CN101918594A - 肺癌中外周血中的微rna表达特征谱和靶向 - Google Patents

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Abstract

公开了通过检测外周血中的至少一种微RNA来诊断、预后和治疗肺癌的方法。

Description

肺癌中外周血中的微RNA表达特征谱和靶向
发明人：Serge P.Nana-Sinkam、Clay B.Marsh、Melissa G.Hunter、Gregory A.Otterson
相关申请的交叉参考和关于联邦政府赞助的研究的声明
本申请要求2007年11月30日提交的美国临时申请61/004,863的权益，其公开内容通过引用合并入本文。本发明是在无政府赞助的情况下进行的，政府在本发明中不具有权利。
发明的技术领域和工业适用性
本发明涉及通过检测外周血中至少一种微RNA(miR)来诊断、预后和治疗肺癌的某些方法。
发明背景
肺癌是美国男性和女性的癌症死亡的首要原因，具有令人沮丧的小于15％的5年存活率。在过去几年中，流行病学统计显示大部分肺癌在曾吸烟者和从未吸烟者中得到诊断。
虽然近年来肺癌的病例和死亡率略有下降，但估计2008年仍有215,020个新病例和161,840例死亡。肺癌早期检测的筛查测试还未建立，目前低于25％的受试者具有可通过手术治愈的疾病(I期和II期)。此外，虽然早期可切除的疾病的5年存活率达到70-80％，但疾病的复发仍然保持不可接受地高。
已越来越认识到，肺癌代表了一组尽管形态学相似但展示不同的生长速度、转移潜力和对治疗的应答的异质性疾病。鉴于曾吸烟者中肺癌的高发病率，早期可治疗的疾病的风险分类和鉴定非常重要。
在临床和病理学上，肺癌被广泛地分为两个不同类型，小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。SCLC代表大约20％的所有肺癌，其特征在于快速的生长速度和初步诊断时分布广泛的疾病。NSCLC(占据80％的肺癌)是至少3种不同病理实体(腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌)的集合，它们行为不同并且在临床上以相似的方式进行治疗。NSCLC倾向于比SCLC更不活跃并且对化疗不太敏感。SCLC的治疗主要依靠化疗(加或不加放射治疗)，然而NSCLC的主要治疗方式是手术且恰当地配合放射和/或化疗。
微RNA(MiRNA，miR)是在许多生物包括动物、植物和病毒中表达的小的非编码RNA(长大约21-25nt)的家族。MiRNA靶向基因以降解mRNA或抑制蛋白质翻译。单个miRNA可靶向多个基因，同时单个基因可被多个miRNA靶向。虽然大多数miRNA的功能仍然不清楚，但几个研究表明它们对于至关重要的生物学功能包括基因调控、细胞凋亡、造血发育和细胞分化的维持可能是不可或缺的。据估计大于50％的miRNA位于已知在癌症中缺失或扩增的染色体区域中。
对肺癌中的miRNA的了解正在开始形成。之前，研究者发现，多个miR-let-7家族基因可靶向线虫(C.elegans)中的线虫RAS基因(let-60)的3′非翻译区(UTR)。let-7的过表达抑制RAS蛋白的表达并且在人NRAS和KRAS 3′-UTR中观察到let-7的互补位点。RAS信号转导据信在肺癌中帮助起始人let-7基因组区域的缺失。事实上，143个切除的肺癌病例中减少的let-7表达与更差的预后关联。
最近，通过使用miRNA芯片分析，研究者显示了104对原发性肺癌和相应的非癌组织中不同miRNA的特征谱。此外，在患腺癌的受试者中，5种不同miRNA(miR-155、17-3p、let-7a-2、145和21)在表达和预测的预后中发生了改变。
基因组平台在鉴定疾病的组织学亚类、新分子靶、预后工具和对治疗的应答中已成为强大的工具。然而，虽然肺癌研究的重现性已有提高，但在使用微阵列分析进行的组织学分类中仍然存在可变性。此外，基因组研究并没有解决基因表达和生物学相关性的有效性的缺乏。整合几个分析平台的系统方法可能是更好地阐明肺癌的分子异质性所必需的。
然而，为了进行正确地鉴定诊断标志物和治疗靶的微阵列研究，必需通过蛋白质分析确定哪些基因表达的变化是有效的。此外，为了确定微阵列分析的生物学显著性，功能读出器的开发也是必需的。
现于本文中提供了一个特征组的特定生物标志物，其可用于外周血的基因组分析，从而用于区分肺癌受试者与正常对照。
发明概述
在第一个广泛的方面，提供了诊断受试者是否患有肺癌或处于发展肺癌的风险中的方法。该方法包括测量受试者的外周血受试样品中至少一种miR基因产物的水平。与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，受试样品中miR基因产物的水平的改变表明受试者患有肺癌或处于发展肺癌的风险中。
在另一个方面，本文中提供了使用外周血中的基因表达模式作为非侵袭性生物标志物以进行疾病的诊断和预后的方法。
在另一个广泛的方面，本文中提供了确定患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者的预后的方法。
当根据附图阅读时，根据下列优选实施方案的详述，本发明的各种目的和优势对本领域技术人员来说将变得显然。
附图概述
图1-Tile代表来自患晚期肺癌的受试者(肿瘤n＝4)和正常对照(正常N＝3)的全外周血miRNA。绿色代表相对高的表达，红色代表相对低的表达。
图2-正常受试者(n＝3)和患晚期未治疗肺癌的受试者(n＝4)的全外周血中MiR-126表达的RT-PCR(*p＜.05)。
图3A-D-人肺癌中miR-155的原位杂交：
图3A-未成熟MiR-155定位至腺癌的细胞核(箭头)。
图3B-相同腺癌样品中不存在可检测的miR-155的成熟形式的表达表明受损的加工。
图3C-支气管肺泡细胞癌(BAC)的细胞核中的未成熟-miR-155(箭头)。
图3D-定位至细胞质的成熟miR-155。
图.4A-4D-MiR-126转染改变了Crk蛋白的表达：
图4A：H1703(非小细胞肺癌)细胞的PremiR-126转染导致miR-126mRNA表达增加1000至5000倍和Crk II蛋白减少。
图4B-4D：Crk mRNA无变化(图4B)。Crk I蛋白不能被Western检测到。用100nM LNA miR-126反义寡核苷酸转染H226细胞导致与混杂(scrambled)pre-miR转染相比，miR-126表达减少10倍(图4C)和Crk II蛋白表达增加，如通过光密度法测量的(*p＜.05)，但不导致mRNA改变(图4D)。以一式二份重复进行Western印迹法，所有RT-PCR结果代表来自以一式二份重复进行的两个独立实验的平均值＝/-S.E.。(*p＜.05，混杂对pre-miR)18S用作内部对照。
图5A-5G：显示人肺鳞状细胞癌中miR-126的原位杂交和Crk的免疫组织化学的代表性图像。在例子1中，Crk表达(红色)在大多数肿瘤细胞中是很明显的(图5A)，并且在肿瘤细胞的相邻部分中不存在miR-126的表达(图5B)，但在正常支气管上皮中检测到miR-126(图5C)(蓝色信号)。在例子2中，在肿瘤中不存在可检测的Crk(图5D)，然而在肿瘤中存在miR-126(蓝色)的强表达(图5E)；在正常组织中Crk定位至内皮(图5F)；和定位至支气管上皮(图5G)(除了图5F为1000X和图5G为200X外，所有图像为400x)。
图6-显示与外周血单核细胞(PBMC)中的正常(N＝5)水平相比，肺癌(N＝5)中miR-126的相对表达的图。(p＜.05)
图7-显示与血清中的正常(N＝5)水平相比，肺癌(N＝5)中miR-let7a的相对表达的图。(p＜.05)。
图8-显示与血清中的正常(N＝5)水平相比，肺癌(N＝5)中miR-126的相对表达的图。(p＜.05)。
图9A-9D：miR-126的过表达对H1703增殖、粘着、迁移和侵袭的作用。
图9A：对照、混杂pre-miR和pre-miR 126细胞在96小时内展示相似的生长速度。以一式三份重复进行2个独立的增殖测定。
图92B-92D：过表达MiR-126的细胞显示减少的粘着(图9B)、迁移(图9C)和侵袭(图9D)。图9C和图9D中的图像代表盲态随机视野(blinded random field)(p＜.05)。在所有实验中，通过RT-PCR确认miR-126的过表达以确保足够的诱导。结果代表以一式三份重复进行的4个视野的平均值(*p＜.05，混杂对pre-miR)。
图10A-10B：NSCLC组织中的miR-126和Crk的表达：19对的人非小细胞肺癌和未受影响的相邻的肺(鳞状1-13和腺癌14-19)的检查显示与未受影响的相邻正常(N)的肺相比，肿瘤(T)中miR-126mRNA的表达减少(图10A)。这些相同样品中Crk mRNA的表达是可变的，19个肿瘤中有7个展示比未受影响的相邻的肺更高的Crk表达。(图10B)RT-PCR结果代表来自以一式三份重复进行的2个独立实验的平均值＝/-S.E.(*p＜.05，肿瘤对未受影响的肺)。18S用作内源对照。
图11(实际的图指底部的图9)-表4显示寡核苷酸探针(Oli goprobe)、前体序列、成熟mRNA、探针是否在活性部位上、Entrez-Gene ID、Ref Seq ID、miR Base茎环登录号、miR Base成熟序列登录号、注释、寡核苷酸序列、成熟miRNA序列和茎环序列。
图12-表5显示血清中检测到的miRNA。
图13-表6显示外周血单核细胞(PBMC)中检测到的miRNA。
优选实施方案的详述
本发明部分基于参与炎症应答和/或在血液中具有改变的表达水平的特定微RNA(miRNA)的鉴定。本发明还部分基于此类miRNA与特定诊断、预后和治疗特征的关联。
在第一个广泛的方面，本文中提供了确定受试者是否患有一种或多种肺癌相关疾病或处于发展所述疾病的风险中的方法。该方法通常包括：测量受试者的外周血样品中至少一种miR基因产物的水平，其中与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，样品中miR基因产物的水平的改变表示受试者患有一种或多种肺癌相关疾病或处于发展所述疾病的风险中。
在某些实施方案中，外周血样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)和血清中的一种或多种。
在某些实施方案中，一种或多种肺癌相关疾病包括支气管肺泡癌(BAC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鳞状细胞癌和小细胞癌。
在某些实施方案中，外周血样品包括全血，并且至少一种miR基因产物是选自本文表1中显示的组的与正常对照相比具有增加的表达的一种或多种miR基因产物。在某些实施方案中，miR是hsa-miR-518f、hsa-miR-516-3p和hsa-miR-516-5p中的一种或多种。
在某些实施方案中，外周血样品包括全血，并且其中至少一种miR基因产物是选自本文表1中显示的组的与正常对照相比具有减少的miR表达的一种或多种miR基因产物。在某些实施方案中，miR是hsa-miR-1-2No1、hsa-miR-511-2No2、hsa-miR-101-2No1、hsa-miR-218-2-precNo1、hsa-miR-451No2、hsa-miR-126*No2、hsa-let-7d-v1-prec、hsa-miR-1-lNo1、hsa-miR-123-precNo1、hsa-miR-100No1、hsa-miR-150-prec、hsa-miR-021-prec-17No1、hsa-miR-34aNo1、hsa-let-7iNo1、hsa-miR-126*No1、hsa-miR-126No2、hsa-miR-181c-precNo2、hsa-miR-126No1中的一种或多种。
在另一个方面，外周血样品包括外周血单核细胞(PBMC)，并且至少一种miR基因产物是选自表2中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述表2中显示的组由hsa-miR-630的减少的miR表达组成。
在另一个方面，样品包括外周血单核细胞，并且至少一种miR基因产物是选自表2中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述表2中显示的组由hsa-miR-152、hsa-miR-365、hsa-miR-487a、hsa-miR-148a、hsa-miR-636、hsa-miR-320和hsa-miR-145的增加的miR表达组成。
在另一个方面，外周血样品包括血清，并且至少一种miR基因产物是选自表3中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述表3中显示的组由hsa-miR-192的增加的miR表达组成。
在另一个方面，样品包括血清，并且至少一种miR基因产物是选自表3中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述表3中显示的组由hsa-miR-532、hsa-miR-197、hsa-miR-342的减少的miR表达组成。
在另一个方面，至少一种miR基因产物是选自表4中显示的组的一种或多种miR基因产物。
在另一个方面，至少一种miR基因产物是选自表5中显示的组的一种或多种miR基因产物。
在另一个方面，至少一种miR基因产物是选自表6中显示的组的一种或多种miR基因产物。
在另一个方面，该方法用于确定患有肺癌的受试者的预后，其包括：测量来自受试者的样品中至少一个miR基因产物的水平，其中所述miR基因产物与肺癌中不利的预后相关；和，与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，样品中至少一个miR基因产物的水平的改变表示不利的预后。
在另一个方面，本文中提供了检测外周血样品中的一种或多种肺癌相关疾病的方法，所述方法包括：就至少一个与肺癌相关的生物标志物的改变的表达分析样品，和使至少一个生物标志物的改变的表达与样品中肺癌的存在或不存在关联，其中所述至少一个生物标志物选自表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了早期诊断怀疑患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者的方法，所述方法包括：从受试者获得样品；就至少一个与肺癌相关的生物标志物的改变的表达分析样品；使至少一个生物标志物的改变的表达与受试者中肺癌的存在关联；其中所述至少一个生物标志物选自表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了治疗患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者的方法，其包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含与至少一个选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物互补的核酸。
在另一个方面，本文中提供了包含与至少一个选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物互补的核酸的药物组合物。
在另一个方面，本文中提供了比较经历针对一种或多种肺癌相关疾病的放化疗的患者的外周血样品与未经历放化疗的患者的样品的方法，其包括：比较至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物的差异表达。
在另一个方面，本文中提供了比较患者中一种或多种肺癌相关疾病的分期的方法，其包括：从患者获得外周血样品；和比较至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物的差异表达。
在另一个方面，本文中提供了用于抑制有此需要的受试者中一种或多种肺癌相关疾病的方法，其包括：施用至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了治疗患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者中一种或多种肺癌相关疾病(其中至少一种miR在受试者的癌细胞中下调或上调(与对照细胞相比))的方法，其包括：当至少一种miR在癌细胞中下调时，对受试者施用有效量的至少一种分离的miR，以便受试者中癌细胞的增殖被抑制；或当至少一种miR在癌细胞中上调时，对受试者施用有效量的至少一种用于抑制至少一种miR的表达的化合物，以便受试者中癌细胞的增殖被抑制；其中miR选自表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了治疗受试者中一种或多种肺癌相关疾病的方法，其包括：测定与对照样品相比，从受试者获得的外周血样品中至少一种miR的量，其中miR选自表1、表2或表3中列出的miR；和通过下列改变受试者中miR活性的量：(i)如果受试者中表达的miR的量低于对照细胞中表达的miR的量，对受试者施用有效量的至少一种分离的miR；或(ii)如果受试者中表达的miR的量大于对照细胞中表达的miR的量，对受试者施用有效量的至少一种用于抑制至少一种miR的表达的化合物，以便受试者中肺癌的增殖被抑制。
在另一个方面，本文中提供了鉴定抗肺癌相关疾病试剂的方法，其包括：给癌细胞提供测试试剂，和测量至少一种与肺癌细胞中减少的表达水平相关的miR的水平，其中与合适的对照细胞相比，肺癌细胞中miR的水平的增加表示测试试剂为抗癌试剂；其中miR选自表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了用于评估受试者中的病理状况或发展病理状况的风险的方法，其包括：测量来自受试者的样品中一种或多种标志物的表达特征谱，其中来自受试者的样品中的表达特征谱与正常样品的表达特征谱的差异表示一种或多种肺癌相关疾病或对其的易感性，并且其中标志物至少包括一种或多种表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了包含一种或多种选自表1、表2或表3中列出的miR的miR的组合物。
在另一个方面，本文中提供了用于检测一种或多种肺癌相关疾病的试剂，其中所述试剂包括多核苷酸，所述多核苷酸包含至少一个表1、表2或表3中列出的miR的核苷酸序列或与所述miR的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
在另一个方面，本文中提供了用于检测一种或多种肺癌相关疾病的试剂，其中所述试剂包含识别由至少一种表1、表2或表3中列出的miR编码的蛋白质的抗体。
在另一个方面，本文中提供了评估疗法预防、诊断和/或治疗一种或多种肺癌相关疾病的有效性的方法，其包括将受试者经历其有效性有待评估的疗法，和通过评估至少一种表1、表2或表3中列出的miR来测定待检测的疗法在治疗或预防一种或多种肺癌相关疾病中的有效性的水平。
在某些实施方案中，候选治疗剂包括药物组合物、营养组合物和顺势疗法组合物(homeopathic composition)中的一种或多种。
在某些实施方案中，待评估的疗法用于人受试者。
在另一个方面，在本文中提供了制品，其包含：至少一种捕获剂，其结合选自至少一种表1、表2或表3中列出的miR的一种或多种肺癌相关疾病的标志物。
在另一个方面，本文中提供了用于筛选用于治疗一种或多种肺癌相关疾病的治疗剂的候选化合物的试剂盒，其中试剂盒包括：至少一种表1、表2或表3中列出的miR的一种或多种试剂和表达至少一种miR的细胞。
在某些实施方案中，使用包含特异性结合至少一种miR的抗体或抗体片段的试剂检测miR的存在。
在另一个方面，本文中提供了用于一种或多种肺癌相关疾病的筛查测试：将一种或多种表1、表2或表3中列出的miR与此类miR的底物和与测试试剂接触，然后确定测试试剂是否调控miR的活性。
在某些实施方案中，体外进行所有方法步骤。
在另一个方面，本文中提供了干扰一种或多种肺癌相关应答信号转导途径的试剂用于制造药剂的用途，所述药剂用于治疗、预防、逆转或限制个体中一种或多种肺癌相关疾病相关并发症的严重性，其中试剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了治疗、预防、逆转或限制有此需要的个体中一种或多种肺癌相关疾病并发症的严重性的方法，其包括：对个体施用干扰至少一种或多种肺癌相关疾病应答级联的试剂，其中试剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
在另一个方面，本文中提供了干扰至少一种或多种肺癌相关疾病应答级联的试剂用于制造药剂的用途，所述药剂用于治疗、预防、逆转或限制个体中一种或多种肺癌相关疾病并发症的严重性，其中试剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
实施例
本发明可通过参考下列非限定性实施例来更好地进行理解，所述实施例用于举例说明而非限定本发明。
因此，本发明包括诊断受试者是否患有肺癌或处于发展肺癌的风险中的方法。根据一个方面，将来自受试者的受试样品中的至少一种miR基因产物的水平与对照样品中相应的miR基因产物的水平相比。与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，受试样品中miR基因产物的水平的改变(例如，增加、减少)表示受试者患有肺癌或处于发展肺癌的风险中。在某些实施方案中，受试样品包括外周血。
不希望受理论束缚，在本文中发明人现相信miRNA表达特征谱在外周血中是可检测的并且其可用于评估受试者中的肺癌。在本文中现还显示miRNA表达特征谱可用于区分患有早期肺癌的受试者与患有晚期疾病的受试者以及进一步区分未患肺癌的目前吸烟者/曾吸烟者。
同样地，在本文中发明人现还相信外周血中的微RNA反映原发性肿瘤生物学，并且可用于肺癌疾病进展/复发的诊断、监测和用于监控对治疗的应答。
在本文中发明人现已在患有已证实的肺癌的受试者的外周血中鉴定了独特的miRNA表达特征谱(即，miR特征(signature)或生物标志物)。
在特定的方面，发明人在本文中鉴定了miRNA在患晚期肺癌的受试者和一组未患已知肺癌的非吸烟者受试者的外周血中的存在。初步无监督聚类分析显示存在区分两组受试者的miRNA。
MiRNA特征谱是鉴定生物学相关靶的有用工具。虽然miRNA在外周血中的作用还不清楚，但在本文中发明人相信外周血miRNA特征谱可用于鉴定肺癌中独特的分子特征和用于使这样的特征谱与肿瘤生物学相关联。此类特征可用于补充其他方式，例如微阵列/蛋白质组平台和CT扫描；从而支持肺癌诊断和治疗的个性化方法。
发明人现还相信外周血中鉴定的微RNA反映原发性肿瘤生物学并且可用作疾病检测、确定对治疗的应答以及肺癌的监测和/或监控肺癌的任何复发的生物标志物。此外miRNA可用于显示不同的分子途径的网络，该网络反过来可用于鉴定新型治疗靶。
如本文的实施例中所显示的，在来自曾吸烟者/目前吸烟者和从不吸烟者的肺肿瘤中存在独特的miRNA特征。这些特征可用于鉴定生物学靶和途径。
在患有肺癌的吸烟和非吸烟个体以及匹配的对照中鉴定了miRNA特征。将在下列组中评估肿瘤中独特的miRNA表达模式的存在：1-为目前吸烟者或曾吸烟者的患有非小细胞肺癌(NSCLC)的可切除的受试者；2-为从不吸烟者的患有非小细胞肺癌(NSCLC)的可切除的受试者；和3-健康对照。
肿瘤和外周血中独特的miRNA特征的存在用于区分患有肺癌的现时/曾吸烟者和从不吸烟者受试者与对照。此外，外周血miRNA表达模式还反映原发性肿瘤特征。
肺癌特异性miRNA
癌症中miRNA的改变的表达的原因还不十分清楚。然而，最近已鉴定了至少5个主要的机制：1)miRNA在癌症相关基因组区域上的定位；2)表观遗传调控；3)miRNA加工蛋白和基因例如Dicer和Drosha的破坏；4)miRNA-miRNA相互作用；和，5)癌基因和肿瘤抑制基因对miRNA表达的靶向。
微RNA的生物发生和靶向
MiRNA可位于几个基因组位置，例如在蛋白质编码基因的内含子内或在非编码RNA的内含子或外显子内。在细胞核中，miRNA以长初级转录物的形式被RNA聚合酶II转录成初级miRNA(pri-miRNA)，其长度范围在数百至数千个核苷酸之间。
同时在细胞核中，Drosha切割pri-miRNA的两条链，从而释放称为前体miRNA(pre-miRNA)的70至100个核苷酸的茎环。随后通过输出蛋白5/RanGTP将pre-miRNA从细胞核输出至细胞质。当在细胞质中时，第二RNA酶III(称为Dicer)联合dsRBD切割pre-miRNA，从而释放出大约22个核苷酸的RNA双链体(成熟miRNA和其互补miRNA*)。
miRNA/miRNA*双链体只有一条链被释放进入含有miRNA的核蛋白微粒(miRNP)的蛋白质复合物，另一条链被降解。MiRNP将miRNA导向靶RNA以通过翻译抑制或mRNA降解来调控蛋白质表达。MiRNA结合蛋白质编码转录物的3′非翻译区域中的靶位点。翻译抑制和mRNA降解依赖于miRNA的5′末端上的“种子”区域与靶位点之间的碱基配对。大多数miRNA具有多个靶，从而具有调控数百至数千个基因的能力。
本文中的发明人已检查了一组患有晚期NSCLC的4个受试者和3个正常对照中全外周血miRNA的表达。检查了来自患有已证实的晚期(3B、IV期)非小细胞肺癌的4个受试者和3个健康对照受试者的全外周血。这些个体的MiRNA芯片分析显示与正常(数据未显示)相比在肺癌受试者的外周血中存在93个miRNA上调或下调。两倍变化的截断值(cutoff)用于表示显著的miRNA。
在本文中发明人已在患有晚期肺癌的受试者和一组未患有已知肺癌的非吸烟者的外周血中鉴定了miRNA的存在。
此外，初步的无监督聚类分析显示存在区分处于疾病的极端的两组个体(患有晚期肺癌的吸烟者和未患疾病的非吸烟者)的miRNA。然而，应当指出，这些结果未考虑可归因于吸烟史或伴随病的变化。
将miRNA和特定的靶定位在人肺癌组织中是确定至关重要的生物学途径，从而开发基于相关细胞类型的体外模型的重要步骤。
发明人已将原位杂交展示为在肺肿瘤中定位miRNA的方法。发明人观察到成熟miR-155不存在于腺癌中但存在于支气管肺泡癌(BAC)中。该发现表明二者的miRNA调控中可存在差异并且现据信所述差异在这些肺癌亚型中具有生物学相关性。
方法
为了进行阐明，将吸烟相关肺腺癌限定于具有大于20包年(pack year)吸烟史的受试者。他们是目前吸烟者或曾吸烟者。仅将一生中吸烟少于100只香烟的受试者包括为“从不吸烟者”。据信大多数具有BAC的受试者是非吸烟者，但患者群体不受该临床特征的限制。进行频数匹配以招募3个组的受试者(即，年龄)。
发明人现已发现，与国家数据相一致，大约13％的受试者报告从未吸烟。还与国家数据一致，大约40-45％的患有肺癌的受试者患有腺癌。关于BAC，虽然相当多的受试者具有BAC特征，但肿瘤登记报告，从2000至2006年，76个受试者被诊断为患有粘蛋白或非粘蛋白BAC。
将样品快速冷冻在液氮中，于-80℃下贮存。研究无肺癌病史或现时诊断的肺癌(以前的胸片)的目前吸烟者和曾吸烟者，同时评估一组健康的从不吸烟者。就年龄、性别和伴随病适当地匹配受试者。
样品大小和效率计算(power calculation)
发明人就全外周血中微RNA表达水平的差异比较了可切除/不可切除的现时/曾吸烟者组与对照和从不吸烟者组。发明人将假设检验分为先验有趣的微RNA(初步数据中发现的93个微RNA和Yanaihara等人，2006中列出的43个微RNA)对探测完全人微RNA。
对于125个先验有趣的微RNA，发明人通过使用Lehman和Romano(2005)的一般性族误差率法(generalized familywise error rate approach)(GFWER)避免了4个假阳性。80的样品大小(20个对照、40个可切除的目前/曾吸烟者和20个可切除的从不吸烟者)允许发明人检测表达的2倍差异，对于初步数据中发现的中值标准差，效率大于80％。
对于全基因组研究，在芯片上存在大约180个可检测的微RNA。发明人使用0.05的GFWER并且允许10个假阳性。对于3个组的80个样品，发明人具有80％的效率来检测1.9的倍数差异。进行背景校正、过滤和标准化方法以避免技术偏倚性。进行T检验以检测差异表达的微RNA。对于差异表达，为了改善可变性和统计检验的估计，使用缩小方差估计法(shrinking variance estimation method)。通过非参数统计方法(Westfall和Young，1993)估计p-值。
血液处理
从受试者获得血液样品，无论他们是否经历手术切除(即计划进行手术、放射、化疗或不进行治疗的受试者可用于从其获得血液样品)。发明人在两个分开的PAX-GENE(可商购获得)管中获得全血样品(5cc)。然后通过用于全血RNA的改进型TRizol提取方案处理样品。
对于在血清和PBMC中的分析，发明人已将第二方法用于miRNA分析。作为第二方法，发明人能够从来自18cc的外周血的血清级分获得足够的RNA(5-10μg)。将外周血收集在EDTA管中。用无菌PBS以1∶2稀释血液，然后使其在Ficoll-Histopaque(d＝1.077)上分层，并进行离心。使用Trizol对所得的血浆直接进行RNA分离。在进行RNA分离之前将含有淋巴细胞和单核细胞的单核细胞层在无菌PBS中清洗一次。通过硫酸葡聚糖沉降从红细胞沉淀中分离嗜中性粒细胞，在进行RNA提取之前，将RBC经历低渗裂解(hyptonic lysis)。
微RNA分析
通过OSU-CCC微阵列设备利用miRNA芯片和通过针对已知miRNA的RT-PCR来分析全血的miRNA表达。从全血、PBMC、血清和肺组织分离RNA并且对其进行处理。微阵列设备利用包含针对578个前体miRNA序列(329个智人(Homo sapiens)、249个小家鼠(Mus Musculus)和3个拟南芥(Arabidopsis thaliana))的探针的microRNACHIP v3。通过产生第一链cDNA来制备5μg的总RNA，然后与各OSU-CCC miRNA芯片进行阵列杂交。一旦完成，使用Sanger miRBase 7.0(Target scan.Pictar)鉴定miRNA靶。
图1举例说明miRNA生物发生，其显示在患有肺癌的个体和匹配的对照中鉴定了miRNA特征。miRNA在患有已证实的肺癌的个体的外周血中是可检测的。
外周血miRNA的特征谱
外周血miRNA特征谱可用于区分在治疗前患有已证实的肺癌的个体与未患肺癌的个体。
使用SAM(微阵列显著性分析)软件分析全外周血miRNA以鉴定两种类型(患有肺癌的受试者(肿瘤)对未患有已证实的肺癌或肺疾病的受试者(正常)的外周血)中统计学上显著的miRNA。
实施例1
外周全血微RNA表达与之前报导的特定微RNA的原发性肿瘤表达相关联。
发明人鉴定了在来自患有晚期肺癌的受试者的肺肿瘤和外周血样品中都下调的miRNA。参见表1，其显示miRNA在一组受试者的外周血中发生改变。
表1显示与全血中的正常水平相比，在肺癌中减少和增加的miRNA。显示了评分(d)、倍数变化和q-值(％)。
Figure BPA00001177016000181
Figure BPA00001177016000191
实施例2
此外，发明人在非小细胞肺癌(NSCLC)(n-4)的情况下(与正常对照(n＝3)相比)通过RT-PCR确认了特定miRNA(miR-126)的全外周血表达模式(参见图2)。
实施例3
原位杂交可用于鉴定哺乳动物组织中的miRNA定位。
肺组织的miRNA表达特征谱区分肺癌与正常肺组织。原位杂交研究用于在人肺癌组织样品中定位潜在的miRNA。在一个非限定性实例中，miR-155在几种实体瘤和恶性血液病中表达增加。在肺癌中，增加的miR-155表达与不良的存活相关。
然而，肺癌中miR-155表达的定位和调控仍然不清楚。如本文中所显示的，已在腺癌的癌细胞的细胞核中鉴定到miR-155的未成熟形式，但成熟形式不容易被鉴定。(参见图3A、3B)。
然而不希望受理论束缚，发明人在本文中现相信这显示miR-155的受损的加工是在NSCLC中进行调控的可能机制。在支气管肺泡细胞癌中，miR-155的未成熟和成熟形式以高水平存在。(参见图3C、3D)。该发现代表存在于肺癌亚型中的微RNA表达中的异质性的实例。
图4A-4D显示MiR-126转染改变Crk蛋白的表达。Crk是参与几种恶性肿瘤包括肺癌的衔接蛋白和预测的miR-126的靶。图4A显示H1703细胞的premiR-126转染导致miR-126mRNA表达增加1000至5000倍和Crk II蛋白减少。
图4B-4D显示，Crk mRNA未发生改变(图4B)，Crk I蛋白通过Western无法检测到。用100nM LNA miR-126反义寡核苷酸对H226细胞(鳞状细胞)的转染导致与混杂pre-miR转染相比miR-126的表达减少10倍(图4C)和Crk II蛋白表达增加，如通过光密度法测量的(*p＜.05)，但其mRNA未发生变化(D)。以一式二份重复进行Western印迹，所有RT-PCR结果代表来自以一式二份重复进行的两个独立实验的平均值＝/-S.E.。(*p＜.05，混杂对pre-miR)。18S用作内部对照。
实施例4
靶向miRNA沉默可用于检查所得的细胞表型的改变。
图5A-5G显示展示人肺鳞状细胞癌中miR-126的原位杂交和Crk的免疫组织化学的代表性图像。在例子1中，Crk表达(红色)在大多数肿瘤细胞中很明显(图5A)，但在肿瘤的相邻部分中不存在miR-126的表达(图5B)，然而在正常支气管上皮中检测到miR-126(图5C)(蓝色信号)。在例子2中，在肿瘤中不存在可检测的Crk(图5D)，然而在肿瘤中存在miR-126(蓝色)的强表达(图5E)；在正常组织中Crk定位至内皮(图5F)；和定位至支气管上皮(图5G)(除了图5F为1000x和图5G为200x外，所有图像为400x)。
MiR-126具有多个预测的靶，包括CRK(已显示其激活激酶信号转导和体外锚定不依赖性生长的信号转导衔接蛋白)。
实施例5
用于肺癌早期检测的筛查测试
在本发明之前，一直未建立用于肺癌早期检测的筛查测试，并且低于25％的受试者具有可通过手术治愈的疾病(I和II期)。此外，疾病的复发仍然保持不可接受的高。最近的流行病学统计显示大部分肺癌在曾吸烟者和从不吸烟者中得到诊断。关于导致从未吸烟的受试者发展非BAC腺癌或支气管肺泡癌(BAC)的独特遗传和表观遗传事件知之甚少。
肺癌特异性miRNA
确定组织/细胞和疾病模型的miRNA功能的策略包括：a)确定选择的肺癌特异性微RNA的体外靶向的过表达和沉默对疾病表型的作用，和b)鉴定选择的肺癌特异性微RNA的调控和加工。
实施例6
表2显示与外周血单核细胞(PBMC)中的正常水平相比，在肺癌中增加或减少的miRNA。表2显示表示为ΔCT(内部对照18s-样品)的关于在癌症(C)和正常(N)的外周血单核细胞(PBMC)中发现的miRNA(C1、C2、C3、C5、N1、N2、N3、N4和N5)的数据。
Figure BPA00001177016000221
实施例7
表3显示与血清中的正常水平相比，在肺癌中增加或减少的miRNA。其表示为ΔCT(内部对照18S-样品)。表3显示关于在癌症(C)和正常(N)的血清中发现的miRNA(C1、C2、C3、C5、N1、N2、N3、N4和N5)的数据。
实施例8
图6是显示与外周血单核细胞(PBMC)中的正常水平相比，肺癌中miR-126的相对表达的图。
同样，也参见图7，其包括显示与血清中的正常水平相比，肺癌中miR-let 7a的相对表达的图。图8包括显示与血清中的正常水平相比，肺癌中miR-126的相对表达的图。
实施例9
图9A-9D：miR-126过表达对H1703增殖、粘着、迁移和侵袭的作用。
图9A：对照、混杂pre-miR和pre-miR 126细胞在96小时内展示相似的生长速度。以一式三份重复进行两个独立的增殖测定。
图92B-92D：过表达MiR-126的细胞显示减少的粘着(图9B)、迁移(图9C)和侵袭(图9D)。图9C和图9D中的图像代表盲态随机视野(p＜.05)。在所有实验中，通过RT-PCR确认miR-126过表达以确保足够的诱导。结果代表以一式三份重复进行的4个视野的平均值(*p＜.05，混杂的对pre-miR)。
实施例10
图10A-10B：NSCLC组织中的miR-126和Crk的表达：19对人非小细胞肺癌和未受影响的相邻肺的检查(鳞状1-13和腺癌14-19)显示与未受影响的相邻正常(N)肺相比，肿瘤(T)中miR-126mRNA表达减少(图10A)。这些相同样品中Crk mRNA的表达是可变的，19个肿瘤中有7个展示比未受影响的相邻肺更高的Crk表达。(图10B)RT-PCR结果代表来自以一式两份重复进行的两个独立实验的平均值＝/-S.E.(*p＜.05肿瘤对未受影响的肺)。18S用作内源对照。
用于定位选择的未成熟和成熟miRNA的原位杂交
发明人在本文中现相信取决于肺癌细胞类型，肿瘤发生中牵涉的miRNA在调控和生物学相关性方面不同。发明人现相信在来自目前/曾吸烟者和从不吸烟者的肺肿瘤中存在不同的miRNA表达的特征。此外，发明人已鉴定了与肺肿瘤发生相关的一组miRNA。
实施例11
使用实时PCR进行的miRNA分析。
可通过实时PCR表征一500个成熟人miRNA的表达以发现在来自患有肺癌的患者和正常对照的血液中差异表达的miRNA。可通过使用之前公开的逆转录条件，用针对500个已知人成熟miRNA的环状引物(looped primer)的混合物(Mega Plex试剂盒，Applied Biosystems)引发来将RNA(50ng)转化成cDNA。针对内部对照snoRNA U38B和U43以及18S和7S rRNA的引物可包括在引物的混合物中。可使用配备有384孔反应板的Applied Biosystems 7900HT实时PCR仪表征表达。
液体操作自动机(Liquid-handling robot)和Zymak Twister自动机可用于增加通量和减少误差。可使用标准条件进行实时PCR。可通过比较GOLD种类的平均2-CT来确定最佳内部对照。该内部对照可用于计算相对基因表达。可根据式2-ΔCT计算各miRNA的相对表达，其中ΔCT＝CTmiRNA-CT内部对照。
然后可使用t检验分析基于PCR的相对miRNA表达。可使用层次聚类的方法分析-ΔCT数据，将结果绘制在热图(heatmap)上。可进行另外的统计分析例如ANOVA以确定在肺癌与正常水平之间差异表达的miRNA。
图11-表4显示寡核苷酸探针、前体序列、成熟mRNA、探针是否在活性位点上、Entrez-Gene ID、Ref Seq ID、miRBase茎环登录号、miRBase成熟序列登录号、注释、寡核苷酸序列、成熟miRNA序列和茎环序列。
实施例12
图12-表5显示血清中检测到的miRNA。
实施例13
图13-表6显示在外周血单核细胞(PBMC)中检测到的miRNA。
定义和用途的实例
如本文中可互换使用的，“miR基因产物”、“微RNA”、“miR”、“miR”或“miRNA”是指来自miR基因的未加工的或加工的RNA转录物。由于miR基因产物不被翻译成蛋白质，因此术语“miR基因产物”不包括蛋白质。未加工的miR基因转录物也称为“miR前体”，其通常包含长度大约70-100个核苷酸的RNA转录物。miR前体可通过用RNA酶(例如，Dicer、Argonaut、RNA酶III(例如，大肠杆菌(E.coli)RNA酶III))降解来加工成具有活性的19-25个核苷酸的RNA分子。该具有活性的19-25个核苷酸的RNA分子也称为“加工的”miR基因转录物或“成熟”miRNA。
可通过天然加工途径(例如使用完整的细胞或细胞裂解物)或通过合成加工途径(例如使用分离的加工酶，例如分离的Dicer、Argonaut或RNA酶III)，从miR前体获得具有活性的19-25个核苷酸的RNA分子。应理解，还可通过生物或化学合成(而不用从miR前体加工)，直接产生具有活性的19-25个核苷酸的RNA分子。当在本文中用名称提及微RNA时，该名称对应前体和成熟形式，除非另有说明。
该方法包括确定来自受试者的样品中至少一种miR基因产物的水平和将样品中的miR基因产物水平与对照相比较。如本文所使用的，“受试者”可以是患有或怀疑患有此类病症的任何哺乳动物。在一个优选的实施方案中，受试者是患有或怀疑患有此类病症的人。
可在从受试者获得的生物样品的细胞中，测量至少一种miR基因产物的水平。
在另一个实施方案中，可从受试者中取出样品，并且可通过标准技术提取和分离DNA。例如，在某些实施方案中，可以在开始放射疗法、化学疗法或其它疗法之前从受试者获得样品。可从受试者的未受影响的样品、从正常人个体或正常个体的群体或从相应于受试者的样品的大部分细胞的培养细胞获得相应的对照样品或对照参照样品(例如获自对照样品群体)。然后可将对照样品与来自受试者的样品一起进行处理，以便可将从来自受试者的样品的细胞中给定的miR基因产生的miR基因产物的水平与来自对照样品的细胞的相应的miR基因产物的水平进行比较。可选地，可以从受试样品分开地得到和加工参照样品(例如，在不同时间)，并且可以将从来自受试样品的细胞中的给定的miR基因产生的miR基因产物的水平与来自参照样品的相应miR基因产物水平相比较。
在一个实施方案中，受试样品中至少一种miR基因产物水平高于对照样品中相应的miR基因产物的水平(即，miR基因产物的表达“上调”)。如本文中所使用的，当来自受试者的样品中miR基因产物的量大于对照(例如，参考标准，对照细胞样品，对照组织样品)中相同基因产物的量时，miR基因产物的表达“上调”。
在另一个实施方案中，受试样品中至少一种miR基因产物水平低于对照样品中相应miR基因产物的水平(即，miR基因产物的表达“下调”)。如本文中所使用的，当从来自受试者的样品中的该基因产生的miR基因产物的量低于从对照样品中的相同基因产生的量时，miR基因的表达“下调”。可根据一个或多个RNA表达标准确定对照和正常样品中相对miR基因表达。所述标准可包括例如0miR基因表达水平、标准细胞系中的miR基因表达水平、受试者的未受影响的样品中的miR基因表达水平或之前从正常人对照群体获得的miR基因表达的平均水平(例如对照参考标准)。
可以用本领域技术人员公知的各种技术(例如定量或半定量RT-PCR，Northern印迹分析，溶液杂交检测)测量至少一种miR基因产物的水平。在特定的实施方案中，通过下述测量至少一种miR基因产物的水平：逆转录获自受试者的受试样品的RNA以提供一组靶寡脱氧核苷酸，将靶寡脱氧核苷酸与一种或多种miRNA特异性探针寡核苷酸(例如包含miRNA特异性探针寡核苷酸的微阵列)杂交以提供受试样品的杂交特征谱，和将受试样品杂交特征谱与从对照样品产生的杂交特征谱相比较。相对于对照样品，受试样品中至少一种miRNA的信号的改变表示受试者患有特定病症或处于发展特定病症的风险中。
还可从基因特异性寡核苷酸探针(所述探针从已知的miRNA序列产生)制备微阵列。对于各miRNA，阵列可包含两种不同的寡核苷酸探针，一种探针包含活性成熟序列，而另一种探针特异于miRNA的前体。阵列还可包含可用作杂交严格条件的对照的对照，例如与人直系同源物只相异于少数几个碱基的一个或多个小鼠序列。还可将来自两个物种的tRNA和其它RNA(例如，rRNA，mRNA)印制在微芯片上，从而为特异性杂交提供内部的、相对稳定的阳性对照。还可将用于非特异性杂交的一个或多个合适的对照包含在微芯片上。为了该目的，基于与任何已知的miRNA不存在任何同源性选择序列。
可使用本领域内已知的技术制备微阵列。例如，在位置C6上对合适长度例如40个核苷酸的探针寡核苷酸进行5′-胺修饰，并且使用可商购获得的微阵列系统例如GeneMachine OmniGridTM 100Microarrayer和Amersham CodeLinkTM活化的载玻片进行印制。通过用标记的引物逆转录靶RNA来制备相应于靶RNA的标记的cDNA寡聚物。在第一链合成后，使RNA/DNA杂交物变性以降解RNA模板。然后将所制备的标记的靶cDNA在杂交条件(例如在25℃下于6X SSPE/30％甲酰胺中进行18小时，然后在37℃下于0.75X TNT中清洗40分钟)下与微阵列芯片杂交。在阵列上的其中固定的探针DNA识别样品中的互补靶cDNA的位置上，发生杂交。标记的靶cDNA标记阵列上的其中发生结合的确切位置，从而允许自动检测和定量。输出信号由一列杂交事件组成，其标示了特定cDNA序列的相对丰度，从而标示了患者样品中相应的互补miR的相对丰度。根据一个实施方案，标记的cDNA寡聚物是从生物素标记的引物制备的生物素标记的cDNA。然后通过使用例如链霉抗生物素蛋白-Alexa647缀合物直接检测包含生物素的转录物来处理微阵列，和使用常规扫描方法扫描微阵列。阵列上的各点的图像强度与患者样品中相应的miR的丰度成比例。
使用阵列对于miRNA表达的检测具有几个有利方面。第一，可在一个时间点上鉴定相同样品中的数百个基因的整体表达。第二，通过寡核苷酸探针的仔细设计，可鉴定成熟分子和前体分子的表达。第三，与Northern印迹分析相比，芯片需要少量RNA，并且使用2.5μg总RNA可提供可重现的结果。数目相对有限的miRNA(每物种数百个)允许对数个物种构建共同的微阵列，其中对每一物种使用不同的寡核苷酸探针。这样的工具允许分析各已知的miR在不同条件下的跨物种表达。
除了用于特定miR的定量表达水平测定外，包含相应于miRNome的大部分(优选整个miRNome)的miRNA-特异性探针寡核苷酸的微芯片可用于进行miR基因表达特征谱分析，以分析miR的表达模式。可使不同的miR特征(signature)与已建立的疾病标志物关联或直接与疾病状态关联。
按照本文中描述的表达特征谱分析法，对来自怀疑患有特定病症的受试者的样品的总RNA进行定量逆转录以提供一组与样品中的RNA互补的标记的靶寡脱氧核苷酸。然后将靶寡脱氧核苷酸与包含miRNA-特异性探针寡核苷酸的微阵列杂交，从而提供样品的杂交特征谱。结果是显示样品中miRNA的表达模式的样品的杂交特征谱。杂交特征谱包括来自靶寡脱氧核苷酸(其来自样品)与微阵列中的miRNA-特异性探针寡核苷酸的结合的信号。所述特征谱可记录为结合的存在或不存在(信号对0信号)。更优选地，记录的特征谱包括来自各杂交的信号的强度。将所述特征谱与从正常的对照样品或参照样品产生的杂交特征谱相比较。信号的改变表示受试者中存在特定病症或发展特定病症的倾向。
用于测量miR基因表达的其它技术也在本领域技术人员的能力之内，其包括用于测量RNA转录和降解的速率的各种技术。
本发明还提供诊断受试者是否患有具有不利的预后的特定病症或处于发展具有不利的预后的特定病症的风险中的方法。在该方法中，测量与特定病症的不利的预后有关的至少一种miR基因产物的水平，通过逆转录来自从受试者获得的受试样品的RNA以提供一组靶寡脱氧核苷酸。然后使所述靶寡脱氧核苷酸与一种或多种miRNA特异性探针寡核苷酸(例如包含miRNA特异性探针寡核苷酸的微阵列)杂交以提供受试样品的杂交特征谱，和将受试样品杂交特征谱与从对照样品产生的杂交特征谱相比较。相对于对照样品，受试样品中至少一种miRNA的信号的改变表示受试者患有具有不利的预后的特定病症或处于发展具有不利的预后的特定病症的风险中。
在某些情况下，可能期望同时测定样品中多种不同的miR基因产物的表达水平。在其他的情况下，可能期望测定与特定的病症相关的所有已知的miR基因的转录物的表达水平。评估数百种miR基因或基因产物的特定表达水平非常耗时并且需要大量的总RNA(例如，对于每一个Northern印迹至少20μg)和需要放射性同位素的放射自显影技术。
为了克服这些限制，可构建以微芯片形式(即，微阵列)存在的寡核苷酸文库，该文库包含一组特异于一组miR基因的寡核苷酸(例如，寡脱氧核苷酸)探针。使用该微阵列，可通过逆转录RNA以产生一组靶寡脱氧核苷酸，将它们与微阵列上的探针寡核苷酸杂交以产生杂交特征谱或表达特征谱，来测定生物样品中多个微RNA的表达水平。然后可将受试样品的杂交特征谱与对照样品的杂交特征谱比较，从而确定具有改变的表达水平的微RNA。如本文中所使用的，“探针寡核苷酸”或“探针寡脱氧核苷酸”是指能够与靶寡核苷酸杂交的寡核苷酸。“靶寡核苷酸”或“靶寡脱氧核苷酸”是指待检测(例如，通过杂交)的分子。“miR-特异性探针寡核苷酸”或“特异于miR的探针寡核苷酸”是指具有选择用于与特定miR基因产物或特定miR基因产物的逆转录物杂交的序列的探针寡核苷酸。
特定样品的″表达特征谱″或″杂交特征谱″本质上是样品状态的指纹图谱；虽然两种状态可能具有相似表达的任何特定基因，大量基因的同时评估允许产生对细胞状态来说是独特的基因表达特征谱。即正常样品可以区别于相应的展示病症的样品。在此类展示病症的样品中，可以确定不同的预后状态(例如良好的或不良的长期存活希望)。通过比较不同的状态中的展示病症的样品的表达特征谱，获得关于在每一种状态下哪些基因是重要的(包括基因的上调和下调)的信息。
在展示病症的样品中差异表达的序列的鉴定，以及导致不同预后结果的差异表达，允许以许多方式使用该信息。例如，可评估特定的治疗方案(例如，以确定化疗药物是否改善特定受试者的长期预后)。类似地，可以通过比较来自受试者的样品与已知的表达特征谱来进行或确认诊断。此外，这些基因表达特征谱(或单独的基因)允许筛选药物候选物，所述药物候选物抑制特定病症的表达特征谱或将不良的预后特征谱转变为更好的预后特征谱。
细胞中一种或多种miR基因产物水平的改变可导致这些miR的一种或多种预期的靶失调，这可导致特定的病症。因此，改变miR基因产物水平(例如，通过减少在展示病症的细胞中上调的miR的水平，通过增加在展示病症的细胞中下调的miR的水平)可成功地治疗病症。
因此，本发明包括治疗受试者的病症的方法，其中至少一种miR基因产物在受试者的细胞中失调(例如，下调、上调)。在一个实施方案中，受试样品中的至少一种miR基因产物的水平大于对照或参照样品中相应的miR基因产物的水平。在另一个实施方案中，受试样品中的至少一种miR基因产物的水平小于对照样品中相应的miR基因产物的水平。当至少一种分离的miR基因产物在受试样品中下调时，该方法包括施用有效量的该至少一种分离的miR基因产物或其分离的变体或生物学活性片段，从而抑制受试者中展示病症的细胞的增殖。
例如，当miR基因产物在受试者的癌细胞中下调时，对受试者施用有效量的分离的miR基因产物，可以抑制癌细胞的增殖。对受试者施用的分离的miR基因产物可以与在癌细胞中下调的内源野生型miR基因产物相同，或可以是其变体或生物学活性片段。
如本文定义的，miR基因产物的“变体”是指与对应的野生型miR基因产物具有小于100％的同一性且具有对应的野生型miR基因产物的一种或多种生物学活性的miRNA。这样的生物学活性的实例包括、但不限于，抑制靶RNA分子的表达(例如，抑制靶RNA分子的翻译，调控靶RNA分子的稳定性，抑制靶RNA分子的加工)和抑制与癌症和/或骨髓增生病症有关的细胞过程(例如，细胞分化，细胞生长，细胞死亡)。这些变体包括物种变体和由于miR基因中的一个或多个突变(例如，置换，缺失，插入)而产生的变体。在某些实施方案中，变体与对应的野生型miR基因产物具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、或99％的同一性。
如本文定义的，miR基因产物的“生物学活性片段”是指具有对应的野生型miR基因产物的一种或多种生物学活性的miR基因产物的RNA片段。如上所述，这样的生物学活性的实例包括、但不限于，抑制靶RNA分子的表达和抑制与癌症和/或骨髓增生病症有关的细胞过程。在某些实施方案中，生物学活性片段的长度是至少约5，7，10，12，15或17个核苷酸。在一个具体实施方案中，可以将分离的miR基因产物与一种或多种其它的抗癌治疗组合地施用给受试者。合适的抗癌治疗包括但不限于，化疗，放疗和其组合(例如，放化疗(chemoradiation))。
当至少一种分离的miR基因产物在癌细胞中上调时，该方法包括给受试者施用有效量的抑制至少一种miR基因产物的表达的化合物，从而抑制展示病症的细胞的增殖。这样的化合物在本文中称作miR基因表达抑制化合物。合适的miR基因表达抑制化合物的实例包括但不限于，本文所述的那些(例如，双链RNA，反义核酸和酶促RNA分子)。
在一个特定实施方案中，可以将miR基因表达抑制化合物与一种或多种其它的抗癌治疗组合地施用给受试者。合适的抗癌治疗包括、但不限于，化疗，放疗和其组合(例如，放化疗)。
如本文所述的，当至少一种分离的miR基因产物在癌细胞中上调时，所述方法包括将有效量的至少一种用于抑制所述至少一种miR基因产物表达的化合物施用给受试者，从而抑制癌细胞的增殖。
如本文中所使用的，术语“治疗”、“医治”和“疗法”是指改善与疾病或病况例如癌症和/或其他病况或病症相关的症状，包括预防或延迟疾病症状的发作，和/或减少疾病、病症或病况的症状的严重性或频率。术语“受试者”、“患者”和“个体”在本文中定义为包括动物例如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠或其它牛科、羊科、马科、犬科、猫科、啮齿目或鼠科物种。在优选实施方案中，动物是人。
如本文中使用的，“分离的”miR基因产物是合成的或通过人工介入从天然状态改变或取出的miR基因产物。例如，合成的miR基因产物，或部分或完全从其天然状态的共存材料分离的miR基因产物被认为是“分离的”。分离的miR基因产物可以以大体上纯化的形式存在，或可以存在于已将所述miR基因产物递送入其中的细胞中。因此，有意地被递送至细胞或在细胞中表达的miR基因产物被认为是“分离的”miR基因产物。在细胞内从miR前体分子产生的miR基因产物也被认为是“分离的”分子。根据本发明，本文所述的分离的miR基因产物可以用于制备用于治疗受试者(例如，人)的药剂。
分离的miR基因产物可使用许多标准技术获得。例如，可使用本领域已知的方法化学合成或重组产生miR基因产物。在一个实施方案中，使用适当保护的核糖核苷亚磷酰胺和常规的DNA/RNA合成仪化学合成miR基因产物。合成的RNA分子或合成试剂的提供商包括例如Proligo(Hamburg，Germany)、Dharmacon Research(Lafayette，CO，U.S.A.)、Pierce Chemical(Perbio Science的一部分，Rockford，IL，U.S.A.)、Glen Research(Sterling，VA，U.S.A.)、ChemGenes(Ashland，MA，U.S.A.)和Cruachem(Glasgow，UK)。
可选地，可使用任何合适的启动子从重组环形或线性DNA质粒表达miR基因产物。用于从质粒表达RNA的合适的启动子包括例如U6或H1 RNA pol III启动子序列或巨细胞病毒启动子。其它合适的启动子的选择在本领域技术人员的能力之内。本发明的重组质粒还可包括用于在细胞(例如癌细胞，展示骨髓增生病症的细胞)中表达miR基因产物的诱导型或可调控的启动子。
可通过标准技术从培养的细胞表达系统分离从重组质粒表达的miR基因产物。还可将从重组质粒表达的miR基因产物递送至细胞并且在其中直接表达。
miR基因产物可从分开的重组质粒表达，或它们可从相同的重组质粒表达。在一个实施方案中，miR基因产物从单个质粒表达为RNA前体分子，然后通过合适的加工系统(包括但不限于癌细胞中现有的加工系统)将该前体分子加工成功能性miR基因产物。
适合用于表达miR基因产物的质粒的选择、用于将核酸序列插入质粒以表达基因产物的方法以及将重组质粒递送至目的细胞的方法在本领域技术人员的能力之内。参见，例如，Zeng等人(2002)，Molecular Cell 9：1327-1333；Tuschl(2002)，Nat.Biotechnol，20：446-448；Brummelkamp等人(2002)，Science 296：550-553；Miyagishi等人(2002)，Nat.Biotechnol.20：497-500；Paddison等人(2002)，Genes Dev.16：948-958；Lee等人(2002)，Nat.Biotechnol.20：500-505；和Paul等人(2002)，Nat.Biotechnol.20：505-508，其全部公开内容通过引用合并入本文。例如，在某些实施方案中，表达miR基因产物的质粒可以包含在CMV立即早期启动子(intermediate-early promoter)控制下编码miR前体RNA的序列。如本文中所使用的，“在启动子的控制下”是指编码miR基因产物的核酸序列位于启动子的3′端，以便启动子可起始miR基因产物编码序列的转录。
miR基因产物还可从重组病毒载体表达。预期miR基因产物可从两个分开的重组病毒载体或从相同的病毒载体表达。可通过标准技术从培养的细胞表达系统分离从重组病毒载体表达的RNA或所述RNA可在细胞(例如癌细胞，展示骨髓增生病症的细胞)中直接表达。
在本发明的治疗方法的其它实施方案中，可对受试者施用有效量的至少一种抑制miR表达的化合物。如本文中所使用的，“抑制miR表达”是指治疗后miR基因产物的前体和/或活性成熟形式的产量低于治疗前产生的量。通过使用例如本文讨论的测定miR转录物水平的技术，本领域技术人员可容易地确定miR的表达在细胞中是否已被抑制。抑制可在基因表达的水平上(即，通过抑制编码miR基因产物的miR基因的转录)或在加工的水平上(例如，通过抑制miR前体至成熟的活性miR的加工)发生。
如本文中所使用的，抑制miR表达的化合物的“有效量”是足以在患有癌症和/或骨髓增生病症的受试者中抑制细胞的增殖的量。通过考虑因素，例如受试者的大小和体重、疾病侵入的程度、受试者的年龄、健康和性别、施用的途径以及施用是局部的还是全身性的，本领域技术人员可容易地确定对给定的受试者施用的抑制miR表达的化合物的有效量。
本领域技术人员还可容易地确定用于对给定的受试者施用抑制miR表达的化合物的合适的给药方案，如本文所述。用于抑制miR基因表达的合适的化合物包括双链RNA(例如短的或小干扰RNA或“siRNA”)、反义核酸和酶促RNA分子例如核酶。这些化合物中的每一种可靶向给定的miR基因产物，并且干扰靶miR基因产物的表达(例如，通过抑制翻译，通过诱导切割和/或降解)。
例如，给定的miR基因的表达可通过用分离的双链RNA(“dsRNA”)分子诱导miR基因的RNA干扰来抑制，所述双链RNA分子与miR基因产物的至少一部分具有至少90％、例如至少95％、至少98％、至少99％或100％的序列同源性。在特定实施方案中，dsRNA分子是“短或小干扰RNA”或“siRNA”。
至少一种miR基因产物或至少一种用于抑制miR表达的化合物的施用将在患有癌症和/或骨髓增生病症的受试者中抑制细胞(例如癌细胞，展示骨髓增生病症的细胞)的增殖。如本文中所使用的，“抑制癌细胞或展示骨髓增生病症的细胞的增殖”是指杀死细胞或永久性或暂时地阻止或减缓细胞的生长。如果受试者中所述细胞的数目在施用miR基因产物或miR基因表达抑制化合物后保持恒定或减少，那么可推断细胞增殖被抑制。如果所述细胞的绝对数目增加但肿瘤生长的速度下降，则也可推断癌细胞或展示骨髓增生病症的细胞增殖被抑制。
还可通过任何合适的肠内或胃肠外施用途径对受试者施用miR基因产物或miR基因表达抑制化合物。用于本方法的合适的肠内施用途径包括例如口服、直肠或鼻内给药。合适的胃肠外施用途径包括例如血管内给药(例如，静脉内团注(bolus injection)、静脉内输注、动脉内团注、动脉内输注和至脉管系统内的导管滴注)；组织外周(peri-tissue)和组织内注射(例如，肿瘤外周和肿瘤内注射，视网膜内注射或视网膜下注射)；皮下注射或沉积，包括皮下输注(例如通过渗透泵)；对目的组织的直接施用，例如通过导管或其它安置装置(例如，视网膜丸剂(retinal pellet)或栓剂或包含多孔的、无孔的或凝胶状材料的植入物)；以及吸入。特别合适的施用途径是注射、输注和直接注射入肿瘤。
可在对受试者施用前，按照本领域已知的技术将miR基因产物或miR基因表达抑制化合物配制为药物组合物，有时称为“药剂”。因此，本发明包括用于治疗癌症和/或骨髓增生病症的药物组合物。
本药物组合物包含与药学上可接受的载体混合的至少一种miR基因产物或miR基因表达抑制化合物(或至少一种包含编码miR基因产物或miR基因表达抑制化合物的序列的核酸)(例如，按重量计算0.1至90％)或其生理上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的药物组合物另外包含一种或多种抗癌剂(例如，化疗剂)。本发明的药物制剂还可包含由脂质体封装的至少一种miR基因产物或miR基因表达抑制化合物(或至少一种包含编码miR基因产物或miR基因表达抑制化合物的序列的核酸)和药学上可接受的载体。
本发明的药物组合物还可包含常规药物赋形剂和/或添加剂。合适的药物赋形剂包括稳定剂、抗氧化剂、渗透压调节剂(osmolalityadjusting agent)、缓冲剂和pH调节剂。合适的添加剂包括例如生理上生物相容性缓冲剂(例如，氨丁三醇盐酸盐)、螯合剂(例如，DTPA或DTPA-双酰胺)或钙螯合络合物(例如，钙DTPA、CaNaDTPA-双酰胺)的添加或任选地，钙或钠盐(例如，氯化钙、抗坏血酸钙、葡萄糖酸钙或乳酸钙)的添加。本发明的药物组合物可以以液体形式包装使用或可以进行冻干。
对于本发明的固体药物组合物，可使用常规无毒性的固体的药学上可接受的载体：例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。
例如，用于口服施用的固体药物组合物可包含上文所列的任何载体和赋形剂以及10-95％，优选25％-75％的至少一种miR基因产物或miR基因表达抑制化合物(或至少一种包含编码它们的序列的核酸)。用于气雾剂(吸入)施用的药物组合物可包含按重量计算0.01-20％，优选1％-10％的封装在上文所述的脂质体中的至少一种miR基因产物或miR基因表达抑制化合物(或至少一种包含编码miR基因产物或miR基因表达抑制化合物的序列的核酸)和喷射剂。还可如所期望的包含载体例如卵磷脂以用于鼻内递送。
本发明的药物组合物还可以包含一种或多种抗癌剂。在一个特定实施方案中，所述组合物包含至少一种miR基因产物或miR基因表达抑制化合物(或至少一种包含编码miR基因产物或miR基因表达抑制化合物的序列的核酸)和至少一种化疗剂。适用于本发明方法的化疗剂包括但不限于，DNA-烷化剂，抗肿瘤抗生素，抗代谢剂，微管蛋白稳定剂，微管蛋白去稳定剂，激素拮抗剂，拓扑异构酶抑制剂，蛋白激酶抑制剂，HMG-CoA抑制剂，CDK抑制剂，细胞周期蛋白抑制剂，胱天蛋白酶抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，反义核酸，三螺旋DNA，核酸适配体，和分子上修饰的病毒、细菌和外毒素剂。适用于本发明组合物的试剂的实例包括但不限于，胞苷阿拉伯糖苷，甲氨蝶呤，长春新碱，依托泊苷(VP-16)，多柔比星(阿霉素)，顺铂(CDDP)，地塞米松，arglabin，环磷酰胺，沙可来新，甲基亚硝脲，氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶(5FU)，长春碱，喜树碱，放线菌素-D，丝裂霉素C，过氧化氢，奥沙利铂，伊立替康，托泊替康，亚叶酸，卡莫司汀，链佐星，CPT-11，紫杉酚，他莫昔芬，达卡巴嗪，利妥昔单抗，柔红霉素，1-β-D-阿糖呋喃糖胞嘧啶(1-β-D-arabinofuranosylcytosine)，伊马替尼，氟达拉滨，多西他赛和FOLFOX4。
在一个实施方案中，该方法包括给细胞提供受试试剂和测量与癌细胞中减少的表达水平关联的至少一种miR基因产物的水平。与合适的对照(例如，对照细胞中miR基因产物的水平)相比，细胞中miR基因产物水平的增加指示受试试剂为抗癌试剂。
合适的试剂包括但不限于药物(例如，小分子、肽)和生物大分子(例如，蛋白质、核酸)。试剂可通过重组、合成产生，或其可从天然来源分离(即，纯化)。用于给细胞提供此类试剂的各种方法(例如，转染)在本领域内是熟知的，并且在上文中描述了几种此类方法。用于检测至少一种miR基因产物的表达的方法(例如，Northern印迹、原位杂交、RT-PCR、表达特征谱分析)在本领域内也是熟知的。本文也描述了几种此类方法。
虽然已通过参考各种和优选实施方案描述了本发明，但本领域技术人员应当理解，可进行各种变化并且可用等同物替代其元素而不背离本发明的基本范围。此外，可进行许多改进以使特定的情况或材料适合于本发明的教导而不背离本发明的基本范围。因此，本发明不意欲限定于本文中公开的预期用于进行本发明的特定实施方案，而是意欲包括落在权利要求的范围内的所有实施方案。
本文中用于举例说明本发明或提供关于本发明的实施的另外的详细内容的公开物和其他材料通过引用合并入本文，并且为方便起见按下列文献目录提供。
参考文献
1.Kopper，L.and J.Timar.2005.Genomics of lung cancer may change diagnosis，prognosis and therapy.Pathol.Oncol.Res.11：5-10.
2.Lynch，T.J.，D.W.Bell，R.Sordella，S.Gurubhagavatula，R.A.Okimoto，B.W.Brannigan，P.L.Harris，S.M.Haserlat，J.G.Supko，F.G.Haluska，D.N.Louis，D.C.Christiani，J.Settleman，and D.A.Haber.2004.Activating mutations in the epidermalgrowth factor receptor underlying responsiveness of non-smail-cell lung cancer to gefitinib.N.Engl.J.Med.350：2129-2139.
3.Shepherd，F.A.，P.J.Rodrigues，T.Ciuleanu，E.H.Tan，V.Hirsh，S.Thongprasert，D.Campos，S.Maoleekoonpiroj，M.Smylie，R.Martins，K.M.van，M.Dediu，B.Findlay，D.Tu，D.Johnston，A.Bezjak，G.Clark，P.Santabarbara，and L Seymour.2005.Erlotinibin previously treated non-small-cell lung cancer.N.Engl.J.Med.353：123-132.
4.Sher，Y.P.，J.Y.Shih，P.C.Yang，S.R.Roffler，Y.W.Chu，C.W.Wu，C.L.Yu，and K.Peck.2005.Prognosis of non-small cell lung cancer subjects by detecting circulatingcancer cells in the peripheral blood with multiple marker genes.Clin.Cancer Res.11：173-179.
5.Nana-Sinkam，S.P.and M.W.Geraci.2006.MicroRNA in lung cancer.Journal ofThoracic Oncology 1：929-931.
6.Johnson，S.M.，H.Grosshans，J.Shingara，M.Byrom，R.Jarvis，A.Cheng，E.Labourier，K.L.Reinert，D.Brown，and F.J.Slack.2005.RAS is regulated by the let-7microRNA family.Cell 120：635-647.
7.Takamizawa，J.，H.Konishi，K.Yanagisawa，S.Tomida，H.Osada，H.Endoh，T.Harano，Y.Yatabe，M.Nagino，Y.Nimura，T.Mitsudomi，and T.Takahashi.2004.Reducedexpression of the let-7microRNAs in human lung cancers in association with shortenedpostoperative survival.Cancer Res.64：3753-3756.
8.Yanaihara，N.，N.Caplen，E.Bowman，M.Seike，K.Kumamoto，M.Yi，R.M.Stephens，A.Okamoto，J.Yokota，T.Tanaka，G.A.Calin，C.G.Liu，C.M.Croce，and C.C.Harris.2006.Unique microRNA molecular profiles in lung cancer diagnosis andprognosis.Cancer Cell 9：189-198.
序列表
<110>THE OHIO STATE UNIVERSITY RESEARCH FOUNDATION
<120>肺癌中外周血中的微RNA表达特征谱和靶向
<130>53-29375
<140>
<141>
<150>61/004,863
<151>2007-11-30
<160>206
<170>PatentIn version 3.5
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>18
ttgtgaagct cctaacactg tctggtaaag atggctcccg                           40
<210>19
<211>95
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>19
cggccggccc uggguccauc uuccaguaca guguuggaug gucuaauugu gaagcuccua     60
acacugucug guaaagaugg cucccgggug gguuc                                95
<210>20
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>20
tggtggaacg atggaaacgg aacatggttc tgtcaagcac                           40
<210>21
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>21
uugugcuuga ucuaaccaug u                                               21
<210>22
<211>110
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>22
gaccagucgc ugcggggcuu uccuuugugc uugaucuaac cauguggugg aacgauggaa     60
acggaacaug guucugucaa gcaccgcgga aagcaccgug cucuccugca               110
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>23
ctaggaagag gtagtagttt gcatagtttt agggcaaaga                           40
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>24
agagguagua gguugcauag uu                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>25
ccuaggaaga gguaguaggu ugcauaguuu uagggcaggg auuuugccca caaggaggua     60
acuauacgac cugcugccuu ucuuagg                                         87
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<213>人工序列
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>26
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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ucguaccgug aguaauaaug cg                                              22
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>28
cgcuggcgac gggacauuau uacuuuuggu acgcgcugug acacuucaaa cucguaccgu     60
gaguaauaau gcgccgucca cggca                                           85
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>29
ctccccatgg ccctgtctcc caacccttgt accagtgctg                           40
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<220>
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ucucccaacc cuuguaccag ug                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>31
cuccccaugg cccugucucc caacccuugu accagugcug ggcucagacc cugguacagg     60
ccugggggac agggaccugg ggac                                            84
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>32
gtcgggtagc ttatcagact gatgttgact gttgaatctc                           40
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<212>RNA
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>33
ugucggguag cuuaucagac ugauguugac uguugaaucu cauggcaaca ccagucgaug     60
ggcugucuga ca                                                         72
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<212>DNA
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>34
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<212>RNA
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>35
caaagugcuu acagugcagg uag                                             23
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>36
gucagaauaa ugucaaagug cuuacagugc agguagugau augugcaucu acugcaguga     60
aggcacuugu agcauuaugg ugac                                            84
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<212>DNA
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>37
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>38
uggaauguaa agaaguaugu au                                              22
<210>39
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>39
ugggaaacau acuucuuuau augcccauau ggaccugcua agcuauggaa uguaaagaag     60
uauguaucuc a                                                          71
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>40
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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agagguauag ggcaugggaa                                                 20
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>42
cgccucagag ccgcccgccg uuccuuuuuc cuaugcauau acuucuuuga ggaucuggcc     60
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>43
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>44
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>45
ugagguagua guuugugcug uu                                              22
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<212>RNA
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>46
cuggcugagg uaguaguuug ugcuguuggu cggguuguga cauugcccgc uguggagaua     60
acugcgcaag cuacugccuu gcua                                            84
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>47
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>48
taaggtgcat ctagtgcaga tagtgaagta gattagcatc                           40
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>49
ttgctatgga atgtaaggaa gtgtgtggtt tcggcaagtg                           40
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>50
uggaauguaa ggaagugugu gg                                              22
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>51
ugcuucccga ggccacaugc uucuuuauau ccccauaugg auuacuuugc uauggaaugu     60
aaggaagugu gugguuucgg caagug                                          86
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>52
tctttggtta tctagctgta tgagtggtgt ggagtcttca                           40
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>53
ucuuugguua ucuagcugua uga                                             23
<210>54
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>54
cgggguuggu uguuaucuuu gguuaucuag cuguaugagu gguguggagu cuucauaaag     60
cuagauaacc gaaaguaaaa auaacccca                                       89
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>55
atcgaccgtt gagtggaccc tgaggcctgg aattgccatc                           40
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<211>22
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>56
aacauucaac cugucgguga gu                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>57
cggaaaauuu gccaaggguu ugggggaaca uucaaccugu cggugaguuu gggcagcuca     60
ggcaaaccau cgaccguuga guggacccug aggccuggaa uugccauccu               110
<210>58
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>58
tgaggtagta ggttgtgtgg tttcagggca gtgatgttgc                           40
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>59
ugagguagua gguugugugg uu                                              22
<210>60
<211>83
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>60
cggggugagg uaguagguug ugugguuuca gggcagugau guugccccuc ggaagauaac     60
uauacaaccu acugccuucc cug                                             83
<210>61
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>61
agattagagt ggctgtggtc tagtgctgtg tggaagacta                           40
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<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>62
uggaagacua gugauuuugu ugu                                             23
<210>63
<211>110
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>63
agauuagagu ggcugugguc uagugcugug uggaagacua gugauuuugu uguucugaug     60
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>64
gtagcattca ggtcaagcaa cattgtacag ggctatgaaa                           40
<210>65
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>65
agcagcauug uacagggcua uga                                             23
<210>66
<211>78
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>66
uugugcuuuc agcuucuuua cagugcugcc uuguagcauu caggucaagc agcauuguac     60
agggcuauga aagaacca                                                   78
<210>67
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>67
caatgtcagc agtgccttag cagcacgtaa atattggcgt                           40
<210>68
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>68
uagcagcacg uaaauauugg cg                                              22
<210>69
<211>89
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>69
gucagcagug ccuuagcagc acguaaauau uggcguuaag auucuaaaau uaucuccagu     60
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<210>70
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>70
ccttggccat gtaaaagtgc ttacagtgca ggtagctttt                           40
<210>71
<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>71
aaaagugcuu acagugcagg uag                                             23
<210>72
<211>81
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>72
ccuuggccau guaaaagugc uuacagugca gguagcuuuu ugagaucuac ugcaauguaa     60
gcacuucuua cauuaccaug g                                               81
<210>73
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>73
ctgctgagtg aattaggtag tttcatgttg ttgggcctgg                           40
<210>74
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>74
uagguaguuu cauguuguug gg                                              22
<210>75
<211>70
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>75
gugaauuagg uaguuucaug uuguugggcc uggguuucug aacacaacaa cauuaaacca     60
cccgauucac                                                            70
<210>76
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>76
gggatgaggt agtagattgt atagttgtgg ggtagtgatt                           40
<210>77
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>77
ugagguagua gauuguauag uu                                              22
<210>78
<211>87
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>78
ucagagugag guaguagauu guauaguugu gggguaguga uuuuacccug uucaggagau     60
aacuauacaa ucuauugccu ucccuga                                         87
<210>79
<211>81
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>79
ctctctgctt tcagcttctt tacagtgttg ccttgtggca tggagttcaa gcagcattgt     60
acagggctat caaagcacag a                                               81
<210>80
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>80
ggcatggagt tcaagcagca ttgtacaggg ctatcaaagc                           40
<210>81
<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>81
agcagcauug uacagggcua uca                                             23
<210>82
<211>81
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>82
cucucugcuu ucagcuucuu uacaguguug ccuuguggca uggaguucaa gcagcauugu     60
acagggcuau caaagcacag a                                               81
<210>83
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>83
tgaggtagta ggttgtatag ttttagggtc acacccacca                           40
<210>84
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>84
ugagguagua gguuguauag uu                                              22
<210>85
<211>80
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>85
ugggaugagg uaguagguug uauaguuuua gggucacacc caccacuggg agauaacuau     60
acaaucuacu gucuuuccua                                                 80
<210>86
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>86
ccctggctgg gatatcatca tatactgtaa gtttgcgatg                           40
<210>87
<211>20
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>87
uacaguauag augauguacu                                                 20
<210>88
<211>86
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>88
uggggcccug gcugggauau caucauauac uguaaguuug cgaugagaca cuacaguaua     60
gaugauguac uaguccgggc accccc                                          86
<210>89
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>89
cctaggaaga ggtagtaggt tgcatagttt tagggcaggg                           40
<210>90
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>90
agagguagua gguugcauag uu                                              22
<210>91
<211>87
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>91
ccuaggaaga gguaguaggu ugcauaguuu uagggcaggg auuuugccca caaggaggua     60
acuauacgac cugcugccuu ucuuagg                                         87
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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tatggatcaa gcagcattgt acagggctat gaaggcattg                           40
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
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<213>人工序列
<220>
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uacugcccuc ggcuucuuua cagugcugcc uuguugcaua uggaucaagc agcauuguac     60
agggcuauga aggcauug                                                   78
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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ugggaaacau acuucuuuau augcccauau ggaccugcua agcuauggaa uguaaagaag     60
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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ucaggcucuu gggaccuagg cggagggga                                       89
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cagugcaaug uuaaaagggc au                                              22
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ugcugcuggc cagagcucuu uucacauugu gcuacugucu gcaccuguca cuagcagugc     60
aauguuaaaa gggcauuggc cguguagug                                       89
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atggattggc tgggaggtgg atgtttactt cagctgactt                           40
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<220>
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uguaaacauc cuacacucag cu                                              22
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>106
accaaguuuc aguucaugua aacauccuac acucagcugu aauacaugga uuggcuggga     60
gguggauguu uacuucagcu gacuugga                                        88
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<400>109
agguugaggu aguagguugu auaguuuaga auuacaucaa gggagauaac uguacagccu     60
ccuagcuuuc cu                                                         72
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<400>110
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ccgcccccgc gucuccaggg caaccguggc uuucgauugu uacuguggga acuggaggua     60
acagucuaca gccauggucg ccccgcagca cgcccacgcg c                        101
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<220>
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ccttggagta aagtagcagc acataatggt ttgtggattt                           40
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ccuuggagua aaguagcagc acauaauggu uuguggauuu ugaaaaggug caggccauau     60
ugugcugccu caaaaauaca agg                                             83
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gttccactct agcagcacgt aaatattggc gtagtgaaat atatattaaa caccaatatt     60
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<400>117
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<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>119
ucucaggcag ugacccucua gauggaagca cugucuguug uauaaaagaa aagaucgugc     60
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>120
gcatctactg cagtgaaggc acttgtagca ttatggtgac                           40
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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caaagugcuu acagugcagg uag                                             23
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<220>
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gucagaauaa ugucaaagug cuuacagugc agguagugau augugcaucu acugcaguga     60
aggcacuugu agcauuaugg ugac                                            84
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<220>
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<220>
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<400>124
aacuuaacau caugcuaccu cuuuguauca uauuuuguua uucuggucac agaaugaccu     60
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<220>
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<400>125
cugaccuaug aauugacagc c                                               21
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<220>
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<400>126
gccgagaccg agugcacagg gcucugaccu augaauugac agccagugcu cucgucuccc     60
cucuggcugc caauuccaua ggucacaggu auguucgccu caaugccagc               110
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>127
cugaccuaug aauugacagc c                                               21
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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cgacuugcuu ucucuccucc augccuugag uguaggaccg uuggcaucuu aauuacccuc     60
ccacacccaa ggcuugcaaa aaagcgagcc u                                    91
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<220>
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>130
ggcugugccg gguagagagg gcagugggag guaagagcuc uucacccuuc accaccuucu     60
ccacccagca uggcc                                                      75
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<220>
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<400>131
uucaccaccu ucuccaccca gc                                              22
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>132
gaaacugggc ucaaggugag gggugcuauc ugugauugag ggacaugguu aauggaauug     60
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>133
uaaugccccu aaaaauccuu au                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>134
aaucauacag ggacauccag uu                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>135
gguacuugaa gagugguuau cccugcugug uucgcuuaau uuaugacgaa ucauacaggg     60
acauccaguu uuucaguauc                                                 80
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>136
ucagugcacu acagaacuuu gu                                              22
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>137
gaggcaaagu ucugagacac uccgacucug aguaugauag aagucagugc acuacagaac     60
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<212>RNA
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>138
ucagugcacu acagaacuuu gu                                              22
<210>139
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>139
guccaguuuu cccaggaauc ccu                                             23
<210>140
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>140
caccuugucc ucacggucca guuuucccag gaaucccuua gaugcuaaga uggggauucc     60
uggaaauacu guucuugagg ucaugguu                                        88
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<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>141
guccaguuuu cccaggaauc ccu                                             23
<210>142
<211>87
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>142
uguccccccc ggcccagguu cugugauaca cuccgacucg ggcucuggag cagucagugc     60
augacagaac uugggcccgg aaggacc                                         87
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>143
aaaagcuggg uugagagggc ga                                              22
<210>144
<211>82
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>144
gcuucgcucc ccuccgccuu cucuucccgg uucuucccgg agucgggaaa agcuggguug     60
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>145
aaaagcuggg uugagagggc ga                                              22
<210>146
<211>82
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>146
gcuucgcucc ccuccgccuu cucuucccgg uucuucccgg agucgggaaa agcuggguug     60
agagggcgaa aaaggaugag gu                                              82
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>147
aaaagcuggg uugagagggc aa                                              22
<210>148
<211>79
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>148
aauuaauccc ucucuuucua guucuuccua gagugaggaa aagcuggguu gagagggcaa     60
acaaauuaac uaauuaauu                                                  79
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>149
aaaagcuggg uugagagggc aa                                              22
<210>150
<211>138
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>150
uguuauuuuu ugucuucuac cuaagaauuc ugucucuuag gcuuucucuu cccagauuuc     60
ccaaaguugg gaaaagcugg guugagaggg caaaaggaaa aaaaaagaau ucugucucug    120
acauaauuag auagggaa                                                  138
<210>151
<211>20
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>151
aaaagcuggg uugagagggu                                                 20
<210>152
<211>88
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>152
uuugcauuaa aaaugaggcc uucucuuccc aguucuuccc agagucagga aaagcugggu     60
ugagagggua gaaaaaaaau gauguagg                                        88
<210>153
<211>20
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>153
aaaagcuggg uugagagggu                                                 20
<210>154
<211>50
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>154
cuucucuuuc caguucuucc cagaauuggg aaaagcuggg uugagagggu                50
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<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>155
aaaagcuggg uugagagga                                                  19
<210>156
<211>48
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>156
uucucguccc aguucuuccc aaaguugaga aaagcugggu ugagagga                  48
<210>157
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>157
gaaagcgcuu cucuuuagag g                                               21
<210>158
<211>87
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>158
ucucaugcug ugacccucua gagggaagca cuuucucuug ucuaaaagaa aagaaagcgc     60
uucucuuuag aggauuacuc uuugaga                                         87
<210>159
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>159
ucgugcaucc cuuuagagug uu                                              22
<210>160
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>160
gugacccucu agauggaagc acugucuguu gucuaagaaa agaucgugca ucccuuuaga     60
guguuac                                                               67
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<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>161
uaaagugcug acagugcaga u                                               21
<210>162
<211>82
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>162
ccugccgggg cuaaagugcu gacagugcag auaguggucc ucuccgugcu accgcacugu     60
ggguacuugc ugcuccagca gg                                              82
<210>163
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>163
gcugacuccu aguccagggc uc                                              22
<210>164
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>164
acccaaaccc uaggucugcu gacuccuagu ccagggcucg ugauggcugg ugggcccuga     60
acgagggguc uggaggccug gguuugaaua ucgacagc                             98
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>165
uugguacuug gagagaggug guccguggcg cguucgcuuu auuuauggcg cacauuacac     60
ggucgaccuc uuugcaguau cuaauc                                          86
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<211>20
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
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<400>166
agagguauag ggcaugggaa                                                 20
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
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<400>167
cgccucagag ccgcccgccg uuccuuuuuc cuaugcauau acuucuuuga ggaucuggcc     60
uaaagaggua uagggcaugg gaaaacgggg cggucggguc cuccccagcg               110
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<211>23
<212>RNA
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<220>
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aaugacacga ucacucccgu uga                                             23
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<212>RNA
<213>人工序列
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uggaauguaa agaaguaugu au                                              22
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<212>RNA
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<400>170
gugucuuuug cucugcaguc a                                               21
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>171
caauagacac ccaucguguc uuuugcucug cagucaguaa auauuuuuuu gugaaugugu     60
agcaaaagac agaauggugg uccauug                                         87
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<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
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<400>172
uacaguacug ugauaacuga a                                               21
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>173
acuguccuuu uucgguuauc augguaccga ugcuguauau cugaaaggua caguacugug     60
auaacugaag aaugguggu                                                  79
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>174
aaaccguuac cauuacugag uu                                              22
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<211>72
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>175
cuugggaaug gcaaggaaac cguuaccauu acugaguuua guaaugguaa ugguucucuu     60
gcuauaccca ga                                                         72
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<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>176
cauuauuacu uuugguacgc g                                               21
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>177
cgcuggcgac gggacauuau uacuuuuggu acgcgcugug acacuucaaa cucguaccgu     60
gaguaauaau gcgccgucca cggca                                           85
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<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>178
uggaauguaa agaaguaugu au                                          22
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<211>71
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>179
ugggaaacau acuucuuuau augcccauau ggaccugcua agcuauggaa uguaaagaag     60
uauguaucuc a                                                          71
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>180
aacccguaga uccgaacuug ug                                              22
<210>181
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>181
ccuguugcca caaacccgua gauccgaacu ugugguauua guccgcacaa gcuuguaucu     60
auagguaugu gucuguuagg                                                 80
<210>182
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>182
uggcaguguc uuagcugguu gu                                              22
<210>183
<211>110
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的多核苷酸
<400>183
ggccagcugu gaguguuucu uuggcagugu cuuagcuggu uguugugagc aauaguaagg     60
aagcaaucag caaguauacu gcccuagaag ugcugcacgu uguggggccc               110
<210>184
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>184
ugagguagua guuugugcug uu                                              22
<210>185
<211>84
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>185
cuggcugagg uaguaguuug ugcuguuggu cggguuguga cauugcccgc uguggagaua     60
acugcgcaag cuacugccuu gcua                                            84
<210>186
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>186
cauuauuacu uuugguacgc g                                               21
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<211>85
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>187
cgcuggcgac gggacauuau uacuuuuggu acgcgcugug acacuucaaa cucguaccgu     60
gaguaauaau gcgccgucca cggca                                           85
<210>188
<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>188
caaagugcuc auagugcagg uag                                             23
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<211>69
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>189
aguaccaaag ugcucauagu gcagguaguu uuggcaugac ucuacuguag uaugggcacu     60
uccaguacu                                                             69
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>190
agaucagaag gugauugugg cu                                              22
<210>191
<211>73
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>191
cuccucagau cagaagguga uuguggcuuu ggguggauau uaaucagcca cagcacugcc     60
uggucagaaa gag                                                        73
<210>192
<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>192
aaaagugcuu acagugcagg uag                                             23
<210>193
<211>81
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>193
ccuuggccau guaaaagugc uuacagugca gguagcuuuu ugagaucuac ugcaauguaa     60
gcacuucuua cauuaccaug g                                               81
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>194
ucguaccgug aguaauaaug cg                                              22
<210>195
<211>85
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>195
cgcuggcgac gggacauuau uacuuuuggu acgcgcugug acacuucaaa cucguaccgu     60
gaguaauaau gcgccgucca cggca                                           85
<210>196
<211>97
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>196
acucaggggc uucgccacug auuguccaaa cgcaauucuu guacgagucu gcggccaacc     60
gagaauugug gcuggacauc uguggcugag cuccggg                              97
<210>197
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>197
ucguaccgug aguaauaaug cg                                              22
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<211>85
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>198
cgcuggcgac gggacauuau uacuuuuggu acgcgcugug acacuucaaa cucguaccgu     60
gaguaauaau gcgccgucca cggca                                           85
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<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>199
agcagcauug uacagggcua uca                                             23
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>200
cucucugcuu ucagcuucuu uacaguguug ccuuguggca uggaguucaa gcagcauugu     60
acagggcuau caaagcacag a                                               81
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<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>201
uaaagugcug acagugcaga u                                               21
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<211>82
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>202
ccugccgggg cuaaagugcu gacagugcag auaguggucc ucuccgugcu accgcacugu     60
ggguacuugc ugcuccagca gg                                              82
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<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
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uagcuuauca gacugauguu ga                                              22
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<211>72
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>204
ugucggguag cuuaucagac ugauguugac uguugaaucu cauggcaaca ccagucgaug     60
ggcugucuga ca                                                         72
<210>205
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>205
aucgugcauc ccuuuagagu gu                                              22
<210>206
<211>87
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的寡核苷酸
<400>206
ucucaggcag ugacccucua gauggaagca cugucuguug uauaaaagaa aagaucgugc     60
aucccuuuag aguguuacug uuugaga                                         87

Claims (40)

1.检测受试者是否患有一种或多种肺癌相关疾病或处于发展所述疾病的风险中的方法，其包括：
测量来自受试者的外周血样品中至少一种miR基因产物的水平，
其中与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，样品中miR基因产物的水平的改变表示受试者患有一种或多种肺癌相关疾病或处于发展所述疾病的风险中。
2.权利要求1的方法，其中所述外周血样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)和血清中的一种或多种。
3.权利要求1的方法，其中所述一种或多种肺癌相关疾病包括支支气管肺泡癌(BAC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌。
4.权利要求1的方法，其中所述外周血样品包含全血，并且其中至少一种miR基因产物是选自表1中所示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由下列的增加的miR表达组成：
miR
hsa-miR-518f
hsa-miR-516-3，5p
hsa-miR-517b*
hsa-miR-490No2
hsa-miR-139-prec
hsa-miR-007-2-precNo1
hsa-miR-021-prec-17No2
hsa-miR-106bNo2
hsa-miR-345No2
hsa-miR-217-precNo1
hsa-miR-323No2
hsa-miR-218-2-precNo2
hsa-miR-202
hsa-miR-425No1
hsa-miR-096-prec-7No1
hsa-miR-125a-precNo2
hsa-miR-339No1
hsa-miR-141-precNo1
hsa-miR-321No1。
5.权利要求4的方法，其中所述miR是hsa-miR-518f和hsa-miR-516-35p中的一种或多种。
6.权利要求1的方法，其中所述外周血样品包括全血，以及其中至少一种miR基因产物是选自表1中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由下列的减少的miR表达组成：
miR
hsa-miR-1-2No1
hsa-miR-511-2No2
hsa-miR-101-2No1
hsa-miR-218-2-precNo1
hsa-miR-451No2
hsa-miR-126*No2
hsa-let-7d-v1-prec
hsa-miR-1-1No1
hsa-miR-123-precNo1
hsa-miR-100No1
hsa-miR-150-prec
hsa-miR-021-prec-17No1
hsa-miR-34aNo1
hsa-let-7iNo1
hsa-miR-017-precNo2
hsa-miR-001b-2-prec
hsa-miR-126*No1
hsa-miR-20bNo1
hsa-miR-202-prec
hsa-miR-020-prec
hsa-miR-383No1
hsa-let-7d-v2-precNo2
hsa-let-7g-precNo1
hsa-miR-106aNo1
hsa-miR-126No2
hsa-miR-018-prec
hsa-miR-206-precNo1
hsa-miR-009-1No1
hsa-miR-181c-precNo2
hsa-let-7b-prec
hsa-miR-007-3-precNo1
hsa-miR-103-2-prec
hsa-miR-219-2No2
hsa-miR-016a-chr13
hsa-miR-126No1
hsa-miR-106-prec-X
hsa-miR-107No1
hsa-miR-196-1-precNo1
hsa-miR-106bNo1
hsa-let-7f-1-precNo2
hsa-miR-107-prec-10
hsa-let-7a-1-prec
hsa-miR-144-precNo2
hsa-let-7d-prec
hsa-miR-320No2
hsa-miR-21No1
hsa-miR-103-prec-5＝103-1
hsa-miR-516-2No1
hsa-miR-001b-1-prec1
hsa-miR-125b-2-precNo2
hsa-miR-130a-precNo2
hsa-miR-030b-precNo2
hsa-let-7a-2-precNo2
hsa-miR-132-precNo2
hsa-miR-51645p
hsa-miR-374No1
hsa-miR-015a-2-precNo1
hsa-miR-517a
hsa-miR-016b-chr3
hsa-miR-017-precNo1
hsa-miR-148-prec。
7.权利要求6的方法，其中所述miR是下列中的一种或多种：
miR
hsa-miR-1-2No1
hsa-miR-511-2No2
hsa-miR-101-2No1
hsa-miR-218-2-precNo1
hsa-miR-451No2
hsa-miR-126*No2
hsa-let-7d-v1-prec
hsa-miR-1-1No1
hsa-miR-123-precNo1
hsa-miR-100No1
hsa-miR-150-prec
hsa-miR-021-prec-
17No1
hsa-miR-34aNo1
hsa-let-7iNo1
hsa-miR-126*No1
hsa-miR-126No2
hsa-miR-181c-precNo2
hsa-miR-126No1。
8.权利要求1的方法，其中所述外周血样品包括外周血单核细胞(PBMC)，和
其中至少一种miR基因产物是选自表2中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由hsa-miR-630的减少的miR表达组成。
9.权利要求1的方法，其中所述样品包括外周血单核细胞，和
其中至少一种miR基因产物是选自表2中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由hsa-miR-152、hsa-miR-365、hsa-miR-487a、hsa-miR-148a、hsa-miR-636、hsa-miR-320和hsa-miR-145的增加的miR表达组成。
10.权利要求1的方法，其中所述外周血样品包括血清，并且
其中至少一种miR基因产物是选自表3中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由hsa-miR-192的增加的miR表达组成。
11.权利要求1的方法，其中所述样品包括血清，并且
其中至少一种miR基因产物是选自表3中显示的组的一种或多种miR基因产物，所述组由hsa-miR-532、hsa-miR-197、hsa-miR-342的减少的miR表达组成。
12.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物是选自表4中显示的组的一种或多种miR基因产物。
13.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物是选自表5中显示的组的一种或多种miR基因产物。
14.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物是选自表6中显示的组的一种或多种miR基因产物。
15.权利要求1的方法，其中所述方法用于确定患有肺癌的受试者的预后，其包括：
测量来自受试者的样品中至少一种miR基因产物的水平，
其中所述miR基因产物与肺癌中不利的预后相关；和，
与对照样品中相应miR基因产物的水平相比，样品中所述至少一种miR基因产物的水平的改变表示不利的预后。
16.检测外周血样品中一种或多种肺癌相关疾病的方法，所述方法包括：
就至少一种与肺癌相关的生物标志物的改变的表达分析样品，和
使所述至少一种生物标志物的改变的表达与样品中肺癌的存在或不存在相关联，
其中所述至少一种生物标志物选自表1、表2或表3中列出的miR。
17.早期诊断怀疑患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者的方法，所述方法包括：
从受试者获得外周血样品；
就至少一种与肺癌相关的生物标志物的改变的表达分析样品；
使至少一种生物标志物的改变的表达与受试者中肺癌的存在相关联；
其中所述至少一种生物标志物选自表1、表2或表3中列出的miR。
18.治疗患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者的方法，其包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含与至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物互补的核酸。
19.包含与至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物互补的核酸的药物组合物。
20.比较已经历针对一种或多种肺癌相关疾病的放化疗的患者的外周血样品与未经历放化疗的患者的样品的方法，其包括：
比较至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物的差异表达。
21.比较患者中一种或多种肺癌相关疾病的分期的方法，其包括：
从所述患者获得外周血样品；和比较至少一种选自表1、表2或表3中列出的miR的生物标志物的差异表达。
22.用于抑制有此需要的受试者中一种或多种肺癌相关疾病的方法，其包括：
施用至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
23.治疗患有一种或多种肺癌相关疾病的受试者中一种或多种肺癌相关疾病的方法，其中相对于对照细胞，至少一种miR在受试者的癌细胞中下调或上调，所述方法包括：
当所述至少一种miR在癌细胞中下调时，对所述受试者施用有效量的至少一种分离的miR，以便所述受试者中癌细胞的增殖被抑制；或
当所述至少一种miR在癌细胞中上调时，对所述受试者施用有效量的至少一种用于抑制所述至少一种miR的表达的化合物，以便所述受试者中癌细胞的增殖被抑制；
其中所述miR选自表1、表2或表3中列出的miR。
24.治疗受试者中一种或多种肺癌相关疾病的方法，其包括：
测定与对照样品相比，获自受试者的外周血样品中至少一种miR的量，其中所述miR选自表1、表2或表3中列出的miR；和
通过下列改变受试者中miR活性的量：
(i)如果所述受试者中表达的miR的量低于对照细胞中表达的miR的量，对所述受试者施用有效量的至少一种分离的miR；或
(ii)如果所述受试者中表达的miR的量大于对照细胞中表达的miR的量，对所述受试者施用有效量的至少一种用于抑制所述至少一种miR的表达的化合物，
以便所述受试者中肺癌的增殖被抑制。
25.鉴定抗肺癌相关疾病试剂的方法，其包括：
给癌细胞提供测试试剂，和
测量至少一种与肺癌细胞中减少的表达水平相关的miR的水平，
其中与合适的对照细胞相比，肺癌细胞中所述miR的水平的增加表示所述测试试剂为抗癌试剂；其中所述miR选自表1、表2或表3中列出的miR。
26.用于评估受试者中的病理状况或发展病理状况的风险的方法，其包括：
测量来自所述受试者的样品中一种或多种标志物的表达特征谱，
其中来自所述受试者的样品的表达特征谱与正常样品的表达特征谱的差异表示一种或多种肺癌相关疾病或对其的易感性，和
其中所述标志物至少包括一种或多种表1、表2或表3中列出的miR。
27.包含一种或多种miR的组合物，所述miR选自表1、表2或表3中列出的miR。
28.用于检测一种或多种肺癌相关疾病的试剂，其中所述试剂包括多核苷酸，所述多核苷酸包含至少一种表1、表2或表3中列出的miR的核苷酸序列或与标志物的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
29.用于检测一种或多种肺癌相关疾病的试剂，其中所述试剂包含识别由至少一种表1、表2或表3中列出的miR编码的蛋白质的抗体。
30.评估疗法预防、诊断和/或治疗一种或多种肺癌相关疾病的有效性的方法，其包括：
将受试者经历其有效性有待评估的疗法，和
通过评估至少一种表1、表2或表3中列出的miR来测定待检测的疗法在治疗或预防一种或多种肺癌相关疾病中的有效性水平。
31.前述权利要求的方法，其中候选治疗剂包括药物组合物、营养组合物和顺势疗法组合物中的一种或多种。
32.前述权利要求的方法，其中所述待评估的疗法用于人受试者。
33.一种制品，其包含：至少一种捕获剂，所述捕获剂结合选自表1、表2或表3中列出的至少一种miR的针对一种或多种肺癌相关疾病的标志物。
34.用于筛选用于治疗一种或多种肺癌相关疾病的治疗剂的候选化合物的试剂盒，其中所述试剂盒包括：至少一种表1、表2或表3中列出的miR的一种或多种试剂和表达至少一种miR的细胞。
35.前述权利要求的试剂盒，其中使用包含特异性结合至少一种miR的抗体或抗体片段的试剂检测所述miR的存在。
36.用于一种或多种肺癌相关疾病的筛查测试，其包括：
将一种或多种表1、表2或表3中列出的miR与此类miR的底物和与测试试剂接触，和
确定所述测试试剂是否调控miR的活性。
37.前述权利要求的筛查测试，其中所有方法步骤在体外进行。
38.干扰一种或多种肺癌相关应答信号转导途径的试剂用于制造药剂的用途，所述药剂用于治疗、预防、逆转或限制个体中一种或多种肺癌相关疾病相关并发症的严重性，其中所述药剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
39.治疗、预防、逆转或限制有此需要的个体中一种或多种肺癌相关疾病并发症的严重性的方法，其包括：
对所述个体施用干扰至少一种或多种肺癌相关疾病应答级联的试剂，其中所述试剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
40.干扰至少一种或多种肺癌相关疾病应答级联的试剂用于制造药剂的用途，所述药剂用于治疗、预防、逆转或限制个体中一种或多种肺癌相关疾病并发症的严重性，其中所述试剂包括至少一种表1、表2或表3中列出的miR。
CN2008801238895A 2007-11-30 2008-11-26 肺癌中外周血中的微rna表达特征谱和靶向 Pending CN101918594A (zh)

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Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102757965A (zh) * 2012-06-21 2012-10-31 李春英 血清microRNA分子标志物及其应用
CN103865928A (zh) * 2014-03-03 2014-06-18 吉林大学 可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-511-5p
CN104169420A (zh) * 2011-06-23 2014-11-26 株式会社爱茉莉太平洋 包含miRNA的调节色素形成的组合物
CN105412944A (zh) * 2015-12-09 2016-03-23 上海大学 miR-451a细胞在非小细胞肺癌中的作用
CN106164290A (zh) * 2014-01-05 2016-11-23 拜奥米尔纳控股有限公司 使用mirna比率确定肺癌
CN107058480A (zh) * 2016-12-14 2017-08-18 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） 用于诊断肺腺癌的长链非编码rna标志物
CN111218513A (zh) * 2020-04-24 2020-06-02 上海思路迪医学检验所有限公司 一种用于肺癌早期诊断的外周血胞外囊泡microRNA生物标志物及其用途
CN112301130A (zh) * 2020-11-12 2021-02-02 苏州京脉生物科技有限公司 一种肺癌早期检测的标志物、试剂盒及方法
CN112410402A (zh) * 2020-11-12 2021-02-26 麦凯(上海)生物科技有限公司 一种游离rna助沉剂
CN112760381A (zh) * 2021-02-08 2021-05-07 复旦大学附属中山医院 一种检测肺腺癌预后的miRNA试剂盒
CN113969261A (zh) * 2020-07-06 2022-01-25 苏州市立医院(北区) 三步法快速测定中性粒细胞趋化的方法

Families Citing this family (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103866018B (zh) 2005-08-01 2016-05-25 俄亥俄州立大学研究基金会 用于乳腺癌的诊断、预后和治疗的基于MicroRNA的方法和组合物
AU2007205257B2 (en) 2006-01-05 2013-07-25 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA expression abnormalities in pancreatic endocrine and acinar tumors
EP2502630B1 (en) 2006-01-05 2015-03-11 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer
AU2007227423B2 (en) 2006-03-20 2013-11-07 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA fingerprints during human megakaryocytopoiesis
AU2007346101B2 (en) 2006-09-19 2013-08-15 The Ohio State University Research Foundation TCL1 expression in chronic lymphocytic leukemia (CLL) regulated by miR-29 and miR-181
CA2667617A1 (en) 2006-11-01 2008-05-08 The Ohio State University Research Foundation Microrna expression signature for predicting survival and metastases in hepatocellular carcinoma
WO2008094545A2 (en) 2007-01-31 2008-08-07 The Ohio State University Research Foundation Mic orna-based methods and compositions for the treatment of acute myeloid leukemia
US8465917B2 (en) 2007-06-08 2013-06-18 The Ohio State University Research Foundation Methods for determining heptocellular carcinoma subtype and detecting hepatic cancer stem cells
CN101918424A (zh) 2007-06-15 2010-12-15 俄亥俄州立大学研究基金会 用于靶向由Drosha介导的微小RNA加工的致癌ALL-1融合蛋白
CN101809169B (zh) 2007-07-31 2013-07-17 俄亥俄州立大学研究基金会 通过靶向dnmt3a和dnmt3b恢复甲基化的方法
US8465918B2 (en) 2007-08-03 2013-06-18 The Ohio State University Research Foundation Ultraconserved regions encoding ncRNAs
CA2926831A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Ohio State University Research Foundation Methods and compositions for inducing deregulation of epha7 and erk phosphorylation in human acute leukemias
JPWO2009044899A1 (ja) * 2007-10-03 2011-02-17 協和発酵キリン株式会社 細胞の増殖を制御する核酸
EP2201112A4 (en) 2007-10-26 2011-02-02 Univ Ohio State Res Found METHODS FOR IDENTIFYING INTERACTION OF THE "FRAGILE HISTIDINE TRIAD" GENE (FHIT) AND USES THEREOF
ES2433940T3 (es) 2008-06-11 2013-12-13 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Uso de la familia miR-26 como marcador predictivo del carcinoma hepatocelular y sensibilidad a la terapia
BRPI0919882A8 (pt) 2008-10-30 2017-09-19 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings Métodos para avaliar padrões de rna
CN102301002A (zh) 2008-11-12 2011-12-28 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和系统
CN101475984A (zh) 2008-12-15 2009-07-08 江苏命码生物科技有限公司 一种非小细胞肺癌检测标记物及其检测方法、相关生物芯片和试剂盒
WO2010082039A1 (en) * 2009-01-19 2010-07-22 Sistemic Scotland Limited Methods employing non-coding rna expression assays
EP2336353A1 (en) 2009-12-17 2011-06-22 febit holding GmbH miRNA fingerprints in the diagnosis of diseases
CA2767367C (en) * 2009-07-09 2018-07-24 Cancer Institute, Chinese Academy Of Medical Sciences The use of two micrornas in lung cancer prognosis and drug preparation
EP2775300A3 (en) * 2009-08-28 2015-04-01 Asuragen, INC. miRNA Biomarkers of Lung Disease
CA2773619C (en) * 2009-09-10 2019-11-12 Svend Lindenberg Method for the preparation of micro-rna and its therapeutic application
JP5892939B2 (ja) * 2009-11-02 2016-03-23 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ 細胞状態をモニタリングするための方法及び間葉系幹細胞を不死化するための方法
EP3118334A1 (en) 2009-11-04 2017-01-18 DiamiR, LLC Methods of using small rna from bodily fluids for diagnosis and monitoring of neurodegenerative diseases
CN102803511A (zh) 2009-11-23 2012-11-28 俄亥俄州立大学 用于影响肿瘤细胞生长、迁移和侵袭的材料和方法
DK3150721T3 (da) 2009-12-24 2019-07-01 Micromedmark Biotech Co Ltd Pankreascancermarkører og detekteringsfremgangsmåder
EP2341145A1 (en) * 2009-12-30 2011-07-06 febit holding GmbH miRNA fingerprint in the diagnosis of diseases
CN101804208A (zh) * 2010-02-26 2010-08-18 南京医科大学 miR-451在制备治疗非小细胞肺癌药物的应用
JP5808349B2 (ja) 2010-03-01 2015-11-10 カリス ライフ サイエンシズ スウィッツァーランド ホールディングスゲーエムベーハー セラノーシスのためのバイオマーカー
US9469876B2 (en) 2010-04-06 2016-10-18 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Circulating biomarkers for metastatic prostate cancer
EP2561091B1 (en) * 2010-04-20 2014-08-06 Comprehensive Biomarker Center GmbH Complex mirna sets as novel biomarkers for an acute coronary syndrome
WO2012065049A1 (en) 2010-11-12 2012-05-18 The Ohio State University Research Foundation Materials and methods related to microrna-21, mismatch repair, and colorectal cancer
CA2817982C (en) 2010-11-15 2020-06-30 The Regents Of The University Of Michigan Controlled release mucoadhesive systems
EP2505663A1 (en) 2011-03-30 2012-10-03 IFOM Fondazione Istituto Firc di Oncologia Molecolare A method to identify asymptomatic high-risk individuals with early stage lung cancer by means of detecting miRNAs in biologic fluids
US20130331290A1 (en) * 2011-01-28 2013-12-12 Febit Holding Gmbh Complex mirna sets as novel biomarkers for lung diseases
IT1406866B1 (it) * 2011-02-07 2014-03-14 Fond Irccs Istituto Naz Dei Tumori Procedimento ed apparecchiatura per identificare individui a rischio di tumore polmonare e/o per diagnosticare un tumore polmonare, nonché composizione e metodo per ridurre o eliminare il rischio di tumore polmonare
IT1403685B1 (it) * 2011-02-07 2013-10-31 Fond Irccs Istituto Naz Dei Tumori Procedimento ed apparecchiatura per identificare individui a rischio di tumore polmonare e/o per diagnosticare un tumore polmonare, nonche' composizione e metodo per ridurre o eliminare il rischio di tumore polmonare.
WO2012107841A2 (en) * 2011-02-07 2012-08-16 Biomirna Holdings Ltd. Micro-rna biomarkers and methods of using same
US8664192B2 (en) 2011-03-07 2014-03-04 The Ohio State University Mutator activity induced by microRNA-155 (miR-155) links inflammation and cancer
WO2012140234A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Vib Vzw Modulation of mirna in diseases with aberrant angiogenesis
JP6211511B2 (ja) 2011-04-18 2017-10-11 ディアミール, エルエルシーDiamir, Llc ｍｉＲＮＡに基づくユニバーサルスクリーニングテスト（ＵＳＴ）
JP2014530612A (ja) 2011-10-14 2014-11-20 ジ・オハイオ・ステート・ユニバーシティ 卵巣がんに関する方法および材料
AU2012340698A1 (en) * 2011-11-22 2014-04-24 Intermune, Inc. Methods of diagnosing and treating idiopathic pulmonary fibrosis
CN104619353A (zh) 2011-12-13 2015-05-13 俄亥俄州国家创新基金会 与miR-21和miR-29a相关的方法和组合物、外切体抑制和癌症转移
US10174314B2 (en) * 2011-12-22 2019-01-08 Interna Technologies B.V. MiRNA for treating head and neck cancer
WO2013110053A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 The Ohio State University Breast cancer biomarker signatures for invasiveness and prognosis
EP2857521A4 (en) * 2012-05-31 2015-12-30 Takeda Pharmaceutical METHOD FOR ASSESSING ENDOMETRIOSIS
US20150307542A1 (en) 2012-10-03 2015-10-29 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
JP2016504050A (ja) 2013-01-17 2016-02-12 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 細胞表現型の改変のためのシグナルセンサーポリヌクレオチド
CN104342439B (zh) * 2013-07-23 2017-06-23 中国科学院遗传与发育生物学研究所 miR‑7及其应用
AU2014348273A1 (en) 2013-11-18 2016-06-09 Diamir, Llc Methods of using mIRNAs from bodily fluids for detection and monitoring of Parkinson's disease (PD)
RU2017101354A (ru) 2014-06-18 2018-07-18 Торэй Индастриз, Инк. Набор или устройство для обнаружения рака легкого и способ обнаружения
US20160046984A1 (en) * 2014-08-15 2016-02-18 Affymetrix, Inc. Robust Detection of Nucleic Acids in Situ
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
US10975436B2 (en) 2016-01-05 2021-04-13 Diamir, Llc Methods of using miRNA from bodily fluids for diagnosis and monitoring of neurodevelopmental disorders
WO2017127750A1 (en) 2016-01-22 2017-07-27 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
US11149313B2 (en) 2016-03-21 2021-10-19 Diamir, Llc Methods of using miRNAs from bodily fluids for detection and differentiation of neurodegenerative diseases
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
EP4186518A1 (en) 2016-05-18 2023-05-31 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding interleukin-12 (il12) and uses thereof
JP2019525901A (ja) 2016-06-14 2019-09-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 脂質ナノ粒子の安定化製剤
JPWO2017221744A1 (ja) * 2016-06-24 2019-04-18 国立大学法人名古屋大学 肺がん検査用の情報を提供する方法、肺がんの検査方法、肺がんの検査装置、肺がんの検査装置のプログラム及び記録媒体、並びに肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット
US11174469B2 (en) 2016-06-29 2021-11-16 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) and other related disorders
CA3029119A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of friedreich ataxia and other related disorders
US11427838B2 (en) 2016-06-29 2022-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Materials and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 (DM1) and other related disorders
EP3481857A1 (en) 2016-07-06 2019-05-15 Crispr Therapeutics AG Materials and methods for treatment of pain related disorders
JP7305534B2 (ja) 2016-07-06 2023-07-10 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 疼痛関連障害を処置するための物質及び方法
AU2017347837A1 (en) 2016-10-26 2019-06-06 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof
WO2018089540A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US20190351039A1 (en) 2017-02-01 2019-11-21 Modernatx, Inc. Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides
US11920148B2 (en) 2017-02-22 2024-03-05 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for gene editing
US20200216857A1 (en) 2017-02-22 2020-07-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of spinocerebellar ataxia type 2 (sca2) and other spinocerebellar ataxia type 2 protein (atxn2) gene related conditions or disorders
EP3585898A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Materials and methods for treatment of spinocerebellar ataxia type 1 (sca1) and other spinocerebellar ataxia type 1 protein (atxn1) gene related conditions or disorders
EP3585807A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Materials and methods for treatment of early onset parkinson's disease (park1) and other synuclein, alpha (snca) gene related conditions or disorders
EP3585899A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Materials and methods for treatment of primary hyperoxaluria type 1 (ph1) and other alanine-glyoxylate aminotransferase (agxt) gene related conditions or disorders
WO2018231990A2 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase
US11634778B2 (en) 2017-06-29 2023-04-25 Toray Industries, Inc. Kit, device, and method for detecting lung cancer
US10781487B2 (en) 2017-07-24 2020-09-22 Diamir, Llc miRNA-based methods for detecting and monitoring aging
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
CN111727251A (zh) 2017-11-21 2020-09-29 克里斯珀医疗股份公司 用于治疗常染色体显性色素性视网膜炎的材料和方法
CA3084632A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of usher syndrome type 2a
WO2019123430A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Casebia Therapeutics Llp Materials and methods for treatment of usher syndrome type 2a and/or non-syndromic autosomal recessive retinitis pigmentosa (arrp)
EP3746052A1 (en) 2018-01-30 2020-12-09 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of agents to immune cells
US20210163928A1 (en) 2018-04-11 2021-06-03 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
JP2022501367A (ja) 2018-09-20 2022-01-06 モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX, Inc. 脂質ナノ粒子の調製及びその投与方法
WO2020086742A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
JP2022519557A (ja) 2019-01-31 2022-03-24 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子の調製方法
AU2020235865A1 (en) 2019-03-08 2021-09-23 Obsidian Therapeutics, Inc. Human carbonic anhydrase 2 compositions and methods for tunable regulation
US20220387628A1 (en) 2019-06-24 2022-12-08 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
US20220251577A1 (en) 2019-06-24 2022-08-11 Modernatx, Inc. Endonuclease-resistant messenger rna and uses thereof
US20220348937A1 (en) 2019-09-06 2022-11-03 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation
US20230285297A1 (en) 2020-01-31 2023-09-14 Modernatx, Inc. Methods of preparing lipid nanoparticles
CN116710079A (zh) 2020-07-24 2023-09-05 斯特兰德生物科技公司 包含经修饰的核苷酸的脂质纳米颗粒
CA3190790A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Modernatx, Inc. Methods of preparing lipid nanoparticles
KR20230129479A (ko) 2021-01-08 2023-09-08 스트랜드 세러퓨틱스 인코포레이티드 발현 구성체 및 이의 용도
WO2022233880A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Curevac Ag Improved nucleic acid sequence for cell type specific expression
WO2023212618A1 (en) 2022-04-26 2023-11-02 Strand Therapeutics Inc. Lipid nanoparticles comprising venezuelan equine encephalitis (vee) replicon and uses thereof
WO2024026475A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Modernatx, Inc. Compositions for delivery to hematopoietic stem and progenitor cells (hspcs) and related uses
WO2024026487A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions comprising phospholipid derivatives and related uses
WO2024026482A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions comprising surface lipid derivatives and related uses

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060105360A1 (en) * 2004-02-09 2006-05-18 Croce Carlo M Diagnosis and treatment of cancers with microRNA located in or near cancer associated chromosomal features
US20070050146A1 (en) * 2004-05-14 2007-03-01 Itzhak Bentwich Micrornas and uses thereof
WO2007081720A2 (en) * 2006-01-05 2007-07-19 The Ohio State University Research Foundation Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer

Family Cites Families (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4196265A (en) * 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US5015568A (en) * 1986-07-09 1991-05-14 The Wistar Institute Diagnostic methods for detecting lymphomas in humans
US5202429A (en) * 1986-07-09 1993-04-13 The Wistar Institute DNA molecules having human BCL-2 gene sequences
US5198338A (en) * 1989-05-31 1993-03-30 Temple University Molecular probing for human t-cell leukemia and lymphoma
WO1993012136A1 (en) * 1991-12-11 1993-06-24 Thomas Jefferson University Detection and treatment of acute leukemias resulting from chromosome abnormalities in the all-1 region
US5633135A (en) * 1991-12-11 1997-05-27 Thomas Jefferson University Chimeric nucleic acids and proteins resulting from ALL-1 region chromosome abnormalities
US6040140A (en) * 1991-12-11 2000-03-21 Thomas Jefferson University Methods for screening and treating leukemias resulting from all-1 region chromosome abnormalities
EP0667920B1 (en) * 1992-10-29 2003-01-15 Thomas Jefferson University Methods of detecting micrometastasis of prostate cancer
US5985598A (en) * 1994-10-27 1999-11-16 Thomas Jefferson University TCL-1 gene and protein and related methods and compositions
US7175995B1 (en) * 1994-10-27 2007-02-13 Thomas Jefferson University TCL-1 protein and related methods
US5928884A (en) * 1996-02-09 1999-07-27 Croce; Carlo M. FHIT proteins and nucleic acids and methods based thereon
US6242212B1 (en) * 1996-02-09 2001-06-05 Thomas Jefferson University Fragile histidine triad (FHIT) nucleic acids and methods of producing FHIT proteins
AU6659298A (en) * 1997-02-18 1998-09-08 Thomas Jefferson University Compositions that bind to pancreatic cancer cells and methods of using the same
CA2286328A1 (en) * 1997-04-04 1998-10-15 The Texas A & M University System Noninvasive detection of colonic biomarkers using fecal messenger rna
WO2000003685A2 (en) * 1998-07-20 2000-01-27 Thomas Jefferson University Nitrilase homologs
WO2000005419A1 (en) * 1998-07-24 2000-02-03 Yeda Research And Development Company Ltd. Prevention of metastasis with 5-aza-2'-deoxycytidine
US7141417B1 (en) * 1999-02-25 2006-11-28 Thomas Jefferson University Compositions, kits, and methods relating to the human FEZ1 gene, a novel tumor suppressor gene
CA2406366A1 (en) * 2000-04-11 2001-10-18 Thomas Jefferson University Muir-torre-like syndrome infhit deficient mice
WO2001087958A2 (en) * 2000-05-16 2001-11-22 Thomas Jefferson University CRYSTAL STRUCTURE OF WORM NitFhit REVEALS THAT A Nit TETRAMER BINDS TWO Fhit DIMERS
US7060811B2 (en) * 2000-10-13 2006-06-13 Board Of Regents, The University Of Texas System WWOX: a tumor suppressor gene mutated in multiple cancers
US20040033502A1 (en) * 2001-03-28 2004-02-19 Amanda Williams Gene expression profiles in esophageal tissue
JP4371812B2 (ja) * 2001-09-28 2009-11-25 マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ マイクロｒｎａ分子
US7371736B2 (en) * 2001-11-07 2008-05-13 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Gene expression profiling based identification of DKK1 as a potential therapeutic targets for controlling bone loss
GB0128898D0 (en) * 2001-12-03 2002-01-23 Biotech Res Ventures Pte Ltd Materials and methods relating to the stabilization and activation of a tumour suppressor protein
US20060084059A1 (en) * 2002-04-08 2006-04-20 Tai-Tung Yip Serum biomarkers in hepatocellular carcinoma
CA2484920A1 (en) * 2002-04-29 2003-11-13 Thomas Jefferson University Human chronic lymphocytic leukemia modeled in mouse by targeted tcl1 expression
JP2005528115A (ja) * 2002-05-31 2005-09-22 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 幹細胞および癌幹細胞を同定および単離する方法
US20060105340A1 (en) * 2002-10-11 2006-05-18 Croce Carlo M Novel tumor suppressor gene and compositions and methods for making and using the same
JP4939055B2 (ja) * 2002-11-13 2012-05-23 トマス ジェファソン ユニバーシティ 癌の診断および治療のための組成物および方法
WO2004071464A2 (en) * 2003-02-12 2004-08-26 Johns Hopkins University School Of Medicine Diagnostic application of differentially-expressed genes in lympho-hematopoietic stem cells
US20050069918A1 (en) * 2003-05-29 2005-03-31 Francois Claret JAB1 as a prognostic marker and a therapeutic target for human cancer
US20050037362A1 (en) * 2003-08-11 2005-02-17 Eppendorf Array Technologies, S.A. Detection and quantification of siRNA on microarrays
WO2005028675A2 (en) * 2003-09-24 2005-03-31 Oncotherapy Science, Inc. Methods for detecting, diagnosing and treating hepatocellular carcinomas (hcc)
US20050164252A1 (en) * 2003-12-04 2005-07-28 Yeung Wah Hin A. Methods using non-genic sequences for the detection, modification and treatment of any disease or improvement of functions of a cell
WO2005118806A2 (en) * 2004-05-28 2005-12-15 Ambion, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS INVOLVING MicroRNA
US7635563B2 (en) * 2004-06-30 2009-12-22 Massachusetts Institute Of Technology High throughput methods relating to microRNA expression analysis
US20060037088A1 (en) * 2004-08-13 2006-02-16 Shulin Li Gene expression levels as predictors of chemoradiation response of cancer
US7642348B2 (en) * 2004-10-04 2010-01-05 Rosetta Genomics Ltd Prostate cancer-related nucleic acids
FR2877350B1 (fr) * 2004-11-03 2010-08-27 Centre Nat Rech Scient IDENTIFICATION ET UTILISATION DE miRNAs IMPLIQUES DANS LA DIFFERENCIATION DE CELLULES ISSUES D'UNE LEUCEMIE MYELOIDE
ES2534300T3 (es) * 2004-11-12 2015-04-21 Asuragen, Inc. Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN
JP2008523157A (ja) * 2004-12-14 2008-07-03 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ＭＬＬ−ＡＦ４のＲＮＡｉ調節およびその使用方法
WO2006069584A2 (en) * 2004-12-29 2006-07-06 Exiqon A/S NOVEL OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND PROBE SEQUENCES USEFUL FOR DETECTION AND ANALYSIS OF microRNAs AND THEIR TARGET mRNAs
ATE480644T1 (de) * 2005-01-25 2010-09-15 Rosetta Inpharmatics Llc Verfahren zur quantifizierung kleiner rna- moleküle
US20070065840A1 (en) * 2005-03-23 2007-03-22 Irena Naguibneva Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of microRNAS and their target mRNAS
US20070054287A1 (en) * 2005-05-31 2007-03-08 Applera Corporation Method for identifying medically important cell populations using micro rna as tissue specific biomarkers
US20070065844A1 (en) * 2005-06-08 2007-03-22 Massachusetts Institute Of Technology Solution-based methods for RNA expression profiling
EP1919512B1 (en) * 2005-08-10 2014-11-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro rna and uses thereof
CN101296702B (zh) * 2005-09-12 2012-11-28 俄亥俄州立大学研究基金会 用于诊断或治疗bcl2相关癌症的组合物和方法
US20070092882A1 (en) * 2005-10-21 2007-04-26 Hui Wang Analysis of microRNA
US7390792B2 (en) * 2005-12-15 2008-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System MicroRNA1 therapies
AU2007205257B2 (en) * 2006-01-05 2013-07-25 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA expression abnormalities in pancreatic endocrine and acinar tumors
JP5127821B2 (ja) * 2006-04-24 2013-01-23 ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション ｍｉＲ１５５トランスジェニックマウスにおけるプレＢ細胞増殖及びリンパ芽球性白血病／高悪性度リンパ腫
US20090131348A1 (en) * 2006-09-19 2009-05-21 Emmanuel Labourier Micrornas differentially expressed in pancreatic diseases and uses thereof
WO2008036776A2 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. Mir-15, mir-26, mir -31,mir -145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216 mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CA2663878A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
AU2007346101B2 (en) * 2006-09-19 2013-08-15 The Ohio State University Research Foundation TCL1 expression in chronic lymphocytic leukemia (CLL) regulated by miR-29 and miR-181
CA2667617A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-08 The Ohio State University Research Foundation Microrna expression signature for predicting survival and metastases in hepatocellular carcinoma
US8293684B2 (en) * 2006-11-29 2012-10-23 Exiqon Locked nucleic acid reagents for labelling nucleic acids
WO2008070082A2 (en) * 2006-12-04 2008-06-12 The Johns Hopkins University Stem-progenitor cell specific micro-ribonucleic acids and uses thereof
EP2104735A2 (en) * 2006-12-08 2009-09-30 Asuragen, INC. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
AU2007333106A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. miR-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20090092974A1 (en) * 2006-12-08 2009-04-09 Asuragen, Inc. Micrornas differentially expressed in leukemia and uses thereof
CN101675165A (zh) * 2006-12-08 2010-03-17 奥斯瑞根公司 Let-7微小rna的功能和靶标
CA2671270A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-17 Asuragen, Inc. Mir-16 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2008094545A2 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 The Ohio State University Research Foundation Mic orna-based methods and compositions for the treatment of acute myeloid leukemia
CA2699418A1 (en) * 2007-02-27 2008-09-04 Moshe Oren Composition and methods for modulating cell proliferation and cell death
EP2126584B1 (en) * 2007-03-16 2012-12-19 CovalX AG Direct mass spectrometric analysis of drug candidates targeting protein complexes
AU2008248319B2 (en) * 2007-04-30 2013-09-05 The Ohio State University Research Foundation Methods for differentiating pancreatic cancer from normal pancreatic function and/or chronic pancreatitis
US20090005336A1 (en) * 2007-05-08 2009-01-01 Zhiguo Wang Use of the microRNA miR-1 for the treatment, prevention, and diagnosis of cardiac conditions
US20090131354A1 (en) * 2007-05-22 2009-05-21 Bader Andreas G miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
WO2008154098A2 (en) * 2007-06-07 2008-12-18 Wisconsin Alumni Research Foundation Reagents and methods for mirna expression analysis and identification of cancer biomarkers
CN101918424A (zh) * 2007-06-15 2010-12-15 俄亥俄州立大学研究基金会 用于靶向由Drosha介导的微小RNA加工的致癌ALL-1融合蛋白
US8465918B2 (en) * 2007-08-03 2013-06-18 The Ohio State University Research Foundation Ultraconserved regions encoding ncRNAs
US20090061424A1 (en) * 2007-08-30 2009-03-05 Sigma-Aldrich Company Universal ligation array for analyzing gene expression or genomic variations
US20090123933A1 (en) * 2007-11-12 2009-05-14 Wake Forest University Health Sciences Microrna biomarkers in lupus
US8071562B2 (en) * 2007-12-01 2011-12-06 Mirna Therapeutics, Inc. MiR-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20090192114A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-30 Dmitriy Ovcharenko miR-10 Regulated Genes and Pathways as Targets for Therapeutic Intervention

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060105360A1 (en) * 2004-02-09 2006-05-18 Croce Carlo M Diagnosis and treatment of cancers with microRNA located in or near cancer associated chromosomal features
US20070050146A1 (en) * 2004-05-14 2007-03-01 Itzhak Bentwich Micrornas and uses thereof
WO2007081720A2 (en) * 2006-01-05 2007-07-19 The Ohio State University Research Foundation Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104169420A (zh) * 2011-06-23 2014-11-26 株式会社爱茉莉太平洋 包含miRNA的调节色素形成的组合物
CN104169420B (zh) * 2011-06-23 2016-05-04 株式会社爱茉莉太平洋 包含miRNA的调节色素形成的组合物
CN102757965A (zh) * 2012-06-21 2012-10-31 李春英 血清microRNA分子标志物及其应用
CN102757965B (zh) * 2012-06-21 2014-09-24 中国人民解放军第四军医大学 血清microRNA分子标志物及其应用
CN106164290A (zh) * 2014-01-05 2016-11-23 拜奥米尔纳控股有限公司 使用mirna比率确定肺癌
CN103865928A (zh) * 2014-03-03 2014-06-18 吉林大学 可检测感染弓形虫的标识性mmu-miR-511-5p
CN105412944A (zh) * 2015-12-09 2016-03-23 上海大学 miR-451a细胞在非小细胞肺癌中的作用
CN107058480B (zh) * 2016-12-14 2018-07-13 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） 用于诊断肺腺癌的长链非编码rna标志物
CN107058480A (zh) * 2016-12-14 2017-08-18 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） 用于诊断肺腺癌的长链非编码rna标志物
CN111218513A (zh) * 2020-04-24 2020-06-02 上海思路迪医学检验所有限公司 一种用于肺癌早期诊断的外周血胞外囊泡microRNA生物标志物及其用途
CN111218513B (zh) * 2020-04-24 2020-08-14 上海思路迪医学检验所有限公司 一种用于肺癌早期诊断的外周血胞外囊泡microRNA生物标志物及其用途
CN113969261A (zh) * 2020-07-06 2022-01-25 苏州市立医院(北区) 三步法快速测定中性粒细胞趋化的方法
CN113969261B (zh) * 2020-07-06 2024-04-09 苏州市立医院(北区) 三步法快速测定中性粒细胞趋化的方法
CN112301130A (zh) * 2020-11-12 2021-02-02 苏州京脉生物科技有限公司 一种肺癌早期检测的标志物、试剂盒及方法
CN112410402A (zh) * 2020-11-12 2021-02-26 麦凯(上海)生物科技有限公司 一种游离rna助沉剂
CN112301130B (zh) * 2020-11-12 2021-11-30 苏州京脉生物科技有限公司 一种肺癌早期检测的标志物、试剂盒及方法
CN112760381A (zh) * 2021-02-08 2021-05-07 复旦大学附属中山医院 一种检测肺腺癌预后的miRNA试剂盒
CN112760381B (zh) * 2021-02-08 2022-11-01 复旦大学附属中山医院 一种检测肺腺癌预后的miRNA试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
US20100323357A1 (en) 2010-12-23
EP2225396A4 (en) 2011-03-02
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EP2225396A1 (en) 2010-09-08
JP2011505143A (ja) 2011-02-24
WO2009070653A1 (en) 2009-06-04
CA2707157A1 (en) 2009-06-04
IL206079A0 (en) 2010-11-30

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