)，8.63(m，1H)，8.51(dd，1H，J1＝8.6Hz，J2＝2.4Hz)，8.21(m，2H)，7.76(d，1H，J＝1.6Hz)，3.82(s，2H)，2.33(s，3H).
步骤5：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺86-8(3.34g，9.4mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(3.47g，9.4mmol)和Pd(PPh3)4(1g，0.94mmol)的反应烧瓶中加入DMF(45mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。将其冷却至室温后，将1N KF水溶液加入到混合物中，并搅拌15分钟。通过过滤收集形成的固体，并通过硅胶快速色谱法纯化，采用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(化合物86)，为白色固体。MS m/z 397.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.13(s 1H)，9.31(d，1H，J＝1.6Hz)，9.11(d，1H，J＝1.6Hz)，8.72(m，1H)，8.62(d，1H，J＝2.8Hz)，8.53(m，3H)，8.24(d，1H，J＝8.8Hz)，7.73(d，1H，J＝1.6Hz)，7.42(s，1H)，7.35(dd，1H，J1＝4.8Hz，J2＝0.8Hz)，3.87(s，2H)，2.53(s，3H)，2.34(s，3H).
实施例11
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(111)
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-硝基吡啶111-1(2.3g，11.4mmol)、1-(哌嗪-1-基)乙酮111-2(1.6g，12.8mmol)、三乙胺(4.8mL，34.2mmol)和DMSO(5mL)。将反应物加热至120℃并搅拌16小时。将反应冷却至室温。通过旋转蒸发除去三乙胺。将残留物在15mL乙酸乙酯中研磨。通过过滤收集固体并用少量乙酸乙酯洗涤，得到1-(4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-3，为淡黄色固体。MS m/z 251.1(M+1).
步骤2：向圆底烧瓶中加入1-(4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-3(2.6g，10.4mmol)、Pd/C(0.5g)和甲醇(50mL)。通过连接氢气球将反应在氢气气氛下搅拌4小时。将反应用氮气冲洗并通过滤过除去固体。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化得到1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4，为类白色固体。MS m/z 221.1(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ7.62(d，1H，J＝2.8Hz)，7.20(dd，1H，J1＝8.8Hz，J2＝2.8Hz)，6.41(d，1H，J＝8.8Hz)，5.47(s，2H)，3.55(m，4H)，2.93(t，2H，J＝5.2Hz)，2.86(t，2H，J＝5.2Hz)，2.03(s，3H).
步骤3：在封闭管中、在氩气下，将2-氯-5-碘苄腈111-5(1.30g，5mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)111-6的乙醚溶液(11mL，5.5mmol)、Pd(dba)2(144mg，0.25mmol)、Q-phos(178mg，0.25mmol)和THF(20mL)的混合物在70℃下搅拌18小时。冷却至室温后，将溶剂蒸发并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-氯-3-氰基苯基)乙酸叔丁酯111-7，为棕色油状物。MS m/z 252.1(M+1).
步骤4：在氩气气氛下，将2-(4-氯-3-氰基苯基)乙酸叔丁基酯111-7(572mg，2.28mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶111-8(870mg，2.28mmol)和Pd(PPh3)4(220mg，0.2mmol)和DMF(9mL)的混合物在120℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和的Na2S2O3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯111-9，为黄色油状物。MS m/z 309.2(M+1).
步骤5：将2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯111-9(656mg，2.13mmol)和TFA(2mL)的DCM(2mL)混合物在室温下搅拌3小时。用Na2CO3将溶液调节至pH约为12，并用二氯甲烷萃取。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH 3，并搅拌15分钟。蒸发溶剂并将留下的固体用20％甲醇的乙酸乙酯溶液萃取并过滤除去不溶物。将滤液通过旋转蒸发浓缩至干，得到含有2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸111-10的粘性固体，其直接用于下一步骤。MS m/z 253.1(M+1).
步骤6：向酸111-10(150mg上述得到粗品，其含有大约25mg，0.1mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(22mg，0.1mmol)111-4、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，40mg，0.105mmol)的混合物中加入DMF(1mL)和二异丙基乙胺(DIEA，38.7mg，0.3mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将其在水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)中重新分配。将有机相用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将油状残留物通过反相制备HPLC和硅胶色谱法纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(化合物111)，为白色固体。MS m/z 455.3(M+1).
实施例12
N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(118)
步骤1：在室温下，向2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酸46-6(128mg，0.5mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(95mg，0.55mmol)和o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，214mg，0.55mmol)的DMF(2mL)混合物中加入二异丙基乙胺(DIEA，250μL，1.5mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺118-1，为淡橙色固体。MS m/z 438.2(M+1)
步骤2：在氩气气氛下，向含有2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺118-1(53mg，0.12mmol)、4-(三丁基锡烷基)哒嗪(54mg，0.14mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.012mmol)的反应管中加入DMF(0.6mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。将为溶液的粗产物直接通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)-2-(4-(哒嗪-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺118，为白色固体。MS m/z 437.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.14(s，1H)，9.35(dd，2H)，9.31(d，1H)，9.27(s，1H)，9.12(d，1H)，8.72(dd，1H)，8.62(d，1H)，8.52(dd，1H)，8.23(d，1H)，7.95(s，1H)，7.82-7.75(m，2H)，7.52(d，1H)，4.00(s，2H).
实施例13
N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(124)
Figure BDA0000088274920000601
步骤1.向反应管中加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺(220mg，1.00mmol)、2-碘吡啶(205mg，1.00mmol)、Pd(PPh3)4(57.7mg，0.05mmol)和K3PO4(424mg，2.00mmol)。将该管置于真空中并回充氩气。加入二氧六环(3.0ml)和水(0.3ml)并将混合物在96℃下加热过夜。冷却至室温后，反应混合物通过硅藻土过滤(用乙酸乙酯洗涤)并蒸发浓缩。将残留物重新分配在乙酸乙酯(40ml)和0.1N HCl溶液(40mL)之中。将酸化的水相再用乙酸乙酯萃取(40mlx2)，并用Na2CO3处理使得pH约为9，并通过蒸发水来浓缩。将固体残留物用回流的乙酸乙酯(40ml)萃取，得到2，3′-联吡啶-6′-胺(124-1)，其不需要进一步纯化即用于反应。
步骤将2.将2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸74-4(57mg，0.31mmol)、2，3′-联吡啶-6′-胺124-1(51mg，0.30mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(75mg，0.36mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(6mg，0.06mmol)的DMF(1.2mL)混合物在室温下搅拌10小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，洗涤并用乙酸乙酯(30ml)稀释，并用水930ml x 2)萃取。将有机相用Na2SO4干燥并蒸发浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法以乙酸乙酯作为洗脱液纯化，得到N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酰胺124-2，为白色固体。
步骤3.向反应管中加入5N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酰胺124-2(52mg，0.15mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(115mg，0.3mmol)和Pd(PPh3)4(35mg，0.03mmol)。将该管置于真空中并回充氩气。加入DMF(1.0ml)并将混合物在118℃油浴中加热过夜。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土过滤，洗涤并用乙酸乙酯(30ml)稀释并用0.1NHCl溶液(30ml)萃取。将酸性水相用Na2CO3处理使得pH约为9，并用乙酸乙酯(3x20ml)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并蒸发浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法以5％MeOH的DCM溶液作为洗脱液纯化，得到N-(2，3′-联吡啶-6′-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺124，为白色固体。MS m/z 396.3(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.93～8.89(m，1H)，8.72～8.67(m，1H)，8.59(d，1H)，8.51(d，1H)，8.37～8.29(m，2H)，8.23(bs，1H)，7.76(m，1H)，7.71(m，1H)，7.65(d，1H)，7.33(bs，1H)，7.30～7.24(m，1H)，3.81(s，2H)，2.63(s，3H)，2.38(s，3H).
实施例14
4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(125)
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-硝基吡啶125-1(5.1g，25.2mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯125-2(4.7g，25.2mmol)DIEA(12mL，75mmol)和DMSO(20mL)。将反应加热至120℃并搅拌16小时。将反应冷却至室温。通过旋转蒸发除去三乙胺。将残留物在15mL乙酸乙酯中研磨。通过过滤收集固体并用少量乙酸乙酯洗涤得到4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯125-3，为浅黄色固体。MS m/z 309.2(M+1).
步骤2：向圆底烧瓶中加入4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯125-3(3.4g，11mmol)、Pd/C(0.5g)和甲醇(100mL)。通过连接氢气球将反应在氢气气氛下搅拌4小时。将反应用氮气冲洗并通过滤过除去固体。通过旋转蒸发除去溶剂，得到4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯125-4，为紫色固体。MS m/z 279.2(M+1).
步骤3：在室温下，向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸26-3(1.1g，4.8mmol)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯125-4(1.3g，4.6mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(2.0g，5.3mmol)的DMF(15mL)混合物中加入DIEA(2.4mL，13.8mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3洗涤然后用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯125.MS m/z 488.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.55(s，1H)，8.56(d，1H)，8.03(s，1H)，7.93(d，1H)，7.81(d，1H)，7.74(s，1H)，7.66(d，1H)，7.51(d，2H)，7.42(m，1H)，3.75(s，2H)，3.08(b，2H)，2.57(s，2H)，2.54(s，4H)，2.51(s，3H)，1.42(s，9H).
实施例15
2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(130)
Figure BDA0000088274920000631
步骤1：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺86-8(70mg，0.21mmol)，4-(三丁基锡烷基)哒嗪(79mg，0.21mmol)和Pd(PPh3)4(22mg，0.021mmol)的反应管中加入DMF(0.9mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。将粗DMF溶液通过反相HPLC纯化得到2-(5-甲基-6-(哒嗪-4-基)吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺130，为白色固体。MS m/z 384.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.15(s，1H)，9.47(d，1H)，9.34(dd，1H)，9.31(d，1H)，9.11(dd，1H)，8.72(m，1H)，8.62(d，1H)，8.56(m，1H)，8.52(dd，1H)，8.21(d，1H)，7.92(dd，1H)，7.79(s，1H)，3.90(s，2H)，2.42(s，3H).
实施例16
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(131)
Figure BDA0000088274920000632
步骤1：向4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(125)(1.5g，3mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(10mL)。将反应搅拌2小时。通过旋转蒸发除去过量的TFA和溶剂，得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺131-1。该化合物不需要进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 388.2(M+1).
步骤2：向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺131-1(20mg，0.05mmol)的THF(1mL)溶液中加入DIEA(19mg，0.15mmol)和乙酰氯(3.9μL，0.055mmol)。将反应在室温下搅拌40min。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺131，为类白色固体。MS m/z 430.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.50(s，1H)，8.45(d，1H)，7.97(d，1H)，7.87(d，1H)，7.71(d，2H)，7.57(s，1H)，7.49(d，1H)，7.42(d，2H)，7.37(dd，1H)，3.68(s，2H)，3.52(m，4H)，3.09(t，2H)，3.02(t，2H)，2.48(s，3H)，1.97(s，3H).
实施例17
4-(6-(2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸甲酯(132)
Figure BDA0000088274920000641
向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺131-1(20mg，0.05mmol)的THF(1mL)溶液中加入DIEA(19mg，0.15mmol)和氯甲酸甲酯(5.2mg，0.055mmol)。将反应在室温下搅拌40min。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺132，为类白色固体。MS m/z 446.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.55(s，1H)，8.72(d，1H)，8.18(s，1H)，8.08(m，1H)，7.96(d，1H)，7.90(d，2H)，7.84(d，1H)，7.50(d，2H)，7.35(dd，1H)，3.72(s，2H)，3.54(s，3H)，3.43(t，4H)，3.03(t，3H)，2.65(s，3H).
实施例18
2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基)乙酰胺(134)
Figure BDA0000088274920000651
步骤1.向反应管中加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺(220mg，1.00mmol)、4-溴哒嗪(159mg，1.00mmol)、Pd(PPh3)4(57.7mg，0.05mmol)和K3PO4(424mg，2.00mmol)。将该管置于真空中并回充氩气。加入二氧六环(3.0ml)和水(0.3ml)并将混合物在96℃下加热过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土过滤(用乙酸乙酯洗涤)并蒸发浓缩。随后用硅胶柱色谱法用5％甲醇的DCM溶液作为洗脱液纯化，得到5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-胺134-1，为棕色固体。
步骤2.将2-(4-溴-3-甲基苯基)乙酸叔丁酯(855mg，3.00mmol)、4-(三丁基锡烷基)哒嗪(1162mg，3.15mmol)、Pd(PPh3)4(173mg，0.15mmol)和DMF(10ml)的混合物在氩气气氛下在118℃下搅拌过夜。冷却至室温后，通过蒸发DMF将混合物浓缩，再溶解在乙酸乙酯(50ml)中，并用水(50mlx2)洗涤。用Na2SO4干燥后，通过蒸发浓缩，将混合物通过硅胶柱色谱法以乙酸乙酯/己烷(1∶1)作为洗脱液纯化，得到2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸叔丁酯134-2，为油状物。
步骤3.在室温下，将由步骤2得到的酯134-2在DCM(15ml)中与三氟乙酸(TFA，3ml)搅拌过夜。通过蒸发浓缩后，将残留物重新在乙酸乙酯(30ml)和5％Na2CO3水溶液(30ml)中分配。用6N HCl溶液将水相酸化至pH约为2，并用乙酸乙酯萃取(40mlx2)。将有机萃取液蒸发，得到2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸134-3，为固体，其不需要进一步纯化即用于反应。
步骤4.在室温下，将5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-胺134-1(53mg，0.31mmol)、2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)乙酸134-3(73mg，0.32mmol)、HATU(122mg，0.32mmol)和DIEA(80uL，0.46mmol)的DMF(1.0ml)混合物搅拌过夜。然后将其在乙酸乙酯(40ml)和3％Na2CO3水溶液(40ml)中分配，并用0.5N HCl溶液(30ml)萃取。将水萃取液用Na2CO3处理调节pH约为10，然后用乙酸乙酯(30ml x 2)萃取。将合并有机萃取液用Na2SO4干燥并蒸发浓缩。将残留物通过反相HPLC纯化，得到2-(3-甲基-4-(哒嗪-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-4-基)吡啶-2-基)乙酰胺134，为类白色固体。MSm/z 383.2(M+1).
实施例19
2-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺(140)
Figure BDA0000088274920000661
步骤1.将2-(6-氯吡啶-3-基)乙酸(521mg，3.03mmol)、5-(3-氟苯基)吡啶-2-胺(570mg，3.03mmol)、HATU(1250mg，3.29mmol)和DIEA(784μl，4.50mmol)的DMF(10ml)混合物在室温下搅拌过夜。减压下蒸发除去大部DMF。将残留物溶解在EtOAc(50ml)中，用3％Na2CO3溶液(30ml)和水(50mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过蒸发浓缩后，将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，得到2-(6-氯吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺140-1。
步骤2.将2-(6-氯吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺140-1(100mg，0.29mmol)与1-(哌嗪-1-基)乙酮(0.8ml)在108℃下加热4小时。将混合物溶解在EtOAc(30ml)中，用水(40mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过蒸发浓缩后，将残留物通过反相HPLC纯化，得到2-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)乙酰胺140，为固体。
实施例20
2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(3-氧代哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(141)
Figure BDA0000088274920000671
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-硝基吡啶141-1(1.01g，5mmol)、哌嗪-2-酮141-2(0.6g，6mmol)、DIEA(1.8mL，18mmol)和DMSO(6mL)。将反应加热至120℃并搅拌16小时。将反应冷却至室温。通过旋转蒸发除去DIEA。将残留物在15mL乙酸乙酯中研磨。通过过滤收集固体并用少量乙酸乙酯洗涤，得到4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮141-3，为浅黄色固体。MS m/z 223.2(M+1).
步骤2：向圆底烧瓶中加入4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮141-3(0.7g，3.1mmol)、Pd/C(0.2g)和甲醇(20mL)。通过连接氢气球将反应在氢气气氛下搅拌4小时。将反应用氮气冲洗并通过过滤除去固体。通过旋转蒸发除去溶剂，得到4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮141-4，为紫色固体。MS m/z193.2(M+1).
步骤3：在室温下，向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸26-3(22mg，0.1mmol)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮141-4(19mg，0.1mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(40mg，0.1mmol)的DMF(1mL)混合物中加入DIEA(52μL，0.3mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(3-氧代哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺141.MS m/z 402.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.49(d，1H)，8.05-8.01(m，2H)，7.94(d，1H)，7.75(d，2H)，7.57(s，1H)，7.48-7.48(m，3H)，7.41(dd，1H)，3.74(s，1H)，3.71(s，2H)，2.54-2.50(m，7H)，1.24(s，2H).
实施例21
N-(5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(143)
Figure BDA0000088274920000691
步骤1：向含有5-碘吡啶-2-胺143-1(1.1g，5mmol)、4-甲基-1H-咪唑143-2(0.61g，7.4mmol)、CuI(0.31g，1.63mmol)和Cs2CO3(3.25g，10mmol)的密封管加入DMF(10mL)。将反应容器用氮气冲洗并密封。将反应在室温下搅拌30分钟，然后在110℃加热24小时。将反应稀释到乙酸乙酯中并通过过滤除去盐。将滤液干燥并将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱，得到5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-2-胺143-3，为类白色固体。MS m/z 175.2(M+1).
步骤2：在室温下，向2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸26-3(22mg，0.1mmol)、5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-2-胺143-3(18mg，0.1mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(40mg，0.1mmol)的DMF(1mL)混合物中加入DIEA(52μL，0.3mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺143。MS m/z 384.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.91(s，1H)，8.58(dd，1H)，8.43(d，1H)，8.10(m，2H)，7.99(m，1H)，7.77(d，2H)，7.51(s，1H)，7.43-7.40(m，4H)，3.75(s，2H)，2.46(s，3H)，2.10(s，3H).
实施例22
2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(145)
Figure BDA0000088274920000701
步骤1：向密闭的烧瓶中加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺145-1(1.54g，7mmol)、3-氯哒嗪145-2(0.8g，7mmol)、Pd(PPh3)4(500mg，0.7mmol)、甲苯(50mL)、乙醇(12mL)和2M Na2CO3(11mL)。将反应混合物冒泡通入氮气2分钟并在90℃下搅拌10小时。冷却至室温后，蒸发溶剂和并将残留物再溶解在二氯甲烷(200ml)中并用1M HCl水溶液(50mL)处理。将两层分离，并将水层用10％NaOH水溶液处理以调节pH约为13。将得到溶液蒸发并将残留的固体用乙酸乙酯(100mLx3)萃取。将合并的有机相浓缩得到5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺145-3，为暗棕色固体。MS m/z 173.1(M+1).
步骤2：在室温下，将2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸86-7(241mg，1.3mmol)、5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺145-3(224mg，1.3mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(325mg，1.6mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(26mg，0.26mmol)的DMF (6mL)混合物搅拌10小时。将反应混合物过滤除去固体并将滤液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺145-4，为淡黄色固体。MS m/z 340.2(M+1)
步骤3：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺145-4(68mg，0.2mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(76mg，0.2mmol)和Pd(PPh3)4(22mg，0.02mmol)反应管中加入DMF(0.9mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。该粗产物为澄清溶液，将其通过反相HPLC纯化，得到2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺145，为白色固体。MS m/z 397.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.14(s，1H)，9.22(dd，1H)，9.13(d，1H)，8.56(dd，1H)，8.52(d，1H)，8.49(d，1H)，8.29(dd，1H)，8.24(d，1H)，7.81(dd，1H)，7.73(d，1H)，7.42(s，1H)，7.35(dd，1H)，3.87(s，2H)，2.53(s，3H)，2.35(s，3H).
实施例23
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(148)
步骤1：在室温下，向2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸74-4(100mg，0.54mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(140mg，0.64mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(220mg，0.58mmol)的DMF(2mL)混合物中加入DIEA(280μL，1.62mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和的NaHCO3洗涤然后用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酰胺148-1(210mg，100％).MS m/z 388.1(M+1).
步骤2：向N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酰胺148-1(80mg，0.21mmol)和2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶148-2(75mg，0.21mmol)的DMF(1.5mL)混合物中加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(30mg，0.18mmol)。将反应在110℃下搅拌20小时。冷却至室温后，将反应混合物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺148，为类白色固体。MS m/z 445.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.57(s，1H)，8.49(d，1H)，8.40(d，1H)，7.98(d，1H)，7.87(d，1H)，7.64(d，1H)，7.42(s，1H)，7.36-7.34(m，2H)，3.70(s，2H)，3.50(b，4H)，3.09(t，2H)，3.02(t，2H)，2.49(s，3H)，2.28(s，3H)，1.97(s，3H).
实施例24
2-甲基-4-(3-甲基-5-(2-氧代-2-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基氨基)乙基)吡啶-2-基)吡啶1-氧化物(156)
Figure BDA0000088274920000721
步骤1：向烧瓶中加入5-溴-2-氯-3-甲基吡啶156-1(4.13g，20mmol)、CuI(380mg，2.00mmol)、Cs2CO3(18g，60mmol)、2-吡啶甲酸(480mg，4.00mmol)。将烧瓶抽真空并回充氩气，进行3次。加入无水的二氧六环(40mL)到烧瓶中，然后加入丙二酸二乙酯156-2(6mL，40mmol)。在氩气气氛下，将混合物在96℃下搅拌36小时。冷却至室温后，将混合物在乙酸乙酯和水中分配。将有机部分用Na2SO4干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。将粗产物通过快速色谱法纯化，采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)丙二酸二乙酯156-3，为无色油状物。MS m/z286.1(M+1).
步骤2：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)丙二酸二乙酯156-3(1.00g，4.00mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(1.53g，4.00mmol)和Pd(PPh3)4(440mg，0.4mmol)的反应烧瓶中加入DMF(20mL)。将混合物在120℃下搅拌10小时。将混合物冷却至室温后，加入1N KF水溶液并搅拌15分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释并将两层分离。将有机层再用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)丙二酸二乙酯156-4，为无色油状物。MSm/z 343.1(M+1)
步骤3：将2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)丙二酸二乙酯156-4(935mg，3mmol)和NaOH(480mg，12mmol)在THF(1.8mL)和水(1.8mL)中的混合物在65℃下搅拌3小时。冷却至室温后，将混合物用3N HCl水溶液处理，调整pH约为3，然后搅拌15分钟。将得到的溶液蒸发至干并将留下的固体用20％甲醇的乙酸乙酯溶液提取。将有机提取液浓缩得到2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸156-5，为白色固体。MS m/z 243.1(M+1).
步骤4：在0℃下，向2-(2′，3-二甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸156-5(100mg，0.41mmol)的二氯甲烷(3mL)和甲醇(0.5mL)溶液中分小份加入mCPBA(91mg，0.41mmol)。在0℃下，将混合物搅拌3小时，然后浓缩至干，得到4-(5-(羧基甲基)-3-甲基吡啶-2-基)-2-甲基吡啶1-氧化物156-6，为白色固体，其不需要进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 259.1(M+1).
步骤5：将由步骤4得到的4-(5-(羧基甲基)-3-甲基吡啶-2-基)-2-甲基吡啶1-氧化物156-6(0.41mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(141mg，0.82mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(188mg，0.90mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(16mg，0.16mmol)的DMF(2mL)混合物在室温下搅拌10小时。将粗产物过滤除去不溶物并将滤液通过反相HPLC纯化，得到2-甲基-4-(3-甲基-5-(2-氧代-2-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基氨基)乙基)吡啶-2-基)吡啶1-氧化物156，为白色固体。MS m/z 413.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.12(s，1H)，9.31(d，1H)，9.11(d，1H)，8.72(m，1H)，8.62(d，1H)，8.52(dd，1H)，8.48(d，1H)，8.31(d，1H)，8.21(d，1H)，7.73(m，2H)，7.52(dd，1H)，3.86(s，2H)，2.41(s，3H)，2.40(s，3H).
实施例25
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(159)
Figure BDA0000088274920000741
步骤1：向2-(4-溴-3-甲基苯基)乙酸24-5(100mg，0.44mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(96mg，0.44mmol)和HATU(200mg，0.53mmol)的DMF(2mL)混合物中加入DIEA(230uL，1.32mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥并蒸发溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-溴-3-甲基苯基)乙酰胺159-1.MS m/z 431.1(M+1).
步骤2：向N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-溴-3-甲基苯基)乙酰胺159-1(65mg，0.15mmol)和2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶159-2(58mg，0.15mmol)的DMF(0.8mL)混合物中加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(30mg，0.036mmol)。将反应在110℃下搅拌20小时。冷却至室温后，将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺159，为类白色固体。MS m/z 444.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.47(s，1H)，8.41(d，1H)，7.97(d，1H)，7.88(d，1H)，7.37(dd，1H)，7.21-7.18(m，2H)，7.16(s，1H)，7.12-7.09(m，2H)，3.61(s，2H)，3.52(m，4H)，3.08(t，2H)，3.02(t，2H)，2.17(s，3H)，1.97(s，3H).
实施例26
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(168)
Figure BDA0000088274920000751
步骤1：向2-(4-氯-3-氟苯基)乙酸168-1(188mg，1.0mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(220mg，1.0mmol)和HATU(400mg，1.05mmol)的DMF(4mL)混合物中加入DIEA(521uL，3.0mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥并蒸发溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-氯-3-氟苯基)乙酰胺168-2.MS m/z 391.1(M+1).
步骤2：向N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-氯-3-氟苯基)乙酰胺168-2(80mg，0.2mmol)和2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(78mg，0.2mmol)的DMF(0.6mL)混合物中加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(33mg，0.04mmol)。将反应在110℃下搅拌20小时。冷却至室温后，将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺168，为白色固体。MS m/z 448.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.57(s，1H)，8.52(d，1H)，8.04(s，1H)，7.93(d，1H)，7.59(m，1H)，7.44-7.29(m，5H)，3.77(s，2H)，3.58(b，2H)，3.14(b，2H)，3.08(b，2H)，2.55(s，2H)，2.51(s，3H)，2.04(s，3H).
实施例27
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(172)
Figure BDA0000088274920000761
向装有N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192-1(300mg，0.62mmol)、2-甲基吡啶-4-基硼酸172-1(127mg，0.93mmol)和Pd(PPh3)4(36mg，0.03mmol)反应容器中加入甲苯(6mL)、乙醇(2mL)和饱和碳酸钠(2mL)。将反应混合物用氮气冲洗并在110℃加热10小时。将反应冷却至室温后，将其在乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间分配并将有机相用盐水洗涤，并用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺172.MS m/z 498.2(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.67(s，1H)，8.66(d，1H)，8.05(m，1H)，7.94(m，2H)，7.75(d，1H)，7.52(s，1H)，7.45(m，3H)，3.88(s，2H)，3.58(b，4H)，3.14(b，2H)，3.09(b，2H)，2.61(s，3H)，2.05(s，3H).
实施例28
N-(5-(4-(氰基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基) 乙酰胺(175)
Figure BDA0000088274920000771
步骤1：将2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺131-1(39mg，0.10mmol)、2-溴乙腈(8uL，0.12mmol)和碳酸钾(28mg，0.20mmol)的DMF(1mL)混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倾入水(5ml)中并用乙酸乙酯(5mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-(氰基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺175.MS m/z 427.2(M+1)；1HNMR 400MHz(MeOD)δ8.37(d，1H)，7.94(s，1H)，7.87(d，1H)，7.68(d，2H)，7.55(s，1H)，7.48-7.44(m，3H)，7.36(dd，1H)，3.74(s，2H)，3.67(s，2H)，3.17(t，4H)，2.69(t，4H)，2.54(s，3H).
实施例29
N-(5-(4-氰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(176)
Figure BDA0000088274920000781
步骤1：将2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺131-1(39mg，0.10mmol)、溴化氰(13mg，0.12mmol)和碳酸钾(28mg，0.20mmol)的DMF(1mL)混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倾入水(5ml)并用乙酸乙酯(5mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-氰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺176.MS m/z 413.2(M+1)；1HNMR 400MHz(MeOD)δ8.39(d，1Hz)，7.96(s，1H)，7.89(d，1H)，7.68(d，2H)，7.58(s，1H)，7.50(d，1H)，7.46(d，2H)，7.37(dd，1H)，3.74(s，2H)，3.35(t，4H)，3.18(t，4H)，2.55(s，3H).
实施例30
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氯吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(177)
Figure BDA0000088274920000782
步骤1：在室温下，向2-(4-碘苯基)乙酸177-1(524mg，2.0mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(440mg，2.0mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(798mg，2.1mmol)的DMF(10mL)混合物中加入DIEA(1.04mL，6.0mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3洗涤，然后用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-碘苯基)乙酰胺177-2，为黄褐色固体。MS m/z 465.2(M+1).
步骤2：向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-碘苯基)乙酰胺177-2(100mg，0.22mmol)、2-氯吡啶-4-基硼酸177-3(52mg，0.33mmol)、Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)、饱和Na2CO3(1mL)、乙醇(1mL)和甲苯(3mL)。将反应加热至110℃并搅拌16小时。将反应冷却至室温，然后用乙酸乙酯萃取。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺177，为类白色固体。MS m/z 450.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.51(s，1H)，8.40(d，1H)，7.97(d，1H)，7.87(d，1H)，7.78(d，1H)，7.76(d，2H)，7.69(dd，1H)，7.43(d，2H)，7.37(dd，1H)，3.68(s，2H)，3.52(m，4H)，3.09(t，2H)，3.02(t，2H)，1.97(s，3H).
实施例31
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(178)
Figure BDA0000088274920000791
向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-碘苯基)乙酰胺177-2(520mg，1.1mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸178-1(237mg，1.6mmol)、Pd(PPh3)4(65mg，0.055mmol)、饱和Na2CO3(5mL)、乙醇(5mL)和甲苯(15mL)。将反应加热至110℃并搅拌16小时。将反应冷却至室温，然后用乙酸乙酯萃取。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用乙酸乙酯洗脱，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺178，为类白色固体。MS m/z 434.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.58(s，1H)，8.30(d，1H，J＝5.6Hz)，8.04(d，1H，J＝2.8Hz)，7.94(d，1H，J＝9.2Hz)，7.84-7.82(m，2H)，7.71-7.69(m，1H)，7.53-7.49(m，3H)，7.44(dd，1H，J1＝9.2Hz，J2＝2.8Hz)，3.76(s，2H)，3.59(b，4H)，3.16(t，2H，J＝2.8Hz)，3.09(t，2H，J＝2.8Hz)，2.04(s，3H).
实施例32
2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺(181)
Figure BDA0000088274920000801
步骤1：将2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸111-10(50mg，0.2mmol)、5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺145-3(34mg，0.2mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(50mg，0.24mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(4mg，0.04mmol)的DMF(0.9mL)混合物在室温下搅拌10小时。将粗产物过滤除去不溶物并将滤液通过反相HPLC纯化，得到2-(3-氰基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺181，为白色固体。MS m/z 407.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.13(s，1H)，9.22(dd，1H)，9.13(d，1H)，8.59(d，1H)，8.56(dd，1H)，8.29(dd，1H)，8.23(d，1H)，7.98(d，1H)，7.83-7.79(m，2H)，7.67(d，1H)，7.489s，1H)，7.42(dd，1H)，3.95(s，2H)，2.56(s，3H).
实施例33
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲氧基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(182)
Figure BDA0000088274920000811
步骤1：在0℃下，向2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)乙酸182-1(364mg，2mmol)和TEA(404mg，4mmol)的DCM(40mL)溶液中缓慢地加入三氟甲磺酸酐(564mg，2mmol)。加入后将反应升温至室温，并在室温搅拌1小时。然后将反应混合物在DCM和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到2-(3-甲氧基-4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)乙酸182-2(590mg，95％).
步骤2：向2-(3-甲氧基-4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)乙酸182-2(590mg，1.9mmol)和2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(730mg，1.9mmol)的DMF(2.0mL)混合物中加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(33mg，0.04mmol)。将反应在110℃下搅拌20小时。冷却至室温后，将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到2-(3-甲氧基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸182-3.MS m/z 258.1(M+1).
步骤3：向2-(3-甲氧基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸182-3(26mg，0.1mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(22mg，0.1mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)的DMF(0.6mL)混合物中加入DIEA(52uL，0.3mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用DMSO稀释，并通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲氧基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺182.MS m/z 460.2(M+1).1H NMR400MHz(DMSO-d6)δ10.52(s，1H)，8.43(d，1H)，8.03(s，1H)，7.94(d，1H)，7.43-7.30(m，3H)，7.15(s，1H)，7.04(d，1H)，3.79(s，2H)，3.72(b，2H)，3.57(b，2H)，3.14(b，2H)，3.07(b，2H)，2.49(s，3H)，2.04(s，3H)，1.23(s，3H).
实施例34
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(183)
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-碘嘧啶183-1(114mg，0.4mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶183-2(88mg，0.4mmol)、Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)、Na2CO3(170mg，1.6mmol)、甲苯(0.4mL)、H2O(0.4mL)和乙醇(0.1mL)。将反应混合物在100℃下搅拌10小时。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再次溶解在水(3ml)中，并用乙酸乙酯(5mL x 3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到5-溴-2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶183-3.MS m/z 250.0(M+1).
步骤2：向封闭管中加入5-溴-2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶183-3(50mg，0.20mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)的乙醚溶液(0.60mL，0.30mmol)、Pd(dba)2(6mg，0.01mmol)、Q-phos(14mg，0.02mmol)和THF(1.5mL)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙酸叔丁酯183-4.MS m/z 286.2(M+1).
步骤3：将2-(2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙酸叔丁酯183-4(35mg，0.12mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌2小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙酸183-5溶解在DMF(2mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(35mg，0.16mmol)和DIEA(107uL，0.61mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(70mg，0.18mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙酰胺183.MS m/z 433.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.47(s，2H)，8.50(d，1H)，8.22(s，1H)，8.14(d，1H)，7.97(d，1H)，7.87(d，1H)，7.38(dd，1H)，3.83(s，2H)，3.68(t，2H)，3.64(t，2H)，3.15(t，2H)，3.09(t，2H)，2.58(s，3H)，2.09(s，3H).
实施例35
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(184)
Figure BDA0000088274920000841
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2，3-二氯吡啶184-1(113mg，0.50mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(1.2mL，0.60mmol)、Pd(dba)2(14mg，0.025mmol)、Q-phos(36mg，0.05mmol)和THF(1.5mL)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在70℃下搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(5，6-二氯吡啶-3-基)乙酸叔丁酯184-3.MS m/z 262.1(M+1).
步骤2：将2-(5，6-二氯吡啶-3-基)乙酸叔丁酯184-3(130mg，0.49mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌2小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(5，6-二氯吡啶-3-基)乙酸184-4溶解到DMF(3mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(128mg，0.58mmol)和DIEA(435uL，2.5mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(277mg，0.73mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并用5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(5，6-二氯吡啶-3-基)乙酰胺184-5.MS m/z 408.1(M+1).
步骤3：向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(5，6-二氯吡啶-3-基)乙酰胺184-5(65mg，0.16mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶183-2(42mg，0.19mmol)、Pd(PPh3)4(9mg，0.08mmol)、Na2CO3(84mg，0.79mmol)、DME(0.5mL)、H2O(0.5mL)和乙醇(0.1mL)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-(2-甲基吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙酰胺184。MSm/z 465.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.52(d，2H)，8.46(d，1H)，7.98-7.95(m，2H)，7.87(d，1H)，7.53(s，1H)，7.49-7.46(m，1Hz)，7.36(dd，1H)，3.81(s，2H)，3.67(t，2H)，3.62(t，2H)，3.13(t，2H)，3.08(t，2H)，2.56(s，3H)，2.08(s，3H).
实施例36
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(188)
Figure BDA0000088274920000851
步骤1：向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺184(46mg，0.10mmol)、氰化锌(14mg，0.12mmol)、Pd2(dba)3(9mg，0.010mmol)、Q-phos(9mg，0.022mmol)和1ml DMF/H2O(99/1，v/v)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在130℃下搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发溶剂和将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺188。MS m/z 456.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.85(d，1H)，8.56(d，1H)，8.28(d，1H)，7.98(s，1Hz)，7.88(d，1H)，7.78(s，1H)，7.73-7.70(m，1Hz)，7.39(dd，1H)，3.89(s，2H)，3.69(t，2H)，3.65(t，2H)，3.16(t，2H)，3.11(t，2H)，2.61(s，3H)，2.09(s，3H).
实施例37
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(189)
Figure BDA0000088274920000861
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-氯-3-(三氟甲基)吡啶189-1(170mg，0.65mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(1.57mL，0.78mmol)、Pd(dba)2(19mg，0.03mmol)、Q-phos(46mg，0.06mmol)和THF(3mL)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酸叔丁酯189-3.MS m/z 296.1(M+1).
步骤2：向封闭管中加入2-(6-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酸叔丁酯189-3(318mg，1.08mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶(283mg，1.29mmol)、Pd(PPh3)4(62mg，0.05mmol)、Na2CO3(342mg，3.22mmol)、甲苯(3mL)、H2O(3mL)和乙醇(0.75mL)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在水(10ml)中并用乙酸乙酯(10mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸叔丁酯189-4.MS m/z 35.2(M+1).
步骤3：将2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸叔丁酯189-4(230mg，0.65mmol)和TFA(1mL)的DCM(5mL)混合物在室温下搅拌5小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸189-5溶解在DMF(4mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(173mg，0.78mmol)和DIEA(910uL，5.22mmol)加入到溶液中，然后再加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(372mg，0.98mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺189.MSm/z 499.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.78(s，1H)，8.48(d，1H)，8.26(s，1H)，7.99(s，1H)，7.88(d，1H)，7.42-7.36(m，2H)，7.31(d，1H)，3.92(s，2H)，3.69(t，2H)，3.65(t，2H)，3.16(t，2H)，3.11(t，2H)，2.57(s，3H)，2.09(s，3H).
实施例38
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(190)
Figure BDA0000088274920000881
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-氯-3-氟吡啶190-1(210mg，1.0mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(2.4mL，1.2mmol)、Pd(dba)2(29mg，0.005mmol)、Q-phos(71mg，0.10mmol)和THF(3mL)。将反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯190-3.MS m/z 246.1(M+1).
步骤2：将2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯190-3(123mg，0.50mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌2小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸190-4溶解在DMF(3mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(110mg，0.50mmol)和DIEA(500uL，2.87mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(285mg，0.75mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并采用5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酰胺190-5.MS m/z 392.2(M+1).
步骤3：向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酰胺190-5(59mg，0.15mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶183-2(49mg，0.23mmol)、Pd(PPh3)4(9mg，0.08mmol)、Na2CO3(79mg，0.75mmol)、甲苯(0.8mL)、H2O(0.8mL)和乙醇(0.2mL)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-2′-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺190.MS m/z449.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.48-8.46(m，2H)，7.96(s，1H)，7.87(d，1H)，7.81(s，1H)，7.75-7.69(m，2Hz)，7.36(dd，1H)，3.84(s，2H)，3.67(t，2H)，3.62(t，2H)，3.13(t，2H)，3.08(t，2H)，2.56(s，3H)，2.08(s，3H).
实施例39
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(191)
Figure BDA0000088274920000891
步骤1：向装有4-溴-2-氟-5-甲基苯胺191-1(2.04g，10mmol)、2-甲基吡啶-4-基硼酸191-2(1.37g，10mmol)和Pd(PPh3)4(0.4g，0.35mmol)的圆底烧瓶加入甲苯(30mL)、乙醇(10mL)和饱和碳酸钠(10mL)。将烧瓶用氮气冲洗并将反应物加热回流10小时。将反应物冷却至室温后，将其在乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间分配并将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯胺191-3。MS m/z 217.1(M+1).
步骤2：在-10℃下，向2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯胺191-3(1.02g，4.7mmol)的CH2I2(16mL)溶液中缓慢地加入亚硝酸异戊酯(6mL)。20分钟后，将反应在100℃下加热2小时。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物溶解在乙酸乙酯中，并用Na2S2O5、盐水洗涤，并通过旋转蒸发处理至干。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到4-(5-氟-4-碘-2-甲基苯基)-2-甲基吡啶191-4.MS m/z328.10(M+1).
步骤3：向装有4-(5-氟-4-碘-2-甲基苯基)-2-甲基吡啶191-4(200mg，0.6mmol)、Pd2(dba)3(28mg，0.03mmol)和Q-Phos(21mg，0.03mmol)的密封管中加入无水的THF(2.5mL)。将反应容器用氮气冲洗，随后加入(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)(0.5M的乙醚溶液，1.34mL，0.67mmol)。将反应物加热至70℃反应12小时。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，采用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯191-5.MS m/z 316.10(M+1).
步骤4：向2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯191-5(80mg，0.37mmol)的DCM(2mL)溶液中加入TFA(2mL)。将反应物在室温下搅拌2小时。通过旋转蒸发除去溶剂和TFA，得到2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸191-6。该产物不需要进一步纯化即用于下一步骤。
步骤5：向2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酸191-6(35mg，0.13mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(30mg，0.13mmol)和HATU(50mg，0.13mmol)的DMF(1.0mL)混合物中加入DIEA(67uL，0.4mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用DMSO稀释并通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2-氟-5-甲基-4-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺191.MS m/z 462.2(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.51(s，1H)，8.49(d，1H)，8.03(s，1H)，7.91(d，1H)，7.43(m，1H)，7.32(d，1H)，7.28(s，1H)，7.21(d，1H)，7.08(d，1H)，3.77(s，2H)，3.53(b，4H)，3.14(b，2H)，3.07(b，2H)，2.55(s，3H)，2.20(s，3H)，2.04(s，3H).
实施例40
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基嘧啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(192)
步骤1：向2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酸46-6(564mg，2.0mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(440mg，2.0mmol)和HATU(798mg，2.1mmol)的DMF(6mL)混合物中加入DIEA(1.04mL，6.0mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥，并蒸发溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192-1(920mg，95％).MS m/z 485.1(M+1).
步骤2：将N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192-1(0.48g，1mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-二(1，3，2-二氧硼杂环戊烷)192-2(0.51g，2mmol)、KOAc(0.29g，3mmol)PdCl2(dppf)2.CH2Cl2(82mg，0.1mmol)的DMSO(5mL)混合物用氮气冲洗并加热至100℃反应2小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥。蒸发溶剂并将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192-3。MS m/z533.2(M+1).
步骤3：将N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192-3(53mg，0.1mmol)、4-氯-2-甲基嘧啶192-4(18mg，0.14mmol)Pd(PPh3)4(11mg，0.01mmol)和K3PO4(42mg，0.2mmol)的二氧六环(1.0mL)混合物用氮气冲洗并加热至100℃反应2小时。过滤除去盐并将滤液通过旋转蒸发处理至干。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-甲基嘧啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺192。MS m/z 499.2(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.58(s，1H)，8.77(d，1H)，8.02(s，1H)，7.89(m，2H)，7.73(d，1H)，7.54(d，1H)，7.42(m，2H)，3.76(s，2H)，3.66(b，4H)，3.14(b，2H)，3.07(b，2H)，2.64(s，3H)，2.03(s，3H).
实施例41
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(193)
Figure BDA0000088274920000921
步骤1：向反应瓶中加入2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酸74-4(185mg，1mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸193-1(220mg，1.5mmol)、Pd(OAc)2(12mg，0.05mmol)、S-Phos(41mg，0.1mmol)和K3PO4(636mg，3mmol)的1mL2-丁醇混合物。将反应物加热至100℃并搅拌2小时。将反应冷却至室温然后稀释至DMSO中。将反应混合物过滤并将滤液通过反相HPLC纯化，得到2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸193-2，为白色固体。MS m/z247.2(M+1).
步骤2：在室温下，向反应瓶中加入在DMF(1mL)中的2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸193-2(60mg，0.17mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(50mg，0.22mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(115mg，0.3mmol)和DIEA(104μL，0.58mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应用DMSO稀释，然后通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺193，为白色固体。MS m/z449.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.58(s，1H)，8.42(d，1H，J＝1.6Hz)，8.28(d，1H，J＝5.2Hz)，7.98(d，1H，J＝2.8Hz)，7.87(d，1H，J＝9.2Hz)，7.67(d，1H，J＝1.6Hz)，7.50-7.48(m，1H)，7.37(dd，1H，J1＝9.2Hz，J2＝3.2Hz)，7.30(s，1H)，3.71(s，2H)，3.50(b，4H)，3.09(t，2H，J＝5.2Hz)，3.02(t，2H，J＝5.2Hz)，2.30(s，3H)，1.97(s，3H).
实施例42
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(194)
Figure BDA0000088274920000931
向反应瓶中加入在2-丁醇(0.3mL)中的N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酰胺190-6(66mg，0.17mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸193-1(35mg，0.25mmol)、Pd(OAc)2(2mg，0.009mmol)、S-Phos(7mg，0.017mmol)和K3PO4(108mg，0.51mmol)。将反应物加热至100℃并搅拌2小时。将反应冷却至室温并然后稀释到DMSO中。将反应混合物过滤并将滤液通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺194。MS m/z 453.1(M+1).
实施例43
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(5-氟嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺(196)
步骤1：将N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-碘苯基)乙酰胺177-2(398mg，0.86mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-二(1，3，2-二氧硼杂环戊烷)192-2(380mg，1.5mmol)、KOAc(270mg，2.7mmol)PdCl2(dppf)2.CH2Cl2(70mg，0.086mmol)的DMSO(5mL)混合物用氮气冲洗并加热至90℃反应2小时。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥。蒸发溶剂并将残留物通过硅胶快速色谱法纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)乙酰胺196-1。MS m/z 465.2(M+1).
步骤2：将N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)乙酰胺196-1(30mg，0.065mmol)、4-氯-5-氟嘧啶196-2(28mg，0.21mmol)Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和K3PO4(90mg，0.424mmol)的二氧六环(0.6mL)混合物用氮气冲洗并在110℃下加热2小时。过滤除去盐并将滤液通过旋转蒸发处理至干。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(5-氟嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺196。MS m/z 435.10(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.54(s，1H)，9.06(d，1H)，8.90(d，1H)，7.98(m，3H)，7.86(d，1H)，7.49(d，2H)，7.37(m，1H)，3.73(s，2H)，3.50(m，4H)，3.09(t，2H)，3.02(t，2H)，1.97(s，3H).
实施例44
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(甲基磺酰基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(197)
Figure BDA0000088274920000951
步骤1：根据文献方法由5-溴-2-氯吡啶-3-胺197-1合成5-溴-2-氯-3-(甲基磺酰基)吡啶197-3。
步骤2：向封闭管中加入5-溴-2-氯-3-(甲基磺酰基)吡啶197-3(60mg，0.22mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(0.54mL，0.27mmol)、Pd(dba)2(6.4mg，0.001mmol)、Q-phos(16mg，0.02mmol)和THF(1mL)。向反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)乙酸叔丁酯197-5.MS m/z 306.1(M+1).
步骤3：将2-(6-氯-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)乙酸叔丁酯197-5(40mg，0.13mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌2小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(6-氯-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)乙酸197-6溶解在DMF(2mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(35mg，0.16mmol)和DIEA(114uL，0.65mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(75mg，0.20mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并用5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)乙酰胺197-7。MSm/z 452.1(M+1).
步骤4：向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)乙酰胺197-7(30mg，0.07mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶183-2(22mg，0.10mmol)、Pd(PPh3)4(4mg，0.003mmol)、Na2CO3(22mg，0.20mmol)、甲苯(0.4mL)、H2O(0.4mL)和乙醇(0.1mL)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-甲基-3-(甲基磺酰基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺197。MS m/z 509.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.81(d，1H)，8.52(d，1H)，8.49(d，1H)，7.97(s，1H)，7.87(d，1H)，7.47(s，1H)7.41(dd，1H)，7.37(dd，1H)，3.95(s，2H)，3.68(t，2H)，3.63(t，2H)，3.15(t，2H)，3.09(t，2H)，2.92(s，3H)，2.57(s，3H)，2.09(s，3H).
实施例45
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(6-甲基嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺(198)
Figure BDA0000088274920000971
将N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)乙酰胺196-1(20mg，0.04mmol)、4-氯-6-甲基嘧啶198-1(8mg，0.06mmol)Pd(PPh3)4(2mg，0.002mmol)和K3PO4(25mg，0.12mmol)的二氧六环(0.6mL)混合物用氮气冲洗并在110℃下加热2小时。过滤除去盐并将滤液通过旋转蒸发处理至干。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(6-甲基嘧啶-4-基)苯基)乙酰胺198。MS m/z 431.20(M+1).1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.59(s，1H)，8.16(d，2H)，8.04(d，1H)，7.98(s，1H)，7.92(m，1H)，7.51(d，2H)，7.45-7.40(m，2H)，3.77(s，2H)，3.58(b，2H)，3.15(b，2H)，3.08(b，2H)，2.55(s，3H)，2.53(s，2H)，2.04(s，3H).
实施例46
2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(199)
Figure BDA0000088274920000981
在室温下，向2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸193-2(50mg，0.2mmol)和5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(36mg，0.2mmol)的DCM(1mL)混合物中加入N，N′-二异丙基碳二亚胺(46μL，0.3mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物溶解在DMSO中，然后通过反相HPLC纯化，得到2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺199，为白色固体。MS m/z 401.2(M+1)；1HNMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.07(s，1H)，9.25(d，1H，J＝1.6Hz)，9.05(m，1H)，8.66(m，1H)，8.57(d，1H，J＝2.4Hz)，8.47-8.45(m，2H)，8.28(d，1H，J＝5.2Hz)，8.16(d，1H，J＝8.8Hz)，7.71(d，1H，J＝1.6Hz)，7.51-7.49(m，1H)，7.31(s，1H)，3.82(s，2H)，2.31(s，3H).
实施例47
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(201)
Figure BDA0000088274920000982
步骤1：将2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酸203-5(30mg，0.11mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(28mg，0.13mmol)、N，N-二异丙基乙胺(99μL，0.57mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(65mg，0.17mmol)的DMF(2mL)混合物在室温下搅拌3小时。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到2N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酰胺201。MS m/z 418.2(M+1)；1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.61(d，1H)，8.25(d，1H)，7.91(d，1H)，7.80-7.72(m，4H)，7.49(d，2H)，6.79(d，1H)，6.73(t，1H)，3.70(s，2H)，3.66-3.58(m，4H)，3.52-3.47(m，2H)，3.45-3.40(m，2H)，2.09(s，3H).
实施例48
2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(203)
Figure BDA0000088274920000991
步骤1：向封闭管中加入2-溴-4-碘吡啶203-1(568mg，2.0mmol)、2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)乙酸乙酯203-2(580mg，2.0mmol)、Pd(PPh3)4(116mg，0.1mmol)、Na2CO3(636mg，6.0mmol)、甲苯(4mL)、H2O(4mL)和乙醇(1mL)。向反应混合物冒泡通入氮气2分钟并在80℃下搅拌10小时。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在水(5ml)中，并用乙酸乙酯(5mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并采用15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-(2-溴吡啶-4-基)苯基)乙酸乙酯203-3.MS m/z320.1(M+1).
步骤2：向封闭管中加入2-(4-(2-溴吡啶-4-基)苯基)乙酸乙酯203-3(440mg，1.37mmol)、2-溴-2，2-二氟乙酸乙酯(1.7mL，13.7mmol)、Cu(1.3g，20.6mmol)和DMF(5mL)。向反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在80℃搅拌1小时。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土层过滤并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并采用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(4-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)苯基)吡啶-2-基)-2，2-二氟乙酸乙酯203-4.MS m/z 364.2(M+1).
步骤3：将2-(4-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)苯基)吡啶-2-基)-2，2-二氟乙酸乙酯203-4(476mg，1.3mmol)溶解在5mL MeOH和2mL 2N LiOH中。将反应混合物在55℃下搅拌12小时。冷却至室温后，将混合物再溶解在5mL DMF和1.5mL浓HCl中。将溶液在130℃下搅拌3小时。冷却至室温后，将溶液倾入5ml水中并用乙酸乙酯(5mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并采用5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酸203-5.MS m/z 264.1(M+1).
步骤4：将2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙酸203-5(70mg，0.27mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺(55mg，0.32mmol)、N，N-二异丙基乙胺(139μL，0.80mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(152mg，0.40mmol)的DMF(2mL)混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到2-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺203。MS m/z 418.2(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.99(d，1H)，8.90(dd，1H)，8.70(d，1H)，8.63(dd，1H)，8.53(d，1H)，8.40-8.33(m，2H)，8.30(s，1H)，7.84(s，1H)，7.70-7.68(m，2H)，7.62-7.60(m，1H)，7.50-7.49(m，2H)，6.70(t，1H)，3.87(s，2H).
实施例49
2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(205)
步骤1：在封闭管中、氩气气氛下，将5-溴-2-氯-3-氟吡啶205-1(631mg，3mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)205-2的乙醚溶液(6.6mL，3.3mmol)、Pd(dba)2(87mg，0.15mmol)、1，2，3，4，5-五苯基-1’-(二-叔丁基膦基)二茂铁(Q-phos，107mg，0.15mmol)和THF(12mL)的混合物在70℃下搅拌18小时。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯205-3，为棕色油状物。MS m/z 246.1(M+1).
步骤2：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯205-3(370mg，1.5mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸205-4(318mg，2.25mmol)、Pd(OAc)2(17mg，0.075mmoL)、2-二环己基膦基-2’，6’-二甲氧基联苯(62mg，0.15mmol)、K3PO4(800mg，9mmol)的烧瓶中加入2-丁醇(1.5mL)。将反应混合物在100℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸叔丁酯205-5，为黄色油状物。MS m/z 307.1(M+1).
步骤3：将2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸叔丁酯205-5(248mg，0.81mmol)和TFA(0.8mL)的DCM(0.8mL)混合物在室温下搅拌3小时。将溶液用Na2CO3调整pH至约12并用二氯甲烷萃取。将水相用1N HCl水溶液酸化至pH 3并搅拌15分钟。蒸发溶剂并将留下的固体用20％甲醇的乙酸乙酯溶液提取并过滤除去不溶物。将滤液通过旋转蒸发浓缩至干，得到2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸205-6，其直接用于下一步骤。MSm/z 251.1(M+1).
步骤4：将2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸205-6(50mg，0.2mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(34mg，0.2mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(50mg，0.24mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(4mg，0.04mmol)的DMF(0.9mL)混合物在室温下搅拌10小时。将粗产物过滤并将滤液直接通过反相HPLC纯化，得到2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺205，为白色固体。MS m/z 405.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.16(s，1H)，9.31(d，1H)，9.12(d，1H)，8.72(dd，1H)，8.63(d，1H)，8.61-8.60(m，1H)，8.52(dd，1H)，8.41(d，1H)，8.21(d，1H)，7.94(dd，1H)，7.88(dd，1H)，7.64(s，1H)，4.01(s，2H).
实施例50
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(206)
Figure BDA0000088274920001031
步骤1：向封闭管中加入5-溴-2-碘苄腈206-1(500mg，1.6mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸205-4(229mg，1.6mmol)、Pd(PPh3)4(94mg，0.08mmol)、Na2CO3(516mg，4.9mmol)、甲苯(2mL)、H2O(2mL)和乙醇(0.5mL)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在水(5ml)中和用乙酸乙酯(8mLx3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并用15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到5-溴-2-(2-氟吡啶-4-基)苄腈206-3。MS m/z277.1(M+1).
步骤2：向封闭管中加入5-溴-2-(2-氟吡啶-4-基)苄腈206-3(42mg，0.16mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(0.46mL，0.23mmol)、Pd(dba)2(4.4mg，0.008mmol)、Q-phos(10.8mg，0.015mmol)和THF(1mL)。向反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯206-5.MS m/z 313.2(M+1).
步骤3：将2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯206-5(35mg，0.11mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌5小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸206-6溶解在DMF(2mL)中。将5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺(23mg，0.13mmol)和DIEA(98uL，0.56mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(64mg，0.17mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺206.MS m/z 411.2(M+1)；1H NMR400MHz(MeOD)δ9.09(s，1H)，9.01(s，1H)，8.66(dd，1H)，8.52(d，1H)，8.42(dd，1H)，8.32(d，1H)，8.25(d，1H)，7.92(d，1H)，7.81(dd，1H)，7.64(d，1H)，7.52(dt，1H)，7.28(s，1H)，3.93(s，2H).
实施例51
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(207)
Figure BDA0000088274920001041
步骤1：向封闭管中加入4-溴-2-氟-1-碘苯207-1(600mg，2.0mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸205-4(282mg，2.0mmol)、Pd(PPh3)4(116mg，0.1mmol)、Na2CO3(636mg，6.0mmol)、甲苯(2mL)、H2O(2mL)和乙醇(0.5mL)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发溶剂并将残留物再溶解在水(5ml)中，并用乙酸乙酯(8mL x 3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过硅胶快速色谱法纯化并用15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到4-(4-溴-2-氟苯基)-2-氟吡啶207-3.MS m/z270.1(M+1).
步骤2：向封闭管中加入4-(4-溴-2-氟苯基)-2-氟吡啶207-3(210mg，0.76mmol)、0.5M(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)氯化锌(II)86-5的乙醚溶液(2.3mL，1.14mmol)、Pd(dba)2(22mg，0.04mmol)、Q-phos(54mg，0.07mmol)和THF(5mL)。向反应混合物冒泡通入氮气1分钟并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，蒸发所有溶剂并将残留物再溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化并用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯207-5。MS m/z 306.2(M+1).
步骤3：将2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸叔丁酯207-5(100mg，0.33mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌5小时。在高真空下蒸发溶剂至干。将粗产物2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸207-6(50mg，0.20mmol)溶解在DMF(2mL)中，将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(53mg，0.24mmol)和DIEA(174uL，1.0mmol)加入溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(114mg，0.30mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺207.MS m/z 452.2(M+1)；1HNMR 400MHz(MeOD)δ8.21(d，1H)，7.96(d，1H)，7.88(d，1H)，7.57-7.51(m，1H)，7.48-7.45(m，1H)，7.37(dd，1H)，7.30-7.21(m，3H)，3.75(s，2H)，3.68(t，2H)，3.63(t，2H)，3.14(t，2H)，3.09(t，2H，J＝5.2Hz)，2.09(s，3H).
实施例52
2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(208)
Figure BDA0000088274920001061
步骤1：在氩气气氛下，向含有2-(6-氯吡啶-3-基)乙酸乙酯208-1(300mg，1.5mmol)、2-氟吡啶-4-基硼酸205-4(318mg，2.25mmol)、Pd(OAc)2(17mg，0.075mmoL)、2-二环己基膦基-2’，6’-二甲氧基联苯(62mg，0.15mmol)、K3PO4(800mg，9mmol)的烧瓶中加入2-丁醇(1.5mL)。将反应混合物在100℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用40％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸乙酯208-2，为黄色固体。MS m/z 261.1(M+1).
步骤2：将2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸乙酯208-2(93mg，0.36mmol)和NaOH(57mg，1.43mmol)的THF(0.5mL)和水(0.5mL)混合物在65℃下搅拌3小时。冷却至室温后，将混合物用3N HCl水溶液处理以调整pH约为3，然后搅拌15分钟。将得到的溶液蒸发至干并将留下的固体用20％甲醇的乙酸乙酯溶液提取。将有机部分浓缩得到2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸208-3，为苍白色固体。MS m/z 233.1(M+1).
步骤3：将2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸208-3(42mg，0.18mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(31mg，0.18mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(45mg，0.22mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(4mg，0.036mmol)的DMF(0.9mL)混合物在室温下搅拌10小时。将粗产物过滤并将滤液通过反相HPLC纯化，得到2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺208，为白色固体。MS m/z 387.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.14(s，1H)，9.31(d，1H)，9.11(d，1H)，8.73-8.71(m，2H)，8.62(d，1H)，8.52(dd，1H)，8.36(d，1H)，8.23-8.17(m，2H)，8.06-8.02(m，1H)，7.95(dd，1H)，7.82(s，1H)，7.64(s，1H)，3.94(s，2H).
实施例53
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(209)
Figure BDA0000088274920001071
步骤1：向2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸208-3(42mg，0.18mmol)、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(40mg，0.18mmol)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，68mg，0.18mmol)的混合物中加入DMF(1mL)和二异丙基乙胺(DIEA，0.15mL，0.9mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将在澄清DMF溶液中的粗产物直接通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2′-氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺209，为白色固体。MS m/z 435.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.65(s，1H)，8.69(d，1H)，8.36(d，1H)，8.15(d，1H)，8.05-8.02(m，2H)，7.94-7.90(m，2H)，7.81(s，1H)，7.42(dd，1H)，3.83(s，2H)，3.57-3.54(m，4H)，3.15-3.13(m，2H)，3.09-3.06(m，2H)，2.03(s，3H).
实施例54
2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺(210)
步骤1：向2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸205-6(25mg，0.1mmol)、5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺145-3(17mg，0.1mmol)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，38mg，0.1mmol)的混合物中加入DMF(0.5mL)和二异丙基乙胺(DIEA，0.05mL，0.3mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将粗DMF溶液直接通过反相HPLC纯化，得到2-(2′，3-二氟-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺210，为白色固体。MS m/z 405.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.18(s，1H)，9.23(d，1H)，9.14(d，1H)，8.61(m，1H)，8.56(dd，1H)，8.41(d，1H)，8.29(dd，1H)，8.23(d，1H)，7.95(dd，1H)，7.91-7.86(m，1H)，7.81(dd，1H)，7.65(s，1H)，4.02(s，2H).
实施例55
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(211)
Figure BDA0000088274920001082
步骤1：将2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸206-6(50mg，0.20mmol)溶解在DMF(2mL)中。将1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(52mg，0.23mmol)和DIEA(170uL，0.98mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(111mg，0.29mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酰胺211。MS m/z 459.2(M+1))；1H NMR400MHz(DMSO-d6)δ10.64(s，1H)，8.41(d，1H)，8.05(d，1H)，7.98(d，1H)，7.91(d，1H)，7.81(dd，1H)，7.71(d，1H)，7.62(dt，1H)，7.49(s，1H)，7.42(dd，1H)，3.85(s，2H)，3.59-3.54(m，4H)，3.15(t，2H)，3.08(t，2H)，2.04(s，3H).
实施例56
2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(212)
步骤1：将2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸207-6(50mg，0.20mmol)溶解在DMF(2mL)中，将5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺(41mg，0.24mmol)和DIEA(174uL，1.0mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(114mg，0.30mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺212.MS m/z 404.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，9.31(d，1H)，9.11(dd，1H)，8.73-8.71(m，1H)，8.63(d，1H)，8.52(dd，1H)，8.34(d，1H)，8.21(d，1H)，7.70-7.52(m，2H)，7.43-7.34(m，3H)，3.89(s，2H).
实施例57
2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺(213)
Figure BDA0000088274920001092
步骤1：将2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸207-6(37mg，0.15mmol)溶解在DMF(2mL)中，并将5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺(31mg，0.18mmol)和DIEA(131uL，0.75mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(86mg，0.23mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到2-(3-氟-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺213。MS m/z 404.2(M+1))；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.11(s，1H)，9.22(dd，1H)，9.13(dd，1H)，8.55(dd，1H)，8.34(d，1H)，8.29(dd，1H)，8.23(d，1H)，8.02(d，1H)，7.83-7.78(m，1H)，7.71-7.65(m，1H)，7.60-7.57(m，1H)，7.44-7.35(m，3H)，3.90(s，2H).
实施例58
2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺(214)
Figure BDA0000088274920001101
步骤1：将2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)乙酸206-6(38mg，0.15mmol)溶解在DMF(2mL)中，将5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺(31mg，0.18mmol)和DIEA(131uL，0.75mmol)加入到溶液中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(86mg，0.23mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC纯化，得到2-(3-氰基-4-(2-氟吡啶-4-基)苯基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺214。MS m/z 411.2(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.14(s，1H)，9.23(dd，1H)，9.13(d，1H)，8.56(dd，1H)，8.42(d，1H)，8.30(dd，1H)，8.23(d，1H)，8.02(d，1H)，7.86-7.78(m，2H)，7.74(d，1H)，7.63(dt，1H)，7.50(s，1H)，3.97(s，2H).
实施例59
N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(S，S-二氧代-6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酰胺(219)
步骤1.向圆底烧瓶中加入2-氯-5-硝基吡啶(3.2g，20mmol)、(3-氟苯基)硼酸(2.8g，20mmol)、Pd(PPh3)4(0.46g，0.4mmol)、甲苯(60mL)、乙醇(20mL)和Na2CO3(2M，20mL)。向反应混合物冒泡通入氮气2分钟并在110℃下回流2小时。冷却至室温后，将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，用50％至100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到2-(3-氟苯基)-5-硝基吡啶，为黄色固体。MS m/z 219.1(M+1).
步骤2.向圆底烧瓶中加入2-(3-氟苯基)-5-硝基吡啶(3.8g，17mmol)、Pd/C(0.5g)和甲醇(100mL)。通过连接氢气球将反应物在氢气气氛下搅拌4小时。将反应物用氮气冲洗并通过过滤除去固体。通过旋转蒸发除去溶剂，得到6-(3-氟苯基)吡啶-3-胺219-1，为棕色固体。MS m/z 189.1(M+1).
步骤3.在氩气气氛下，将硫吗啉(1.03g，10.0mmol)、5-溴-2-碘吡啶(3.69g，13mmol)、Pd2(dba)3(200mg，0.2mmol)、Xantphos(510mg，0.6mmol)和t-BuONa(1.44g，15mmol)的甲苯(50ml)混合物在98℃下搅拌3小时。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土过滤和用乙酸乙酯洗涤。将滤液蒸发，并将残留物通过硅胶柱色谱法用0～5％乙酸乙酯的己烷溶液作为洗脱液纯化，得到4-(5-溴吡啶-2-基)硫吗啉219-2，为固体。
步骤4.在氩气气氛下，将4-(5-溴吡啶-2-基)硫吗啉219-2(2.37g，9.15mmol)、丙二酸二乙酯(2.04g，12.8mmol)、Pd(OAc)2(102mg，0.46mmol)、联苯-2-基-二-叔丁基膦(270mg，0.9mmol)和t-BuONa(1.76g，18.3mmol)的甲苯(45ml)混合物在98℃下搅拌1小时。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土过滤和用乙酸乙酯洗涤。将滤液蒸发并将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，得到2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)丙二酸二乙酯219-3。
步骤5.将2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)丙二酸酯219-3(564mg，1.67mmol)与NaOH(334mg，8.35mmol)在二氧六环(5ml)和水(5ml)中搅拌4小时。加入HCl溶液调整pH约为1，并将反应混合物在88℃加热1小时。然后用Na2CO3调整pH到约为4，然后蒸发溶剂。将残留物用乙酸乙酯萃取并将有机萃取液用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩。用反相HPLC纯化，得到2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酸219-4。
步骤6.将2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酸219-4(92mg，0.39mmol)、6-(3-氟苯基)吡啶-3-胺219-1(73mg，0.39mmol)、HATU(162mg，0.43mmol)和DIEA(104μl，0.6mmol)的DMF(1.0ml)混合物在室温下搅拌过夜。然后将其在水(30ml)和乙酸乙酯(40ml)中重新分配。将有机相用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩。通过硅胶柱色谱法(用乙酸乙酯/己烷从1∶10到2∶1作为洗脱液)纯化，得到N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酰胺219-5，为固体。
步骤7.在0℃下，将N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酰胺219-5(114mg，0.28mmol)用在DCM(2ml)中的mCPBA处理。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，用5％Na2CO3溶液洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(S，S-二氧代-6-硫吗啉代吡啶-3-基)乙酰胺219，为固体。MS m/z 396.3(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.82(d，1H)，8.16(dd，1H)，8.11(d，1H)，7.99(d，1H)，7.92～7.80(m，2H)，7.60(dd，1H)，7.50(m，1H)，7.22(m，1H)，7.02(d，1H)，4.06～4.01(m，4H)，3.61(s，2H)，3.10～3.05(m，4H).
实施例60
2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺(221)
Figure BDA0000088274920001131
在室温下，向2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)乙酸193-2(25mg，0.1mmol)和5-(哒嗪-3-基)吡啶-2-胺145-3(17mg，0.1mmol)的DCM(1mL)混合物中加入N，N′-二异丙基碳二亚胺(22μL，0.15mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时。通过旋转蒸发除去溶剂并将残留物溶解在DMSO中，然后通过反相HPLC纯化，得到2-(2′-氟-3-甲基-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺221，为白色固体。MS m/z 401.1(M+1)；1HNMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.09(s，1H)，9.17(dd，1H)，9.07(d，1H)，8.51(dd，1H)，8.46(d，1H)，8.28(d，1H)，8.25(dd，1H)，8.18(d，1H)，7.76(m，1H)，7.71(d，1H)，7.51(m，1H)，7.31(s，1H)，3.83(s，2H)，2.31(s，3H).
实施例61
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲基-2′-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺(222)
Figure BDA0000088274920001141
向封闭管中加入N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙酰胺148-1(123mg，0.32mmol)、2-(三氟甲基)吡啶-4-基硼酸(61mg，0.32mmol)、Pd(OAc)2(3.6mg，0.016mmol)、2，6-二甲氧基-1，1′-联苯-2-基)二环己基膦(13.0mg，0.032mmol)和K3PO4(202mg，0.95mmol)。将该管和其内容物用氮气清洗。加入脱气的甲苯(1.0mL)后，将混合物在120℃搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物倾入水中并用乙酸乙酯萃取(8mLx3)。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-甲基-2′-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)乙酰胺222。MS m/z 498.8(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.81(d，1H)，8.51(d，1H)，8.35(s，1H)，8.11(d，1H)，7.91(s，1H)，7.89(s，1H)，7.68-7.64(m，2H)，7.30(dd，1H)，3.80-3.75(m，4H)，3.63(t，2H)，3.14(t，2H)，3.11(t，2H)，2.39(s，3H)，2.14(s，3H).
实施例62
2-(3-甲基-2′-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(223)
Figure BDA0000088274920001142
向封闭管中加入2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺86-8(85mg，0.25mmol)、2-(三氟甲基)吡啶-4-基硼酸(48mg，0.25mmol)、Pd(OAc)2(2.8mg，0.013mmol)、2，6-二甲氧基-1，1′-联苯-2-基)二环己基膦(10.2mg，0.025mmol)和K3PO4(159mg，0.75mmol)。将该管和其内容物用氮气清洗。加入脱气的甲苯(1.0mL)后，将混合物在100℃下搅拌2小时。冷却至室温后，将混合物倾入水中并用乙酸乙酯萃取(8mLx3)。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并浓缩。将残留物通过反相HPLC纯化，得到2-(3-甲基-2′-(三氟甲基)-2，4′-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺223.MS m/z 450.8(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ9.01(d，1H)，8.95(s，1H)，8.81(d，1H)，8.76(s，1H)，8.63(dd，1H)，8.56-8.51(m，2H)，8.37(s，2H)，7.89(s，1H)，7.69-7.65(m，2H)，3.84(s，2H)，2.40(s，3H).
实施例63
N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-氰基-3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺(237)
Figure BDA0000088274920001151
步骤1.在室温下，向2-(3-氯-4-羟基苯基)乙酸(560mg，3.00mmol)、三氟甲磺酸酐(888mg，3.15mmol)的DCM(30ml)混合物中加入三乙胺(1.1ml，8.06mmol)并将混合物搅拌2小时。然后用HCl溶液(1N，30mlx2)洗涤，用Na2SO4干燥并通过旋转蒸发浓缩，得到2-(3-氯-4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)乙酸237-1(749mg，粗品)，其不需要进一步纯化直接用于反应。
步骤2.将2-(3-氯-4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基)乙酸237-1、1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮111-4(112mg，0.51mmol)、HATU(232mg，0.61mmol)和DIEA(0.26ml，1.49mmol)的DMF(2.0ml)溶液在室温下搅拌过夜。将溶液直接通过反相HPLC纯化，得到三氟甲磺酸4-(2-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基氨基)-2-氧代乙基)-2-氯苯基酯237-2。
步骤3.在氩气气氛下，将三氟甲磺酸4-(2-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基氨基)-2-氧代乙基)-2-氯苯基酯237-2(65mg，0.125mmol)、Zn(CN)2(30mg，0.255mmol)、Pd(PPh3)4(14mg，0.012mmol)的DMF(0.6ml)混合物在80℃下搅拌96小时。冷却至室温后，将其通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，并通过蒸发溶剂浓缩。将残留物通过反相HPLC纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-4-氰基苯基)乙酰胺237-3，为固体。
步骤4.在氩气气氛下，将为固体的N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(3-氯-4-氰基苯基)乙酰胺237-3(17mg，0.043mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(24.5mg，0.064mmol)、Pd(PPh3)4(5mg，0.0043mmol)的DMF(0.6ml)混合物在118℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将其通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(30ml)洗涤和稀释。然后将其用水(40ml)洗涤，并用0.5N HCl(30ml)萃取。将水萃取液用Na2CO3处理以使得pH调整到约为9后，将水相用乙酸乙酯萃取(30mlx2)。将合并的有机相用Na2SO4干燥，通过旋转蒸发浓缩，并将残留物通过硅胶柱色谱法用MeOH的乙酸乙酯溶液(0-5％)作为洗脱液纯化，得到N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(4-氰基-3-(2-甲基吡啶-4-基)苯基)乙酰胺237，为固体。MS m/z 455.2(M+1)；1H NMR 400MHz(CDCl3)δ8.62(d，1H)，8.08(d，1H)，8.02(bs，1H)，7.91(d，1H)，7.79(d，1H)，7.53～7.47(m，2H)，7.34(bs，1H)，7.31～7.26(m，2H)，3.82(s，2H)，3.80～3.75(m，2H)，3.65～3.60(m，2H)，3.16～3.08(m，4H)，2.64(s，3H)，2.14(s，3H).
实施例64
2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺(238)
Figure BDA0000088274920001171
步骤1：在氩气气氛下，向含有2-(2-氯吡啶-4-基)乙酸甲酯238-1(1.00g，5.38mmol)、2-甲基-4-(三丁基锡烷基)吡啶(2.06g，5.38mmol)、Pd(PPh3)4(594mg，0.54mmoL)的烧瓶中加入DMF(15mL)。将反应混合物在120℃下搅拌10小时。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发浓缩至干。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，采用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)乙酸甲酯238-2，为暗橙色油状物。MS m/z 243.1(M+1).
步骤2：将2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)乙酸甲酯238-2(621mg，2.56mmol)和NaOH(409mg，10.24mmol)在1，4-二氧六环(6mL)和水(6mL)中的混合物在80℃下搅拌3小时。冷却至室温后，将混合物用3N HCl水溶液处理来调整pH至约为4，然后搅拌15分钟。将得到的溶液蒸发至干并将留下的固体用20％甲醇的乙酸乙酯溶液提取。将有机提取液浓缩得到2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)乙酸238-3，为苍白色固体。MS m/z 229.1(M+1).
步骤3：将2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)乙酸238-3(46mg，0.2mmol)、5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-胺86-3(34mg，0.2mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(50mg，0.24mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(4mg，0.04mmol)的DMF(0.9mL)混合物在室温下搅拌10小时。将粗产物过滤除去不容物并将滤液直接通过反相HPLC纯化，得到2-(2′-甲基-2，4′-联吡啶-4-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺238，为白色固体。MS m/z 383.1(M+1)；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ11.14(s，1H)，9.30(d，1H)，9.11(dd，1H)，8.73-8.71(m，1H)，8.67(d，1H)，8.62(d，1H)，8.56(d，1H)，8.52(dd，1H)，8.21(d，1H)，8.09(s，1H)，7.93(s，1H)，7.84(dd，1H)，7.45(dd，1H)，3.95(s，2H)，2.56(s，3H).
将本发明的示例化合物以及采用Wnt-Luc报道分子测定法测得的IC50值总结在表1中。
表1
Figure BDA0000088274920001181
Figure BDA0000088274920001191
Figure BDA0000088274920001211
Figure BDA0000088274920001221
Figure BDA0000088274920001231
Figure BDA0000088274920001241
Figure BDA0000088274920001251
Figure BDA0000088274920001261
Figure BDA0000088274920001271
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Figure BDA0000088274920001291
Figure BDA0000088274920001301
Figure BDA0000088274920001321
Figure BDA0000088274920001331
Figure BDA0000088274920001341
Figure BDA0000088274920001361
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Figure BDA0000088274920001381
Figure BDA0000088274920001391
Figure BDA0000088274920001401
Figure BDA0000088274920001411
Figure BDA0000088274920001421
Figure BDA0000088274920001431
Figure BDA0000088274920001461
Figure BDA0000088274920001471
Figure BDA0000088274920001481
测定法
用于Wnt信号通路抑制的Wnt-Luc报道分子测定法
将小鼠莱迪希细胞TM3细胞(获自美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection)，ATCC，Manassas，VA)在Ham′s F12培养基和补加有2.5％FBS(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)和5％马血清(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)、50单位/mL青霉素和50μg/mL链霉素(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)的Dulbecco改良的Eagle培养基(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)的1∶1混合物中在37℃与5％CO2在空气气氛中培养。按照制造商的方案将10cm培养皿中的TM3细胞用8μg含有被Wnt-应答元件驱动的萤光素酶基因的STF-报道分子质粒和2μgpcDNA3.1-Neo(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)以及30μL FuGENE6(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)共转染。用400μg/mL G418(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)选择稳定细胞系(TM3Wnt-Luc)。使TM3Wnt-Luc细胞和L-细胞Wnt3a细胞(获自美国标准生物品收藏中心，ATCC，Manassas，VA；在补加有10％FBS(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)和50单位/mL青霉素和50μg/mL链霉素(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)的Dulbecco改良的Eagle培养基(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)在37℃与5％CO2在空气气氛中培养的)受胰蛋白酶作用，并在384-孔板中与补加有2％FBS的DMEM培养基一起共培养，并用不同浓度的本发明的化合物进行处理。24小时后，采用Bright-GloTM萤光素酶测定系统(Promega，Madison，WI)测定萤火虫萤光素酶活性。当化合物的作用使发光信号减少50％时测定IC50。
Wnt信号通路抑制的Wnt-Luc报道分子测定法
将人胚肾293细胞(获自美国标准生物品收藏中心，ATCC，Manassas，VA)在补加有10％FBS(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)、50单位/mL青霉素和50μg/mL链霉素(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)的DMEM培养基(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)中在37℃与5％CO2在空气气氛中培养。按照制造商的方案将10cm培养皿中的293细胞用8μg含有被Wnt-应答元件驱动的萤光素酶基因的STF-报道分子质粒和2μgpcDNA3.1-Neo(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)以及30μL FuGENE6(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)共转染。用400μg/mL G418(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)选择稳定细胞系(293Wnt-Luc)。使293Wnt-Luc细胞和L-细胞Wnt3a细胞(获自美国标准生物品收藏中心，ATCC，Manassas，VA)受胰蛋白酶作用，并在384-孔板中与补加有2％FBS的DMEM培养基一起共培养，并用不同浓度的本发明的化合物进行处理。24小时后，采用Bright-GloTM萤光素酶测定系统(Promega，Madison，WI)测定萤火虫萤光素酶活性。当化合物的作用使发光信号减少50％时测定IC50。
应当理解的是，本文所述的实施例和实施方案仅用作举例说明目的，基于其的各种修改或改变对本领域技术人员而言已有提示，这些修改或改变包括在本申请的精神和主旨以及所附权利要求书的范围内。将本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请引入本文作为参考用于所有目的。

Claims (17)

1.式(6)的化合物：
Figure FDA0000464910120000011
或其生理上可接受的盐，其中：
其中X1、X2、X3和X4选自N和CR7；
X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CH；
X9选自N和CH；
Z选自苯基、吡嗪基、吡啶基、哒嗪基和哌嗪基；其中Z的苯基、吡嗪基、吡啶基、哒嗪基或哌嗪基各自任选被R6基团取代；
R1、R2和R3是氢；
m是1；
R4选自氢、卤素、二氟甲基、三氟甲基和甲基；
R6选自氢、卤素和-C(O)R10；其中R10是甲基；且
R7选自氢、卤素、氰基、甲基和三氟甲基。
2.化合物，其选自
Figure FDA0000464910120000012
Figure FDA0000464910120000021
Figure FDA0000464910120000031
Figure FDA0000464910120000041
Figure FDA0000464910120000051
Figure FDA0000464910120000061
Figure FDA0000464910120000071
或其生理上可接受的盐。
3.权利要求1的化合物，其中所述化合物是2-(2',3-二甲基-2,4'-联吡啶-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其生理上可接受的盐。
4.权利要求1的化合物，其中所述化合物是N-(2,3'-联吡啶-6'-基)-2-(2',3-二甲基-2,4'-联吡啶-5-基)乙酰胺或其生理上可接受的盐。
5.权利要求1的化合物，其中所述化合物是N-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-2-(2'-氟-3-甲基-2,4'-联吡啶-5-基)乙酰胺或其生理上可接受的盐。
6.式(5)的化合物：
Figure FDA0000464910120000081
或其生理上可接受的盐，其中：
其中A1是被–C(O)CH3取代的哌嗪基、
Figure FDA0000464910120000082
或选自：
Figure FDA0000464910120000083
环E是苯基，或X1、X2、X3和X4中的一个是N且其余的是CR7；
X5、X6、X7和X8中的一个是N且其余的是CR11；
Z是6-元杂环或6-元杂芳基，各含有1-2个氮杂原子，并且其各自任选被1-2个R6基团取代；
R1、R2和R3是H；
R4和R6独立地是氢、氰基、C1-6烷氧基、–S(O)2R10、–C(O)NR8R9、-L-C(O)R10、-L-C(O)OR10、C1-6烷基，其任选被卤素、C2-6烯基或C2-6炔基取代；
R5是H或C1-6烷基；
L是键或(CR2)1-4其中R是H或C1-6烷基；
W是C3-7环烷基；
R7和R11独立地是H、卤素、氰基、C1-6烷氧基、-S(O)2R10或任选被卤素取代的C1-6烷基；
R8和R9独立地是H、-L-W或C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，其各自任选被卤素、氨基、羟基或氰基取代；
R10是C1-6烷基或-L-W；且
m、n和p独立地是0-2。
7.权利要求6的化合物，其中A1是被–C(O)CH3取代的哌嗪基、或选自：
Figure FDA0000464910120000092
且m是0-1。
8.化合物，其选自：
Figure FDA0000464910120000093
Figure FDA0000464910120000101
Figure FDA0000464910120000111
Figure FDA0000464910120000131
Figure FDA0000464910120000141
Figure FDA0000464910120000151
Figure FDA0000464910120000171
或其生理上可接受的盐。
9.根据权利要求1、6和7中任何一项的化合物，其中Z选自吡嗪基、吡啶基、哒嗪基和哌嗪基；其中Z的吡嗪基、吡啶基、哒嗪基或哌嗪基各自任选被R6基团取代。
10.根据权利要求1-9中任何一项的化合物，其中所述化合物是富马酸盐形式的。
11.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-9中任何一项的化合物和生理学上可接受的载体。
12.权利要求1-10中任何一项的化合物或权利要求11的药物组合物在制备治疗Wnt-介导的病症的药物中的用途。
13.权利要求12的用途，其中所述Wnt-介导的病症是视网膜病。
14.权利要求12的用途，其中所述Wnt-介导的病症是瘢痕瘤、纤维化、蛋白尿、肾移植排斥、骨关节炎、帕金森病、黄斑囊样水肿、黄斑变性或与异常的Wnt信号活性相关的细胞增殖性病症。
15.权利要求14的用途，其中所述病症是选自下面的与异常的Wnt信号活性相关的细胞增殖性病症：结肠直肠癌、乳腺癌、头颈鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、脑瘤、维尔姆斯瘤、基底细胞癌、黑色素瘤、宫颈癌和前列腺癌。
16.权利要求14的用途，其中所述病症是选自下面的与异常的Wnt信号活性相关的细胞增殖性病症：肉瘤、头颈癌和食道癌。
17.权利要求1-10中任何一项的化合物或权利要求11的药物组合物在制备治疗通过抑制Wnt-信号可治疗的病症的药物中的用途。
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