CN101883790B - 抗淀粉样蛋白β抗体在眼病中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供包含特异性识别并结合来自一系列β-淀粉样蛋白的特异性表位的高度特异并高度有效抗体的新方法和组合物。本发明的抗体特别可用于治疗与视觉系统组织中病理学异常/变化相关，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病。

Description

抗淀粉样蛋白β抗体在眼病中的用途
相关专利申请的交叉引用
本申请要求2007年10月5日提交的美国临时申请号60/960,614，和2007年10月5日提交的美国临时申请号60/960,615的优先权。
发明背景
本发明涉及在由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-likeprotein)引起的或与其相关的疾病和紊乱的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物，所述疾病和紊乱包括淀粉样变性，一组与淀粉样蛋白相关的紊乱和异常，如阿尔茨海默氏病。
淀粉样变性不是单一的疾病实体，而是一大类以蜡质淀粉状蛋白(称为淀粉样蛋白，其在一种或多种器官或身体系统中积累)的细胞外组织沉积为特征的进行性疾病过程。随着淀粉样蛋白沉积物的堆积，其开始干扰器官或身体系统的正常功能。有至少15种不同类型的淀粉样变性。主要形式是没有已知前因的原发性淀粉样变性，出现在一些其它病症之后的继发性淀粉样变性，和遗传性淀粉样变性。
继发性淀粉样变性发生在罹患慢性感染或炎性疾病，例如结核病、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风病的患者中。
淀粉样蛋白原纤维(fibril)约占淀粉样蛋白物质的90％，包含数种不同类型的蛋白质中的一种。这些蛋白质中的一些能够折叠成所谓的“β-折叠”片状原纤维，这种独特的蛋白质构型呈现出对刚果红(Congo red)的结合位点，导致了淀粉样蛋白的独特的着色性质。另外，淀粉样蛋白沉积物还与淀粉样蛋白P(五边形)成分(AP)——一种与正常血清淀粉样蛋白P(SAP)相关的糖蛋白，以及与硫酸盐化的糖胺聚糖(GAG)——结缔组织的复杂糖密切相关。
许多老年病基于淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-like proteins)或与其相关，并且部分地以促进疾病发生和疾病发展的淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样物质的细胞外沉积物的累积为特征。这些疾病包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默氏病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆(Lewy body dementia)(LBD)、唐氏综合征(Down’s syndrome)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征。其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病有进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病、HIV相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤以及其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；角膜，导致角膜网络状营养不良。
尽管这些疾病的发病机理可能是多种多样的，但它们的特征性沉积物经常含有许多共同的分子成分。在显著程度上，这可能归因于促炎通路的局部激活，从而与激活的补体成分、急性期反应物、免疫调节剂及其它炎性介质的共沉积相关(McGeer等人，1994)。
阿尔茨海默氏病(AD)是一种神经紊乱，其主要被认为是由淀粉样蛋白斑块，即蛋白质异常沉积物在脑中的积累，引起的。在患病个体脑中发现的最常见的淀粉样蛋白类型主要包含Aβ原纤维。科学证据表明β淀粉样蛋白在斑块中的产生和累积的增加导致神经细胞死亡，这助长了AD的发展和进程。在关键脑区域中神经细胞的损失进而又导致神经递质的减少和记忆的减损。主要负责斑块增大的蛋白质包括淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和两种早老蛋白(早老蛋白I和早老蛋白II)。通过酶β和γ分泌酶相继切割淀粉样蛋白前体蛋白(APP)(其在大多数细胞中组成型表达和代谢)导致39至43个氨基酸的Aβ肽的释放。APP的降解很可能增加其在斑块中聚集的倾向。特别是Aβ(1-42)片段由于其C-末端的两个极为疏水的氨基酸残基，而具有构建聚集物的高倾向。因此认为Aβ(1-42)片段主要参与并负责AD中神经炎斑块形成的起始，并因此具有高病理学潜力。因此需要能够靶向并散开淀粉样蛋白斑块形成的特异性抗体。
AD的症状缓慢显现，第一个症状可能仅仅是轻度健忘。在此阶段，个体可能忘记新近的事件、活动、熟悉的人或事的名称以及不能解决简单的数学问题。随着疾病进展，症状更易于被察觉并且变得足够严重从而导致患有AD的人们或他们的家人寻求医学帮助。AD的中期症状包括忘记如何做诸如整理清洁的简单任务，并且出现说话、理解、阅读或书写方面的问题。后期的AD患者可能变得焦虑或具攻击性，可能从家里走失以及最终需要全面护理。
目前，唯一的明确诊断AD的方法是在个体死亡后的尸体解剖中鉴别脑组织中的斑块和缠结。因此，当人仍活着的时候，医生只能作出“可能”或“很可能”患有AD的诊断。应用目前的方法，内科医师利用数种诊断“可能”AD的工具，至多可以在90％的时间正确诊断AD。内科医师询问个体的一般健康状况、过往的医疗问题、以及在完成日常活动时出现任何困难的历史。关于记忆、解决问题、注意力、计算和语言的行为测试提供认知减退的有关信息，而医疗检验诸如血、尿或脊髓液的检验和脑部扫描可以提供一些其它信息。
AD的管理由基于药物的和基于非药物的治疗组成。以改变疾病的潜在过程(延缓或逆转进程)为目的的治疗迄今在很大程度上是不成功的。修补神经细胞的化学信使(神经递质)不足(缺陷)或功能障碍的药物，特别是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(如他克林和卡巴拉汀(rivastigmine))已显示出可改善症状。ChEI阻碍神经递质的酶促降解，由此增加脑中可用于传递神经信号的化学信使的量。
对于处于疾病早期和中期阶段的一些人，药物他克林(tacrine，COGNEXMorris Plains，NJ)、多奈哌齐(ARICEPT，Tokyo，JP)、卡巴拉汀(rivastigmine，EXELON，East Hanover，NJ)或加兰他敏(galantamine，REMINYL，New Brunswick，NJ)可以在有限的时间内帮助防止某些症状变得更严重。另一种药物美金刚(memantine，NAMENDA，New York，NY)已被核准治疗中度至重度的AD。也有药物用于对付AD的精神病学表现。还有一些药物可以帮助控制AD的行为症状，如失眠、兴奋、恍惚、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使患者更加舒服，并使护理人员更易于进行护理。不幸的是，尽管有显著的治疗进展显示出这类药剂可靠地优于安慰剂，但是疾病仍继续发展，并且对精神功能的平均作用仅为有限的。很多用于AD药物治疗的药物(例如ChEI)也具有副作用，包括胃肠功能失调、肝脏毒性和体重减轻。
皮层视觉缺陷通常与AD相关，尽管有损伤的视力或眼病的负面发现。来自AD患者的死后证据已经显示前皮层视觉结构中的病理变化并且视神经纤维减少。
AD中的视觉加工障碍也与腹侧途径和背侧途径中的神经学变化和病理相关，所述腹侧途径从具有P神经节细胞的视网膜延伸通过外侧膝状体核(LGN)的小细胞层，到达颞下皮层(IT)，所述背侧途径从具有M神经节细胞的视网膜延伸通过LGN的大细胞层，到达中间颞皮层。AD患者的老年斑在这些皮层区产生了异常和障碍。老年斑也引起视知觉的丧失，如熟悉人面部识别中的障碍，称为面容失认症的情况。
基于淀粉样蛋白样蛋白质的累积和沉积或与之相关的其它疾病为轻度认知损害、路易体痴呆(LBD)、唐氏综合征(21三体)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、包涵体肌炎(IBM)和与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；角膜，导致角膜网络状营养不良。
轻度认知损害(MCI)是一个一般性术语，最通常定义为微妙的但可测量的记忆障碍。患有MCI的人体验到比正常衰老所预期到的更严重的记忆问题，但是不显示其它的痴呆症状，诸如判断或推理损害。MCI是常常反映AD临床前阶段的一种病症。
β淀粉样蛋白在内嗅皮质(EC)的沉积据认为在老年人轻度认知损害(MCI)的发展过程中起着关键的作用。这与一旦AD变得临床明显、则CSF-A Aβ(1-42)水平即显著下降的观察结果是一致的。与CSF-Aβ(1-42)相反，CSF-τ的水平在MCI阶段显著增加。这些值在此之后继续升高，表明通过增加的CSF-τ水平，有可能帮助检测预测将发展成AD的MCI个体。
路易体痴呆(LBD)是可发生在65岁以上人群中的神经变性病，其一般引起的症状为认知(思考)损伤和异常的行为改变。症状可包括认知损害、神经学迹象、睡眠紊乱和自主神经衰竭。认知损害是LBD在多数病例中所呈现的特征。患者具有精神混乱的反复发作，且日益严重。认知能力的波动往往与注意力和警觉性的移动程度相关。认知损害和思考的波动可随分钟、小时或天而不同。
路易体是由磷酸化和非磷酸化的神经丝蛋白形成的；它们含有突触蛋白α-突触核蛋白以及泛素，额外21号染色体的一部分，并且经常与认知能力和身体生长的一些损伤相关。DS的特征在于过早老化：受该疾病影响的大多数个体在其五十岁时会患阿尔茨海默氏病，所述疾病包括经常比大多数其它阿尔茨海默氏病患者更严重的斑块形成性蛋白质淀粉样蛋白β的沉积。此外，患有DS的许多人在儿童期开始就患白内障，并且许多人患先天性青光眼。在人中，切割形成淀粉样蛋白β的淀粉样蛋白前体蛋白质的基因定位在21号染色体上。在受DS影响的个体中，可溶性和胞内β淀粉样蛋白在负责形成老年斑的胞外β淀粉样蛋白之前累积。唐氏综合征中β淀粉样蛋白水平的升高可反映21号染色体上β淀粉样蛋白前体蛋白质切割酶2的增加表达和蛋白质水平。
肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是以上和下运动神经元的变性为特征的。在有些ALS患者中，可能存在痴呆或失语症(ALS-D)。痴呆最常见的是额颞叶痴呆(FTD)，且很多这些病例在齿状回以及额和颞叶浅层的神经元中具有泛素阳性、τ阴性的包涵体。
包涵体肌炎(IBM)是通常发现于50岁以上人群中的致残疾病，其中肌纤维生出炎症并开始萎缩，但是脑部不会受到损伤，且患者保持完全的智力。在患有这种老年人最普遍的进行性肌疾病的患者的肌细胞中，发现参与淀粉样蛋白β产生的两种酶增加，其中淀粉样蛋白β也增加。
唐氏综合征(DS)或21三体是因额外的21号染色体全部或部分存在引起的遗传疾病，并经常与认知能力和身体生长的一些损伤相关。DS的特征在于过早老化：受该疾病影响的大多数个体在其五十岁时会患阿尔茨海默氏病，所述疾病包括经常比大多数其它阿尔茨海默氏病患者更严重的斑块形成蛋白质淀粉样蛋白β的沉积。此外，患有DS的许多人在儿童期开始就患白内障，并且许多人患先天性青光眼。在人中，切割形成淀粉样蛋白β的淀粉样蛋白前体蛋白质的基因定位在21号染色体上。在受DS影响的个体中，可溶性和胞内β淀粉样蛋白在负责形成老年斑的胞外β淀粉样蛋白之前累积。唐氏综合征中β淀粉样蛋白水平的升高可反映21号染色体上β淀粉样蛋白前体蛋白质切割酶2的增加表达和蛋白质水平。
另外一种基于淀粉样蛋白样蛋白的积累和沉积或与其相关的疾病是黄斑变性。
黄斑变性是引起视网膜中心区域，即黄斑(在眼睛后部的像纸一样薄的组织，感光细胞在此传送视觉信号至大脑)变性的常见眼病。通过黄斑区处理产生锐利、明晰、“正向”的视像。损伤黄斑区导致盲点的产生和视像的模糊或变形。年龄相关性黄斑变性(AMD)在美国是引起视力损伤的主要原因，并且对于65岁以上的人来说，其为高加索人中法定失明的主要原因。大约有180万40岁及以上的美国人患有晚期AMD，而其它730万患有中等AMD的人具有视力丧失的真实风险。政府估计到2020年，将会有290万人患有晚期AMD。AMD受害者常常惊讶和沮丧地发现对这种失明病症的原因和治疗的了解是如此之少。
存在两种形式的黄斑变性：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。有百分之八十五的黄斑变性病例诊断为干性形式，其中黄斑区的细胞缓慢地开始损坏。两只眼睛通常都受到干性AMD的影响，但一只眼睛可能丧失视力而另外一只眼睛可能保持不受影响。视网膜下的黄色沉积物，即脉络膜小疣(drusen)，是干性AMD的早期征兆。随着脉络膜小疣的数目或大小的增加，发展成晚期干性AMD或湿性AMD的风险也增加。干性AMD可能在不转变为湿性形式疾病的情况下进一步发展并导致视力丧失；然而，早期的干性AMD也有可能突然变为湿性形式。
湿性形式尽管只占病例的百分之十五，却导致了百分之九十的失明，并且被视为晚期AMD(没有早期或中期阶段的湿性AMD)。湿性AMD总是处于干性形式的疾病之后。当干性形式恶化时，一些人在黄斑区的后面开始有异常的血管生长。这些血管非常脆弱并且会泄漏液体和血液(因此是“湿性”黄斑变性)，导致对黄斑区的快速损伤。
干性形式的AMD最初往往会引起轻度的视力模糊。然后，特别是视力的中心可能变得模糊不清，并且这一区域随着疾病的发展将变大。如果只有一只眼睛受到影响，则可能注意不到症状。在湿性AMD中，直线可能看起来像波浪状，并且可迅速发生中心视力的丧失。
黄斑变性的诊断一般涉及扩张眼检查、视敏度检查，以及用称为眼底检查的方法查看眼睛的后部以帮助诊断AMD，并且如果有湿性AMD的嫌疑，则也可能进行荧光素血管造影术。如果干性AMD达到晚期阶段，没有现行治疗能预防视力丧失。然而，抗氧化剂和锌的特定高剂量配方可以延缓或预防中期AMD发展至晚期阶段。Macugen(哌加他尼钠注射液)、激光光凝术和光动力学治疗能够控制黄斑区中的异常血管生长和流血，这对有些患有湿性AMD的患者有用；然而，视力已经丧失的则不能通过这些技术恢复。如果视力已经丧失，存在可以帮助提高生活质量的低视力辅助器。
年龄相关性黄斑变性(AMD)的最早征兆之一是脉络膜小疣在视网膜色素上皮(RPE)基底层和布鲁赫膜(BM)之间的积累。近来由Anderson等人进行的研究已证实脉络膜小疣包含淀粉样蛋白β(Experimental EyeResearch 78(2004)243-256)。
正在进行的研究继续探索可能促进AMD的环境、遗传和饮食因素。也正在探索新的治疗策略，包括视网膜细胞移植物、能够预防或减缓疾病发展的药物、放射疗法、基因疗法、植入到视网膜的可帮助刺激视力的计算机芯片、以及预防黄斑区下新血管生长的药剂。
开发新药物时，考虑的一个重要因素是对目标患者来说使用的容易性。由于对患者的便利性，口服药物递送(特别是片剂、胶囊剂和软胶剂)占所有消费剂型的70％。药物开发人员认同患者更喜欢口服递药，而不是接受注射或其它更具侵入性的药物给药方式。导致减少给药间隔频率(即一天一次或持续释放)的制剂也是优选的。以口服剂型给药抗生素的容易性导致了治疗期间患者顺从性的增加。
所需的是用于产生高特异性和高效抗体的有效方法和组合物，这是以口服剂型提供抗体的先决条件。优选此类抗体能识别多种抗原(诸如淀粉样蛋白)上的特定表位。
因此，还需要在有需要的个体中解决如下疾病和紊乱的相关并发症的有效组合物和方法，所述疾病和紊乱与由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱如阿尔茨海默氏病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆(LBD)、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；角膜，导致角膜网络状营养不良。特别需要能对抗疾病的生理学表现(如与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样肽的纤维聚集相关的斑块形成)的特异高效抗体。
由接种与弗氏完全或不完全佐剂混合的Aβ1-42引起的抗淀粉样蛋白抗体已证明能够减少人阿尔茨海默氏病转基因小鼠的淀粉样蛋白负荷(Schenk等人，1999)。
对NORBA转基因小鼠腹膜内接种在脂质体中重构的四棕榈酰化Aβ1-16引起了显著滴度的抗淀粉样蛋白抗体，其也被证实能够在体外和体内溶解淀粉样蛋白纤维和斑块(Nicolau等人，2002)。
Bard等人(2000)首先提出了淀粉样蛋白斑块和纤维溶解的一种可能机制，基于他们的数据，他们提出了这样的结论——抗体调理斑块，随后小神经胶质的巨噬细胞将之破坏。De Mattos等人(2001)指出抗β淀粉样蛋白中心结构域的mAb能够结合并完全隔离血浆淀粉样蛋白。他们认为循环系统中这些mAb的存在改变了脑和血浆之间的Aβ平衡，从而有利于外周清除和代谢而不是在脑内沉积。
本发明提供了包括高特异性高效抗体的新方法和组合物，所述抗体具有特异性识别并结合特定β淀粉样蛋白的能力。通过本发明教导提供的抗体特别可用于对有需要的个体治疗由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱，包括淀粉样变性：一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默氏病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白-样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；角膜，导致角膜网络状营养不良。
而且，本发明提供在呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的哺乳动物中保持或提高认知记忆能力的新方法和组合物，包括对需要此类治疗的个体，特别是哺乳动物，更特别是人给药治疗有效量的根据本发明的单克隆抗体。
发明概述
本发明利用了可以导致增加优选抗原构象的暴露和稳定的抗原提呈，这最终导致具有独特性质的抗体。
在本发明的一个实施方案中，提供了针对超分子抗原构建体产生的抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，或更特别地单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽(特别是选择的β淀粉样蛋白肽片段)氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用亲水部分(例如聚乙二醇(PEG))或者用疏水部分(例如棕榈酸)修饰，其中所述的亲水部分或疏水部分通过至少一个、特别是一个或两个氨基酸(例如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)或任何其它能够作为使该亲水部分或疏水部分与肽片段偶联的连接结构的适宜氨基酸或氨基酸类似物，而共价连接于抗原肽的每个末端。
当利用亲水部分例如PEG时，该选择的β淀粉样蛋白肽片段可以是对应于Aβ22-35或Aβ29-40氨基酸序列的片段，且游离PEG末端可以共价连接于磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
当利用疏水部分例如棕榈酸时，该选择的β淀粉样蛋白肽片段可以是对应于Aβ1-15氨基酸序列的片段，且此疏水部分可以直接作为锚定元件，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
在本发明的一个实施方案中，提供了抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体识别并结合构象表位，并分别与聚合可溶性淀粉样蛋白和淀粉样蛋白原纤维或纤维，特别是与聚合可溶性淀粉样蛋白Aβ肽和淀粉样蛋白Aβ原纤维或纤维结合。
在本发明的一个实施方案中，提供了抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体识别并结合构象表位，所述构象表位优先地分别展示在聚合可溶性淀粉样蛋白和寡聚淀粉样蛋白肽上，特别是分别地在包含多个单体Aβ1-42肽的聚合可溶性淀粉样蛋白Aβ肽和寡聚淀粉样蛋白Aβ肽上。
在本发明的一个实施方案中，提供了抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体识别并结合构象表位，所述构象表位优先地分别展示在聚合可溶性淀粉样蛋白和寡聚淀粉样蛋白肽上、但也在淀粉样蛋白原纤维或纤维上，特别是分别地在包含多个单体Aβ1-42肽的聚合可溶性淀粉样蛋白Aβ肽和寡聚淀粉样蛋白Aβ肽上、以及在掺入多个所述寡聚肽的淀粉样蛋白原纤维或纤维上。
载脂蛋白E ε4等位基因(apoE4)的遗传是AD的强遗传风险因素。此蛋白能够结合淀粉样蛋白，并且已知既参与Aβ的跨血脑屏障清除，又参与促进Aβ沉积。反过来，淀粉样蛋白的结合作图位于ApoE的疏水脂蛋白结合区，且此缔合显著减小ApoE的整体脂质结合能力。
从而，本发明的另一实施方案提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够抑制或以其它方式减小个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中，特别是患有与脑中Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中淀粉样蛋白与ApoE4的相互作用。因此根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，优先地分别与聚合可溶性淀粉样蛋白和寡聚淀粉样蛋白肽结合，特别是分别与包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合Aβ肽和寡聚Aβ肽结合。在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体与具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽结合，但显示出对具有少于30个残基的Aβ单体肽、特别地具有少于20个残基的肽、更特别地具有少于10个残基的肽、但尤其是具有少于8个及以下残基的肽基本上无结合。
在一个特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-42中等程度的结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和对Aβ单体肽1-42中等程度的结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对Aβ单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在一个实施方案中，如本文所述的根据本发明的抗体，在与单体和/或寡聚形式的、具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的、单体和/或寡聚形式的Aβ单体肽共温育，尤其是与Aβ1-42单体肽和/或包含多个所述Aβ1-42单体肽的寡聚肽共温育，特别是以高达1∶1000的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比，尤其是1∶10至1∶100的摩尔浓度比共温育后，抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
特别地，根据本发明的抗体与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽的共温育在28℃至40℃的温度，特别是32℃至38℃，更特别是37℃进行24小时至60小时，特别是30小时至50小时，更特别是48小时。
在本发明的特定实施方案中，与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽的共温育在37℃的温度进行48小时。
特别地，根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，优先结合Aβ1-40单体肽，并且在与Aβ1-40单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制该Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽，特别是Aβ单体肽1-40，以及结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制该Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽以及Aβ1-42寡聚和/或聚合肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对单体肽1-42中等程度的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制该Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，与在缓冲液中温育的相应淀粉样蛋白肽单体(对照)相比较，根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，至少40％、至少50％、特别地至少60％、特别地至少65％、更特别地至少75％、甚至更特别地至少80％、但尤其是至少85％-90％或更高程度地抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽以及Aβ1-42寡聚和/或聚合肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对单体肽1-42中等程度的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(thioflavin，Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，尤其是至少85％-90％地抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维；且在1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％地抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
如本文所描述的本发明抗体与促淀粉样变(amyloidogenic)单体肽和/或寡聚肽，特别是与淀粉样蛋白形式(1-42)的结合，导致抑制单体的和/或寡聚的促淀粉样变肽聚集成高分子原纤维或纤丝。根据本发明的抗体通过抑制促淀粉样变单体肽和/或寡聚肽的聚集，能够防止或减缓淀粉样蛋白斑块，特别是淀粉样蛋白形式(1-42)的形成，已知淀粉样蛋白形式(1-42)通过二级构象的改变会变得不可溶，并且是患病动物或人脑中淀粉样蛋白斑块的主要部分。
根据本发明的抗体的聚集抑制潜力可以通过任何本领域已知的适宜方法来测定，例如通过密度梯度超速离心随后在预先形成的梯度上进行SDS-PAGE沉降分析，和/或通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法来测定。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体，在与预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育，特别地以1∶10至1∶1000摩尔浓度比、更特别地以1∶100的比例共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少20％、至少30％、至少35％，特别地至少40％，更特别地至少50％，甚至更特别地至少60％，但尤其是至少70％或更高，其中所述预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝由具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的、单体形式和/或包含多个所述单体肽的寡聚体形式的Aβ单体肽和/或寡聚肽，尤其是Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽，聚集形成。
在本发明特定的实施方案中，可以通过密度梯度超速离心，随后在预先形成的梯度上进行SDS-PAGE沉降分析，来分别地测定抗体的聚集抑制和解聚潜力。
在本发明另一特定的实施方案中，通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法来分别地测定抗体的聚集抑制和解聚潜力。
在另一特定的实施方案中，根据本发明的抗体与预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃共温育12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地24小时。
特别地，与预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共温育在37℃的温度进行24小时。
在一个实施方案中，本发明涉及根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽，特别是Aβ单体肽1-40，以及包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚，特别是解聚至少5％、至少10％、至少20％，特别地至少30％，更特别地至少40％，甚至更特别地至少50％，但尤其是至少60％，甚至更特别地至少70％或更高。
特别地，本发明涉及根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽以及Aβ1-42寡聚和/或聚合肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对单体肽1-42中等程度的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚，特别是解聚至少5％、至少10％、至少20％，特别地至少30％，更特别地至少40％，甚至更特别地至少50％，但尤其是至少60％、至少70％、至少80％或更高。
在本发明的一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽以及Aβ1-42寡聚和/或聚合肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对单体肽1-42中等程度的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少55％，特别地至少60％，更特别地至少70％和更高；在1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％。
根据本发明的抗体通过抑制淀粉样蛋白聚集又通过解聚促淀粉样变聚合原纤维或纤丝，能够防止或减缓淀粉样蛋白斑块的形成，这引起疾病相关症状的缓解及进程的延缓或逆转。
相应地，本发明另一实施方案提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够降低患有与脑中Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、尤其是人的脑中的Aβ总量。
在本发明的另一个实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够瓦解斑块，从而降低患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块负荷。根据本发明的抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，使脑中的斑块负荷降低至少10％、至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％。
又在本发明的另一个实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够溶解斑块，伴随着患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块量减小。根据本发明的抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，使脑中的斑块量减小至少10％，特别地至少15％，更特别地至少20％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，尤其是至少85％-90％。
应理解根据本发明的抗体能够呈现出各种组合方式的一种、两种或更多种本文所述的特定特性。
例如，在一个实施方案中，本发明提供了抗体，尤其是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体是双特异性或者双效的，因其既呈现出如本文所定义的聚集抑制特性又呈现出解聚特性，特别是配合着高度的构象敏感性。
在一个实施方案中，如本文所述的本发明抗体是双特异性或者双效的，并且在与具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的单体形式和/或包含多个所述单体肽的寡聚形式的Aβ单体肽和/或寡聚肽，尤其是与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维；并且，此外，在与由具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的单体形式和/或包含多个所述单体肽的寡聚形式的Aβ单体肽和/或寡聚肽，尤其是Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚。
特别地，分别地与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽以及预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共温育以高达1∶1000的摩尔浓度比、但尤其是以1∶10至1∶100的摩尔浓度比、特别是以1∶100的摩尔浓度比进行。
根据本发明的抗体与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽的共温育在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃进行24小时至60小时，特别地30小时至50小时，更特别地48小时；而与淀粉样蛋白预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共温育在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃进行12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地24小时。
在一个实施方案中，如本文所述的本发明双特异性或者双效抗体能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少55％，特别地至少65％，更特别地至少70％，甚至更特别地至少70％，但尤其是至少75％-80％。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，与在缓冲液中温育的相应淀粉样蛋白肽单体(对照)相比较，所述抗体至少40％、至少50％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％或更高程度地抑制具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的单体形式和/或包含多个所述单体肽的寡聚形式的Aβ单体肽和/或寡聚肽，尤其是Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对Aβ1-40单体肽、特别是Aβ单体肽1-40以及包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽呈现出高特异性，但显示出对选自如下的淀粉样蛋白肽单体基本上无或者仅仅是微小到中度的交叉反应性：Aβ1-28、Aβ17-40、Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-41和/或Aβ1-42单体肽。
在特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对淀粉样蛋白肽Aβ1-40比对Aβ1-28、Aβ17-40、Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-41、Aβ1-42要敏感高达1000倍，特别地50-100倍，更特别地80-100倍，但尤其是100倍，并且能够在体外及在体内抑制促淀粉样变单体肽和/或寡聚肽的聚集。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体优先结合Aβ1-40单体肽以及Aβ1-42寡聚和/或聚合肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对单体肽1-42中等程度的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，至少5％、至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少55％，特别地至少65％，更特别地至少70％地抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维，并在1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％地抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维；且在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％，且在1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少20％。
在另一特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对淀粉样蛋白肽Aβ1-40具有高结合敏感性，能够在至多0.01μg的浓度，但特别是0.5μg至0.01μg的浓度范围，更特别是0.1μg至0.01μg，但尤其是0.01μg的浓度检测Aβ1-42可溶性寡聚体和/或聚合淀粉样蛋白肽。
在一个实施方案中，本发明提供如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体针对超分子抗原构建体产生，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽Aβ1-15氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用疏水棕榈酸部分修饰，其中所述的疏水部分通过氨基酸(例如赖氨酸)或任何其它能够作为接头分子的适宜氨基酸或氨基酸类似物而共价连接于各末端。
如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，识别并结合构象表位。
在一个实施方案中，本发明涉及呈现出与SEQ ID NO：7中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：9-11多肽序列的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及呈现出与SEQ ID NO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区，或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：12-14多肽序列的重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
此外，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出与SEQ IDNO：7中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：9-11多肽序列的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
此外，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出与SEQ IDNO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：12-14多肽序列的重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出与SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链及重链可变结构域、或其功能部分，包含具有SEQ ID NO：9-14多肽序列的重链及轻链CDR中的部分或全部。
本发明还涉及单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体包含SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8中所示的多肽序列。本发明还涉及具有SEQ ID NO：7-8多肽序列的单克隆抗体ACI-24-Ab-3。
本发明也包括这样的抗体，其序列已通过向SEQ ID NO：7-8的序列中引入至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个或更多个保守取代而进行了改变，从而该抗体基本上维持其完全的功能。
在一个实施方案中，本发明涉及肽片段，其包含如SEQ ID NO：9中给出的轻链CDR1和/或如SEQ ID NO：10中给出的轻链CDR2和/或如SEQ ID NO：11中给出的轻链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及肽片段，其包含如SEQ ID NO：12中给出的重链CDR1和/或如SEQ ID NO：13中给出的重链CDR2和/或如SEQ ID NO：14中给出的重链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：9中给出的轻链CDR1。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：10中给出的轻链CDR2。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：11中给出的轻链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：12中给出的重链CDR1。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：13中给出的重链CDR2。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：14中给出的重链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及包含轻链可变区或其功能部分的编码核苷酸序列的多核苷酸，所述轻链可变区呈现出与SEQ ID NO：7中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：9-11多肽序列的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。在一个实施方案中，本发明涉及包含重链可变区或其功能部分的编码核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区呈现出与SEQ ID NO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：12-14多肽序列的重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的编码核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出与SEQ ID NO：7中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：9-11多肽序列的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的编码核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出与SEQ ID NO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：12-14多肽序列的重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的编码核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出与SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链及重链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含具有SEQ ID NO：9-14多肽序列的重链及轻链CDR。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包含编码如本文所述的本发明抗体的核苷酸序列、特别是编码具有SEQ ID NO：7-8多肽序列的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸。特别地，这些多核苷酸序列为SEQ ID NO：15-16。
在另一个实施方案中，提供了在严格条件下与编码具有SEQ ID NO：7-8多肽序列的单克隆抗体的核苷酸序列杂交的多核苷酸。特别地，提供了在严格条件下与SEQ ID NO：15-16核苷酸序列杂交的多核苷酸。
特别地，SEQ ID NO：8的位置52可以是任何氨基酸。在另一实施方案中，位置52可以是酪氨酸、丝氨酸或半胱氨酸残基。更特别地，位置52是半胱氨酸残基。
特别地，本发明也涉及与针对超分子抗原构建体产生的单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能部分)结合的Aβ表位，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽Aβ1-15氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用疏水棕榈酸部分修饰，其中所述的疏水部分通过氨基酸(例如赖氨酸)或任何其它能够作为接头分子的适宜氨基酸或氨基酸类似物而共价结合于各末端。本发明还涉及与单克隆抗体ACI-24-Ab-3结合的Aβ表位。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合具有至少10个、特别地至少20个、更特别地至少30个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽，和/或包含多个所述淀粉样蛋白单体肽的可溶性聚合淀粉样蛋白肽，和/或掺入多个所述聚合肽的淀粉样蛋白纤维或原纤维，但尤其是结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，并且显示出对具有8个或更少氨基酸残基的Aβ单体肽基本上无结合。
在一个特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合具有至少30个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽，和/或包含多个所述淀粉样蛋白单体肽的可溶性聚合淀粉样蛋白肽，和/或掺入多个所述聚合肽的淀粉样蛋白纤维或原纤维，但尤其是结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
在本发明的另一个特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-42和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合。
在本发明的另一个特定实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ单体肽1-42和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合。
特别地，根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，结合Aβ1-42单体肽，和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，与在缓冲液中温育的相应淀粉样蛋白肽单体(对照)相比较，根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，至少20％、至少30％，特别地至少40％，特别地至少50％、更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％、但尤其是至少80％-90％或更高程度地抑制Aβ单体和/或寡聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，至少20％、至少30％，特别地至少40％，特别地至少50％、更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％地抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维，并在1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔浓度比时，至少50％，更特别地至少60％，更特别地至少65％，甚至更特别地至少70％地抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
特别地，本发明涉及根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚，特别是解聚至少10％、至少20％，特别地至少30％，更特别地至少40％，甚至更特别地至少50％，但尤其是至少60％或更高。
在本发明的一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％、至少20％、至少30％，特别地至少40％，特别地至少50％，更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％，并在1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少40％，特别地至少50％，更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％。
根据本发明的抗体通过抑制淀粉样蛋白聚集和/或通过解聚促淀粉样变聚合原纤维或纤丝，能够防止或减缓淀粉样蛋白斑块的形成，这引起疾病相关症状的缓解及其进程的延迟或逆转。
相应地，本发明另一实施方案提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够降低患有与脑中Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的Aβ总量。
在本发明的另一个实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够瓦解斑块，从而降低患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块负荷。根据本发明的抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，使脑中的斑块负荷降低至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％、甚至更特别地大于30％。
又在本发明的另一个实施方案中，提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够溶解斑块，伴随着患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块量减小。根据本发明的抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，使脑中的斑块量减小至少10％，特别地至少15％，更特别地至少20％。
应理解根据本发明的抗体能够呈现出各种组合方式的一种、两种或更多种本文所述的特定特性。
例如，在一个实施方案中，本发明提供了抗体，但尤其是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体是双特异性或者双效的，因其既呈现出如本文所定义的聚集抑制特性又呈现出解聚特性，特别是与高度构象敏感性配合地。
在一个实施方案中，如本文所述的本发明抗体是双特异性或者双效的，并且在与具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽和/或寡聚肽，但尤其是在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽共温育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维；另外，在与由具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽和/或寡聚肽，但尤其是Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共温育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚。
特别地，分别与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽以及预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共温育以高达1∶1000的摩尔浓度比、但尤其是以1∶10至1∶100的摩尔浓度比、特别是以1∶100的摩尔浓度比进行。
根据本发明的抗体与淀粉样蛋白单体肽和/或寡聚肽的共温育在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃进行24小时至60小时，特别地30小时至50小时，更特别地48小时；而与淀粉样蛋白预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共温育在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃进行12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地24小时。
在一个实施方案中，如本文所述的本发明双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％、至少20％、至少30％，特别地至少40％，特别地至少50％，更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％。
在一个实施方案中，与在缓冲液中温育的相应淀粉样蛋白肽单体(对照)相比较，如本文所述的本发明双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，能够至少30％，特别地至少40％，特别地至少50％、更特别地至少60％，甚至更特别地至少70％，但尤其是至少80％-90％或更高程度地抑制具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽和/或寡聚肽，但尤其是Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽的聚集。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对Aβ1-42单体肽呈现出高特异性，但显示出对选自Aβ1-28和Aβ17-40单体肽的淀粉样蛋白肽单体基本上无或者仅仅是微小的交叉反应性。
在特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对淀粉样蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-28和/或Aβ17-40要敏感高达1000倍，特别地50-1000倍，更特别地80-100倍，但尤其是100倍，并且能够在体外及在体内抑制促淀粉样变单体肽和/或寡聚肽的聚集，和/或使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的双特异性或者双效抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体结合Aβ1-42单体肽和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和/或对Aβ单体肽17-40基本上无结合，并且，如通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法、特别是如下文实施例1.4和2.4所述的硫代黄素T(Th-T)荧光测定法所确定的，在与Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，至少30％地抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维，而在1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，至少65％地抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维；且在与由Aβ1-42单体肽和/或寡聚肽聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在37℃的温度共温育24小时后，在1∶100的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少20％，而在1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，导致预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少50％。
在另一特定实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体对淀粉样蛋白肽Aβ1-42具有高结合敏感性，且能够在至多0.01μg的浓度，但特别是0.5μg至0.01μg的浓度范围，更特别是0.1μg至0.01μg，但尤其是0.01μg的浓度检测Aβ1-42纤维。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体针对超分子抗原构建体产生，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽Aβ22-35或Aβ29-40氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用亲水部分(例如聚乙二醇(PEG))修饰，其中所述的亲水部分通过氨基酸(例如赖氨酸)或任何其它能够作为接头分子的适宜氨基酸或氨基酸类似物而共价连接于各末端。
如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，识别并结合构象表位。
在一个实施方案中，本发明涉及呈现出分别与SEQ ID NO：17和SEQID NO：19中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区、或其功能部分，所述功能部分包含该轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及呈现出分别与SEQ ID NO：18和SEQID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区或其功能部分，所述功能部分包含该重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
此外，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出分别与SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
此外，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出分别与SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域、或其功能部分，所述功能部分包含重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，其中所述抗体包含呈现出与SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链及重链可变结构域或其功能部分，其包含部分或全部的重链及轻链CDR。
本发明还涉及单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体包含SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中和/或SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的多肽序列。本发明还涉及具有多肽序列SEQ IDNO：17-18的单克隆抗体ACI-11-Ab-9，以及具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11。
本发明也包括这样的抗体，其序列已通过分别向SEQ ID NO：17-18和SEQ ID NO：19-20的序列中引入至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个或更多个保守取代而进行了改变，从而该抗体基本上维持其完全的功能。
在一个实施方案中，本发明涉及肽片段，其包含如SEQ ID NO：21中给出的轻链CDR1和/或如SEQ ID NO：22中给出的轻链CDR2和/或如SEQ ID NO：23中给出的轻链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及肽片段，其包含如SEQ ID NO：24中给出的重链CDR1和/或如SEQ ID NO：25中给出的重链CDR2和/或如SEQ ID NO：26中给出的重链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：21中给出的轻链CDR1。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：22中给出的轻链CDR2。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：23中给出的轻链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：24中给出的重链CDR1。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：25中给出的重链CDR2。
在一个实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：26中给出的重链CDR3。
在一个实施方案中，本发明涉及包含轻链可变区或其功能部分的编码核苷酸序列的多核苷酸，所述轻链可变区呈现出分别与SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，所述功能部分包含SEQ ID NO：21-23所示的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含重链可变区或其功能部分的编码核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区呈现出分别与SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，所述功能部分包含SEQ ID NO：24-26所示重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含编码如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出分别与SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域或其功能部分，所述功能部分包含SEQ ID NO：21-23所示的轻链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含编码如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出分别与SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域或其功能部分，所述功能部分包含SEQ ID NO：24-26所示的重链CDR中的至少一个、特别是至少两个、更特别是至少3个，但尤其是全部CDR嵌入在它们的天然构架区中。
在一个实施方案中，本发明涉及包含编码如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体包含呈现出分别与SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中及SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20中给出的序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链及重链可变结构域或其功能部分，其包含SEQ ID NO：21-26所示的重链及轻链CDR。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包含编码如本文所述的本发明抗体的核苷酸序列、但特别是编码具有SEQ ID NO：17-18多肽序列的单克隆抗体或具有SEQ ID NO：19-20多肽序列的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸。特别地，编码SEQ ID NO：17-18和SEQ ID NO：19-20的多核苷酸序列分别为SEQ ID NO：27-28和SEQ ID NO：29-30。
在另一个实施方案中，提供了在严格条件下与编码具有SEQ ID NO：17-18多肽序列的单克隆抗体或具有SEQ ID NO：19-20多肽序列的单克隆抗体的核苷酸序列杂交的多核苷酸。特别地，提供了在严格条件下与SEQ 功能部分，结合的Aβ表位，所述抗体针对超分子抗原构建体产生，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽Aβ22-35或Aβ29-40氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用亲水部分(例如聚乙二醇(PEG))修饰，其中所述的亲水部分通过氨基酸(例如赖氨酸)或任何其它能够作为接头分子的适宜氨基酸或氨基酸类似物而共价连接于各末端。本发明还涉及与单克隆抗体ACI-11-Ab-9结合的Aβ表位。本发明还涉及与单克隆抗体ACI-12-Ab-11结合的Aβ表位。一方面，如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，能够降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中可溶性Aβ的总量。
另一方面，如本文所述的本发明抗体能够瓦解斑块，从而降低患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块负荷。
另一方面，如本文所述的本发明抗体能够溶解斑块，伴随着患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块量减小。
本发明的另一目的是提供包含如本文所述的本发明抗体的方法和组合物，用于例如通过用如上文所述的本发明抗体被动免疫个体(包括哺乳动物或人)而对有需要的个体预防和/或治疗和/或减轻由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱的影响，所述疾病和紊乱包括但不限于淀粉样变性(一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，例如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默氏病(AD)，以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病和老年性心脏淀粉样变性)；内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性。
在本发明的特定方面，这些方法的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。
在本发明另一特定方面，这些方法的单克隆抗体分别是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ IDNO：9-10的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。
本发明还涉及治疗组合物，其包含治疗有效量的如本文所述的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分。
在一个实施方案中，所述药物组合物还包含可药用载体，特别是治疗有效量的载体。
在一个实施方案中，本发明提供了如本文所述的组合物，用于治疗由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱，包括但不限于淀粉样变性、肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性。
在此类实施方案的特定方面，使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。
在此类实施方案的另一特定方面，使用的单克隆抗体选自如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的单克隆抗体ACI-11-Ab-9、和具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的单克隆抗体ACI-12-Ab-11、或其功能部分。
根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，可以与用于治疗疾病的其它生物活性物质或其它治疗方法组合给药。其它生物活性物质可以以混合物的形式构成已经包含了根据本发明的抗体的同一组合物的一部分，其中抗体和其它生物活性物质可以在相同的可药用溶剂和/或载体中混合或与相同的可药用溶剂和/或载体相混；或者抗体与其它生物活性物质可以各自作为单独组合物的一部分分开提供，这些单独组合物可以分开供应或以成套试剂盒产品的形式一起供应。
根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，可以与一种或多种其它生物活性物质同时地、间歇地或相继地对需要的个体给药。例如，根据本发明的单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，可以与第一另外的生物活性物质同时给药，或在抗体给药之后或之前相继给药。如果选择了一种以上另外的生物活性物质与至少一种根据本发明的抗体一起给药的给药方案，则化合物或物质可以以各种组合方式部分地同时给药、部分地相继给药。
在一个实施方案中，本发明还涉及组合物，其包含治疗有效量的如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，和其它生物活性物质或化合物(特别是在由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱(包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性)的药物治疗中使用的化合物)，和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在一个实施方案中，提供了如本文所述的本发明组合物，其包含如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，且还包含至少一种选自如下的化合物和任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂：抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂如哌仑西平和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、消炎分子、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)、及其它药物和营养补充剂。
在特定实施方案中，本发明提供了组合物，其包含如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，还包含至少一种胆碱酯酶抑制剂(ChEI)化合物。
在另一特定实施方案中，本发明提供了组合物，其包含如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，还包含选自他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、加兰他敏、烟酸和美金刚的至少一种其它化合物。
又在本发明的另一个实施方案中，提供了组合物，其包含如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，还包含至少一种“非典型的抗精神病药物”，例如，用于治疗阳性和阴性精神病症状，包括幻觉、妄想、思维紊乱(表现为明显的不连贯、出轨、接触性离题(tangeniality))以及古怪或错乱的行为以及快感缺乏、情感单调、冷淡、和社交退缩，的药物，例如，氯氮平、齐拉西酮(ziprasidone)、利哌利酮、阿立哌唑(aripiprazole)或奥氮平，以及任选地还包含可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
适合与根据本发明的抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能部分)组合用于组合物中的其它化合物描述于例如WO 2004/058258(尤其参见16和17页)，包括治疗性药物靶标(36-39页)、链烷磺酸和烷醇硫酸(39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(51-56页)、NMDA受体拮抗剂(56-58页)、雌激素(58-59页)、非甾体抗炎药(60-61页)、抗氧化剂(61-62页)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂(63-67页)、降胆固醇药(68-75页)、淀粉样蛋白抑制剂(75-77页)；淀粉样蛋白形成抑制剂(77-78页)、金属螯合剂(78-79页)、抗精神病药和抗抑郁药(80-82页)、营养补充剂(83-89页)、以及增加脑中生物活性物质利用度的化合物(参见89-93页)和前体药物(93和94页)，该文献并入本文作为参考。
特别地，根据本发明的组合物包含治疗有效量的单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能部分)和/或生物活性物质。
在一个实施方案中，本发明涉及产生如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)的方法，所述方法包括在适宜的宿主生物中针对超分子抗原构建体产生抗体，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽或其片段的氨基酸序列的抗原肽，特别是对应于β淀粉样蛋白肽Aβ1-15的氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用疏水部分(特别是棕榈酸部分)修饰，或者特别是对应于β淀粉样蛋白肽Aβ22-35或Aβ29-40的氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用亲水部分(特别是聚乙二醇(PEG))修饰，其中所述的疏水或亲水部分通过至少一个、特别是一个或两个氨基酸(例如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)或任何其它能够作为接头分子的适宜氨基酸或氨基酸类似物而共价连接于各末端；并分离抗体。
当利用亲水部分例如PEG时，所选择的β淀粉样蛋白肽片段可以是对应于Aβ22-35或Aβ29-40氨基酸序列的片段，且游离PEG末端可共价连接于磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段，和/或如本文所述的本发明药物组合物，或如本文所述的本发明混合物在制备药物中的用途，所述药物用于对有需要的个体治疗或减轻由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱(包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性)的影响。
在一个实施方案中，本发明涉及利用如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段，制备如本文所述的本发明药物组合物或混合物的方法，用于对需要的个体治疗或减轻由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱(包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性)的影响。
在一个实施方案中，本发明提供了利用如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)、药物组合物或混合物制备药物的方法，用于对需要的个体预防、治疗或减轻由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱(包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性)的影响。
在特定实施方案中，本发明涉及利用特别是如本文所述的本发明抗体，特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段，制备药物组合物的方法，所述方法包括以可药用形式配制所述抗体，特别是使抗体以治疗有效量包含在组合物中。
在本发明的一个方面，提供了减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块负荷的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人给药治疗有效量的如上文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。
在本发明的特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。
在本发明另一特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是选自以下抗体的单克隆抗体：如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、和具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
特别地，斑块负荷减小至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
在本发明的另一方面，提供了减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中的斑块量的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人给药治疗有效量的如上文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。
在本发明的特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。
在本发明另一特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是选自以下抗体的单克隆抗体：如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、和具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
特别地，脑中的斑块量减小至少10％，特别地至少15％，更特别地大于15％。
又在本发明的另一方面，提供了降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体、特别是哺乳动物、但尤其是人的脑中可溶性Aβ总量的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人给药治疗有效量的如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。
在本发明的特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。
在本发明另一特定方面，这些方法中使用的单克隆抗体是选自以下抗体的单克隆抗体：如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、和具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
又在本发明的另一方面，提供了在需要治疗的个体中，尤其是受此类紊乱影响的哺乳动物或人中预防、治疗或减轻由与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱的影响的方法，包括如本文所述对需要该治疗的个体，特别是哺乳动物，更尤其是人施用治疗有效量的抗体，尤其是单克隆抗体(包括任何功能等同抗体或其功能部分)或本发明组合物或混合物。这些疾病和紊乱包括，但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性。
又在本发明的另一方面，提供了在呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体中保持或增加认知记忆能力的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人给药治疗有效量的根据本发明或如上文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。
在一个实施方案中，本发明涉及杂交瘤细胞系，特征在于其产生根据本发明或如上文所述的单克隆抗体。
特别地，本发明涉及杂交瘤细胞系，特征在于其产生单克隆抗体，所述抗体具有于2007年5月25日保藏且保藏号为DSM ACC2844的杂交瘤EJ1A9所产生的抗体的特征性特性。
在本发明的特定实施方案中，提供了于2007年5月25日保藏且保藏号为DSM ACC2844的杂交瘤细胞系EJ1A9。
特别地，本发明涉及杂交瘤细胞系，特征在于其产生单克隆抗体，所述抗体具有于2007年5月25日保藏且保藏号为DSM ACC2845的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日保藏且保藏号为DSM ACC2846的杂交瘤FK2A6A6所产生的抗体的特征性特性。
在本发明的特定实施方案中，提供了于2007年5月25日作为DSMACC2845保藏的杂交瘤细胞系FG1F9E4。
在本发明的特定实施方案中，提供了于2007年5月25日作为DSMACC2846保藏的杂交瘤细胞系FK2A6A6。
在一个实施方案中，本发明涉及在受该紊乱影响的个体，特别是哺乳动物，更特别是人中诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症的方法，包括检测如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)对样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合，所述方法包括步骤：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体样品或特定身体部分或身体区域与根据本发明的抗体接触，所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；
(b)允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成，特别地以便使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(d)将免疫复合物的存在或不存在与个体样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。
在特定实施方案中，步骤(a)的组合物包含抗体的组合用于治疗所述个体。淀粉样蛋白相关疾病或病症包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病，其中所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在一个实施方案中，提供了在有需要的个体的组织中确定促淀粉样变斑块负荷程度的方法，包括：
(a)获得代表所研究个体的组织的样品；
(b)用如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)测试所述样品中淀粉样蛋白斑块的存在；
(c)测定与样品结合的抗体量，特别地以便使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白斑块的存在或不存在相关联；和
(d)计算个体组织中的斑块负荷。所述个体可能患有淀粉样蛋白相关疾病或病症，其包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病，其中所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在一个实施方案中，提供了诊断个体的淀粉样蛋白相关疾病或病症易感性的方法，包括检测如本文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)对样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的特异性结合，所述方法包括步骤：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体样品或特定身体部分或身体区域与抗体接触，其中所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；
(b)允许抗体与样品中的任何淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；
(d)将免疫复合物的存在或不存在与个体样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较，所述复合物量的增加指示所述患者患有或有风险发生淀粉样蛋白相关疾病或病症。所述淀粉样蛋白相关疾病或病症包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在一个实施方案中，提供了监测个体在用根据本发明的抗体或组合物治疗之后的微小残留病的方法，其中所述方法包括：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体样品或特定身体部分或身体区域与如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)接触，其中所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；
(b)使抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；
(d)将免疫复合物的存在或不存在与个体样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，
其中与正常对照值相比较，所述复合物量的增加指示所述个体依然患有微小残留病。所述微小残留病包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在特定实施方案中，步骤(a)的组合物包含抗体的组合用于治疗所述个体。
在一个实施方案中，提供了预测个体对用根据本发明的抗体或组合物治疗的反应性的方法，所述方法包括：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)接触，所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；
(b)使抗体与淀粉样蛋白抗原结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；
(d)将免疫复合物的存在或不存在与个体样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(e)比较治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，
其中所述免疫复合物的量降低指示所述个体具有对治疗产生反应的高潜力。在特定实施方案中，所述治疗针对淀粉样蛋白相关疾病或病症，其包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在特定实施方案中，步骤(a)的组合物包含抗体的组合用于治疗所述个体。
在一个实施方案中，本发明涉及用于对有需要的个体检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症的检验试剂盒，其包括如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)，以及有关使用抗体用于结合淀粉样蛋白以形成免疫复合物，和检测免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联的说明书。淀粉样蛋白相关疾病和病症包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在阅读了如下对公开实施方案的详细描述和所附权利要求书后，本发明的这些和其它目的、特征和优点将变得显而易见。
附图简述
图1显示了利用覆盖Aβ1-42全长氨基酸序列的重叠肽的肽文库通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-24-Ab-3表位作图研究的结果。对全长Aβ1-42的结合用作为阳性对照。所有其它的肽长8-10个氨基酸。肽编号对应于Aβ1-42序列中该肽的起始氨基酸。结果表达为O.D.。
图2显示了利用覆盖Aβ1-28、17-40、1-40、1-42A(Anaspec)或1-42B(Bachem)的较长肽通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-24-Ab-3表位作图研究的结果。结果表达为扣除背景后的O.D.。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图3图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-24-Ab-3介导的Aβ1-42聚集抑制。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图4图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-24-Ab-3介导的预聚集的Aβ1-42的解聚。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图5图示了ACI-24-Ab-3抗体对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(proto-fibrillar，PF)寡聚体富集制备物和低分子量(LMW)单体制备物的结合。
图6图示了6E10对照抗体对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集的初原纤维和低分子量(LMW)单体制备物的结合。
图7图示了ACI-24-Ab-3抗体(A)和对照抗体6E10(B)对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果报告为三次独立实验的平均(±SEM)光密度(O.D.)值。
图8显示了利用覆盖Aβ1-42全长氨基酸序列的重叠肽的肽文库通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-11-Ab-9表位作图研究的结果。对全长Aβ1-42的结合用作为阳性对照。所有其它的肽长8-10个氨基酸。肽编号对应于Aβ1-42序列中该肽的起始氨基酸。结果表达为O.D.。
图9显示了利用覆盖Aβ1-28、17-40、1-40、1-42A(Anaspec)或1-42B(Bachem)的较长肽通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-11-Ab-9表位作图研究的结果。结果表达为扣除背景后的O.D.。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图10显示了利用覆盖Aβ1-42全长氨基酸序列的重叠肽的肽文库通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-12-Ab-11表位作图研究的结果。对全长Aβ1-42的结合用作为阳性对照。所有其它的肽长8-10个氨基酸。肽编号对应于Aβ1-42序列中该肽的起始氨基酸。结果表达为O.D.。
图11显示了利用覆盖Aβ1-28、17-40、1-40、1-42A(Anaspec)或1-42B(Bachem)的较长肽通过ELISA进行的鼠单克隆抗体ACI-11-Ab-9表位作图研究的结果。结果表达为扣除背景后的O.D.。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图12图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-11-Ab-9介导的Aβ1-42聚集抑制。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图13图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-11-Ab-9介导的预聚集的Aβ1-42的解聚。结果显示了3次独立实验的平均值±1标准误差。
图14图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-12-Ab-11介导的Aβ1-42聚集抑制。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图15图示了在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时ACI-12-Ab-11介导的预聚集的Aβ1-42的解聚。结果显示了2次独立实验的平均值±1标准误差。
图16图示了ACI-12-Ab-11抗体(A)和对照抗体6E10(B)对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果报告为三次独立实验的平均(±SEM)光密度(O.D.)值。
图17图示了可用来分析rhApoE4对Aβ42-生物素的结合的ELISA试验步骤。
图18图示了从开发用于rhApoE4结合Aβ42-生物素的ELISA试验中获得的结果。为了优化rhApoE4和Aβ42-生物素的浓度，用恒定浓度的Aβ42-生物素对rhApoE4的多份稀释液进行测试。
图19图示了在所述的ELISA试验中过量Aβ42-生物素对与rhApoE4复合的Aβ42-生物素的结合的影响。
图20图示了对用于所述ELISA试验的Aβ42-生物素的最佳浓度的确定例子。
附表简述
表1.1给出抗体和用来产生本文所述的某些抗体的抗原构建体。
表1.2Aβ肽对ACI-24-Ab-3的结合。结果表达为背景扣除后的O.D.。
表1.3通过ELISA分析的ACI-24-Ab-3对Aβ1-42的33个重叠肽的结合。对全长Aβ1-42的结合用作为阳性对照。所有其它的肽长8-10个氨基酸。肽编号对应于Aβ1-42序列中该肽起始的氨基酸。结果表达为O.D.。
表1.4ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和低分子量(LMW)单体制备物的结合。
表1.56E10对照抗体对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和低分子量(LMW)单体制备物的结合。
表1.6ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果表达为O.D.值。
表1.76E10对照抗体对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果表达为O.D.值。
表2.1阐示了抗体和用来产生本文所述的某些抗体的抗原构建体。
表2.2Aβ肽对ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11的结合。结果表达为背景扣除后的O.D.。
表2.3通过ELISA分析的ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11对Aβ1-42的33个重叠肽的结合。对全长Aβ1-42的结合用作为阳性对照。所有其它的肽长8-10个氨基酸。肽编号对应于Aβ1-42序列中该肽起始的氨基酸。结果表达为O.D.。
表2.4ACI-12-Ab-11(克隆FK2A6A6)抗体对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果表达为O.D.值。
表2.56E10对照抗体对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。结果表达为O.D.值。
序列简述
SEQ ID NO：1：抗原肽Aβ22-35
SEQ ID NO：2：抗原肽Aβ29-40
SEQ ID NO：3：Aβ肽片段Aβ1-28
SEQ ID NO：4：Aβ肽片段Aβ17-40
SEQ ID NO：5：Aβ肽片段Aβ1-40
SEQ ID NO 6：Aβ肽片段Aβ1-42
SEQ ID NO：7ACI-24-Ab-3轻链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：8ACI-24-Ab-3重链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：9轻链CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO：10轻链CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO：11轻链CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO：12重链CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO：13重链CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO：14 重链CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO：15 编码ACI-24-Ab-3轻链可变结构域序列的多核苷酸序列
SEQ ID NO：16 编码ACI-24-Ab-3重链可变结构域序列的多核苷酸序列
SEQ ID NO：17 ACI-11-Ab-9轻链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：18 ACI-11-Ab-9重链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：19 ACI-12-Ab-11轻链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：20 ACI-12-Ab-11重链可变结构域序列的氨基酸序列
SEQ ID NO：21 轻链CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO：22 轻链CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO：23 轻链CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO：24 重链CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO：25 重链CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO：26 重链CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO：27 编码ACI-11-Ab-9轻链可变结构域序列的多核苷酸序列
SEQ ID NO：28 编码ACI-11-Ab-9重链可变结构域序列的多核苷酸序列
SEQ ID NO：29 编码ACI-12-Ab-11轻链可变结构域序列的多核苷酸序列
SEQ ID NO：30 编码ACI-12-Ab-11重链可变结构域序列的多核苷酸序列
发明详述
如本文所述的本发明抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，或更特别地单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分可用于治疗与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。这些病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
特别地，如本文所述治疗有效量的组合物，特别是包含抗体，特别是包括任何功能等同抗体或其功能部分的单克隆抗体的治疗组合物可用于治疗与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在另一实施方案中，以混合物的形式提供本发明的组合物，其中所述抗体在相同的药学上可接受的溶剂和/或载体中与另一生物活性物质或与相同的药学上可接受的溶剂和/或载体混合，或者所述其它生物活性物质可作为单独组合物的一部分分别提供，可分别提供所述单独组合物或以试剂盒的形式提供。所述组合物可用于治疗与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
青光眼是涉及视神经病特征模式中视网膜神经节细胞(RGC)丧失的一组视神经病。青光眼经常，但不总是伴随升高的眼压，其可能是眼房水循环或其排水阻断的结果。
尽管眼内压升高是患青光眼的主要危险因素，但却不能定义对于引起青光眼为决定性的眼内压阈值。
损伤也可能是由向重要视神经纤维(神经结构中的薄弱地方)的血液供应不足，和/或神经纤维本身的健康问题引起。
不加治疗的青光眼导致视神经的永久性损伤和所致的视野减小，其可发展成失明。
RGC是将视觉信号从眼睛传递到大脑的神经细胞。细胞凋亡过程中的两个主要的酶，胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶8在在过程中被激活，导致RGC凋亡。胱天蛋白酶3切割淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)以产生神经毒素片段，包括淀粉样蛋白β。在没有APP的保护作用下，视网膜神经节细胞层中淀粉样蛋白β累积导致RGC死亡和视力不可逆丧失。
可将不同类型的青光眼分类为开角型青光眼(如果病症是慢性的)，或闭角型青光眼(如果突然发生急性青光眼)。青光眼一般影响两只眼，但疾病在一只眼中比在另一只眼中发展地更迅速。
也称为原发性开角型青光眼(POAG)的慢性开角型青光眼(COAG)是最常见类型的青光眼。COAG由小梁网中细微阻断引起，其减少了眼房水流出物向巩膜静脉窦中的排放并升高了眼内压(IOP)。POAG一般影响两只眼并与年龄和阳性家族史强相关。因为眼睛排水机制随衰老逐渐变得阻塞，所以青光眼的频率在老年人中升高。受慢性开角型青光眼影响的个体中眼内压的升高不伴随任何症状，直至在中央视区感觉到丧失。
急性闭角型青光眼(AACG)或闭角型青光眼是相对罕见类型的青光眼，其特征在于眼内压突然上升到35到80mmHg，导致重度痛和视力不可逆丧失。突然的压力升高由过滤角闭合以及排水通道阻断引起。具有窄视角的个体具有视角突然闭合的危险升高。AACG一般在一只眼中发生，但在两只眼中均存在危险。年龄、白内障和假表皮脱落也是危险因素，因为它们与晶状体的扩大和视角的拥挤或狭窄相关。突然的青光眼攻击可能与严重的目痛和头痛、火眼、恶心、呕吐和视力模糊相关。
混合的或组合机制青光眼是开角型和闭角型青光眼的混合或组合。其影响患有急性ACG的患者(其视角在激光虹膜切开术后开放，但其继续需要药物治疗用于IOP控制)以及患有POAG或假剥脱性青光眼的患者(其逐渐发生视角变窄)。
正常眼压性青光眼(NTG)，也称为低眼压性青光眼(LTG)，特征在于进行性视神经损坏以及与在其它类型青光眼中所见相似的周边视觉丧失；然而，眼内压处于正常范围或甚至低于正常范围。
先天性(婴儿)青光眼是相对稀少的遗传类型的开角型青光眼。排水区域的不充分发育导致眼内压力升高，其可导致来自视神经损伤的视力丧失和增大的眼。早期诊断和治疗对保护受疾病影响的婴儿和儿童的视力是至关重要的。
继发性青光眼可能起因于眼损伤、眼虹膜中的炎症(虹膜炎)、糖尿病、白内障、或类固醇敏感个体中类固醇的使用。继发性青光眼也可能与视网膜脱落或视网膜静脉闭塞或阻断相关。
色素性青光眼特征在于来自虹膜的色素颗粒脱离。所述颗粒引起眼排水系统的阻断，导致升高的眼内压和对视神经的损伤。
剥脱性青光眼(假剥脱)特征在于前囊上和眼视角内鳞片状物质的沉积。鳞片状物质的累积阻断了排水系统并升高了眼压。
可使用多种检测来进行青光眼的诊断。眼压测量法通过测定眼睛表面的张力或硬度来测定眼内的压力。对该测定而言，可使用几种类型的眼压计，最常见的眼压计是扁平角膜压力计。厚度测量法测定角膜的厚度，其又测定了眼内压。前房角镜检查允许对过滤角和眼排水区域进行检查。前房角镜检查也可测定异常血管是否阻断房水排出眼睛外。检眼镜检查允许检查视神经并可检测视神经盘中神经纤维层的脱落或变化，或该结构的凹入(杯化)，其可能由眼内压升高或轴突脱离引起。前房角镜检查也可用于评估血流不畅或眼内压升高对神经的损伤。视野试验主观地绘制了视野，其可检测青光眼对视神经损伤的指标。这由视野丧失的特定模式表示。通过光透过损伤轴突组织的差异观察视神经纤维层的厚度(在青光眼中发生改变)进行对神经纤维层损失的客观测量-光学相干断层扫描。
视神经脉络膜小疣是蛋白质和钙盐的球形结石，感觉其代表通过先天性改变的血管结构的分泌物，影响轴突神经纤维层。这些累积发生在视乳头周围的神经纤维层并认为其通过直接压迫或间接破坏神经纤维层的血管供应损害了神经纤维层。它们一般在受影响个体生命中第一个十年后变得可见。它们最经常在两只眼中发生，但只影响一只眼，并且可在很多年后引起周边视觉轻度丧失。
视神经病是特征在于由脱髓鞘、血液供给阻断、营养缺乏或毒素引起对视神经损伤的疾病。脱髓鞘视神经病(见下文视神经炎)通常由潜在的脱髓鞘过程如多发性硬化引起。称为缺血性视神经病的血液供给阻断可导致视神经细胞死亡或功能异常。非动脉缺血性视神经病一般在中年人中发生。危险因素包括高血压、糖尿病和动脉粥样硬化。动脉缺血性视神经病一般在老年人中发生，随后会出现动脉炎症(动脉炎)，尤其是颞动脉(颞动脉炎)。视力丧失可以是快速的或在2到7天里逐渐发展，并且可以损伤一只眼，或两只眼。在患有暴露于毒素或营养缺陷引起的视神经病的人中，两只眼一般均受影响。
大约40％患非动脉缺血性视神经病的人随时间会自发改善。通过控制血压、糖尿病和胆固醇水平治疗非动脉缺血性视神经病。利用高剂量皮质类固醇治疗动脉缺血性视神经病来预防第二只眼中的视力丧失。
视神经炎与一只或两只眼中轻度或严重视力丧失相关，并可能由全身性脱髓鞘过程(见上文)、病毒感染、接种、脑膜炎、梅毒、多发性硬化和眼内炎症(眼色素层炎)引起。眼运动可以是疼痛的并且视力可随反复发作而恶化。诊断涉及检查瞳孔的反应并测定视盘是否膨胀。磁共振成像(MRI)可显示多发性硬化，或罕见为压迫视神经的肿瘤的证据，在所述情况下一旦减轻了肿瘤压迫，那么视力会改善。在不加治疗的情况下，视神经炎的大多数病例在少数几个月里会得到改善。在一些情况下，用静脉内皮质类固醇治疗是必须的。
白内障是在眼睛晶状体或其外膜中产生的浑浊。白内障通常引起进行性视力丧失，并且如果不加治疗，可能引起失明。在硬核液化白内障中，白内障皮层渐进性地液化形成乳白色流体，并且如果晶状体囊破裂并渗漏则可能引起重度炎症。如果不加治疗，白内障也可能引起膨胀期继发青光眼。白内障本质上可以是先天性的或由遗传因素、年龄增长、长期紫外线暴露、暴露于射线、糖尿病、眼损伤或身体创伤引起。
囊外(ECCE)手术是治疗白内障的最有效治疗。在手术中，去除晶状体，但晶状体囊的主要部分仍然保持完整。晶状体乳化法是在角质层一侧开一个小口，通常用于在取出晶状体之前将其打碎。
视觉淀粉样变性是与I型家族性淀粉样多发性神经病变(FAP)相关的遗传性疾病，并且其特征在于异常的结膜管、干性角膜结膜炎、瞳孔异常，并在一些情况下，其特征在于玻璃体浑浊和继发性青光眼。I型FAP与转甲状腺素蛋白(TTR)中的突变相关，所述转甲状腺素蛋白是在肝、视网膜色素上皮和脑脉络丛中合成的四聚体血浆蛋白(前白蛋白)。不同的突变引起转甲状腺素蛋白聚合成淀粉样蛋白纤维的褶结构，导致遗传性淀粉样变性。最常见的突变是TTR-met303，其中在转甲状腺素蛋白30位上甲硫氨酸代替了缬氨酸。
IV型FAP与格子状角膜变性(LCD)相关。格子状角膜变性是遗传性的原发的一般双边角膜淀粉状蛋白病，其特征在于在角膜基质中存在具有双轮廓的可折射格状线。LCD类型I(Biber-Haab-Dimmer)是常染色体显性的两侧对称的角膜病症，其特征在于在中央间质的表面和中间层存在许多半透明细小格状线以及白点和微弱的浑浊。症状在生命第一个或第二个十年过程中开始出现，引起视力的进行性丧失。大多数患者需要在40岁时进行角膜移植。LCD类型II与系统性淀粉样变性(Meretoja′s综合征)相关，并且其特征在于在边缘、中央角膜和间质中存在厚的格状线。视力不受影响直至生命后期。LCD类型III影响中年人，并且其特征在于存在从边缘延伸至边缘的厚格状线。LCD类型III A的特征在于在间质中积累淀粉样蛋白沉积物以及在间质和角膜前界层之间存在淀粉样蛋白带状物，LCD类型III A不同于LCD类型III，因为存在角膜糜烂、白带出现和常染色体显性遗传模式。
唐氏综合征(DS)或21三体是具有约1∶700活产发生率的最常见的遗传病，并且经常与多种先天异常相关。因存在额外的21号染色体引起的所述病症与斑块形成蛋白质淀粉样蛋白β的过早沉积以及到中年时阿尔茨海默氏病的发生相关。此外，受DS影响的许多人从儿童期开始就患白内障，并且许多人患先天性青光眼。因为切割形成淀粉样蛋白β的淀粉样蛋白前体蛋白质的基因定位在人21号染色体的长臂上，该基因的过表达可导致唐氏综合征中淀粉样蛋白前体蛋白质和淀粉样蛋白沉积物的水平升高。
青光眼无法治愈。用于治疗青光眼的药物治疗包括减少眼中房水产生的药剂，如β阻滞剂(Timoptic，Betoptic)、碳酸酐酶抑制剂(Trusopt，Azopt)和α激动剂(Alphagan，Iopidine)，和通过眼睛后面不同途径更改房水排水的药剂，如前列腺素(Xalatan)。激光手术包括小梁成形术，其为帮助房水更有效离开眼睛的方法。根据Glaucoma Foundation，近80％的患者对该方法反应很好，足以延迟或避免进一步手术。然而，根据National EyeInstitute，在激光手术后两年内半数所有患者的眼中压力会再次升高。如果药物治疗和最初的激光治疗在降低眼内压力上不成功，则进行切开手术。一种类型手术为小梁切除术，在眼睛壁中产生切口，以便房水可排出。然而，根据Glaucoma Foundation，约三分之一的小梁切除患者在五年内患白内障。如果小梁切除术失败，额外的切开方法包括在角膜和虹膜之间向眼内插入排水管并使用激光或冰冻处理来破坏产生房水的眼内组织。手术可挽救患者残留视力，但其不能改善视力。手术后的视力事实上可能会更差。
年龄相关性黄斑变性(AMD)是年龄超过65的白种人失明的主要原因。尽管最近在黄斑变性研究中已经取得了很大进展，但没有拯救在疾病过程发生的神经元细胞死亡的治疗。对与淀粉样蛋白β相关神经元退化相关的其它眼病，如皮质视觉缺陷、视神经脉络膜小疣、视神经病、视神经炎、视觉淀粉样变性和角膜网格状营养不良也没有确定性治疗。
因此，本领域迫切需要对受与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病影响的个体的改善的治疗选择。这些病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。本发明通过提供靶向如下过程的解决方案满足了该需要，所述过程在受该疾病影响的患者中引起与淀粉样蛋白β相关神经元退化相关的眼病。
进一步对于该目标，本发明涉及如本文所述的本发明抗体(特别是包括任何功能等同抗体或其功能部分的单克隆抗体)和/或如本文所述的本发明药物组合物，或如本文所述的本发明混合物用于制备药物的用途，所述药剂用于治疗或减轻与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病相关的眼病的影响。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的本发明药物组合物或混合物，使用如本文所述的本发明抗体(特别是包括任何功能等同抗体或其功能部分的单克隆抗体)，用于治疗或减轻与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病的影响。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在另一实施方案中，本发明提供包含单克隆抗体的药物(所述单克隆抗体包括任何功能等同抗体或其功能部分)、包含治疗有效量的如本文所述的本发明抗体的药物组合物或混合物，用于预防、治疗或减轻与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关的眼病的影响。这些病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
在本发明的一个方面，提供用于降低患有与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病的个体，特别是哺乳动物，但尤其是人中视网膜神经节细胞层中斑块负荷的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人施用治疗有效量的如上文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。在本发明的一个方面，在此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9或具有多肽序列SEQ IDNO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。特别地，斑块负荷减小至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
在本发明的另一方面，提供了用于降低患有与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病的个体，特别是哺乳动物，但尤其是人中视网膜神经节细胞层中斑块量的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人施用治疗有效量的如上文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明的另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。特别地，脑中的斑块量减小至少10％，特别地至少15％，更特别地大于15％。
又在本发明的另一方面，提供了用于患有与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病的个体，特别是哺乳动物，但尤其是人的视网膜神经节细胞层中可溶性Aβ的总量的方法，所述方法包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人施用治疗有效量的根据本发明和如上文所述的抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的另一方面，提供在受与淀粉样蛋白β相关神经元退化相关的眼病的个体、特别是哺乳动物、更特别是人中预防、治疗或减轻与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病的影响的方法，包括对需要此类治疗的个体、特别是哺乳动物、更特别是人施用治疗有效量的如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的另一方面，提供用于在需要此类诊断的个体中诊断与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病的方法，其包括检测如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物对样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合，所述方法包括步骤：(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与根据本发明的抗体接触，所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；(b)允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；(c)检测免疫复合物的形成，特别地从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和(d)将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的其它方面，提供用于在需要此类诊断的个体中诊断与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关眼病易感性的方法，其包括检测如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其片段)或组合物或混合物对样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的特异性结合，所述方法包括步骤(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体样品或特定身体部分或身体区域与抗体接触，其中所述抗体结合淀粉样蛋白的构象表位；(b)允许抗体与样品中的任何淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；(c)检测免疫复合物的形成；(d)将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；(e)并将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较，所述复合物量的增加表明所述个体患有或有风险发生与视觉系统组织中病理学异常/变化相关的眼病，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的另一方面，提供了监测个体在用根据本发明的药物组合物治疗之后与视觉系统组织中病理学异常/变化相关的，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的的微小残留眼病(如神经元退化)的方法，其中所述方法包括：(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)接触，其中所述抗体结合淀粉样蛋白的表位；(b)允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；(c)检测免疫复合物的形成；(d)将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较，所述复合物量的增加表明所述个体依然患有与视觉系统组织中病理学异常/变化相关的，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的微小残留眼病。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的又一方面，提供了预测个体对用根据本发明的药物组合物治疗的反应性的方法，所述方法包括步骤：(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)或组合物或混合物接触，其中所述抗体结合淀粉样蛋白的表位；(b)允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；(c)检测免疫复合物的形成；(d)将免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和(e)比较治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，其中所述免疫复合物的量降低表明所述个体具有对治疗产生反应的高潜力。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
在本发明的另一方面，提供了保持或降低患与视觉系统组织中病理学异常/变化相关的，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化(如神经元退化)相关的眼病的个体，特别是哺乳动物，更特别是人的眼中眼压力的方法，所述方法包括对需要该治疗的个体，特别是哺乳动物，更特别是人施用治疗有效量的如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分)或组合物或混合物。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。在本发明的一个方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：7-8的ACI-24-Ab-3或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2844保藏的杂交瘤EJ1A9产生。在本发明另一方面，此类方法中使用的单克隆抗体是如本文所述的具有多肽序列SEQ ID NO：17-18的ACI-11-Ab-9、或具有多肽序列SEQ ID NO：19-20的ACI-12-Ab-11、或其功能部分。特别地，单克隆抗体由于2007年5月25日作为DSM ACC2845保藏的杂交瘤FG1F9E4、或于2007年5月25日作为DSM ACC2846保藏的杂交瘤FK2A6A6产生。
定义
如本文使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换，并定义为由通过肽键连接的氨基酸组成的生物分子。
除非上下文不合适，否则本文使用的术语“一”、“一个/一种”、“该”定义为“一个或多个/一种或多种”，并且包括复数。
如本文使用的术语“检测”定义为用已知的技术(如免疫化学或组织学方法)检测生物分子，并指定性或定量确定所研究生物分子的存在或浓度。
“淀粉样蛋白β、Aβ或β淀粉样蛋白”是本领域认可的术语，并且指β淀粉样蛋白和肽、β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)，以及其修饰物、片段或任何功能等同体。如本文所用，淀粉样蛋白β是指通过APP的蛋白水解切割所产生的任何片段，但尤其是那些参与淀粉状蛋白病理学或与之相关的片段，包括但不限于Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42和Aβ1-43。
上述淀粉样蛋白β肽的结构和序列是本领域普通技术人员公知的，并且生产所述肽或从脑和其它组织中提取它们的方法描述于，例如Glenner和Wong，Biochem Biophys Res Comm 129，885-890(1984)。而且，淀粉样蛋白β肽也可以以多种形式商购获得。
术语“Aβ原纤维”或“Aβ纤丝”或“淀粉样蛋白原纤维”或“初原纤维”指单体蛋白的聚合形式，形成具有恒定纤维直径的单个或成束纤维，其不溶于水性介质，并且在其核心含有大量的交叉β结构，大多数具有垂直于原纤维轴的β链。
术语“单体Aβ”或“Aβ单体”指在水性介质中完全溶解而没有聚集的复合体的淀粉样蛋白β。
如本文所用的术语“初原纤维”或“初原纤维制备物”是指聚合的Aβ淀粉样蛋白肽的高分子量级分，其富含可溶性淀粉样蛋白Aβ寡聚体。
短语“聚合可溶性淀粉样蛋白”和“寡聚淀粉样蛋白肽Aβ”和“Aβ寡聚体”在本文可互换使用，是指淀粉样蛋白肽、或淀粉样蛋白样肽(amyloid-like peptide)、或修饰的或截短的淀粉样蛋白肽、或淀粉样蛋白肽的其它衍生物的多个聚集的单体，形成低聚或多聚结构，其在体外在水性介质中以及在体内在哺乳动物或人体中、更特别地在脑中均为可溶的；但特别是指在哺乳动物或人体中，更特别地在脑中是可溶的、淀粉样蛋白肽、或修饰的或截短的淀粉样蛋白肽、或其衍生物的多个聚集的单体。
短语“聚合可溶性淀粉样蛋白Aβ肽”和“寡聚淀粉样蛋白Aβ肽”和“Aβ寡聚体”在本文可互换使用，是指淀粉样蛋白Aβ肽、或修饰的或截短的淀粉样蛋白Aβ肽、或淀粉样蛋白Aβ肽的其它衍生物的多个聚集的单体，形成低聚或多聚结构，其在体外在水性介质中以及在体内在哺乳动物或人体中、更特别地在脑中均为可溶的；但特别是指在哺乳动物或人体中，更特别地在脑中是可溶的、淀粉样蛋白β(Aβ)、或修饰的或截短的淀粉样蛋白β(Aβ)肽、或其衍生物的多个聚集的单体。
当提及单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能片段)，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，以及结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，时；“实质上更弱的结合”表示这样的结合，其比对Aβ单体肽1-40的结合低至少约80％，特别地至少约85％，更特别地至少约90％，但尤其是至少约95％。
当提及单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能片段)，所述抗体结合Aβ单体肽1-42和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，时；“实质上更弱的结合”表示这样的结合，其比对Aβ单体肽1-42的结合低至少约60％，特别地至少约65％，更特别地至少约70％，甚至更特别地至少约80％，但尤其是至少约90％及高达100％。
当提及单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能片段)，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，时；“中等程度的结合”表示这样的结合，其比对Aβ单体肽1-40的结合低至少约60％，特别地至少约65％，更特别地至少约70％，甚至更特别地至少约80％。
当提及单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能片段)，所述抗体结合Aβ单体肽1-40，特别是Aβ单体肽1-40，并结合包含多个Aβ1-42单体肽的可溶性聚合和/或寡聚淀粉样蛋白肽，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，对单体肽1-42中等程度的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，时；“基本上无结合”表示这样的结合，其比对Aβ单体肽1-40的结合低至少约95％，特别地至少约98％，但尤其是至少约99％及高达100％。
当提及单克隆抗体(包括任何功能等同的抗体或其功能片段)，所述抗体结合Aβ单体肽1-42和包含多个Aβ1-42单体肽的聚合可溶性Aβ肽以及掺入多个所述聚合肽的Aβ原纤维或纤维，但显示出对Aβ单体肽1-28实质上更弱的结合，和对Aβ单体肽17-40基本上无结合，时；“基本上无结合”表示这样的结合，其比对Aβ单体肽1-42的结合低至少约85％，特别地至少约90％，更特别地至少约95％，甚至更特别地至少约98％，但尤其是至少约99％及高达100％。
如本文所述的本发明抗体(特别是单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能片段)对Aβ单体肽的结合通过ELISA型测定法，特别是利用生物素化的Aβ单体肽的ELISA试验，但尤其是如下文实施例1.16和2.16所述的ELISA试验来确定。
“分离的”是指生物分子不含至少一些与之一起天然存在的组分。
用语“由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱”包括但不限于，由单体、原纤维或聚合状态的淀粉样蛋白样蛋白，或这三者的任意组合的存在或活性引起的疾病和紊乱。此类疾病和紊乱包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
短语“与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病”指与异常β淀粉样蛋白功能或沉积相关的导致神经元退化的病理学异常，其例如可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
术语“淀粉样变性”是指一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括但不限于，继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如包括但不限于：神经紊乱如阿尔茨海默氏病(AD)、包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；和老年性心脏淀粉样变性，以及其它疾病，包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。
如本文使用的术语“抗体”是本领域认可的术语，应理解为指与已知抗原结合的分子或分子的活性片段，特别是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有特异性结合抗原的结合位点的分子。根据本发明的免疫球蛋白可为任何型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
“抗体”在本发明的范围内旨在包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性或双效抗体、猿源化(simianized)抗体、人抗体和人源化抗体，以及其活性片段。结合已知抗原的分子的活性片段的实例包括Fab、F(ab′)2、scFv和Fv片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物和上述任何抗体和片段的表位结合片段。
此类活性片段可以通过多种本领域已知的技术，从本发明的抗体获得。例如，可用酶，诸如胃蛋白酶切割纯化的单克隆抗体，然后进行HPLC凝胶过滤。然后可收集含Fab片段的适当级分并通过膜过滤等浓缩。有关抗体活性片段分离的更多常用技术的描述可参见例如Khaw，B.A.等人，J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等人，Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986。
短语“人源化抗体”指一类工程化抗体，其CDR衍生自非人供体免疫球蛋白，分子中其余的免疫球蛋白来源部分衍生自一种(或多种)人免疫球蛋白。另外，可以改变构架支持残基以保留结合亲和力。获得“人源化抗体”的方法是本领域普通技术人员公知的(例如参见，Queen等人，Proc.NatlAcad Sci USA，86：10029-10032(1989)、Hodgson等人，Bio/Technology，9：421(1991))。
“人源化抗体”也可以通过新颖的基因工程方法获得，该方法使得可以在大型动物如兔子中产生亲和力成熟的人样多克隆抗体(例如参见，美国专利No.7,129,084)。
短语“单克隆抗体”也是本领域公认的，是指在实验室中由单个克隆大量生产的且仅识别一个抗原的抗体。单克隆抗体一般通过将正常短命的产抗体B细胞和快速生长的细胞诸如癌细胞(有时称为“永生”细胞)融合而制备。所得的杂交细胞或杂交瘤快速增殖，建立产生大量抗体的克隆。对于本发明的目的，“单克隆抗体”也应理解为包括由尚未达到完全单克隆性的母克隆所生产的抗体。
术语“CDR”是指抗体的高变区。术语“高变区”、“HVR”或“HV”当在本文使用时，是指抗体可变结构域中在序列上高度可变和/或形成结构上确定的环的区域。通常抗体包含六个高变区；三个位于VH(H1、H2、H3)中，而三个位于VL(L1、L2、L3)中。有多种高变区描述法在使用中，且涵盖在本文中。Kabat互补决定区以序列的可变性为基础，并且是最常用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。
位于术语“CDR”之前的字母“HC”和“LC”分别指重链和轻链的CDR。不同地，Chothia参照结构环的定位(Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。AbM高变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷方案，并为Oxford Molecular的AbM抗体模建软件所用。“接触”高变区以可利用的复合晶体结构的分析为基础。来自这些高变区中每一种的残基注释如下。
环    Kabat      AbM        Chothia    接触
----  -----      ---        -------    -------
L1    L24-L34    L24-L34    L26-L32    L30-L36
L2    L50-L56    L50-L56    L50-L52    L46-L55
L3    L89-L97    L89-L97    L91-L96    L89-L96
H1    H31-H35B   H26-H35B   H26-H32    H30-H35B
(Kabat编号)
H1    H31-H35    H26-H35    H26-H32    H30-H35
(Chothia编号)
H2    H50-H65    H50-H58    H53-H55    H47-H58
H3    H95-H102   H95-H102   H96-H101   H93-H101
高变区可以包括如下“延伸高变区”：在VL中24-36或24-34(L1)，46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及在VH中26-35(H1)，50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一种，可变结构域残基均根据Kabat等人(同前引文)进行编号。
术语“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变形，是指Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版Public Health Service，National Institutesof Health，Bethesda，MD(1991)中用于抗体汇编的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。
利用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可以含有较少的或者额外的氨基酸，对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或向其中的插入。例如，重链可变结构域可以包括H2残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)，和重链FR残基82之后的多个插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等等)。对于给定抗体，可以通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源区域进行比对来确定残基的Kabat编号。
短语“功能等同的抗体”在本发明的范围内应理解为是指与某抗体实质上共有至少一种主要的功能特性的抗体，例如本文所述的功能特性，包括但不限于：对β淀粉样蛋白，特别是Aβ1-42蛋白，更特别是Aβ1-42蛋白的4-16表位区域的结合特异性；体外的免疫反应性；抑制Aβ1-42单体聚集成高分子的聚合原纤维和/或解聚预形成的Aβ1-42聚合原纤维；和/或β折叠的破坏特性；以及当预防性地或治疗性地给药时减轻由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱(包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病)的效应。抗体可以是任何类，诸如IgG、IgM或IgA等，或任何亚类，诸如IgG1、IgG2a等，以及本文所述或本领域已知的其它亚类，但特别是IgG4类。此外，抗体可以通过任何方法生产，诸如噬菌体展示，或在任何生物或细胞系中生产，包括细菌、昆虫、哺乳动物、或生产具有期望特征的抗体(诸如人源化抗体)的其它类型的细胞或细胞系。抗体也可以通过组合来自不同物种的Fab部分和Fc区形成。
术语“双特异性”、“双功能性”和“双效性”在本申请的范围内同义地使用，以表征既呈现出抑制淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样纤维形成的特性、又呈现出解聚淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样纤维的特性的抗体。
术语“抗原”是指能够在生物体、特别是动物、更特别是哺乳动物、包括人体中诱导免疫反应的实体或其片段。该术语包括免疫原及其负责抗原性或抗原决定簇的区域。
如本文所用，术语“可溶”指在水性溶液中部分或完全溶解。
同样如本文所用，术语“免疫原性”指物质能够引起或增强抗免疫原性物质的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞产生，且促进人或动物的免疫反应。
当个体针对所给药的本发明免疫原性组合物产生足够的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞以缓解或减轻待治疗的紊乱时，则发生免疫反应。
短语“聚合可溶性淀粉样蛋白”是指淀粉样蛋白肽、或淀粉样蛋白样肽、或修饰的或截短的淀粉样蛋白肽、或淀粉样蛋白肽的其它衍生物的多个聚集的单体，形成低聚或多聚结构，其在哺乳动物或人体中、更特别地在脑中是可溶的；但特别是指淀粉样蛋白β(Aβ)、或修饰的或截短的淀粉样蛋白β(Aβ)肽、或其衍生物的多个聚集的单体，其在哺乳动物或人体中，更特别地在脑中是可溶的。
术语“杂交瘤”是本领域认可的，并被本领域普通技术人员理解为是指通过将生产抗体的细胞和永生细胞(例如多发性骨髓瘤细胞)融合而产生的细胞。这样的杂交细胞能够生产持续供应的抗体。参见上文“单克隆抗体”的定义和下文实施例中有关本领域已知的融合方法的更详细说明。
如本文所用的术语“载体”表示能够掺入在其中抗原肽或超分子构建体或能够与之缔合，由此将抗原肽或肽的部分呈递给或暴露于人类或动物免系统的结构。任何适合应用于动物或人类治疗的颗粒(例如囊泡、颗粒或微粒体)均可以在本发明中用作载体。该术语还包括递送方法，其可将包含抗原肽的超分子抗原构建体组合物通过递送机制运输到期望的部位。此类递送系统的一个实例利用胶体金属，如胶体金。术语“载体”还包括本领域技术人员已知的递送机制，包括但不限于钥孔戚血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)以及其它佐剂。
在根据本发明的超分子抗原构建体中，脂质体可以具有双重功能，即，它能够用作为包含如本文所述的超分子构建体的载体，而同时又能够起到佐剂的作用以增加或刺激用本发明的治疗性疫苗治疗的目标动物或人体中的免疫反应。也应理解，本发明的超分子抗原构建体组合物可进一步包含其它的佐剂，例如，脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1，和/或多糖和蛋白质的微囊，但特别是脱毒脂质A(诸如单磷酰或双磷酰脂质A)或明矾，还可以包含防腐剂、稀释剂、乳化剂、稳定剂和其它本领域已知和用于疫苗中的成分。而且，任何本领域已知的佐剂系统均可应用于本发明的组合物中。此类佐剂包括但不限于弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂、多分散β-(1，4)连接的乙酰化甘露聚糖(“Acemannan”)、TITERMAX(CytRx公司的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物佐剂)、Chiron公司的改性脂质佐剂、Cambridge Biotech的皂角苷衍生物佐剂、杀死的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、革兰氏阴性细菌的脂多糖(LPS)、大的聚合阴离子(诸如硫酸葡聚糖)、以及无机凝胶(诸如明矾、氢氧化铝或磷酸铝)。
可以应用于本发明的超分子抗原构建体组合物中的载体蛋白包括但不限于，麦芽糖结合蛋白“MBP”；牛血清白蛋白“BSA”；钥孔戚血蓝蛋白“KLH”；卵白蛋白；鞭毛蛋白；甲状腺球蛋白；任何物种的血清白蛋白；任何物种的γ球蛋白；同系细胞(syngeneic cells)；携带Ia抗原的同系细胞；以及D-和/或L-氨基酸的聚合物。
此外，术语“治疗有效量”指抗体的量，当对人或动物给药时，其在所述人或动物体中引发足以产生治疗效果的免疫反应。本领域技术人员按照常规方法能很容易的确定治疗有效量。
两序列间的“同源性”用序列同一性确定。如果待相互比较的两序列长度有别，则序列同一性优选是指较短序列中与较长序列核苷酸残基完全相同的核苷酸残基的百分数。序列同一性可以通过使用计算机程序诸如Bestfit程序(Wisconsin序列分析包，版本8，Unix，Genetics ComputerGroup，University Research Park，575 Science Drive Madison，WI 53711)，常规确定。Bestfit利用Smith和Waterman，Advances in AppliedMathematics 2(1981)，482-489的局部同源算法，目的是找出两序列间具有最高序列同一性的区段。当使用Bestfit或其它序列比对程序来确定特定的序列是否与本发明的参照序列具有例如95％的序列同一性时，优选调整参数使序列同一性百分比在参照序列的全长范围上计算，并允许高达参照序列中核苷酸总数5％的同源性空位。当使用Bestfit时，所谓的任选参数优选置于其预设(“默认”)值。在给定序列和上述本发明序列的比较中出现的偏离可由例如添加、缺失、取代、插入或重组引起。此类序列比较也可优选地利用程序“fasta20u66”(2.0u66版本，1998年9月，William R.Pearson和the University of Virginia；也参见W.R.Pearson(1990)，Methods inEnzymology 183，63-98，所附的实例和http://workbench.sdsc.edu/)。为此目的，可以使用“默认”参数设置。
如本文所使用的“保守变化”是指与天然蛋白质相比，基本上在构象上或抗原性上是中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在突变多肽的抗原决定簇中产生最小变化。当述及本发明的抗体和抗体片段时，保守变化表示不引起该抗体不能结合目标受体的氨基酸取代。本领域普通技术人员将能够预测可进行哪些氨基酸取代，而保持在构象上和在抗原性上中性的高度可能性。例如在Berzofsky，(1985)Science229：932-940和Bowie等人(1990)Science 247：1306-1310中提供了此类指导。有关构象上和抗原性上中性维持的可能性，可以考虑的影响其的因素包括但不限于：(a)疏水氨基酸的取代不太可能影响抗原性，因为疏水残基更可能位于蛋白质的内部；(b)理化类似氨基酸的取代较不太可能影响构象，因为取代的氨基酸残基在结构上模拟天然氨基酸；和(c)进化上保守的序列的改变很可能不利地影响构象，因为此类保守性提示该氨基酸序列可能具有功能重要性。本领域普通技术人员将能够应用公知的测定法评估蛋白质构象的改变，所述测定法包括但不限于微量补体结合法(Wasserman等人(1961)J.Immunol.87：290-295；Levine等人(1967)Meth.Enzymol.11：928-936)和应用构象依赖性单克隆抗体的结合研究(Lewis等(1983)Biochem.22：948-954)。
本文所使用的术语“杂交”指常规的杂交条件，优选指使用5×SSPE、1％SDS、1×Denhardts溶液作为溶液和/或杂交温度在35℃至70℃、优选65℃的杂交条件。杂交后，优选在35℃至70℃、优选65℃的温度，首先用2×SSC、1％SDS，随后用0.2×SSC进行洗涤(关于SSPE、SSC和Denhardts溶液的定义参见Sambrook等人的上述引文)。特别优选严格杂交条件，例如Sambrook等人，同上引文中描述的条件。特别优选的严格杂交条件存在于例如当如上所述在65℃进行杂交和洗涤时。非严格杂交条件，例如在45℃进行杂交和洗涤是不太优选的，在35℃是甚至更不优选的。
通过参考以下包含于此的具体实施方案的详细描述，能更容易地理解本发明。尽管本发明参照某些实施方案的具体细节进行了描述，但此类细节并不旨在视为对本发明范围的限制。
本发明提供了抗体及其功能部分，所述抗体为构象敏感性抗体。这些抗体识别多种淀粉样蛋白抗原上的特定表位。所述抗体可用于诊断性和治疗性干预由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱，尤其是阿尔茨海默氏病。
可对个体给药抗体，使之被动免疫以抵抗由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的多种疾病或紊乱，诸如阿尔茨海默氏病。
本文提供的抗体是单克隆或多克隆抗体，其对参与由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的多种疾病或紊乱(例如阿尔茨海默氏病)的起始、发展和/或恶化的抗原肽具有结合特异性。
根据本发明的抗体可以通过用超分子抗原构建体组合物免疫动物，诸如小鼠、大鼠、兔或任何其它能够产生天然抗体或人抗体的动物物种来制备。
本文公开的超分子抗原构建体通常包含修饰的肽，以增强抗原性效果，其中此类肽通过聚乙二醇化(用聚乙二醇或修饰的聚乙二醇)修饰，或通过其它的方法，诸如通过棕榈酸、聚氨基酸(例如聚甘氨酸、聚组氨酸)、多糖(例如聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、壳多糖、壳聚糖)、合成聚合物(聚酰胺、聚氨酯、聚酯)或共聚物(例如聚(甲基丙烯酸)和N-(2-羟基)丙基甲基丙烯酰胺)等修饰。
棕榈酸修饰(棕榈酰化)尽管为肽提供了在脂质体双层中锚着的锚，但是由于C16:0脂肪酸部分的相对减小的长度，导致肽几乎位于脂质体表面。因此，加工抗原的细胞将不得不摄取带有肽的整个脂质体，在大多数情况下，这导致相对而言较为缓慢的免疫反应。
在本发明的一个实施方案中，分别利用修饰的淀粉样蛋白Aβ22-35肽和Aβ29-40肽来制备根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体。
在本发明的一个实施方案中，利用修饰的淀粉样蛋白Aβ1-15肽来制备根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体。
可以按照在Nicolau等人2002报道的方法合成修饰的淀粉样蛋白Aβ1-15肽。Nicolau等人报道的方法涉及通过在树脂上将亲脂或疏水部分嫁接到预形成的肽的末端氨基酸残基上来修饰抗原肽，这产生了相当高纯度的产物。特别地，用已知的偶联化学，将受保护的氨基酸，特别是Fmoc保护的氨基酸连接到树脂上。移除保护基团，并偶联第二个受保护的氨基酸残基。然后可以利用标准自动化肽合成，利用已知的保护化学，特别是Fmoc/tBu化学和标准侧链保护基团，通过偶联上淀粉样蛋白Aβ1-42的氨基酸22至25、29至40和1至15，合成Aβ抗原肽，以产生肽片段。在最后的步骤中，将两个其它的受保护的氨基酸偶联到生长中的肽片段上。然后可以选择性断裂Mtt基团并与棕榈酸偶联。在洗涤树脂后，移除保护基团并同时断裂树脂，接着用标准方法进行侧链去保护。然后可以得到高纯度终产物，可以通过本领域已知的方法，例如电喷雾质谱法来验证其身份。
根据本发明的亲脂或疏水部分可以是脂肪酸、甘油三酯或磷脂，其中脂肪酸的碳主链具有至少10个碳原子。特别地，亲脂或疏水部分是碳主链具有至少大约14个碳原子且至多大约24个碳原子的脂肪酸，落在这一范围内的各单个碳原子数值也是本发明的一部分。更特别地，亲脂或疏水部分具有至少14个碳原子的碳主链。疏水部分的实例包括但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和胆固醇或DSPE。在本发明特定的实施方案中，亲脂或疏水部分是棕榈酸。
为了增强免疫反应，可适宜地应用其它锚/间隔基将肽重构在脂质体中，例如应用聚乙二醇(PEG)。
PEG共价地连接于结合在肽两末端的氨基酸残基上，特别是Glu、Cys或Lys氨基酸残基或任何其它能适用于将PEG共价结合到肽上的氨基酸残基。在链的另一末端，可共价连接疏水部分以用作在脂质体双层中的锚定元件，例如磷脂酰乙醇胺(PEA)。因此，脂质体仍可以起佐剂的作用，而离双层足够远的肽可被单独加工，由此与棕榈酰化抗原相比增加了其免疫原性。
在某些实施方案中，在本发明范围内使用的超分子抗原构建体包含在每一末端均共价连接了聚乙二醇化赖氨酸的肽序列。PEG(聚乙二醇)链的长度可以从n＝8至n＝150,000或更长，特别是从n＝10至n＝80,000，更特别地从n＝20至n＝10,000变化不等。在本发明特定的实施方案中，PEG链的长度不超过n＝45，特别是在n＝5至n＝40之间，更特别地在n＝10至n＝30之间，而甚至更特别地n＝10。
本文所述的超分子构建体可利用自动化肽合成和已知的保护化学(特别是Fmoc/tBu化学)和标准侧链保护基团合成。一般地，肽的聚乙二醇化导致区域异构体(regioisomer)的混合物。
为了实现PEG-脂质缀合物与Aβ的C-和N-两末端的位点特异性连接，可以利用部分保护的肽。对于含有内部Lys或His残基的肽序列，将正交保护的Lys(ivDde)添加到每一末端。可以将额外的Gly添加到C-末端以促进合成。移除保护基团并利用乙酸酐进行N-乙酰化，随后选择性地断裂ivDde基团。
优选树脂，特别是2-氯三苯甲基树脂，其是酸敏感的从而使得能够分离受保护的肽。
在本发明特定的实施方案中，在液相中进行偶联反应。随之在温和条件下选择性从树脂上断裂，释放内部被保护的肽。
成功地实现了衍生自β-淀粉样蛋白序列的肽(例如Aβ22-35或Aβ29-40，或Aβ1-15)与脂肪酸—磷脂酰胆碱(例如DSPE)修饰的PEG分子的液相偶联。在最终侧链去保护之前，可通过应用阳离子交换层析，分离单偶联产物与双偶联产物。随后的肽侧链去保护导致分离到具有可接受纯度的期望缀合物。纯化可通过本领域公知的方法，例如HPLC等实现。
这种应用受保护的肽合成N-和C-末端脂质-PEG β淀粉样蛋白抗原的方法适用于多种肽序列。
然后可以如Nicolau等人，2002所述制备根据本发明的脂质体抗原。修饰的淀粉样蛋白Aβ抗原肽，特别是修饰的PEG化Aβ22-35和Aβ29-40抗原肽，或棕榈酰化Aβ1-15抗原肽，可以在由脂质体(特别是由双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、双肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇制成的、任选地含有单磷酰脂质A的脂质体)构成的构建体中重构。
在本发明特定的实施方案中，利用具有脂质A的脂质体作为佐剂来制备抗淀粉样蛋白疫苗。混合双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油和胆固醇，特别地以0.9∶1.0∶0.7的摩尔比混合。然后以适宜的浓度，特别地以30-50mg/mmol，更特别地40mg/mmol磷脂的浓度，加入强免疫调节剂，例如单磷酰脂质A。然后以1∶30至1∶200的肽与磷脂的摩尔比，特别地以1∶1000、1∶50至1∶120之间，更特别地以1∶100的摩尔比加入修饰的抗原Aβ肽。溶剂例如通过蒸发除去，并用无菌缓冲液(例如PBS)水合所产生的薄膜。
也可通过例如描述于Wagner等人(2002)Journal of LiposomeResearch Vol 12(3)，259-270页所述的交叉流注射(crossflow injection)技术制备脂质体。在将脂质溶液注入水性缓冲液系统期间，脂质趋于形成“沉淀物”，随后自身排列为囊泡。所获得的囊泡的大小取决于诸如脂质浓度、搅拌速率、注入速率以及脂质的选择等因素。制备系统可以包括交叉流注射组件、极性相(例如，PBS缓冲液)容器、乙醇/脂质溶液容器和加压装置，特别是氮加压装置。当将水性或极性溶液泵过交叉流注射组件时，在施加不同压力的情况下将乙醇/脂质溶液注入到极性相中。
脂质体仍起佐剂的作用，而离双层足够远的肽可被单独加工，故而与棕榈酰化抗原相比增加了其免疫原性。
游离的PEG末端共价连接磷脂酰乙醇胺分子(其中脂肪酸可为：肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸等，或其组合)以作为锚定元件。这种超分子结构可以通过重构而锚在由磷脂和胆固醇(各种摩尔比的磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇)组成的脂质体中。也可使用其它的磷脂。可以以大约40μg/μmole磷脂的浓度使用脂质A。
在某些实施方案中，棕榈酰化或聚乙二醇化的超分子抗原构建体包含具有β淀粉样蛋白的氨基酸序列的肽。肽可以包含或对应于整个淀粉样蛋白β肽及其活性片段。另外，特别地，可用于本发明的肽可以分别地包括Aβ22-35和Aβ29-40、或Aβ1-15、及其活性片段。
为了激发和制备抗体以及确定修饰的Aβ抗原构建体的免疫原性，用抗原肽免疫选自小鼠、大鼠、兔、猪、鸟等的适宜动物，但特别是小鼠，尤其是C57BL/6小鼠。抗原构建体的免疫原性通过在免疫后以适宜的时间间隔用免疫测定法(例如，ELISA试验)探测血清样品来测定。
可利用本领域熟知的经典克隆和细胞融合技术来制备本发明的单克隆抗体。一般对野生型或近交小鼠(例如BALB/c或尤其是C57BL/6小鼠)、大鼠、兔或其它能产生天然或人抗体的动物物种或转基因小鼠给药(例如腹腔内注射)目的免疫原(抗原)。免疫原可以单独给药或与佐剂混合，或由载体(VEE复制子载体、痘苗)表达、或作为DNA、或作为融合蛋白，以诱导免疫反应。融合蛋白包含偶联到载体蛋白(例如，β-半乳糖苷酶、谷胱甘肽S转移酶、钥孔戚血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白)的肽，其中针对所述肽的免疫反应是期望的。在这些情况下，肽作为带有载体蛋白的半抗原。在对动物加强免疫例如两次或更多次后，从免疫的动物收获脾细胞，并通过利用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory，New York 1988))的方法使致敏的脾细胞与骨髓瘤细胞系(诸如鼠SP2/O骨髓瘤细胞(ATCC，Manassas，VA))融合来生成杂交瘤。
在本发明特定的实施方案中，根据本发明的抗原构建体，特别是以可药用形式包含所述抗原构建体的疫苗组合物，以1至10周的时间间隔、特别是1至6周的时间间隔、更特别是1至4周的时间间隔、甚至更特别地2至3周的时间间隔，重复剂量给药，特别地1至15个剂量、更特别地2至10个剂量、甚至更特别地3至7个剂量、但尤其是4至6个剂量。通过在加强免疫后适宜的时间，特别是加强后3至10天、更特别地加强后4至8天、而更特别地加强后5至6天采集血清样品，并利用已知的方法、特别是常用免疫测定法中的一种(例如，ELISA试验)测定抗原构建体的免疫原性来监测免疫反应。
用根据本发明的抗原构建体、特别是以可药用形式包含根据本发明的抗原构建体的疫苗组合物进行免疫，在处理动物中引起显著的免疫反应。选择具有治疗滴度的动物、特别是小鼠进行产抗体细胞(特别是B淋巴细胞)与持续生长或永生细胞系(诸如骨髓瘤细胞系)的融合。通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。治疗滴度是以1∶4000至1∶6000、特别是1∶4500至1∶5500、更特别地1∶5000稀释时在ELISA试验中给出阳性结果的那些滴度。
然后以常规方式，例如利用有限稀释法克隆所得的杂交细胞，并培养所得的生产期望单克隆抗体的克隆。
通过将细胞铺板于含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的选择培养基中对如此获得的杂交瘤进行化学选择。
随后依据产生对抗特定淀粉样蛋白相关疾病或紊乱的单克隆抗体的能力来筛选杂交瘤。克隆产目的抗体的杂交瘤，扩增，并冷冻保藏以备将来的生产。优选的杂交瘤生产具有IgG同种型的单克隆抗体。
可以通过用本文所述的本发明的超分子抗原构建体组合物免疫动物，诸如小鼠或兔、或任何其它适宜的动物而制备多克隆抗体。随后从动物收集血清，并依据对淀粉样蛋白的结合反应性来筛选血清中的抗体。
根据本发明的抗体可用已知的技术制备为生理学上可接受的制剂，并且其可以包含可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。例如，如本文所述的本发明抗体[包括任何功能等同的抗体或其功能部分]，特别是单克隆抗体[包括任何功能等同的抗体或其功能部分]可以与可药用载体、稀释剂和/或赋形剂组合形成治疗组合物。适宜的药学载体、稀释剂和/或赋形剂是本领域公知的，并且包含例如磷酸缓冲盐溶液、水、乳液(诸如油/水乳液)、各种类型的湿润剂、无菌溶液等。
根据本发明的药物组合物的配制可根据本领域普通技术人员已知的标准方法完成。
本发明的组合物可以以固体、液体或气溶胶的形式以适宜的药学有效剂量对个体给药。固体组合物的实例包括片剂、霜剂以及可植入的剂量单位。片剂可以口服给药。治疗霜剂可以局部给药。可植入的剂量单位可以局部地例如在肿瘤部位给药；或可以经植入用于全身地释放治疗组合物，例如经皮下植入。液体组合物的实例包括适合肌内、皮下、静脉内、动脉内注射的制剂，以及用于局部和眼内给药的制剂。气溶胶制剂的实例包括用于肺部给药的吸入制剂。
组合物可以通过标准的给药途径给药。一般来说，组合物可以通过局部、口服、直肠、鼻、真皮内、腹膜内或非肠胃(例如静脉内、皮下、或肌内)途径给药。另外，还可以将组合物掺入到持续释放基质中，诸如生物可降解的聚合物，将聚合物植入期望递送位置例如肿瘤部位附近。方法包括单剂量的给药、以预定的时间间隔重复剂量给药、以及持续给药预定的一段时间。
如本文使用的持续释放基质是由通常为聚合物的材料制成的基质，所述材料可以通过酶促或酸/碱水解或通过溶解而降解。一旦植入到体内，基质受到酶和体液的作用。期望地持续释放基质选自生物相容材料，如脂质体、聚丙交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(乙醇酸的聚合物)、聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)、聚酐类、聚原酸酯、多肽、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、诸如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸等氨基酸、多核苷酸、聚乙烯基丙烯、聚乙烯吡咯烷酮和聚硅氧烷。优选的生物可降解基质是聚丙交酯、聚乙交酯或聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)之一的基质。
相关领域普通技术人员公知，组合物的剂量取决于多种因素，例如，待治疗的病症、所使用的具体组合物、以及其它临床因素如患者的体重、尺寸、性别和一般健康状况、体表面积、待给药的具体化合物或组合物、并行给药的其它药物以及给药途径。
本发明组合物可以和其它组合物联合给药，包含生物活性物质或化合物、特别是至少一种选自如下的化合物、连同本发明的抗体、以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂、以及用于疾病治疗的说明书：抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂诸如哌仑西平和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、抗炎分子、“非典型的抗精神病药物”(例如氯氮平、齐拉西酮、利哌利酮、阿立哌唑或奥氮平)、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)、和其它药物以及营养补充剂，诸如维生素B12、半胱氨酸、乙酰胆碱前体、卵磷脂、胆碱、银杏、乙酰基-L-肉毒碱、艾地苯醌、丙戊茶碱或黄嘌呤衍生物。
蛋白质药学活性物质可以以每剂1ng至10mg的量存在。一般地，给药方案应为0.1μg至10mg本发明的抗体、特别是1.0μg至1.0mg、更特别的1.0μg至100μg，其中落入这些范围的所有单个数值也是本发明的一部分。如果通过连续输注进行给药，更适当的剂量可以是每小时每千克体重0.01μg至10mg单位，其中落入这些范围的所有单个数值也是本发明的一部分。
给药/给药通常可以是非肠胃的，例如静脉内给药。非肠胃给药的制品包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、以及可注射的有机酯如油酸乙酯。水性溶剂可以选自水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。非肠胃媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内媒介物包括流体和营养补充物、电解质补充物(诸如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。也可以存在防腐剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
药物组合物可以进一步包含蛋白质性载体，例如，血清白蛋白或免疫球蛋白，特别是人来源的。其它的生物活性剂也可以存在于本发明的药物组合物中，这取决于其目的用途。
当结合靶标位于脑中时，本发明的某些实施方式确保抗体或其活性片段穿过血脑屏障。某些神经变性疾病与血脑屏障通透性的增加相关，从而抗体或其活性片段能够很容易地被引入脑中。当血脑屏障保持完整时，存在若干种本领域已知的跨越此屏障转运分子的方法，包括但不限于：物理方法、基于脂质的方法、以及基于受体和通道的方法。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的物理方法包括但不限于：完全地规避血脑屏障，或通过在血脑屏障中创建开口。规避方法包括但不限于：直接注射至脑中(例如参见，Papanastassiou等人，Gene Therapy 9：398-406(2002))和在脑中植入递送装置(例如参见，Gill等人，Nature Med.9：589-595(2003)；和Gliadel WafersTM，Guildford Pharmaceutical)。在屏障中创建开口的方法包括但不限于：超声(例如参见美国专利公开No.2002/0038086)，渗透压(例如通过给药高渗甘露糖醇(Neuwelt，E.A.，Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation，卷1和2，Plenum Press，N.Y.(1989)))，透化作用，例如通过缓激肽或透化剂A-7(例如美国专利No.5,112,596、5,268,164、5,506,206和5,686,416)，以及用含有抗体或抗原结合片段编码基因的载体转染跨血脑屏障的神经元(例如参见美国专利公开No.2003/0083299)。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的、基于脂质的方法包括但不限于：将抗体或其活性片段包封在脂质体内，所述脂质体与能够结合血脑屏障的血管内皮上受体的抗体活性片段偶联(例如参见美国专利申请公开No.20020025313)；以及用抗体或其活性片段包被低密度脂蛋白颗粒(例如参见美国专利申请公开No.20040204354)或载脂蛋白E(例如参见美国专利申请公开No.20040131692)。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的、基于受体和通道的方法包括但不限于：应用糖皮质类固醇阻断剂增加血脑屏障的通透性(例如参见美国专利申请公开No.2002/0065259、2003/0162695和2005/0124533)；激活钾通道(例如参见美国专利申请公开No.2005/0089473)、抑制ABC药物转运蛋白(例如参见美国专利申请公开No.2003/0073713)；用转铁蛋白包被抗体并调节一或多种转铁蛋白受体的活性(例如参见美国专利申请公开No.2003/0129186)、以及阳离子化抗体(例如参见美国专利No.5,004,697)。
在本发明的另一实施方案中，提供了用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症的方法和试剂盒，所述淀粉样蛋白相关疾病或病症包括与视觉系统组织中病理学异常和/或变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病。所述病理学异常可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；角膜，导致角膜网络状营养不良。此外，本发明提供用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症易感性，或用于在患者中监测微小残留病，或用于预测患者对用本发明抗体或疫苗组合物治疗的反应性的方法和试剂盒，所述淀粉样蛋白相关疾病或病症包括包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病，其可以在例如眼睛的不同组织中发生，如视皮层，导致皮层视觉缺陷；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，因β淀粉样蛋白沉积导致白内障；玻璃体，导致视觉淀粉样变性；视网膜，导致原发视网膜变性和黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性)；视神经，导致视神经小疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致角膜网络状营养不良。这些方法包括常用于在生物样品中或在原位条件下检测或定量物质的公知免疫学方法。
对需要诊断的个体，特别是哺乳动物，更特别是人中淀粉样蛋白相关疾病或病症(包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病)或对淀粉样蛋白相关疾病或病症易感性的诊断，可以通过检测本发明抗体，尤其是单克隆抗体或其活性片段与样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合来完成，这包括使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与结合该淀粉样蛋白的表位的抗体接触，允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样品中或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较，所述免疫复合物的量增加指示所述个体患有或有风险发生淀粉样蛋白相关疾病或病症。淀粉样蛋白可以是单体、原纤维和/或聚合形式。抗体或其活性部分可以特异于淀粉样蛋白的单体、原纤维和/或聚合形式。
监测个体，特别是哺乳动物，更特别是人在用根据本发明的抗体或疫苗组合物治疗之后的微小残留病可以通过检测本发明的抗体、特别是单克隆抗体或其活性片段与样品中的或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合来完成，这包括使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与结合该淀粉样蛋白的表位的抗体接触，允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较，所述免疫复合物的量增加指示所述个体可能依然患有微小残留病。淀粉样蛋白可以是单体、原纤维和/或聚合形式。抗体或其活性部分可以特异于淀粉样蛋白的单体、原纤维和/或聚合形式。
预测个体，特别是哺乳动物，更特别是人对用根据本发明的疫苗组合物治疗的反应性可以通过检测单克隆抗体或其活性片段与样品中的或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合来完成，这包括使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与结合淀粉样蛋白表位的抗体接触，允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联，任选地比较治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，其中所述免疫复合物的量降低指示所述患者具有对治疗产生反应的高潜力。淀粉样蛋白可以是单体、原纤维和/或聚合形式。抗体或其活性部分可以特异于淀粉样蛋白的单体、原纤维和/或聚合形式。
可以用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症、用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症(包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如可在眼不同组织中发生的神经元退化相关的眼病)易感性、或用于监测患者微小残留病、或用于预测患者对用如本文所述的本发明抗体或疫苗组合物治疗的反应性的生物样品有例如体液，诸如血清、血浆、唾液、胃分泌液、黏液、脑脊髓液、淋巴液等；或从生物体获得的组织或细胞样品，诸如神经、脑、心脏或血管组织。为确定样品中淀粉样蛋白的存在或不存在，可以使用任何本领域普通技术人员已知的免疫测定法，例如，利用借助于第二试剂进行检测的间接检测方法的测定法、ELISA和免疫沉淀及凝集测定。例如Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory，New York 1988 555-612、授予Maertens和Stuyver的WO96/13590、Zrein等人(1998)和WO96/29605给出了这些测定法的详细描述。
对于原位诊断，可以利用本领域已知的方法，例如静脉内、鼻内、腹膜内、脑内、动脉内注射，对待诊断的生物给药抗体或其任何活性和功能性部分，以便在本发明抗体与淀粉样蛋白抗原上的表位区域之间可以发生特异性结合。可以通过连接于抗体或其功能片段的标记物，或本领域抑制的任何其它检测方法，来方便地检测抗体/抗原复合物。
在诊断应用中、或在用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症(包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如可在眼不同组织中发生的神经元退化相关的眼病)的易感性、或用于监测患者的微小残留病、或用于预测患者对用如本文所述的本发明抗体或疫苗组合物治疗的反应性的应用中，使用的免疫测定法通常依赖于标记的抗原、抗体或二级试剂进行检测。这些蛋白或试剂可用本领域技术人员已知的化合物标记，包括酶、放射性同位素、以及荧光、发光以及显色物质，包括但不限于有色粒子，诸如胶体金和乳胶珠。其中，放射性标记能够应用于几乎所有类型的测定法以及大多数变型形式。在必须避免放射性或需要快速结果时，酶缀合的标记物特别有用。尽管荧光染料在使用中需要昂贵的设备，但荧光染料提供了非常灵敏的检测方法。可以用于这些测定的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和经亲和纯化的多克隆抗体。
可选地，抗体可以通过与对免疫球蛋白具有亲和力的经标记的物质(诸如蛋白质A或蛋白质G或第二抗体)进行反应来间接地标记。抗体可以与第二物质缀合，并用对与抗体缀合的第二物质具有亲和力的标记的第三物质检测。例如，抗体可以缀合生物素，并用标记的亲和素或链霉亲和素来检测抗体-生物素缀合物。与之类似，抗体可以缀合半抗原，并用标记的抗半抗原抗体来检测抗体-半抗原缀合物。
本领域技术人员公知这些和其它根据本发明可采用的适宜标记物。可以应用本领域普通技术人员普遍公知的标准技术完成这些标记物与抗体或其片段的结合。Kennedy，J.H.等人，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)，和Schurs，A.H.W.M.等人，1977(Clin.Chim Acta 81：1-40)描述了典型的技术。后者中提到的偶联技术是戊二醛法、高碘酸盐法、双马来酰亚胺法，等等，所有的这些都并入本文作为参考。
当前的免疫测定法利用双抗体方法检测分析物的存在，其中，抗体通过与已用可检测的标记物标记的第二抗体反应而进行间接标记。第二抗体优选是与单克隆抗体来源动物的抗体结合的抗体。换句话说，如果单克隆抗体是小鼠抗体，则标记的第二抗体是抗小鼠抗体。对于用于下文描述的测定法中的单克隆抗体，这种标记优选是抗体包被的珠，特别是磁珠。对于用于本文描述的免疫测定法中的多克隆抗体，标记物优选是可检测的分子，诸如放射性的、荧光的、或电化学发光的物质。
一个备选的双抗体系统，由于适应于快速确定分析物的存在而经常被称为快速格式系统(fast format systems)，也可以在本发明的范围内采用。该系统需要抗体与分析物之间的高亲和力。根据本发明的一个实施方案，用一对均特异于淀粉样蛋白的抗体确定淀粉样蛋白的存在。所述抗体对中的一个在此称为“检测抗体”，而所述抗体对中的另一个在此称为“俘获抗体”。本发明的单克隆抗体可以用做俘获或检测抗体。本发明的单克隆抗体也能够既用作俘获抗体又用作检测抗体，一起用于单个测定试验中。本发明的一个实施方案因此应用双抗体夹心法在生物液体样品中检测淀粉样蛋白。在此方法中，分析物(淀粉样蛋白)被夹在检测抗体和俘获抗体之间，其中俘获抗体不可逆地固定在固相支持物上。检测抗体包含可检测的标记，以鉴定抗体-分析物夹心的存在并且因此鉴定分析物的存在。
例示性固相物质包括但不限于在放射免疫测定和酶免疫测定领域中公知的微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁性、塑料或玻璃珠和载片。用于将抗体偶联到固相的方法也是本领域技术人员公知的。最近，多种多孔材料诸如尼龙、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维和其它的多孔聚合物也已被采用作为固相支持物。
本发明也涉及检测生物样品中淀粉样蛋白的诊断试剂盒，其包含上面定义的组合物。而且，本发明涉及此后面的诊断试剂盒，除了如上面定义的组合物外，其还包括上面所定义的检测试剂。术语“诊断试剂盒”广义地指本领域公知的任何诊断试剂盒。更具体地，此后一术语指如Zrein等人(1998)描述的诊断试剂盒。
本发明的又一目的是提供用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症(包括与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如可在眼不同组织中发生的神经元退化相关的眼病)的、包含根据本发明抗体的、新免疫探针和检验试剂盒。对于免疫探针，抗体直接或间接地连接于适宜的报告分子(例如，酶或放射性核素)。检验试剂盒包括容纳一种或多种根据本发明的抗体的容器，以及有关使用抗体结合淀粉样蛋白抗原形成免疫复合物和检测免疫复合物的形成、从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联的说明书。
实施例
实施例1：通过用棕榈酰化Aβ1-15超分子抗原构建体免疫而生成的抗体
实施例1.1：制备棕榈酰化Aβ1-15超分子抗原构建体的方法
1.1.1四(棕榈酰赖氨酸)-Aβ1-15肽抗原的合成
按照改进的之前报道的方法(Nicolau等人2002)合成棕榈酰化淀粉样蛋白1-15肽。这种新方法包括在树脂上将棕榈酸嫁接到预形成的肽的末端Lys残基上，而不是掺入经修饰的氨基酸9-芴基甲氧羰基(Fmoc)-Lys(Pal)-OH的逐步固相合成。这种新方法提高了偶联效率，且提供了相当更高纯度的产物。因此，应用[六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓](HBTU)偶联化学，将正交保护的氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH连接到王氏树脂(Wang resin)上。用20％哌啶的DMF溶液移除Fmoc基团，并偶联第二个Fmoc-Lys(Mtt)-OH残基。然后使用Fmoc/tBu化学和标准侧链保护基团，应用标准自动化肽合成，偶联接下来的15个氨基酸以产生肽序列。最后，偶联的最后两个氨基酸是Fmoc-Lys(Mtt)-OH。然后用1％三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷溶液选择性地断裂Mtt基团以释放肽片段，随后利用HBTU使之偶联棕榈酸。在树脂洗涤后，用20％哌啶的二甲基甲酰胺(DMF)溶液移除Fmoc基团，最后利用TFA在标准条件下同时进行树脂断裂和侧链去保护。在冷二乙醚中研制产生白色固体产物。电喷雾质谱法证实了产物的身份(m/z预期值：1097.9([M]3+)；实验值：1096.8([M-3H]3+)，未检测到其它的三-、二-或单-棕榈酰化肽。
实施例1.2：超分子抗原构建体引起的抗体
制备针对棕榈酰化Aβ1-15超分子抗原构建体产生的mAb
利用棕榈酰化抗原(ACI-24，Aβ1-15)以2周时间间隔对C57BL/6小鼠进行免疫。用每种抗原免疫10-12只动物(注射体积：200μl，含8nmol肽)。末次注射后4天处死动物。加强免疫5次后，选择具有治疗滴度(血清1∶5,000稀释时为ELISA阳性)的小鼠用于融合。从免疫的动物收集脾细胞，并通过使致敏的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合生成杂交瘤。应用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory，NewYork 1988))的方法进行来自脾脏的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞系SP2-0(ATCC，Manassas，VA)细胞的融合。
通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。所得的杂交细胞随之以常规方式培养10±14天以使克隆生长。利用有限稀释进行最初克隆选择。选择产生IgG的杂交瘤克隆并通过ELISA测试其与Aβ1-42肽的特异性结合，并培养所得的生产期望单克隆抗体的克隆。
这样获得的杂交瘤通过将细胞铺板到含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的选择培养基中进行化学选择。
随后依据产生抗特定淀粉样蛋白相关疾病或紊乱的单克隆抗体的能力，对杂交瘤进行筛选。一旦鉴定了母克隆，就对其亚克隆四次，以确保单克隆性并使杂交体稳定化。克隆产生目的抗体的杂交瘤，扩增，并冷冻保藏用于将来的生产。
通过商业可得的小鼠单克隆抗体同种型分型试剂盒对抗体进行同种型分型，使稳定的克隆适应无血清培养基，并置于生物反应器中进行抗体生产。
优选的杂交瘤生产了具有IgG1同种型的单克隆抗体。
实施例1.3：抗体mACI-24-Ab3的特异性测定
为分析抗体mACI-24-Ab3的特异性，将不同浓度的预形成的淀粉样蛋白1-42、1-40和17-40、1-28原纤维点样到Hybond ECL硝酸纤维素膜(Amersham Biosciences)上。在用10％奶粉和0.7％吐温20封闭后，将膜与20μg/ml一抗在室温温育2小时。洗涤后，膜与辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗小鼠IgG抗体(Amersham Biosciences)在室温温育1小时，洗涤并与化学发光溶液一起温育，随后使膜曝光于X光胶片。
为测量mAb mACI-24-Ab3与淀粉样蛋白β1-42、1-40和17-40、1-28的结合，在37℃历时七天预形成纤维，并将其点样在膜上。使用20μg/ml的抗体测量结合能力，并通过接触辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗小鼠IgG抗体20分钟来检测结合的抗体。
实施例1.4：硫代黄素T(Th-T)荧光测定法
为测量mAb的聚集抑制和解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测定法，其特异性结合原纤维Aβ1-42分子，且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关。
将Aβ1-42冻干粉末在六氟异丙醇(HFIP)中重构至1mM。室温超声处理肽溶液15分钟，搅拌过夜，将等分试样装入未硅化的微型离心管中。然后在氩气流下蒸发HFIP。所得的肽膜真空干燥10分钟，并储藏于-80℃备用。
1.4.1Aβ1-42聚集测定
为测定抗体介导的对Aβ1-42聚集的抑制，将抗体于PBS中预稀释，并在未硅化的温育管中制备含有如下成分的测定溶液：3.3或0.33μM预稀释的抗体、10μM硫代黄素T、33μM Aβ1-42和8.2％DMSO。因此，抗体对Aβ1-42的最终摩尔比是1∶10和1∶100。还制备了适当的对照溶液。然后溶液在37℃温育24小时，并在Perkin-Elmer FluoroCount分光荧光计上在黑色348孔板(Perkin-Elmer)中以一式六个重复读出分光荧光(相对荧光单位；RFU)。根据如下方程式将聚集抑制或解聚分别表达为平均％抑制或解聚：
％抑制＝(阳性对照的RFU-阴性对照的RFU)-(有Aβ 1-42 的样品的 RFU-无Aβ 1-42 的样品的RFU)×100％
(阳性对照的RFU-阴性对照的RFU)
与对照相比较，当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，抑制平均为26％(2次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，抑制是51％(2次独立实验)。
1.4.2Aβ1-42的解聚测定
为测量mAb的解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测定法，其特异性结合原纤维Aβ1-42分子，且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关。
为测定抗体介导的预聚集的Aβ1-42的解聚，将如上文所述制备的低分子量Aβ1-42配制为在27％DMSO和1×PBS中的110μM溶液。然后使该溶液在37℃聚集24小时，其后加入如下物质：3.3或0.33μM预稀释的抗体和10μM硫代黄素T。这产生1∶10和1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔比，含8.2％DMSO。然后该溶液在37℃再温育24小时。然后测量分光荧光并如上文所述计算％解聚。
在解聚测定中，抗体ACI-24-Ab-3显示出对预聚集的Aβ1-42显著的解聚。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，解聚平均为12％(2次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，解聚是20％(2次独立实验)。
根据上述结果，显然ACI-24-Ab-3在与Aβ1-42纤丝的相互作用中呈现出双功能性，即，其能够抑制Aβ1-42的聚集并解聚预形成的Aβ1-42纤维。
实施例1.5：mACI-01Ab7C2-Aβ1-42相互作用
应用表面等离子共振研究了抗体ACI-24-Ab-3与淀粉样蛋白肽Aβ1-42之间的相互作用。确定了该小鼠抗体与Aβ1-42单体或纤维的结合。
所有的SPR实验都在Biacore X仪器(Biacore AB)上进行。用于固定的试剂(EDC、NHS和乙醇胺)、感应芯片CM5和SA以及跑样缓冲液和样品缓冲液HBS-EP均购自Biacore AB。使用乙酸钠(10mM，pH 5.0)作为偶联缓冲液以增加偶联产率。通过向Aβ1-42中添加PBS缓冲液至3mg/ml的终浓度并将小瓶置于37℃历时7天来制备原纤维Aβ1-42(BAchem)。将原纤维Aβ1-42偶联到含表面结合的羧甲基葡聚糖基质的CM5感应芯片上。将生物素化的单体Aβ1-42(Bachem)偶联到由共价连接链亲和素的羧甲基葡聚糖基质组成的感应芯片SA上。一般通过用跑样缓冲液进行系列稀释来测定四至五个浓度的mAb。从最低的浓度开始进行注射，并以30μL/分钟的流速历时3分钟流经fc 1和2。流通池2未被衍生化，并从fc 1中扣除响应值，以校正仪器噪音和总体折射率变化。完成注射后，立即用跑样缓冲液洗涤表面5分钟。为从Aβ1-42原纤维中除去剩余的结合抗体，通过注射10mM NaOH脉冲进行表面再生。利用数值积分和整体分析算法使用BIAevaluation 3.0进行动力学分析。将注射不同浓度分析物获得的曲线重合(overlay)，并将基线调整至零。对于曲线拟合，同时将所有数据拟合成1:1同质复合。
确定了该小鼠ACI-24-Ab-3抗体与淀粉样蛋白的结合。
实施例1.6：ACI-24-Ab-3单克隆抗体对淀粉样蛋白纤维的结合
为分析预形成纤维上抗体ACI-24-Ab-3的分子结合部位，进行了负相差透射电子显微镜检(TEM)。
根据Slot JW，Geuze HJ(1985)，使抗体ACI-24-Ab-3与8nm胶体金偶联。对于淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)纤维的共温育，将6.65μM纤维与金标记的抗体以1∶100的摩尔比在室温温育24小时。随后将5μl样品在用派罗啶(parlodium)/C薄膜覆盖的新鲜辉光放电Cu栅网(200目)上温育45秒，用水洗涤3次，并用2％新鲜经稀释并过滤的乙酸双氧铀洗涤1次。使样品在2％乙酸双氧铀中染色15-20秒。吸去栅网上过量的染色剂，从而风干。制备了每个样品的3个栅网。在透射电子显微镜Hitachi 7000中分析栅网。
实施例1.7：通过密度梯度超速离心的分级分离
通过密度梯度超速离心(Rzepecki等人，2004)，基于该原理分配在与和不与抗体温育之后得到的大小不同的肽纤维，随后在预形成的梯度(OptiPrepTM)上进行SDS-PAGE沉降分析，研究单克隆抗体ACI-24-Ab-3抑制Aβ1-42纤维聚合和解聚Aβ1-42纤维的特性。这种方法明显的优点在于同时分析预形成的Aβ纤维群、共温育抗体的解聚和聚集抑制性质、以及抗体与纤维的结合。
对于Aβ1-42聚集的抑制，使Aβ1-42单体与mAb ACI-24-Ab-3以两个不同的摩尔比(单体Aβ1-42比mAb高三十或一百倍的摩尔比)温育，其中Aβ终浓度50μM。在37℃温育24小时后，将样品铺放在OptiprepTM的不连续梯度上，并在4℃以259000g使管旋转离心3小时。收集了15个级分(各140μL)，级分1是来自梯度顶端的密度最小的级分，而级分15是来自梯度底端的密度最大的级分。也采集了沉淀物。通过SDS-PAGE利用银染分析了收集的级分。用于抑制测定的Aβ1-42的浓度比用于解聚测定的Aβ1-42的浓度低五倍，这降低了淀粉样蛋白的聚集动力学并确保在线性相范围内测量。
对于与mAb ACI-24-Ab-3共温育(以1∶30和1∶100的两个不同的摩尔比，mAb+单体Aβ1-42，Aβ的终浓度是246μM)的预形成Aβ1-42原纤维的解聚，样品在37℃温育24小时。24小时后，通过超速离心对样品进行分级，并如上文和之前(Rzepecki等人，2004)所述通过SDS-PAGE进行分离。
实施例1.8：通过荧光测定法评估与mAb ACI-24-Ab-3共温育对Aβ1-42纤丝聚集的抑制和对预形成的Aβ1-42纤丝的解聚
BIS-ANS荧光测定法
为评估mAb的抑制特性，应用了BIS-ANS(LeVine，2002)荧光测定法，其特异地检测Aβ1-42纤丝中的单体或非纤丝群体。在荧光测量前，使Aβ1-42单体与缓冲液(作为对照)或mAb ACI-24-Ab-3(mAb与Aβ1-42肽的摩尔比1∶100)在37℃预温育14小时。自动记录相对荧光单位，且结果表达为相对于对照的变化百分比。
实施例1.9：ACI-24-Ab-3单克隆抗体与13C标记的β淀粉样蛋白1-42肽相互作用的NMR和荧光表征
为评价mAb溶解预形成纤维或抑制纤维形成的潜在机制，进行U-13CTyr10和Val12标记的β淀粉样蛋白1-42肽的固态NMR和Th-T荧光测定之间的头对头实验。因此，此研究的目的是通过固态NMR光谱法跟踪在单克隆抗体存在下β淀粉样蛋白肽中的β折叠转变，并直接将此与通过Th-T荧光测定法测得的解聚能力比较。
固态NMR光谱法不仅检测二级结构的转变，而且也能定位Aβ1-42肽中支配结构转变的结构域。固态NMR对于该问题的适用性是已得以证明的，因为它已经对Aβ1-42纤维的结构确定作出过贡献(Petkova等人，2004，Petkova等人，2002)。特别地，13Cα和13Cβ的化学位移与二级结构之间的相关性(Cornilescu等人，1999，Luca等人，2001，Iwadate等人，1999)是检验肽内二级结构变化的有价值的工具。
通过Fmoc合成方案，合成在12位包括13C预标记的缬氨酸(12Val)和在10位包括13C预标记的酪氨酸(10Tyr)的标记肽。通过MALDI质谱分析证实肽的身份和纯度。使用标记的β淀粉样蛋白肽(1-42)通过在PBS缓冲液中在37℃温育肽溶液1周生成纤维。主要问题，即淀粉样蛋白β肽在PBS缓冲液中较差的溶解性，可以通过以下方式解决：通过微量氨使PBS缓冲液的pH值暂时升高以溶解淀粉样蛋白β肽。利用氨挥发的性质，通过在更大PBS浴存在下温育样品，以重新获得PBS缓冲液的初始pH值。
为测量β折叠破坏性抗体的作用，将纤维溶液与抗体在37℃温育24小时，进行NMR和Th-T测定。为实时比较，利用相同溶液的等分试样进行Th-T荧光测定，并冻干剩余溶液进行NMR测量。
利用Th-T荧光测定法通过与预形成的13C标记的淀粉样蛋白β纤维共温育来分析ACI-24-Ab-3的解聚能力。
为研究PBS(对照)与mAb温育之间的差异，利用PeakFit(www.systat.com/-products/PeakFit)解卷积每一光谱。采用混合Lorentzian/Gaussian拟合程序，使曲线充分地匹配。
实施例1.10：ACI-24-Ab-3对淀粉样蛋白纤维的功能性
12.1在结合ACI-24-Ab-3抗体后Aβ1-42纤维的构象改变和解聚的起始
为了评价抗体能够解聚预形成的β淀粉样蛋白(Aβ1-42)纤维的机制，进行了U-13C酪氨酸10和缬氨酸12标记的Aβ1-42肽的硫代黄素T(Th-T)荧光测定(测量解聚)和固体核磁共振(NMR)(分析二级构象)之间的头对头比较。
实施例1.11：单克隆抗体ACI-24-Ab-3的表位作图
使用肽文库通过ELISA进行单克隆抗体ACI-24-Ab-3的表位作图，该文库包含覆盖Aβ1-42全长氨基酸(aa)序列的总共33个生物素化的肽(由Mimotopes，Clayton Victoria，澳大利亚制造，购自ANAWA Trading SA，Wangen瑞士)。肽文库中的肽由八肽、九肽或十肽组成。应用生物素化的全长Aβ1-42肽(人序列)作为阳性对照(Bachem，Bubendorf，瑞士)。另外，还利用覆盖Aβ1-28、Aβ17-40、Aβ1-40和Aβ1-42的较长的肽来界定这些抗体可能结合的边界区。这四种肽也被生物素化(由Anaspec制造，购自ANAWA Trading SA，Wangen瑞士)。根据制造商(Mimotopes)的说明书，进行表位作图。简言之，将经链亲和素包被的板(NUNC，Roskilde，丹麦)在4℃用0.1％BSA的PBS溶液封闭过夜。用PBS-0.05％吐温20洗涤后，用来自文库的不同肽(在0.1％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至10μM终浓度)在室温包被板1小时。洗涤后，板与不同抗体于室温温育1小时，其中对于ACI-24-Ab-3，在2％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至10μg/ml。再次洗涤板，并与碱性磷酸酶缀合的山羊抗小鼠IgG(Jackson Immunresearch West Grove，PA，美国)于室温温育1小时。在末次洗涤后，将板与磷酸酶底物(pNPP，Sigma-Aldrich，St Louis，MO，美国)温育，3小时温育后，利用ELISA板读取器在405nm读数。
令人惊讶地，发现ACI-24-Ab-3尽管能够抑制Aβ1-42聚集，但是不与Aβ1-42显著结合，而且也不显示出与文库中任何其它肽的任何结合。
为确定ACI-24-Ab-3是否可以识别其它Aβ肽，评价了对Aβ1-28、Aβ17-40、Aβ1-40和Aβ1-42的结合。ACI-24-Ab-3显示出对Aβ17-40无结合，对Aβ1-28和Aβ1-42无或者低结合，但显示出对Aβ1-40的显著结合。此结果表明ACI-24-Ab-3可能特异于Aβ1-40。
实施例1.12：被动接种ACI-24-Ab-3对单转基因hAPP小鼠脑中淀粉样蛋白负荷的影响
为评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体在体内结合可溶淀粉样蛋白并将其清除出脑的能力，使用性别和年龄匹配的6月龄的单hAPP小鼠进行不同剂量的被动免疫研究。在研究结束时，通过收集动物的脑并进行Aβ1-40和Aβ1-42特异性ELISA(TGC，德国)来分析可溶淀粉样蛋白负荷。
每组8-13只动物以一周的时间间隔接受两次溶于200μl PBS的100、300和1000μg单克隆抗体的注射，而仅注射PBS作为对照。在第二次注射一天后，处死动物进行可溶性淀粉样蛋白级分的生化分析。为了定量脑匀浆物的可溶级分和/或脑脊髓液(CSF)中的人Aβ1-40和人Aβ1-42的量，使用可商购的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(人淀粉样蛋白β40或β42ELISA高敏，TGC，瑞士)。根据制造商的方案进行ELISA。简言之，在无蛋白结合能力的96孔聚丙烯板(Greiner，德国)中制备标准品(合成的Aβ1-40或Aβ1-42的稀释液)和样品。在样品稀释剂(与ELISA试剂盒一起提供)中制备终浓度为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6pg/ml的标准品稀释液和样品，至60μl的终体积。由于淀粉样蛋白的水平随着小鼠的年龄而增加，而且由于实际评价要求样品的读数落在标准曲线的线性部分，因此进行Aβ40分析的样品以2∶3稀释，进行Aβ42分析的样品没有稀释。
将样品、标准品和空白(50μl)添加到经抗Aβ包被的聚苯乙烯板(俘获抗体选择性地识别抗原的C-末端)，另外添加选择性抗Aβ抗体缀合物(生物素化的检测抗体)，并在4℃温育过夜以允许形成抗体—淀粉样蛋白—抗体复合物。第二天，添加链亲和素—过氧化物酶缀合物，30分钟后添加TMB/过氧化物混合物，导致底物转变为有颜色的产物，并通过光度测定法用具有450nm滤光片的ELISA读数器测量颜色强度。通过与用合成的Aβ1-40或Aβ1-42制作的标准曲线比较吸光度而获得对样品中Aβ含量的定量。数据表达为相对于平均对照值的个体改变(相对于对照的百分比)。
实施例1.13：长期被动给药ACI-24-Ab-3对双转基因hAPPxPS1小鼠斑块负荷的影响
为评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体在体内结合并减小脑中淀粉样蛋白斑块的能力，应用性别和年龄匹配的3.5月龄的双转基因hAPPxPS1小鼠进行4个月长的长期被动免疫研究。在研究结束时，通过硫代黄素S结合由动物脑的组织化学来分析淀粉样蛋白斑块。
15只转基因动物接受16次每周一次的500μg单克隆抗体PBS溶液注射。仅用PBS注射的15只动物作为对照。所有注射均为腹膜内给予。处死时，将小鼠麻醉并用生理血清在4℃经心脏灌流以从脑血管中除去血液。随后，从颅中摘除脑，并在冠/额状面切割，分离前脑和后脑。通过使用中线矢状切，将前脑均分为左和右半球。一个半球于4％多聚甲醛中后固定过夜用于组织学。切制矢状振动切片(40μm)进行自由漂浮温育，并储存在4℃直到在PBS中用1％叠氮化钠染色。不同水平的五个切片用硫代黄素S染色致密斑(dense plaques)。使用的所有动物的切片均随机化用于染色和盲法定量。用装备有Sony DXC-9100P相机的Leica DMR显微镜获取图像，并使用Leica Q-Win软件用计算机分析。在图像获取的整个过程中，显微镜的光强度和聚光镜设置保持恒定。所有获取的图像均经过相同计算机子程序处理，以最小化研究者的偏差。在整个分析期间一致地应用密度分割阈值(density slice thresholding)。选择下托(subiculum)区域在硫代黄素S染色中进行淀粉样蛋白负荷的自动定量。
实施例1.14：被动接种ACI-24-Ab-3对单转基因hAPP小鼠记忆能力的影响
为了分析ACI-24-Ab-3抗体在体内改变或增加认知功能的能力，应用性别和年龄匹配的9月龄的单hAPP小鼠进行被动免疫研究。在免疫期结束时，通过新物体识别任务(ORT)测量非空间认知。
每组12只动物接受两次溶于200μl PBS中的400μg单克隆抗体的腹膜内注射，而仅注射PBS的作为对照。第二次注射后一天，在新物体识别任务(ORT)12，13中研究认知能力。对于ORT入选(enrollment)，将小鼠置于行为场所中10分钟并面对新的未知物体。记录探索时间。对于第二期，于三小时后，将相同的动物重新置于相同的场所中，但面对先前已探索过的旧物体以及额外的新物体。再次记录探索两个物体的时间，且认知系数计算为探索新物体的时间相对于总探索时间的比值，且表达为相对于对照的比例变化。
实施例1.15-相对于低分子量(LMW)单体，小鼠单克隆抗体优先结合Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集制备物
可以利用ELISA进行小鼠抗淀粉样蛋白β单克隆抗体对Aβ1-42肽低分子量(LMW)单体及Aβ1-42肽的高分子量初原纤维(PF)寡聚体富集制备物的结合。
利用大小排阻层析(SEC)(其应用2种SEC柱：Superdex 75HR 10/30(值阈3-70kDa)和Superose 6HR 10/30(值阈5-5,000kDa))来制备Aβ1-42肽级分，包括Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和低分子量(LMW)单体制备物。所得的洗脱物随之用乙酸双氧铀染色，并通过高分辨率透射电子显微镜检(TEM)在100kV检查，以验证洗脱的Aβ1-42级分的结构形态。
然后进行ELISA，用Aβ1-42级分以2μM过夜包被高结合测定板。包被的板随之用1.0％BSA封闭，然后自20μg/ml起加入系列稀释的ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体。还应用了系列稀释的标准抗体(6E10，Chemicon)。利用与碱性磷酸酶缀合的抗小鼠IgG抗体和4-硝基苯磷酸来检测结合。在405nm读板。所有条件一式两份测定，变异系数(CV)＜0.2。
通过ELISA测量小鼠抗Aβ抗体ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)以及对照抗体6E10的结合。表1.4和图5显示了ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体在与人Aβ1-42肽的初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和LMW单体制备物结合后的光密度(O.D.)值。表1.5和图6显示了6E10抗Aβ1-42对照抗体在与人Aβ1-42肽的初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和LMW单体制备物结合后的光密度(O.D.)值。
这些结果说明ACI-24-Ab-3单克隆抗体对具有高度有序PF/寡聚形态的Aβ1-42肽比对LMW单体肽显示出更强的结合。此外，这些结果还表明ACI-24-Ab-3与优先展示在Aβ1-42初原纤维(PF)寡聚体富集级分上的表位结合。
实施例1.16：单克隆抗体ACI-24-Ab-3对淀粉样蛋白β1-42肽的单体和寡聚体的结合
评估了抗淀粉样蛋白β抗体ACI-24-Ab-3(克隆：EJ1A9)对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。在进行研究之前，抗体于-80℃贮存。Aβ1-42肽(W.M.Keck Facility，耶鲁大学)作为冻干粉贮存直至使用当天。除非另有说明，所有其它材料购自Sigma-Aldrich(Sigma-Aldrich Chemie GmbH，Buchs，瑞士)。
为制备Aβ1-42肽的单体和寡聚体富集度提高的高分子量级分，采用大小排阻层析(SEC)，应用改进的方法。利用两种SEC柱：Supelco TSKG4000PW-XL(值阈：10-1500kDa；Sigma)和Superose 6HR 10/30(值阈5-5,000kDa；GE Healthcare Bio-Sciences AB Uppsala，瑞典)来制备富含LMW单体和高分子量寡聚体级分的Aβ1-42肽级分。所得的SEC洗脱物随之用乙酸双氧铀染色，并通过高分辨率透射电子显微镜检(TEM)在100kV检查，以验证Aβ1-42级分的结构形态(未显示)。为研究抗体对Aβ1-42级分的结合，进行了ELISA。用Aβ1-42级分以2.2μM的PBS溶液包被高结合测定板2小时。包被的板随之用0.05％吐温20的PBS溶液洗涤5次，并用1.0％BSA封闭。自所示浓度起，添加系列稀释的抗Aβ抗体，包括对照抗体(6E10)。利用与碱性磷酸酶缀合的抗小鼠IgG抗体(JacksonImmunoResearch，Suffolk，英国)和4-硝基苯磷酸来检测结合。在室温温育14小时之后，于405nm读板。试验重复三次。图7显示了从三次独立的ELISA试验获得的平均(±SEM)光密度(O.D.)值。与不富含寡聚体而主要由Aβ1-42单体组成的级分相比，抗体ACI-24-Ab-3展现出对富含寡聚体的Aβ1-42制备物更优的结合(图7A)。相比之下，对照抗体6E10对两种Aβ1-42级分等同地良好结合。表1.6和1.7显示了分别在ELISA试验1、2和3中针对抗体ACI-24-Ab-3和6E10获得的O.D.值。
这些结果说明抗体ACI-24-Ab-3(克隆：EJ1A9)对Aβ1-42寡聚体富集制备物比对Aβ1-42单体制备物显示出更优的结合亲和力。
实施例1.17：单克隆抗体ACI-24-Ab-3对培养的视网膜神经节细胞(RGC)程序性细胞死亡的影响
为了评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体在体外降低与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关的视网膜神经节细胞(RGC)死亡的能力，使用来自大鼠和小鼠的培养的RGC。
为了分离细胞，处死时将动物麻醉，取出其眼睛，切开视网膜，并在37℃下2mg/ml木瓜蛋白酶溶液中温育25分钟来破碎细胞外基质。在处理结束时，在蛋白酶抑制剂存在下用RCG培养基洗涤细胞三次来终止木瓜蛋白酶作用。然后通过将其快速上下通过巴斯德吸管研磨组织，直至将细胞分散开。使用市售Coulter计数器来测定细胞悬浮液中的细胞密度，然后在37℃下95％空气/5％CO2中培养细胞。
为了模拟来自与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病的损伤，并评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体的预防性效果，将细胞与L-谷氨酸在存在或不存在ACI-24-Ab-3单克隆抗体的情况下温育3天。仅在缓冲液中培养的细胞作为对照。
为了测定RGC存活，在温育时期结束时，在室温下用磷酸缓冲盐水(PBS)中的3.7％甲醛固定细胞30分钟，在PBS中冲洗三次，并在含RGC特异性标记Thy1.1或NF-L抗体的PBS中温育1小时。然后通过冲洗去除抗体并且所述细胞与荧光标记的二级抗体山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG或兔抗山羊IgG温育30分钟。在温育结束时，洗涤细胞，用DAPI溶液染色5分钟并冲洗。通过荧光显微术计数存活的RGC并将与ACI-24-Ab-3单克隆抗体温育后存在的细胞数目与对照比较。
实施例1.18：单克隆抗体ACI-24-Ab-3对体内视网膜神经节细胞(RGC)程序性细胞死亡的影响
为了评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体在体内降低受与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病影响的个体中视网膜神经节细胞(RGC)死亡的能力，大鼠和小鼠用于2到16周的诱导眼内压(IOP)研究。在研究结束时通过体内成像和组织学终点分析测定视网膜神经节细胞死亡。
为了模拟与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病，特别是青光眼相关的眼内压的升高，首先用腹膜内氯胺酮(75mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)以及局部丙对卡因1％滴眼剂麻醉动物。然后可使用两种备选方法来人为升高大鼠和小鼠的一只眼(单侧)中的IOP。在第一种方法中，麻醉的动物接受印度墨汁注射到前房中，然后在小梁网中用垂直于小梁并平行于虹膜的裂隙灯中的532-nm二极管激光进行染料的激光诱导的光凝固。动物接受50μm大小，0.4W和0.6秒持续时间的40到50点的初始处理。在人为提高IOP的第二种方法中，使用具有刚刚足以漂白静脉的压力的显微操作针使麻醉的动物接受50μl高渗盐溶液注射到一只眼内巩膜外静脉中。
为了测定IOP，使用市售手提式眼压计(TonoLab)。在激光处理前即刻，处理后1、4和7天，然后在实验持续过程中每周在动物麻醉状态下进行测定作为12次读数的平均值。如果在一周间隔时，动物两只眼睛之间IOP的差异低于6mm Hg，那么在研究中不再包括该动物。
为了评估ACI-24-Ab-3单克隆抗体对RGC程序性死亡的影响，接受IOP诱导处理的一半动物在IOP升高时接受ACI-24-Ab-3单克隆抗体的玻璃体内或静脉内注射。一半动物用作对照。将具有IOP升高的眼的整个视网膜中功能性RGC成像并计数，然后与同一动物对侧眼中存在的数目比较。两只眼睛之间RGC数目的差异代表在外科手术眼中因IOP升高已经丧失的细胞。这些差异值中变化的分析帮助鉴定由ACI-24-Ab-3单克隆抗体引发的保护性效果。
通过在IOP诱导升高后2、4、8和16周的组织学终点分析测定RGC的数目。将动物的视网膜在4％低聚甲醛中固定并使用RGC特异性标记物Brn3b在切片中或全标本包埋染色。大量研究已证实Brn3b染色的丧失与RGC中功能的丧失相关联。为了证实组织学RGC标记的准确性，该方法可与在动物亚群中用DiASP或荧光金对来自SCN的视神经的反标记(backlabeling)相结合，以鉴定保持完整的功能轴突的RCG，其没有失去与脑中靶标的连接性。
在第二个终点，也测定在眼睛亚群中RGC的程序性细胞死亡。在处死动物前1小时，荧光标记的锚定蛋白V用于通过玻璃体内注射蛋白质来标记凋亡细胞。如上制备视网膜并且锚定蛋白V的成像与组织学终点的成像结合进行。
实施例2：通过用聚乙二醇化超分子抗原构建体免疫生成的抗体
实施例2.1：制备超分子抗原构建体的方法
2.1.1聚乙二醇化β-淀粉样蛋白肽抗原的合成
为了增强免疫反应，应用锚/间隔基以在脂质体中重构肽，例如聚乙二醇(PEG)。PEG共价地连接于结合在肽两末端的赖氨酸残基上。在链(PEGn＝70)的另一末端，共价地结合磷脂酰乙醇胺(PEA)以作为脂质体双层中的锚定元件。因此，脂质体仍起佐剂的作用，而离双层足够远的肽可被单独加工，故而与棕榈酰化抗原相比增加了其免疫原性。
利用标准的Fmoc/tBu氨基酸侧链保护，独特地合成本文所述的超分子构建体。一般地，肽的聚乙二醇化产生区域异构体的混合物。在此阐述了用部分保护的肽使PEG—脂质缀合物与Aβ的C-和N-两末端进行位点特异性连接的便利方法。
对于那些含有内部Lys或His残基的肽序列(22-35)，将正交保护的Lys(ivDde)添加到每一末端。将额外的Gly添加到C-末端以促进合成。用20％哌啶的DMF溶液移除Fmoc基团，并用乙酸酐进行N-乙酰化。用3％水合肼的DMF溶液历时一小时完成ivDde基团的选择性切除。2-氯三苯甲基树脂比更广泛应用的王氏树脂更优选，因为已证实前者对肼解作用更具抗性。此外，与王氏树脂不同，2-氯三苯甲基树脂是极其酸敏感的，故而使得能够分离受保护的肽。实际上，有必要在液相中进行偶联反应，因为结合在树脂上的肽与预活化的聚乙二醇化脂质试剂DSPE-PEG-SPA的偶联得不到任何偶联产物。这样，在温和条件下(乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷，1∶1∶8，1小时，室温)从树脂上选择性断裂而产生了内部受保护的肽。
在DMSO和过量的碱中，成功地实现了分别衍生自序列Aβ22-35和Aβ29-40的肽与DSPE-PEG-SPA的液相偶联。然后通过加入过量的乙醇胺历时2小时淬灭反应，并冻干溶液。
对于序列29-40，不需要特别的保护策略。
通过HPLC(半制备性反相C4柱)纯化得到了50-70％纯度的N-和C-末端PEG—脂质缀合物，其身份通过MALDI(基质辅助激光解吸电离)证实。每一序列在偶联反应的容易度上显示出相当大的差异，故相应地调整条件(温度、DSPE-PEG-SPA摩尔当量数、时间)。为从期望产物中分离过量的DSPE-PEG-SPA，应用HPLC纯化。在最终侧链去保护之前的单偶联产物与双偶联产物的分离，可通过应用阳离子交换层析实现。随后肽侧链去保护和分离过量淬灭的DSPE-PEG-SPA，导致分离到具有可接受纯度的期望缀合物。
这种应用保护的肽合成N-和C-末端脂质-PEGβ淀粉样蛋白抗原的方法适用于多种肽序列。
实施例2.2：超分子抗原构建体引起的抗体
制备针对聚乙二醇化Aβ22-35和Aβ29-40超分子抗原构建体产生的mAb
如(Nicolau等人，2002，PNAS，99，2332-37)所描述的那样制备脂质体抗原。在含单磷酰脂质A(40mg/mM磷脂)的由双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、双肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇(0.9∶0.1∶0.1∶0.7摩尔比)制成的脂质体构建物中重构序列PEG-Aβ22-35和-Aβ29-40。用这些抗原以两周的时间间隔对C57BL/6小鼠进行免疫。用每种抗原免疫10-12只动物。在加强免疫3至6次后，选择具有治疗滴度的小鼠(血清1∶5,000稀释时为ELISA阳性)进行融合。从免疫动物中收集脾细胞，并通过使致敏的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合，生成杂交瘤。应用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory，New York 1988))的方法，进行来自脾脏的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞系SP2-0(ATCC，Manassas，VA)细胞的融合。
通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。所得的杂交细胞随之以常规方式克隆，例如应用有限稀释法。选择产生IgG的杂交瘤克隆并通过ELISA测试其与Aβ1-42肽的特异性结合，培养所得的生产期望单克隆抗体的克隆。
这样获得的杂交瘤通过将细胞铺板到含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的选择培养基中进行化学选择。
随后依据产生抗特定淀粉样蛋白相关疾病或紊乱的单克隆抗体的能力，对杂交瘤进行筛选。克隆产生目的抗体的杂交瘤，扩增，并冷冻保藏用于进一步的生产。优选的杂交瘤生产具有IgG同种型的单克隆抗体。
实施例2.3：抗体ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11的特异性测定
为分析抗体ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11的特异性，将不同浓度的预形成的淀粉样蛋白1-42、1-40和17-40、1-28原纤维点样到Hybond ECL硝酸纤维素膜(Amersham Biosciences)上。在用10％奶粉和0.7％吐温20封闭后，将膜与20μg/ml一抗在室温温育2小时。洗涤后，膜与辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗小鼠IgG抗体(Amersham Biosciences)在室温温育1小时，洗涤并与化学发光溶液一起温育，随后使膜曝光于X光胶片。
为测量mAb ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11与淀粉样蛋白β1-42、1-40和17-40、1-28的结合，在37℃历时七天预形成纤维，并将其点样在膜上。使用20μg/ml的抗体测量结合能力，并通过接触辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗小鼠IgG抗体20分钟来检测结合的抗体。
实施例2.4：硫代黄素T(Th-T)荧光测定法
为测量mAb的聚集抑制和解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测定法，其特异性结合原纤维Aβ1-42分子，且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关。
将Aβ1-42冻干粉末在六氟异丙醇(HFIP)中重构至1mM。室温超声处理肽溶液15分钟，搅拌过夜，将等分试样装入未硅化的微型离心管中。然后在氩气流下蒸发HFIP。所得的肽膜真空干燥10分钟，并储藏于-80℃备用。
2.4.1 Aβ1-42聚集测定
为测定抗体介导的对Aβ1-42聚集的抑制，将抗体于PBS中预稀释，并在未硅化的温育管中制备含有如下成分的测定溶液：3.3或0.33μM预稀释的抗体、10μM硫代黄素T、33μM Aβ1-42和8.2％DMSO。因此，抗体对Aβ1-42的最终摩尔比是1∶10和1∶100。还制备了适当的对照溶液。然后溶液在37℃温育24小时，并在Perkin-Elmer FluoroCount分光荧光计上在黑色348孔板(Perkin-Elmer)中以一式六个重复读出分光荧光(相对荧光单位；RFU)。与对照相比，根据如下方程式将聚集抑制或解聚分别表达为平均％抑制或解聚：
％抑制＝(阳性对照的RFU-阴性对照的RFU)-(有Aβ 1-42 的样品的 RFU-无Aβ 1-42 的样品的RFU)×100％
(阳性对照的RFU-阴性对照的RFU)
与对照相比，抗体ACI-11-Ab-9显示出对Aβ1-42聚集的显著抑制。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，抑制平均为34％(3次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，抑制是69％(2次独立实验)。
与对照相比，抗体ACI-12-Ab-11也显示出对Aβ1-42聚集的显著抑制。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，抑制平均为30％(2次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，抑制是66％(2次独立实验)。
2.4.2Aβ1-42的解聚测定
为测量mAb的解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测定法，其特异性结合原纤维Aβ1-42分子，且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关。
为测定抗体介导的预聚集的Aβ1-42的解聚，将如上文所述制备的低分子量Aβ1-42配制为在27％DMSO和1×PBS中的110μM溶液。然后使该溶液在37℃聚集24小时，其后加入如下物质：3.3或0.33μM预稀释的抗体和10μM硫代黄素T。这产生1∶10和1∶100的抗体对Aβ1-42摩尔比，含8.2％DMSO。然后该溶液在37℃再温育24小时。然后测量分光荧光并如上文所述计算％解聚。
在解聚测定中，抗体ACI-11-Ab-9显示出对预聚集的Aβ1-42显著的解聚作用。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，解聚平均为22％(3次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，解聚是52％(3次独立实验)。
在解聚测定中，抗体ACI-12-Ab-11也显示出对预聚集的Aβ1-42显著的解聚作用。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，解聚平均为18％(2次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，解聚是54％(2次独立实验)。
根据上述结果，显然抗体ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11在与Aβ1-42纤丝的相互作用中呈现出双功能性，即，两种抗体均能够抑制Aβ1-42的聚集并解聚预形成的Aβ1-42纤维。
实施例2.5：ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11的相互作用
应用表面等离子共振研究了抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11与淀粉样蛋白肽Aβ1-42之间的相互作用。确定所述小鼠抗体与Aβ1-42的单体或纤维的结合。
所有的SPR实验都在Biacore X仪器(Biacore AB)上进行。用于固定的试剂(EDC、NHS和乙醇胺)、感应芯片CM5和SA以及跑样缓冲液和样品缓冲液HBS-EP均购自Biacore AB。使用乙酸钠(10mM，pH 5.0)作为偶联缓冲液以增加偶联产率。通过向Aβ1-42中添加PBS缓冲液至3mg/ml的终浓度并将小瓶置于37℃历时7天来制备原纤维Aβ1-42(BAchem)。将原纤维Aβ1-42偶联到含表面结合的羧甲基葡聚糖基质的CM5感应芯片上。将生物素化的单体Aβ1-42(Bachem)偶联到由共价连接链亲和素的羧甲基葡聚糖基质组成的感应芯片SA上。一般通过用跑样缓冲液进行系列稀释来测定四至五个浓度的mAb。从最低的浓度开始进行注射，并以30μL/分钟的流速历时3分钟流经fc 1和2。流通池(flow cell)2未被衍生化，并从fc 1中扣除响应值，以校正仪器噪音和总体折射率变化。完成注射后，立即用跑样缓冲液洗涤表面5分钟。为从Aβ1-42原纤维中除去剩余的结合抗体，通过注射10mM NaOH脉冲进行表面再生。利用数值积分和整体分析算法，使用BIAevaluation 3.0进行动力学分析。将注射不同浓度分析物获得的曲线重合(overlay)，并将基线调整至零。对于曲线拟合，同时将所有数据拟合成1:1同质复合。
确定了该小鼠ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11抗体与淀粉样蛋白的结合。
实施例2.6：ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11单克隆抗体对淀粉样蛋白纤维的结合
为分析预形成纤维上抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11的分子结合部位，进行了负相差透射电子显微镜检(TEM)。
根据Slot JW，Geuze HJ(1985)，使抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11与8nm胶体金偶联。对于淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)纤维的共温育，将6.65μM纤维与金标记的抗体以1∶100的摩尔比在室温温育24小时。随后将5μl样品在用派罗啶(parlodium)/C薄膜覆盖的新鲜辉光放电Cu栅网(200目)上温育45秒，用水洗涤3次，并用2％新鲜经稀释并过滤的乙酸双氧铀洗涤1次。使样品在2％乙酸双氧铀中染色15-20秒。吸去栅网上过量的染色剂，从而风干。制备了每个样品的3个栅网。在透射电子显微镜Hitachi7000中分析栅网。
实施例2.7：通过密度梯度超速离心的分级分离
通过密度梯度超速离心(Rzepecki等人，2004)，基于该原理分配在与和不与抗体温育之后得到的大小不同的肽纤维，随后在预形成的梯度(OptiPrepTM)上进行SDS-PAGE沉降分析，研究单克隆抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11抑制Aβ1-42纤维聚合和解聚Aβ1-42纤维的特性。这种方法明显的优点在于同时分析预形成的Aβ纤维群、共温育抗体的解聚和聚集抑制性质、以及抗体与纤维的结合。
对于Aβ1-42聚集的抑制，使Aβ1-42单体分别与mAb ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11以两个不同的摩尔比(单体Aβ1-42比mAb高三十或一百倍的摩尔比)温育，其中Aβ终浓度50μM。在37℃温育24小时后，将样片铺放在OptiprepTM的不连续梯度上，并在4℃以259000g使管旋转离心3小时。收集了15个级分(各140μL)，级分1是来自梯度顶端的密度最小的级分，而级分15是来自梯度底端的密度最大的级分。也采集了沉淀物。通过SDS-PAGE利用银染分析了收集的级分。用于抑制测定的Aβ1-42的浓度比用于解聚测定的Aβ1-42的浓度低五倍，这降低了淀粉样蛋白的聚集动力学并确保在线性相范围内测量。
对于与mAb ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11共温育(mAb+单体Aβ1-42，1∶30和1∶100的两个不同的摩尔比，Aβ的终浓度是246μM)的预形成Aβ1-42原纤维的解聚，样品在37℃温育24小时。24小时后，通过超速离心对样品进行分级，并如上文和之前(Rzepecki等人，2004)所述通过SDS-PAGE进行分离。
实施例2.8：通过荧光测定法评估分别与mAb ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11共温育对Aβ1-42纤丝聚集的抑制和对预形成的Aβ1-42纤丝的解聚
BIS-ANS荧光测定法
为评估mAb的抑制特性，应用了BIS-ANS(LeVine，2002)荧光测定法，其特异地检测Aβ1-42纤丝中的单体或非纤丝群体。在荧光测量前，使Aβ1-42单体与缓冲液(作为对照)或mAb ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11(mAb与Aβ1-42肽的摩尔比1∶100)在37℃预温育14小时。自动记录相对荧光单位，且结果表达为相对于对照的变化百分比。
实施例2.9：ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11单克隆抗体与13C标记的β淀粉样蛋白1-42肽相互作用的NMR和荧光表征
为评价mAb溶解预形成纤维或抑制纤维形成的潜在机制，进行了U-13C Tyr10和Val12标记的β淀粉样蛋白1-42肽的Th-T荧光测定和固态NMR之间的头对头实验。因此，此研究的目的是通过固态NMR光谱法跟踪在单克隆抗体存在下β淀粉样蛋白肽中的β折叠转变，并直接将这与通过Th-T荧光测定法测得的解聚能力比较。
固态NMR光谱法不仅检测二级结构的转变，而且也能定位Aβ1-42肽中支配结构转变的结构域。固态NMR已证明它对于该问题的适用性，因为它已经帮助Aβ1-42纤维的结构测定(Petkova等人，2004，Petkova等人，2002)。特别地，13Cα和13Cβ的化学位移与二级结构之间的相关性(Cornilescu等人，1999，Luca等人，2001，Iwadate等人，1999)是检验肽内二级结构变化的有价值的工具。
通过Fmoc合成方案进行包括在12位13C预标记的缬氨酸(12Val)和在10位13C预标记的酪氨酸(10Tyr)的标记的肽的合成。通过MALDI质谱分析证实肽的身份和纯度。使用标记的β淀粉样蛋白肽(1-42)通过在PBS缓冲液中在37℃温育肽溶液1周生成纤维。主要问题，即淀粉样蛋白β肽在PBS缓冲液中较差的溶解性，可以通过以下方式解决：通过微量氨使PBS缓冲液的pH值暂时升高以溶解淀粉样蛋白β肽。利用氨挥发的性质，通过在更大PBS浴存在下温育样品以重新获得PBS缓冲液的初始pH值。
为测量β折叠破坏性抗体的作用，将纤维溶液与抗体在37℃温育24小时，进行NMR和Th-T测定。为实时比较，利用相同溶液的等分试样进行Th-T荧光测定，并冻干剩余溶液进行NMR测量。
利用Th-T荧光测定法通过与预形成的13C标记的淀粉样蛋白β纤维共温育来分析ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11的解聚能力。
为研究PBS(对照)与mAb温育之间的差异，利用PeakFit(www.systat.com/-products/PeakFit)解卷积每一光谱。采用混合Lorentzian/Gaussian拟合程序，使曲线良好匹配。
实施例2.10：ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11对淀粉样蛋白纤维的功能性
12.1在结合ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11抗体后Aβ1-42纤维的构象改变和解聚引发
为评价抗体能够解聚预形成的β淀粉样蛋白(Aβ1-42)纤维的机制，进行了分析二级构象的U-13C酪氨酸10和缬氨酸12标记的Aβ1-42肽的固态核磁共振(NMR)和测量解聚的硫代黄素T(Th-T)荧光测定的头对头比较。
实施例2.11：单克隆抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11的表位作图
使用肽文库通过ELISA进行单克隆抗体ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11的表位作图，该文库包含覆盖Aβ1-42全长氨基酸(aa)序列的总共33个生物素化的肽(由Mimotopes，Clayton Victoria，澳大利亚制造，购自ANAWA Trading SA，Wangen瑞士)。肽文库中的肽由八肽、九肽或十肽组成。应用生物素化的全长Aβ1-42肽(人序列)作为阳性对照(Bachem，Bubendorf，瑞士)。另外，还利用覆盖Aβ1-28、Aβ17-40、Aβ1-40和Aβ1-42的较长的肽来界定这些抗体可能结合的边界区。这四种肽也被生物素化(由Anaspec制造，购自ANAWA Trading SA，Wangen瑞士)。根据制造商(Mimotopes)的说明进行表位作图。简言之，将经链亲和素包被的板(NUNC，Roskilde，丹麦)在4℃用0.1％BSA的PBS溶液封闭过夜。用PBS-0.05％吐温20洗涤后，用来自文库、在0.1％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至10μM终浓度的不同肽在室温包被板1小时。洗涤后，板与不同抗体于室温温育1小时，对于ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11抗体，在2％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至10μg/ml。再次洗涤板，并与碱性磷酸酶缀合的山羊抗小鼠IgG(Jackson Immunresearch West Grove，PA，美国)于室温温育1小时。在末次洗涤后，将板与磷酸酶底物(pNPP，Sigma-Aldrich，St Louis，MO，美国)温育，3小时温育后，利用ELISA板读取器在405nm读数。
ACI-11-Ab-9显示出对Aβ1-42的显著结合，但是不能结合肽文库中的任何短肽。因此得出结论：该抗体需要8个以上的氨基酸以结合表位和/或ACI-11-Ab-9可能识别仅存在于全长Aβ1-42上的构象表位。
ACI-12-Ab-11也显示出对Aβ1-42的显著结合，但与ACI-11-Ab-9类似，ACI-12-Ab-11并不结合肽文库中的任何短肽。
为确定ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11是否可以识别其它Aβ肽，评价了对Aβ1-28、Aβ17-40和Aβ1-40及Aβ1-42的结合。
ACI-11-Ab-9显示出对Aβ1-28、Aβ1-40和Aβ1-42相当程度的结合，但不显示出对Aβ17-40的任何结合。
综上所述，这些结果表明ACI-11-Ab-9的表位位于Aβ的1-28区域，且该表位长于8个氨基酸和/或对Aβ的结合依赖于Aβ的构象。
ACI-12-Ab-11显示出对Aβ1-40和Aβ1-42的显著结合，但不显示出对Aβ1-28或Aβ17-40的任何结合。因此，ACI-12-Ab-11只能结合全长Aβ1-40和Aβ1-42，而不结合任何更短的Aβ肽。这些结果表明ACI-12-Ab-11识别的表位依赖于Aβ的构象，因为即便是24-或28-mer的Aβ也不足以使抗体结合。
实施例2.12：被动接种ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11对单转基因hAPP小鼠脑中淀粉样蛋白负荷的影响
为评估ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11单克隆抗体在体内结合可溶淀粉样蛋白并将其清除出脑的能力，使用性别和年龄匹配的6月龄的单hAPP小鼠进行不同剂量的被动免疫研究。在研究结束时，通过收集动物的脑并进行Aβ1-40和Aβ1-42特异性ELISA(TGC，德国)来分析可溶淀粉样蛋白负荷。
每组8-13只动物以一周的时间间隔接受两次溶于200μl PBS的100、300和1000μg单克隆抗体的注射，而仅注射PBS作为对照。在第二次注射一天后，处死动物进行可溶性淀粉样蛋白级分的生化分析。为了定量脑匀浆物的可溶级分和/或脑脊髓液(CSF)中的人Aβ1-40和人Aβ1-42的量，使用可商购的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(人淀粉样蛋白β40或β42ELISA高敏，TGC，瑞士)。根据制造商的方案进行ELISA。简言之，在无蛋白结合能力的96孔聚丙烯板(Greiner，德国)中制备标准品(合成的Aβ1-40或Aβ1-42的稀释液)和样品。在样品稀释剂(与ELISA试剂盒一起提供)中制备终浓度为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6pg/ml的标准品稀释液和样品，至60μl的终体积。由于淀粉样蛋白的水平随着小鼠的年龄而增加，而且由于实际评价要求样品的读数落在标准曲线的线性部分，因此进行Aβ40分析的样品以2∶3稀释，进行Aβ42分析的样品没有稀释。
将样品、标准品和空白(50μl)添加到经抗Aβ包被的聚苯乙烯板(俘获抗体选择性地识别抗原的C-末端)，另外添加选择性抗Aβ抗体缀合物(生物素化的检测抗体)，并在4℃温育过夜以允许形成抗体—淀粉样蛋白—抗体复合物。第二天，添加链亲和素—过氧化物酶缀合物，30分钟后添加TMB/过氧化物混合物，导致底物转变为有颜色的产物，并通过光度测定法用具有450nm滤光片的ELISA读数器测量颜色强度。通过与用合成的Aβ1-40或Aβ1-42制作的标准曲线比较吸光度而获得对样品中Aβ含量的定量。数据表达为相对于平均对照值的个体改变(相对于对照的百分比)。
实施例2.13：长期被动给药ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11对双转基因hAPPxPS1小鼠斑块负荷的影响
为评估ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11单克隆抗体在体内结合并减小脑中淀粉样蛋白斑块的能力，应用性别和年龄匹配的3.5月龄的双转基因hAPPxPS1小鼠进行4个月长的长期被动免疫研究。在研究结束时，通过硫代黄素S结合由动物脑的组织化学来分析淀粉样蛋白斑块。
15只转基因动物接受16次每周一次的500μg单克隆抗体PBS溶液注射。仅用PBS注射的15只动物作为对照。所有注射均为腹膜内给予。处死时，将小鼠麻醉并用生理血清在4℃经心脏灌流以从脑血管中除去血液。随后，从颅中摘除脑，并在冠/额状面切割，分离前脑和后脑。通过使用中线矢状切，将前脑均分为左和右半球。一个半球于4％多聚甲醛中后固定过夜用于组织学。切制矢状振动切片(40μm)进行自由漂浮温育，并储存在4℃直到在PBS中用1％叠氮化钠染色。不同水平的五个切片用硫代黄素S染色致密斑(dense plaques)。使用的所有动物的切片均随机化用于染色和盲法定量。用装备有Sony DXC-9100P相机的Leica DMR显微镜获取图像，并使用Leica Q-Win软件用计算机分析。在图像获取的整个过程中，显微镜的光强度和聚光镜设置保持恒定。所有获取的图像均经过相同计算机子程序处理，以最小化研究者的偏差。在整个分析期间一致地应用密度分割阈值(density slice thresholding)。选择下托(subiculum)区域在硫代黄素S染色中进行淀粉样蛋白负荷的自动定量。
实施例2.14：被动接种ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11对单转基因hAPP小鼠记忆能力的影响
为了分析ACI-11-Ab-9及ACI-12-Ab-11抗体在体内改变或增加认知功能的能力，应用性别和年龄匹配的9月龄的单hAPP小鼠进行被动免疫研究。在免疫期结束时，通过新物体识别任务(ORT)测量非空间认知。
每组12只动物接受两次溶于200μl PBS中的400μg单克隆抗体的腹膜内注射，而仅注射PBS的作为对照。第二次注射后一天，在新物体识别任务(ORT)12，13中研究认知能力。对于ORT入选(enrollment)，将小鼠置于行为场所中10分钟并面对新的未知物体。记录探索时间。对于第二期，于三小时后，将相同的动物重新置于相同的场所中，但面对先前已探索过的旧物体以及额外的新物体。再次记录探索两个物体的时间，且认知系数计算为探索新物体的时间相对于总探索时间的比值，且表达为相对于对照的比例变化。
实施例2.15-相对于低分子量(LMW)单体，小鼠单克隆抗体优先结合Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集级分
可以利用ELISA进行小鼠抗淀粉样蛋白β单克隆抗体对Aβ1-42肽低分子量(LMW)单体及Aβ1-42肽的高分子量初原纤维(PF)寡聚体富集制备物的结合。
利用大小排阻层析(SEC)(其应用2种SEC柱：Superdex 75HR 10/30(值阈3-70kDa)和Superose 6HR 10/30(值阈5-5,000kDa))来制备Aβ1-42肽级分，包括Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维(PF)寡聚体富集制备物和低分子量(LMW)单体制备物。所得的洗脱物随之用乙酸双氧铀染色，并通过高分辨率透射电子显微镜检(TEM)在100kV检查，以验证洗脱的Aβ1-42级分的结构形态。
然后进行ELISA，用Aβ1-42级分以2μM过夜包被高结合测定板。包被的板随之用1.0％BSA封闭，然后自20μg/ml起加入系列稀释的ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体。还应用了系列稀释的标准抗体(6E10，Chemicon)。利用与碱性磷酸酶缀合的抗小鼠IgG抗体和4-硝基苯磷酸来检测结合。在405nm读板。所有条件一式两份测定，变异系数(CV)＜0.2。
实施例2.16-ACI-12-Ab-11单克隆抗体(克隆FK2A6A6)对Aβ1-42肽的单体及寡聚体富集级分的结合
评估了抗Aβ后继抗体ACI-12-Ab-11(克隆：FK2A6A6)对Aβ1-42肽的单体和寡聚体的结合。在进行研究之前，抗体于-80℃贮存。Aβ1-42肽(W.M.Keck Facility，耶鲁大学)作为冻干粉贮存直至使用当天。除非另有说明，所有其它材料购自Sigma-Aldrich(Sigma-Aldrich Chemie GmbH，Buchs，瑞士)。
为制备Aβ1-42肽的单体和寡聚体富集度提高的高分子量级分，采用大小排阻层析(SEC)，应用改进的方法。利用两种SEC柱：Supelco TSKG4000PW-XL(值阈：10-1500kDa；Sigma)和Superose 6HR 10/30(值阈5-5,000kDa；GE Healthcare Bio-Sciences AB Uppsala，瑞典)来制备富含LMW单体和高分子量寡聚体级分的Aβ1-42肽级分。所得的SEC洗脱物随之用乙酸双氧铀染色，并通过高分辨率透射电子显微镜检(TEM)在100kV检查，以验证Aβ1-42级分的结构形态(未显示)。为研究抗体对Aβ1-42级分的结合，进行了ELISA。用Aβ1-42级分以2.2μM的PBS溶液包被高结合测定板2小时。包被的板随之用0.05％吐温20的PBS溶液洗涤5次，并用1.0％BSA封闭。自所示浓度起，添加系列稀释的抗Aβ抗体，包括对照抗体(6E10)。利用与碱性磷酸酶缀合的抗小鼠IgG抗体(JacksonImmunoResearch，Suffolk，英国)和4-硝基苯磷酸来检测结合。在室温温育14小时之后，于405nm读板。试验重复三次。
图16显示了从三次独立的ELISA试验获得的平均(±SEM)光密度(O.D.)值。与不富含寡聚体而主要由Aβ1-42单体组成的级分相比，抗体ACI-12-Ab-11展现出对富含寡聚体的Aβ1-42级分更优的结合(图16A)。相比之下，对照抗体6E10对两种Aβ1-42级分等同地良好结合(图16B)。表2.4和2.5显示了分别在ELISA试验1、2和3中针对ACI-12-Ab-11和6E10获得的O.D.值。
这些结果说明抗体ACI-12-Ab-11(克隆：FK2A6A6)对Aβ1-42的寡聚体富集级分比对单体Aβ1-42显示出更优的结合亲和力。
实施例2.17：ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11对培养的视网膜神经节细胞(RGC)程序性细胞死亡的影响
为了评估ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11单克隆抗体在体外降低与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化相关的眼病，如神经元退化相关的视网膜神经节细胞(RGC)死亡的能力，使用来自大鼠和小鼠的培养的RGC。
为了分离细胞，处死时将动物麻醉，取出其眼睛，切开视网膜，并在37℃下2mg/ml木瓜蛋白酶溶液中温育25分钟来破碎细胞外基质。在处理结束时，在蛋白酶抑制剂存在下用RCG培养基洗涤细胞三次来终止木瓜蛋白酶作用。然后通过将其快速上下通过巴斯德吸管研磨组织，直至将细胞分散开。使用市售Coulter计数器来测定细胞悬浮液中的细胞密度，然后在37℃下95％空气/5％CO2中培养细胞。
为了模拟来自与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病的损伤，并评估ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11单克隆抗体的预防性效果，将细胞与L-谷氨酸在存在或不存在ACI-11-Ab-9或ACI-12-Ab-11单克隆抗体的情况下温育3天。仅在缓冲液中培养的细胞作为对照。
为了测定RGC存活，在温育时期结束时，在室温下用磷酸缓冲盐水(PBS)中的3.7％甲醛固定细胞30分钟，在PBS中冲洗三次，并在含RGC特异性标记Thy1.1或NF-L抗体的PBS中温育1小时。然后通过冲洗去除抗体并且所述细胞与荧光标记的二级抗体山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG或兔抗山羊IgG温育30分钟。在温育结束时，洗涤细胞，用DAPI溶液染色5分钟并冲洗。通过荧光显微术计数存活的RGC并将与ACI-11-Ab-9或ACI-12-Ab-11单克隆抗体温育后存在的细胞数目与对照比较。
实施例2.18：ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11在体内对视网膜神经节细胞(RGC)程序性细胞死亡的影响
为了评估ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11单克隆抗体在体内降低受与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病影响的个体中视网膜神经节细胞(RGC)死亡的能力，大鼠和小鼠用于2到16周的诱导眼内压(IOP)研究。在研究结束时通过体内成像和组织学终点分析测定视网膜神经节细胞死亡。
为了模拟与视觉系统组织中病理学异常/变化，特别是与视觉系统组织中淀粉样蛋白β相关病理学异常/变化，如神经元退化相关的眼病，特别是青光眼相关的眼内压的升高，首先用腹膜内氯胺酮(75mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)以及局部丙对卡因1％滴眼剂麻醉动物。然后可使用两种备选方法来人为升高大鼠和小鼠的一只眼(单侧)中的IOP。在第一种方法中，麻醉的动物接受印度墨汁注射到前房中，然后在小梁网中用垂直于小梁并平行于虹膜的裂隙灯中的532-nm二极管激光进行染料的激光诱导的光凝固。动物接受50μm大小，0.4W和0.6秒持续时间的40到50点的初始处理。在人为提高IOP的第二种方法中，使用具有刚刚足以漂白静脉的压力的显微操作针使麻醉的动物接受50μl高渗盐溶液注射到一只眼内巩膜外静脉中。
为了测定IOP，使用市售手提式眼压计(TonoLab)。在激光处理前即刻，处理后1、4和7天，然后在实验持续过程中每周在动物麻醉状态下进行测定作为12次读数的平均值。如果在一周间隔时，动物两只眼睛之间IOP的差异低于6mm Hg，那么在研究中不再包括该动物。
为了评估ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11单克隆抗体对RGC程序性死亡的影响，接受IOP诱导处理的一半动物在IOP升高时接受ACI-11-Ab-9或ACI-12-Ab-11单克隆抗体的玻璃体内或静脉内注射。一半动物用作对照。将具有IOP升高的眼的整个视网膜中功能性RGC成像并计数，然后与同一动物对侧眼中存在的数目比较。两只眼睛之间RGC数目的差异代表在外科手术眼中因IOP升高已经丧失的细胞。这些差异值中变化的分析帮助鉴定由ACI-11-Ab-9或ACI-12-Ab-11单克隆抗体引发的保护性效果。
通过在IOP诱导升高后2、4、8和16周的组织学终点分析测定RGC的数目。将动物的视网膜在4％低聚甲醛中固定并使用RGC特异性标记物Brn3b在切片中或全标本包埋染色。大量研究已证实Brn3b染色的丧失与RGC中功能的丧失相关联。为了证实组织学RGC标记的准确性，该方法可与在动物亚群中用DiASP或荧光金对来自SCN的视神经的反标记(backlabeling)相结合，以鉴定保持完整的功能轴突的RCG，其没有失去与脑中靶标的连接性。
在第二个终点，也测定在眼睛亚群中RGC的程序性细胞死亡。在处死动物前1小时，荧光标记的锚定蛋白V用于通过玻璃体内注射蛋白质来标记凋亡细胞。如上制备视网膜并且锚定蛋白V的成像与组织学终点的成像结合进行。
实施例3：Aβ42-ApoE4结合的抑制
评估了ApoE4与淀粉样蛋白的结合以及根据本发明的单克隆抗体抑制ApoE4和Aβ42肽之间的相互作用的能力。
人重组ApoE4用PBS稀释至200nM，并以0.5ml的小份贮存于-80℃。将1mg Aβ42-生物素肽重悬于20μl DMSO中、然后是1980μl PBS/0.1％BSA/0.1％叠氮化钠中，以获得0.5mg/ml的终溶液。利用ELISA实验来测定rhApoE4与Aβ42的结合。rhApoE4(100nM)与Aβ42-生物素(1μM)于37℃温育3小时，以使该蛋白与该肽结合。将该混合物施加到事先用PBST(PBS+0.05％吐温20)洗涤3次的链亲和素包被的板上。室温(RT)温育1小时后，用PBST洗涤板3次，并用含0.1％BSA的PBS于4℃封闭过夜。用IgG1小鼠抗人ApoE抗体在PBS中以1∶3000稀释应用，并于室温施加到板上2.5小时，来检测结合的ApoE4。用PBST洗涤板4次，然后与检测抗体，即在PBS中以1∶5000稀释的偶联于碱性磷酸酶(AP)的抗小鼠IgG，于室温温育1小时。在末次4×PBST洗涤之后，板与AP底物pNPP(磷酸酶底物，4-硝基苯磷酸二钠盐六水合物)温育5.5小时，并利用ELISA板读数器在405nm读数。图17总结了该实验。
ELISA试验通过制备rhApoE4(150nM)和Aβ42-生物素(1.5μM)混合物的8×2倍稀释液而开发。增加如下阴性对照：(1)仅rhApoE4；(2)Aβ42-生物素；和(3)rhApoE4-Aβ42-生物素(方案无小鼠抗ApoE4)。图18显示，只有当rhApoE4和Aβ42-生物素均存在，且遵循此完整的ELISA方案时，才获得阳性信号。
为优化试验中rhApoE4和Aβ42-生物素的浓度，利用恒定浓度的Aβ42-生物素(例如，正常：1.5μM或过量：15μM)对rhApoE4的稀释液(例如，150nM)进行了测试。图19显示，由于与rhApoE4复合的Aβ42-生物素较少与板结合，过量的Aβ42-生物素会稀释ELISA试验的信号。基于此测试，选择了rhApoE4的最佳浓度。
利用100nM恒定浓度的rhApoE4优化试验中Aβ42-生物素的浓度。在ELISA设置中对Aβ42-生物素的各稀释液(例如，起始浓度1.5μM(稀释至更低的浓度，例如低至1500nM))进行了测试。基于图20所示的结果，选择1μM最佳浓度的Aβ42-生物素来测定单克隆抗体对于rhApoE4与Aβ42-生物素结合的影响。
利用上文所述的ELISA实验(不过在应用于板上之前在结合混合物中进一步纳入了本发明的抗体)评估了本发明的一种或多种抗体对于rhApoE4与Aβ42-生物素结合的影响。例如，从50μg/mL的浓度起，可应用两倍系列稀释的抗体。可以在ApoE4与Aβ42-生物素首先混合时纳入抗体，或者可以在ApoE4与Aβ42-生物素首先混合之后(例如，数小时之后)纳入抗体。在前一种情况下，评估本发明的抗体阻止或抑制ApoE4与Aβ42-生物素相互作用的能力，而在后一种情况下，则评估本发明的抗体破坏已有ApoE4与Aβ42-生物素复合物的能力。
表格
表1.1.抗体以及用来产生所述抗体的抗原构建体
  小鼠mAb   克隆   同种型   抗原/序列   接头   锚  佐剂
  mACI-24-Ab3   EJ1A9   IgG1   Aβ1-15   -   棕榈酸  脂质A
表1.2.Aβ肽对ACI-24-Ab-3的结合。结果表达为背景扣除后的O.D.。
表1.3.通过ELISA分析的ACI-24-Ab-3对Aβ1-42的33个重叠肽的结合。
表1.4.ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体
对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维和LMW单体制备物的结合。
  20   3.765   1.946   1.82
  10   2.546   0.836   1.71
  5   1.629   0.619   1.01
  2.5   1.101   0.331   0.77
  1.25   0.642   0.295   0.35
  0.6250   0.457   0.177   0.28
  0.3125   0.253   0.143   0.11
  0.1563   0.167   0.115   0.05
表1.5.6E10对照抗体
对Aβ1-42肽的高分子量(HMW)初原纤维和LMW单体制备物的结合。
表1.6.ACI-24-Ab-3(小鼠EJ1A9)抗体
对Aβ1-42肽的寡聚体及单体富集制备物的结合。
a O.D.：405nm的光密度
b ACI-24-Ab-3(克隆：EJ1A9)的稀释起点为30μg/ml
表1.7.6E10对照抗体对Aβ1-42肽的寡聚体及单体富集制备物的结合。
a O.D.：405nm的光密度
b 6E10的稀释起点为0.5μg/ml
表2.1.抗体以及用来产生所述抗体的抗原构建体
  小鼠mAb   克隆   抗原/序列   接头   锚  佐剂
  ACI-11-Ab-9   FG1F9E4   Aβ22-35   PEG   DSPE  脂质A
  ACI-12-Ab-11   FK2A6A6   Aβ29-40   PEG   DSPE  脂质A
表2.2.Aβ肽对ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11的结合。
结果表达为背景扣除后的O.D.。
1来自Anaspec的肽
2来自Bachem的肽
表2.3.通过ELISA分析的
ACI-11-Ab-9和ACI-12-Ab-11对Aβ1-42的33个重叠肽的结合。
表2.4.ACI-12-Ab-11(克隆：FK2A6A6)
对Aβ1-42肽的单体及寡聚体富集制备物的结合。
a O.D.：405nm的光密度
b ACI-12-Ab-12(克隆：FK2A6A6)的稀释起点为40μg/ml
表2.5.6E10对照抗体对Aβ1-42肽的单体及寡聚体富集制备物的结合。
a O.D.：405nm的光密度
b 6E10的稀释起点为0.5μg/ml
保藏物
如下的杂交瘤细胞系根据布达佩斯条约保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH，DSMZ)”：
  杂交瘤株命名   抗体命名   保藏日   保藏号
  EJ1A9   ACI-24-Ab-3   2007年5月25日   DSM ACC2844
  FG1F9E4   ACI-11-Ab-9   2007年5月25日   DSM ACC2845
  FK2A6A6   ACI-12-Ab-11   2007年5月25日   DSM ACC2846
参考文献
Bard F，Cannon C，Barbour R，Burke RL，Games D，Grajeda H，Guido T，Hu K，Huang J，Johnson-Wood K，Khan K，Kholodenko D，LeeM，Lieberburg I，Motter R，Nguyen M，Soriano F，Vasquez N，Weiss K，Welch B，Seubert P，Schenk D，Yednock T.(2000).Nature Med.6，916-919.
Barghorn S，Nimmrich V，Striebinger A，Krantz C，Keller P，JansonB，Bahr M，Schmidt M，Bitner RS，Harlan J，Barlow E，Ebert U，Hillen H(2005)Globular amyloid beta-peptide oligomer-a homogenous and stableneuropathological protein in Alzheimer′s disease.J Neurochem95：834-847.
Baschong W，Wrigley NG(1990)Small colloidal gold conjugated toFab fragments or to immunoglobulin G as high-resolution labels forelectron microscopy：a technical overview.J Electron Microsc Tech14：313-323.
Blond and Goldberg，1987，PNAS March 1，1987 Vol.84|no.5|1147-1151
Cornilescu G，Delaglio F，Bax A.(1999)J.Biomol.NMR；13：289-302.
Burdick，D.et al.Assembly and aggregation properties of syntheticAlzheimer′s A4/beta amyloid peptide analogs.J.Biol.Chem.267，546-554(1992).
DeMattos，Bales，KR，Cummins，DJ，Dodart，JC，Paul，SM，Holtzmann，D.M(2001).Proc Natl Acad Sci U S A 98，8850-8855.
Dewachter I，Van DJ，Smeijers L，Gilis M，Kuiperi C，Laenen I，Caluwaerts N，Moechars D，Checler F，Vanderstichele H，Van LF(2000)Aging increased amyloid peptide and caused amyloid plaques in brain ofold APP/V717I transgenic mice by a different mechanism than mutantpresenilin1.J Neurosci 20：6452-6458.
Dewachter I，Reverse D，Caluwaerts N，Ris L，Kuiperi C，Van denHC，Spittaels K，Umans L，Serneels L，Thiry E，Moechars D，Mercken M，Godaux E，Van Leuven F(2002)Neuronal deficiency of presenilin 1inhibits amyloid plaque formation and corrects hippocampal long-termpotentiation but not a cognitive defect of amyloid precursor protein[V717I]transgenic mice.J Neurosci 22：3445-3453.
Glenner and Wong，Biochem Biophys Res Comm129，885-890(1984)
Harlow and Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory，New York 1988))
Heneka MT，Sastre M，Dumitrescu-Ozimek L，Dewachter I，Walter J，Klockgether T，Van LF(2005)Focal glial activation coincides withincreased BACE1 activation and precedes amyloid plaque deposition inAPP[V717I]transgenic mice.J Neuroinflammation 2：22.
Hodgson et al.，Bio/Technoloy，9：421(1991)
Iwadate M，Asakura T，Williamson MP.(1999)J.Biomol.NMR；13：199-211.
Kirschner，D.A.，Abraham，C.，&Selkoe，D.J.X-ray diffraction fromintraneuronal paired helical filaments and extraneuronal amyloid fibers inAlzheimer disease indicates cross-beta conformation.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 83，503-507(1986).
Khaw，B.A.et al.J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)
Kennedy，J.H.，et al.，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)
Klein WL(2002)Abeta toxicity in Alzheimer′s disease：globularoligomers(ADDLs)as new vaccine and drug targets.Neurochem Int41(5)：345-352.
Kohler and Milstein(Nature 256：495-497(1975))
LeVine，H.III，(2002).Arch Biochem Biophys 404，106-115.
Luca et al.，2001
McGeer et al.，1994
Moechars D，Dewachter I，Lorent K，Reverse D，Baekelandt V，NaiduA，Tesseur I，Spittaels K，Haute CV，Checler F，Godaux E，Cordell B，VanLF(1999)Early phenotypic changes in transgenic mice that overexpressdifferent mutants of amyloid precursor protein in brain.J Biol Chem274：6483-6492.
Nelson，R.&Eisenberg，D.Recent atomic models of amyloid fibrilstructure.Curr.Opin.Struct.Biol.(2006).
Nicolau，C.，Greferath，R.，Balaban，T.S.，Lazarte，J.E.，and Hopkins，R.J.(2002).Proc Natl Acad Sci U S A 99，2332-2337.
Queen et al.，Proc.Natl Acad Sci USA，86：10029-10032(1989)
Pearson W.R.(1990)，Methods in Enzymology 183，63-98
Petkova AT，Buntkowsky G，Dyda F，Leapman RD，Yau WM，TyckoR.J.Mol.Biol.2004；335：247-260.
Petkova AT，Ishii Y，Balbach JJ，Antzutkin ON，Leapman RD，Delaglio F，Tycko R.(2002)Proc.Nat..Acad.Sci.U.S.A；99：16742-16747.
Rousseaux et al.Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986
Rzepecki，P.，Nagel-Steger，L.，Feuerstein，S.，Linne，U.，Molt，O.，Zadmard，R.，Aschermann，K.，Wehner，M.，Schrader，T.and Riesner，D.(2004).J Biol Chem 279，47497-47505.
Sambrook et al.Molecular Biology：A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York，1989
Schenk D，Barbour R，Dunn W，Gordon G，Grajeda H，Guido T，HuK，Huang J，Smith，S.O.，and Bormann，B.J.(1995).Proc Natl Acad Sci US A 92，488-491.
Schenk et al.，1999
Schurs，A.H.W.M.，et al.1977(Clin.Chim Acta 81：1-40
Selkoe DJ.Toward a comprehensive theory for Alzheimer′s disease.Hypothesis：Alzheimer′s disease is caused by the cerebral accumulationand cytotoxicity of amyloid beta-protein.Ann.N.Y.Acad.Sci.2000，924：17-25.
S1ot JW，Geuze HJ(1985)A new method of preparing gold probes formultiple-labeling cytochemistry.Eur J Cell Biol 38：87-93.
Smith and Waterman，Advances in Applied Mathematics 2(1981)，482-489
Van dA，I，Wera S，Van LF，Henderson ST(2005)A ketogenic dietreduces amyloid beta 40 and 42 in a mouse model of Alzheimer′s disease.Nutr Metab(Lond)2：28.
Wagner et al(2002)Journal of Liposome Research Vol 12(3)，pp 259-270
Ye，J.，Dave，U.P.，Grishin，N.V.，Goldstein，J.L.，and Brown，M.S.(2000).Proc Natl Acad Sci U S A 97，5123-5128.
Zrein et al.(1998)，Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology，5(1)：45-49.Experimental Eye Research 78(2004)243-256
WO 2004/058258
WO96/1359
WO96/29605
序列表
<110>AC免疫有限公司
<120>单克隆抗体
<130>089667-0154
<141>2008-10-03
<150>US 60/960,614和US 60/960,615
<151>2007-10-05
<160>30
<170>PatentIn版本3.4
<210>1
<211>14
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>抗原肽AB 22-35
<400>1
Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met
1               5                   10
<210>2
<211>12
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>抗原肽AB 29-40
<400>2
Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
1               5               10
<210>3
<211>28
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>Aβ肽片段AB 1-28
<400>3
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1               5                   10                  15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys
            20                  25
<210>4
<211>24
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>Aβ肽片段AB 17-40
<400>4
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
1               5                   10                  15
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
            20
<210>5
<211>40
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>Aβ肽片段AB 1-40
<400>5
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1               5                   10                  15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
            20                  25                  30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
        35                  40
<210>6
<211>42
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>Aβ肽片段AB 1-42
<400>6
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1               5                   10                  15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
            20                  25                  30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
        35                  40
<210>7
<211>107
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-24-Ab-3的轻链可变结构域
<400>7
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Leu Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr Asn
            20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser 6ly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
            100                 105
<210>8
<211>121
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-24-Ab-3的重链可变结构域
     X可以是任一氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(52)..(52)
<223>Xaa可以是任一天然存在的氨基酸
<400>8
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Arg Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile Xaa Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Ser Ile Tyr Tyr Gly Arg Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>9
<211>11
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR1
<400>9
Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr Asn Val Ala
1               5                   10
<210>10
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR2
<400>10
 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
 1               5
<210>11
<211>9
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR3
<400>11
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1               5
<210>12
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR1
<400>12
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Arg
1               5                   10
<210>13
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR2
X可以是任一氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>Xaa可以是任一天然存在的氨基酸
<400>13
Glu Ile Xaa Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>14
<211>12
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR3
<400>14
Ser Ile Tyr Tyr Gly Arg Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>15
<211>321
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-24-Ab-3轻链可变区编码序列
<400>15
gatatcgtga tgacccagtc tcaactcttc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc   60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtggct actaatgtag cctggtatca acagaaacca  120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat  180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct  240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgctcac gttcggtgct  300
gggaccaagc tggagctgaa a                                            321
<210>16
<211>363
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-24-Ab-3重链可变区编码序列
<400>16
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc ctggggcttc agtgaagctg   60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatggta taaggtgggt gaagcagaga  120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttgtccta gaagtggcaa tacttactac  180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacagtg actgcagaca aatcctccag cacagcgtac  240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagatcgatt  300
tactacggta gaccctacta ctttgactac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc  360
tca                                                                363
<210>17
<211>109
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-11-Ab-9的轻链可变区
<400>17
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Ile Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Ser Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Val Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Thr Glu Asp Asp Ala Met Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Thr
            85                  90                  95
His Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
        100                 105
<210>18
<211>117
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-11-Ab-9的重链可变区
<400>18
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
            20                  25                  30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Tyr Gly Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
            100                 105                 110
Leu Thr Val Ser Ser
        115
<210>19
<211>109
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-12-Ab-11的轻链可变区
<400>19
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Ile Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Ser Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Val Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Thr Glu Asp Asp Ala Met Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Thr
                85                  90                  95
His Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
            100                 105
<210>20
<211>117
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>ACI-12-Ab-11的重链可变区
<400>20
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
            20                  25                  30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Tyr Gly Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
            100                 105                 110
Leu Thr Val Ser Ser
        115
<210>21
<211>14
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR1
<400>21
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1               5                   10
<210>22
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR2
<400>22
Gly Thr Ser Asn Arg Ala Pro
1               5
<210>23
<211>9
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>轻链CDR3
<400>23
Ala Leu Trp Tyr Ser Thr His Tyr Val
1               5
<210>24
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR1
<400>24
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Ile His
1               5                   10
<210>25
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR2
<400>25
Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>26
<211>8
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>MISC_FEATURE
<223>重链CDR3
<400>26
Asp Tyr Gly Tyr Ala Phe Asp Tyr
1               5
<210>27
<211>327
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-11-Ab-9轻链可变区编码序列
<400>27
caggcagttg tgactcagga atctgcactc accacgtcac ctggtggaac agtcatactc   60
acttgtcgct caagtactgg ggctgttaca actagtaact atgccaactg ggtccaagaa  120
aaaccagatc atttattcac tggtctaata ggtggtacca gcaaccgagc tccaggtgtt  180
cctgtcagat tctcaggctc cctgattgga gacaaggctg ccctcaccat cacaggggca  240
cagactgagg atgatgcaat gtatttctgt gctctatggt acagcaccca ttatgttttc  300
ggcggtggaa ccaaggtcac tgtccta                                      327
<210>28
<211>351
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-11-Ab-9重链可变区编码序列
<400>28
caggttcagc tgcagcagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggagcttc agtgaagata   60
tcctgcaagg tttctggcta caccttcact gaccatacta ttcactggat gaagcagagg  120
cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatggtag tactaagtac  180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac  240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagactat  300
ggttacgcct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a           351
<210>29
<211>327
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-12-Ab-11轻链可变区编码序列
<400>29
caggccgttg tgactcagga atctgcactc accacgtccc ctggtggaac agtcatactc   60
acttgtcgct caagtactgg ggctgttaca actagtaact atgccaactg ggtccaagaa  120
aaaccagatc atttattcac tggtctaata ggtggtacca gcaaccgagc tccaggtgtt  180
cctgtcagat tctcaggctc cctgattgga gacaaggctg ccctcaccat cacaggggca  240
cagactgagg atgatgcaat gtatttctgt gctctatggt acagcaccca ttatgttttc  300
ggcggtggaa ccaaggtcac tgtccta                                      327
<210>30
<211>351
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<223>ACI-12-Ab-11重链可变区编码序列
<400>30
caggttcagc tgcagcagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggagcttc agtgaagata   60
tcctgcaagg tttctggcta caccttcact gaccatacta ttcactggat gaagcagagg  120
cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatggtag tactaagtac  180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac  240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagactat  300
ggttacgcct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a           351

Claims (38)

1.组合物在生产用于治疗个体中青光眼的药物中的用途，其中所述组合物包含治疗有效量的特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含：
(i)如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；和
(ii)如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
2.组合物用于生产药物的用途，所述药物用于在个体中预防、治疗或减轻青光眼的一种或多种影响，其中所述组合物包含治疗有效量的特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ IDNO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ IDNO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
3.权利要求1或2的用途，其中所述青光眼选自慢性开角型青光眼(COAG)、急性闭角型青光眼(AACG)、混合的或组合机制青光眼、正常眼压性青光眼、先天性青光眼、继发性青光眼、色素性青光眼和剥脱性青光眼。
4.权利要求1或2的用途，其中所述抗体选自单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、双效抗体、猿源化抗体、人抗体和人源化抗体或是其功能片段，所述双效抗体显示出聚集抑制性质以及解聚性质。
5.权利要求4的用途，其中所述抗体是嵌合抗体或者人源化抗体。
6.权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ IDNO：7给出的轻链可变区和如SEQ ID NO：8给出的重链可变区。
7.权利要求1或2的用途，其中所述个体是哺乳动物。
8.权利要求1或2的用途，其中所述个体是人。
9.权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ IDNO：7给出的轻链可变区。
10.权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：8给出的重链可变区。
11.权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其功能片段由在2007年5月25日以保藏号DSM ACC2844保藏的杂交瘤细胞系EJ1A9产生。
12.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段用于生产治疗个体中青光眼的药物的用途，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
13.权利要求12的用途，其中所述青光眼选自慢性开角型青光眼(COAG)、急性闭角型青光眼(AACG)、混合的或组合机制青光眼、正常眼压性青光眼、先天性青光眼、继发性青光眼、色素性青光眼和剥脱性青光眼。
14.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段用于生产预防、治疗或减轻个体中青光眼的一种或多种影响的药物的用途，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
15.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段用于生产药物的用途，所述药物：
a)用于降低患有青光眼的个体的视网膜神经节细胞层中斑块负荷；
b)用于减少患有青光眼的个体的视网膜神经节细胞层中斑块的量；
c)用于减少患有青光眼的个体的视网膜神经节细胞层中可溶性淀粉样蛋白β的总量；或
d)用于保持或降低患有青光眼的个体中眼中的眼压力，
其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ IDNO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
16.权利要求14或15的用途，其中所述青光眼选自慢性开角型青光眼(COAG)、急性闭角型青光眼(AACG)、混合的或组合机制青光眼、正常眼压性青光眼、先天性青光眼、继发性青光眼、色素性青光眼和剥脱性青光眼。
17.根据权利要求12、14或15的用途，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、双效抗体、猿源化抗体和人源化抗体或其功能片段，所述双效抗体显示出聚集抑制性质以及解聚性质。
18.根据权利要求17的用途，其中所述抗体是人源化抗体。
19.根据权利要求12、14或15的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：7给出的轻链可变区。
20.根据权利要求12、14或15的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：8给出的重链可变区。
21.根据权利要求12、14或15的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：7给出的轻链可变区和如SEQ ID NO：8给出的重链可变区。
22.根据权利要求12、14或15的用途，其中所述抗体或其功能片段由在2007年5月25日以保藏号DSM ACC2844保藏的杂交瘤细胞系EJ1A9产生。
23.权利要求12、14或15的用途，其中所述个体是哺乳动物。
24.权利要求12、14或15的用途，其中所述个体是人。
25.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段在生产组合物中的用途，所述组合物用于监测个体中微小残留青光眼的方法，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3，其中所述方法包括：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与所述抗体或其功能片段接触；
(b)允许所述抗体或其功能片段与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；
(d)将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值进行比较，
其中与正常对照值相比较，所述复合物量的增加表明所述个体依然患有微小残留青光眼。
26.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段在生产组合物中的用途，所述组合物用于预测个体对用包含所述抗体或其功能片段的药物组合物治疗青光眼的反应性的方法，其中所述功能片段是Fab、F(ab，)2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ ID NO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQ ID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ IDNO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3，并且其中所述方法包括步骤：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与所述抗体或其功能片段接触；
(b)允许所述抗体或其功能片段与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；
(d)将免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联；和
(e)比较治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，
其中所述免疫复合物的量降低表明所述个体具有对治疗产生反应的高潜力。
27.权利要求25或26的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：7给出的轻链可变区。
28.权利要求25或26的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：8给出的重链可变区。
29.权利要求25或26的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：7给出的轻链可变区和如SEQ ID NO：8给出的重链可变区。
30.权利要求25或26的用途，其中所述个体是哺乳动物。
31.权利要求25或26的用途，其中所述个体是人。
32.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段在生产试剂或试剂盒中的用途，所述试剂或试剂盒用于监测个体在用所述抗体或其功能片段的药物组合物治疗之后微小残留的青光眼，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ IDNO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
33.特异性结合淀粉样蛋白β蛋白的抗体或其功能片段在生产试剂或试剂盒中的用途，所述试剂或试剂盒用于预测个体对用所述抗体或其功能片段的药物组合物治疗青光眼的反应性，其中所述功能片段是Fab、F(ab')2、scFv或Fv片段，并且其中所述抗体或其功能片段包含如SEQ IDNO：9给出的轻链CDR1；如SEQ ID NO：10给出的轻链CDR2；如SEQID NO：11给出的轻链CDR3；如SEQ ID NO：12给出的重链CDR1；如SEQ ID NO：13给出的重链CDR2；和如SEQ ID NO：14给出的重链CDR3。
34.权利要求32或33的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：7给出的轻链可变区。
35.权利要求32或33的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：8给出的重链可变区。
36.权利要求32或33的用途，其中所述抗体或其功能片段包含如SEQID NO：7给出的轻链可变区和如SEQ ID NO：8给出的重链可变区。
37.权利要求32或33的用途，其中所述个体是哺乳动物。
38.权利要求32或33的用途，其中所述个体是人。
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CA2631195C (en) 2005-11-30 2016-04-05 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
CN101432302A (zh) 2005-11-30 2009-05-13 艾博特公司 抗－Aβ球聚体抗体，其抗原结合部分，相应的杂交瘤、核酸、载体、宿主细胞，生产所述抗体的方法，包含所述抗体的组合物，所述抗体的应用以及使用所述抗体的方法
EP2046833B9 (en) 2006-07-14 2014-02-19 AC Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
EP2124952A2 (en) 2007-02-27 2009-12-02 Abbott GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
CA2701793C (en) 2007-10-05 2017-04-25 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
CN105169388A (zh) * 2007-10-05 2015-12-23 基因技术公司 人源化抗体
US8987419B2 (en) 2010-04-15 2015-03-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Amyloid-beta binding proteins
SG187173A1 (en) 2010-07-30 2013-02-28 Ac Immune Sa Safe and functional humanized anti beta-amyloid antibody
MX358739B (es) 2010-08-14 2018-09-03 Abbvie Inc Star Proteinas de union a amiloide beta.
MX354662B (es) * 2011-10-07 2018-03-14 Ac Immune Sa Anticuerpos fosfoespecificos que reconocen la tau.
BR112016004437A2 (pt) 2013-09-13 2017-10-17 Genentech Inc métodos de imunoteste e de seleção de linhagem de células, anticorpos e kit
SG10201802525QA (en) 2013-09-13 2018-04-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
KR20230097209A (ko) 2014-03-12 2023-06-30 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 Cns의 질환 및 손상을 치료하기 위한 전신적 조절 t 세포 수준 또는 활성의 감소
EP3177732A4 (en) * 2014-08-08 2018-04-25 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for the treatment of ophthalmic diseases and conditions
CN113508127A (zh) 2018-11-06 2021-10-15 阿尔萨泰克公司 神经变性疾病的基于细胞的基因疗法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1420032A1 (en) * 2001-08-03 2004-05-19 Medical &amp; Biological Laboratories Co., Ltd. Antibody recognizing gm1 ganglioside-bound amyloid beta-protein and dna encoding the antibody

Family Cites Families (243)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5525339A (en) 1986-08-27 1996-06-11 Dms Pharmaceutical Inc. Isolated components of dense microspheres derived from mammalian brain tissue and antibodies thereto
US5231170A (en) 1986-08-27 1993-07-27 Paul Averback Antibodies to dense microspheres
DE3702789A1 (de) 1987-01-30 1988-08-18 Bayer Ag Vorlaeuferprotein des apc-polypeptids, dafuer codierende dna und diagnostische verwendung der dna und des proteins
IT1217123B (it) 1987-02-05 1990-03-14 Rotta Research Lab Derivati otticamente attivi dell acido 5 pentilammino 5 oxo pentanoico r ad attivita antagonista della colecistochinina e procedimento per la loro preparazione
DE3805744C2 (de) 1987-03-04 1999-09-23 Novartis Ag Phenylcarbamate zur Hemmung der Acetylcholinesterase
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
FI95572C (fi) 1987-06-22 1996-02-26 Eisai Co Ltd Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen piperidiinijohdannaisten tai sen farmaseuttisen suolan valmistamiseksi
CA1340802C (en) 1987-08-15 1999-10-26 Yasuyuki Takahashi Senile amyloid precursor protein and an antibody specific for the same
US5231000A (en) 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
AU3204689A (en) 1988-02-10 1989-09-06 Children's Medical Center Corporation Amyloid protein precursors, genetic probes, antibodies, and methods of use
US6287793B1 (en) 1988-08-19 2001-09-11 Elan Pharmaceuticals, Inc. Diagnostic methods for alzheimer's disease
US5215889A (en) 1988-11-18 1993-06-01 The Regents Of The University Of California Catalytic and reactive polypeptides and methods for their preparation and use
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US20030229208A1 (en) 1988-12-28 2003-12-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5262332A (en) 1989-04-05 1993-11-16 Brigham And Women's Hospital Diagnostic method for Alzheimer's disease: examination of non-neural tissue
WO1990012871A1 (en) 1989-04-14 1990-11-01 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Cerebrovascular amyloid protein-specific monoclonal antibody sv17-6e10
US5234814A (en) 1989-06-01 1993-08-10 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Diagnostic assay for alzheimer's disease
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
AT396939B (de) 1990-05-29 1993-12-27 Alois Dipl Ing Dr Jungbauer Komplexes virales antigen von hiv-1 bindendes rekombinantes protein
US5502658A (en) 1990-12-27 1996-03-26 Relin; Arkadi Sampled-continuous probability method of velocity measurement of the object having informatively-structural inhomogeneity
JP3277211B2 (ja) 1991-11-12 2002-04-22 プラナ・バイオテクノロジー・リミテッド アルツハイマー病の試験方法と治療方法
US5837822A (en) 1992-01-27 1998-11-17 Icos Corporation Humanized antibodies specific for ICAM related protein
US5773218A (en) 1992-01-27 1998-06-30 Icos Corporation Method to identify compounds which modulate ICAM-related protein interactions
US20010029293A1 (en) 1992-01-27 2001-10-11 Icos Corporation Icam-related protein
US5538845A (en) 1992-02-05 1996-07-23 Athena Neurosciences, Inc. Beta-amyloid peptide production inhibitors and methods for their identification
US5441870A (en) 1992-04-15 1995-08-15 Athena Neurosciences, Inc. Methods for monitoring cellular processing of β-amyloid precursor protein
US5604102A (en) 1992-04-15 1997-02-18 Athena Neurosciences, Inc. Methods of screening for β-amyloid peptide production inhibitors
US5766846A (en) 1992-07-10 1998-06-16 Athena Neurosciences Methods of screening for compounds which inhibit soluble β-amyloid peptide production
US5837672A (en) 1992-07-10 1998-11-17 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide
US6610493B1 (en) 1993-06-17 2003-08-26 Brigham And Women's Hospital Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide
US5605811A (en) 1992-10-26 1997-02-25 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for monitoring cellular processing of beta-amyloid precursor protein
US5891623A (en) 1992-11-09 1999-04-06 Consorzio Per Le Biotecnologie Diagnosis and treatment of AIDS onset
ZA938243B (en) 1992-11-12 1995-05-04 Hybritech Inc Altered affinity polypeptides of metal chelate binding antibodies
EP0683234B2 (en) 1993-01-25 2007-06-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof
US5955317A (en) 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
CA2115900A1 (en) 1993-02-22 1994-08-23 Gerald W. Becker Pharmaceutical screens and antibodies
US5840294A (en) 1993-03-29 1998-11-24 Queen's University At Kingston Method for treating amyloidosis
AU7949394A (en) 1993-11-19 1995-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human medulloblastomatous cell
CA2127476C (en) 1994-07-06 1999-12-07 Daniel G. Pomerleau Logging or measurement while tripping
US5626332A (en) * 1994-07-29 1997-05-06 Harris Corporation Vibration isolation system using plural signals for control
US6114133A (en) 1994-11-14 2000-09-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for aiding in the diagnosis of Alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41)
US5589154A (en) 1994-11-22 1996-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
US5786180A (en) 1995-02-14 1998-07-28 Bayer Corporation Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4 peptide
US6303567B1 (en) 1995-03-14 2001-10-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc . Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5756662A (en) 1995-03-14 1998-05-26 Corixa Corporation Compounds and methods for the detection of T. cruzi infection
AU5752696A (en) 1995-05-18 1996-11-29 Regents Of The University Of Michigan, The Dna binding antibodies
AU6255096A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York, The Pegylated modified proteins
JP3495738B2 (ja) 1995-09-14 2004-02-09 ザ レジェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア 天然ＰｒＰｓｃ特異的抗体
AUPN649395A0 (en) 1995-11-10 1995-12-07 Ramsay Health Care Pty Ltd A method for diagnosing alzheimer's disease
EP0866805A1 (en) 1995-12-12 1998-09-30 Karolinska Innovations AB PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
JPH09178743A (ja) 1995-12-27 1997-07-11 Oriental Yeast Co Ltd 可溶性ａｐｐの定量法
WO1998006403A1 (en) 1996-08-13 1998-02-19 P.N. Gerolymatos S.A. Use of the chelating agent clioquinol for the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of alzheimer's disease
US6218506B1 (en) 1997-02-05 2001-04-17 Northwestern University Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof)
US20030068316A1 (en) 1997-02-05 2003-04-10 Klein William L. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US20020086847A1 (en) 1997-04-09 2002-07-04 Mindset Biopharmaceuticals (Usa) Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods of use thereof
US6689359B1 (en) 1997-07-21 2004-02-10 Arpi Matossian-Rogers Ligands, including antibodies, showing reactivity against endocrine cells
IT1293511B1 (it) 1997-07-30 1999-03-01 Gentili Ist Spa Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati
EP1017375A2 (en) 1997-09-24 2000-07-12 Nova Molecular, Inc. Methods for increasing apoe levels for the treatment of neurodegenerative disease
US6905686B1 (en) 1997-12-02 2005-06-14 Neuralab Limited Active immunization for treatment of alzheimer's disease
US7179892B2 (en) 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US6761888B1 (en) 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US6913745B1 (en) 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6750324B1 (en) 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6418338B1 (en) 1998-02-06 2002-07-09 Phylatron Ltd. Method for detecting and surgically removing lymphoid tissue involved in tumor progression
NZ550199A (en) 1998-02-11 2008-07-31 Bellus Health Int Ltd Treatment of inflammation, abeta-induced cell toxicity, neuronal cell death or neuronal cell loss in subjects suffering from alzheimer's disease
WO1999055369A1 (en) 1998-04-28 1999-11-04 Smithkline Beecham Corporation Monoclonal antibodies with reduced immunogenicity
MXPA00011213A (es) 1998-05-15 2003-04-22 Neurochem Inc Uso de inhibidores de amiloides para la modulacion de la muerte de las celulas neuronales.
US20030147882A1 (en) 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US7083950B2 (en) 1998-09-25 2006-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity fusion proteins and therapeutic and diagnostic methods for use
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
AR022952A1 (es) 1999-03-19 2002-09-04 Smithkline Beecham Corp ANTICUERPO MONOCLONAL DE ROEDOR ESPECIFICAMENTE NEUTRALIZANTE PARA LA INTERLEUQUINA-18 HUMANA , UN FRAGMENTO FAB NEUTRALIZANTE o FRAGMENTO F(AB')2, UNA REGION DE COMPLEMENTARIEDAD DE CADENA LIGERA DE INMONOGLOBULINA(CDR), UNA MOLECULA DE ACIDO NUCLEICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE, EL
US6998124B1 (en) 1999-04-14 2006-02-14 Smithkline Beecham Corporation Erythropoietin receptor antibodies
US6787637B1 (en) 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
WO2000077178A1 (en) 1999-06-16 2000-12-21 Boston Biomedical Research Institute IMMUNOLOGICAL CONTROL OF β-AMYLOID LEVELS IN VIVO
DE60016242T2 (de) 1999-09-01 2005-12-01 Evotec Neurosciences Gmbh Verfahren zur diagnose oder prognose von altersbedingter maculadegeneration
US20040013647A1 (en) 1999-09-03 2004-01-22 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods and compositions for treating a plaque-forming disease
ATE461996T1 (de) 1999-09-03 2010-04-15 Univ Ramot Verbindungen, zusammensetzungen und verfahren zur behandlung oder vorsorge von alzheimer erkrankung
US6294171B2 (en) 1999-09-14 2001-09-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies
CA2388559A1 (en) 1999-11-29 2001-06-07 Neurochem Inc. Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
IL150374A0 (en) 1999-12-23 2002-12-01 Neurochem Inc Compounds and methods for modulating cerebral amyloid angiopathy
US20020182660A1 (en) 2000-02-18 2002-12-05 Fong Kei-Lai L. N- and C-terminus specific immunoassays for full length beta-amyloid peptide-Abeta(1-40), Abeta(1-39), Abeta(1-40), Abeta(1-42) , and Abeta(1-43)
CZ2008595A3 (cs) 2000-02-24 2017-05-03 Washington University Léčivo pro prevenci nebo léčení preklinické nebo klinické Alzheimerovy nemoci
EP1130032A1 (en) 2000-02-28 2001-09-05 Gesellschaft für biotechnologische Forschung mbH (GBF) Single-chain antibodies recognizing the human vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2/KDR)
AU2001249760B2 (en) 2000-03-30 2005-04-21 Dyax Corp. Mucin-1 specific binding members and methods of use thereof
WO2001075165A2 (en) 2000-03-30 2001-10-11 Elan Pharmaceuticals, Inc. Screening markers and methods for neurodegenerative disorders
US7371365B2 (en) 2000-04-04 2008-05-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for detecting parenchymal plaques in vivo
US20020009445A1 (en) 2000-07-12 2002-01-24 Yansheng Du Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
CN1468250A (zh) 2000-08-03 2004-01-14 ��ķһ����˹��̹ 在转基因动物中产生人源化抗体
US6750210B2 (en) 2000-08-05 2004-06-15 Smithkline Beecham Corporation Formulation containing novel anti-inflammatory androstane derivative
US7067133B2 (en) 2000-09-06 2006-06-27 Aventis Pharma S.A. Methods and compositions for diseases associated with amyloidosis
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20040191264A1 (en) 2001-02-19 2004-09-30 Nielsen Klaus Gregorius Synthetic vaccine agents
US6815175B2 (en) 2001-03-16 2004-11-09 Cornell Research Foundation, Inc. Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder
US7927597B2 (en) * 2001-04-10 2011-04-19 Agensys, Inc. Methods to inhibit cell growth
DE60230736D1 (de) 2001-04-30 2009-02-26 Lilly Co Eli HUMANISIERTE ANTIKÖRPER DIE DAS BETA-AMYLOID PEPTID ERKENNEN& x9;
DE60229051D1 (de) 2001-04-30 2008-11-06 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper
ES2228697T3 (es) 2001-06-12 2005-04-16 Wiltfang, Jens Anticuerpo monoclonal, mab 1e8, que es especifico para los dos primeros aminoacidos de peptidos beta-amiloides y su utilizacion en la deteccion de peptidos beta-amiloides y/o sapp alfa.
US6638722B2 (en) 2001-06-13 2003-10-28 Invitrogen Corporation Method for rapid amplification of DNA
WO2003000714A2 (en) 2001-06-22 2003-01-03 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for preventing protein aggregation in neurodegenerative diseases
CN1396183A (zh) 2001-07-13 2003-02-12 张小如 降低脑内与老年痴呆有关的淀粉样变纤维的融合人抗体
JP2005500389A (ja) 2001-08-17 2005-01-06 イーライ・リリー・アンド・カンパニー Ａβに関連する病態および疾患を治療するための、可溶性Ａβに高い親和性を有する抗体の使用
PT1944040E (pt) 2001-08-17 2012-10-31 Univ Washington Método de avaliação para a doença de alzheimer
EP1519740A4 (en) 2001-08-17 2005-11-09 Lilly Co Eli FASTER IMPROVEMENT OF COGNITION IN DISEASES ASSOCIATED WITH A-BETA
WO2003016466A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company ANTI-Aβ ANTIBODIES
US20030082191A1 (en) 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
GB0124317D0 (en) 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
CA2504349A1 (en) 2001-11-02 2003-05-15 Diagenics International Corporation Monoclonal antibodies specific for beta-amyloid
US7390885B2 (en) 2001-11-26 2008-06-24 Cell Matrix, Inc. Humanized collagen antibodies and related methods
RS51155B (sr) * 2001-12-20 2010-10-31 Bristol-Myers Squibb Company DERIVATI α -(N-SULFONAMIDO)ACETAMIDA KAO INHIBITORI β -AMILOIDA
EP1975179A1 (en) 2001-12-26 2008-10-01 Araclon Biotech, S.L. Polyclonal antibodies, preparation method thereof and use of same
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
WO2003076006A2 (en) 2002-03-07 2003-09-18 Advisys, Inc. Electrode assembly for constant-current electroporation and use
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20030190689A1 (en) 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
WO2003086310A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Prevention of brain inflammation as a result of induced autoimmune response
WO2003089460A1 (en) 2002-04-19 2003-10-30 The Governing Council Of The University Of Toronto Immunological methods and compositions for the treatment of alzheimer's disease
ATE419871T1 (de) 2002-04-25 2009-01-15 Lilly Co Eli Verfahren zur behandlung von angststörungen bei älteren personen
WO2004013172A2 (en) 2002-07-24 2004-02-12 Innogenetics N.V. Fragments of beta-amyloid as targets for vaccination against alzheimer disease
WO2004024090A2 (en) 2002-09-12 2004-03-25 The Regents Of The University Of California Immunogens and corresponding antibodies specific for high molecular weight aggregation intermediates common to amyloids formed from proteins of differing sequence
WO2004029629A1 (en) 2002-09-27 2004-04-08 Janssen Pharmaceutica N.V. N-11 truncated amyloid-beta nomoclonal antibodies, compositions, methods and uses
US7541440B2 (en) 2002-09-30 2009-06-02 Immunomedics, Inc. Chimeric, human and humanized anti-granulocyte antibodies and methods of use
US20070213512A1 (en) 2002-10-01 2007-09-13 Krafft Grant A Amyloid beta peptide analogs and assemblies thereof
JP2006508072A (ja) 2002-10-01 2006-03-09 ノースウエスタン ユニバーシティ アミロイドベータ由来拡散性リガンド（ＡＤＤＬｓ）、ＡＤＤＬ代替物、ＡＤＤＬ結合性分子、およびそれらの使用
EP1633786A4 (en) 2002-10-09 2007-07-25 Rinat Neuroscience Corp METHOD FOR TREATING ALZHEIMER DISEASE WITH ANTIBODIES TO AMYLOID BETA PEPTIDE AND COMPOSITIONS THEREOF
US20050097625A1 (en) 2002-11-27 2005-05-05 Meade Harry M. Modified antibodies stably produced in milk and methods of producing same
DE10256900A1 (de) 2002-11-29 2004-06-24 Nemod Immuntherapie Ag Tumorspezifische Erkennungsmoleküle
WO2004056318A2 (en) 2002-12-19 2004-07-08 New York University Method for treating amyloid disease
EP1439192A1 (en) 2003-01-15 2004-07-21 Xerion Pharmaceuticals AG Neuropilin-1 inhibitors
US20050031651A1 (en) 2002-12-24 2005-02-10 Francine Gervais Therapeutic formulations for the treatment of beta-amyloid related diseases
BR0317747A (pt) 2002-12-24 2005-11-22 Neurochem Int Ltd Método de tratamento terapêutico concomitante de um indivìduo, composição farmacêutica, kit, uso de um primeiro agente e um segundo agente, e, métodos de prevenir ou tratar uma doença relacionada com amilóide-b, doença de alzheimer e insuficiência cognitiva suave
ES2897506T3 (es) 2003-01-09 2022-03-01 Macrogenics Inc Identificación y modificación de anticuerpos con regiones Fc variantes y métodos de utilización de los mismos
AT413945B (de) 2003-01-14 2006-07-15 Mattner Frank Dr Impfstoff für die alzheimer-krankheit
WO2004065569A2 (en) 2003-01-23 2004-08-05 The Regents Of The University Of California Multi-functional antibodies
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
JP2006516639A (ja) 2003-02-01 2006-07-06 ニユーララブ・リミテツド 可溶性Ａ−βに対する抗体を生成させるための能動免疫
US7575747B2 (en) 2003-02-10 2009-08-18 Applied Molecular Evolution Aβ binding molecules
US20040242845A1 (en) 2003-02-21 2004-12-02 Nicolau Yves Claude Methods and compositions comprising supramolecular antigenic constructs and antibodies elicited against them
US8663650B2 (en) 2003-02-21 2014-03-04 Ac Immune Sa Methods and compositions comprising supramolecular constructs
US20050129695A1 (en) 2003-03-28 2005-06-16 Marc Mercken Anti-amyloid antibodies, compositions, methods and uses
EP1469312A1 (en) 2003-04-18 2004-10-20 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Diagnosis of Alzheimer's disease
US20040223912A1 (en) 2003-05-07 2004-11-11 Montalto Michael Christopher Compositions and methods for non-invasive imaging of soluble beta-amyloid
ES2246178B1 (es) 2003-05-08 2007-03-01 Universidad De Zaragoza. Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas.
EP1627062A1 (en) 2003-05-14 2006-02-22 Domantis Limited A process for recovering polypeptides that unfold reversibly from a polypeptide repertoire
EP1480041A1 (en) 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease
PE20050627A1 (es) 2003-05-30 2005-08-10 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
CA2528182A1 (en) 2003-06-06 2005-06-16 Oncomax Acquisition Corp. Antibodies specific for cancer associated antigen sm5-1 and uses thereof
US20050124016A1 (en) 2003-08-01 2005-06-09 Enh Research Institute Antibodies specific for toxic amyloid beta protein oligomers
WO2005018424A2 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Antibodies specific for fibrillar amyloid and a procedure to detect fibrillar amyloid deposits
US20070031416A1 (en) 2003-09-09 2007-02-08 Takeda Pharmaceutical Company Limited Use of antibody
EP1660533A4 (en) 2003-09-12 2009-10-21 Univ California SPECIFIC MONOCLONAL ANTIBODIES MADE FROM PROTEINS OF DIFFERENT SEQUENCES FOR HIGHLY MOLECULAR AGGREGATIVE INTERMEDIATE PRODUCTS OF AMYLOIDS
WO2005037209A2 (en) 2003-10-14 2005-04-28 University Of South Florida A method for the separation anti-amyloid beta antibody with amyloid beta peptide
JP4870348B2 (ja) 2003-12-04 2012-02-08 株式会社ペルセウスプロテオミクス 細胞表面抗原に対する抗体取得とその抗原同定
MY144231A (en) 2003-12-17 2011-08-15 Wyeth Corp Aß IMMUNOGENIC PEPTIDE CARRIER CONJUGATES AND METHODS OF PRODUCING SAME
WO2005080435A1 (ja) 2004-02-20 2005-09-01 Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd. モノクローナル抗体およびその利用
ES2375627T3 (es) 2004-02-23 2012-03-02 Eli Lilly And Company Anticuerpos anti-abeta.
US20040260068A1 (en) 2004-02-26 2004-12-23 Naoya Tsurushita Humanized chicken antibodies
WO2005105998A1 (ja) 2004-04-27 2005-11-10 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute ヒト抗アミロイドβペプチド抗体およびその抗体フラグメント
US20110142858A1 (en) 2004-06-07 2011-06-16 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Method of Passsive Immunization Against Disease or Disorder Charcterized by Amyloid Aggregation with Diminished Risk of Neuroinflammation
SE0401601D0 (sv) 2004-06-21 2004-06-21 Bioarctic Neuroscience Ab Protofibril specific antibodies and uses thereof
US8507206B2 (en) 2004-07-02 2013-08-13 Northwestern University Monoclonal antibodies that target pathological assemblies of amyloid β (Abeta)
WO2006006172A2 (en) 2004-07-15 2006-01-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections
US7807165B2 (en) 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
WO2006016644A1 (ja) 2004-08-11 2006-02-16 Mitsubishi Chemical Corporation 抗体及びその利用
TWI374935B (en) 2004-08-27 2012-10-21 Pfizer Ireland Pharmaceuticals Production of α-abeta
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
WO2006039470A2 (en) 2004-09-29 2006-04-13 Centocor, Inc. Anti- amyloid antibodies, compositions, methods and uses
CA2582683A1 (en) 2004-10-01 2006-04-13 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Novel antibodies directed to the mammalian eag1 ion channel protein
WO2006039327A2 (en) * 2004-10-01 2006-04-13 Merck & Co., Inc. Methods of treatment or prophylaxis of amyloidogenic diseases of the eye or optic nerve
EP1814917A2 (en) 2004-10-13 2007-08-08 Ablynx N.V. Single domain camelide anti-amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenerative neural diseases such as alzheimer's disease
US7780963B2 (en) 2004-10-25 2010-08-24 Merck & Co., Inc. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
WO2006047670A2 (en) 2004-10-26 2006-05-04 Wyeth Methods for assessing antibodies to neurodegenerative disease-associated antigens
CN101048662A (zh) 2004-10-28 2007-10-03 三光纯药株式会社 阿尔茨海默氏病的检验方法及诊断试剂
PE20061152A1 (es) 2004-12-15 2006-10-13 Neuralab Ltd Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
JP2008523815A (ja) 2004-12-15 2008-07-10 エラン ファーマ インターナショナル リミテッド 認知の改善における使用のためのヒト化アミロイドβ抗体
CA2589017A1 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Amyloid beta antibodies for use in improving cognition
WO2006069081A2 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Washington University In St. Louis USE OF ANTI-Aβ ANTIBODY TO TREAT TRAUMATIC BRAIN INJURY
EP1853299A4 (en) * 2005-01-14 2009-11-11 Univ California COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE PRESENCE OF DRUGS AND DIAGNOSING OR TREATING DRUG-INDUCED DISEASES
CA2589860A1 (en) 2005-01-24 2006-08-03 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
ES2340414T3 (es) 2005-03-05 2010-06-02 ABBOTT GMBH &amp; CO. KG Metodo de seleccion, proceso para la purificacion de oligomeros de a-beta no-difusibles, anticuerpos selectivos contra dichos oligomeros de a-beta no-difusibles y un proceso para la fabricacion de dichos anticuerpos.
ES2259270B1 (es) 2005-03-09 2007-11-01 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Metodo de diagnostico in vitro de la enfermedad de alzheimer mediante un anticuerpo monoclonal.
ES2318918B1 (es) 2005-04-01 2010-02-16 Biotherapix Molecular Medicines, S.L.U. Anticuerpos humanos con capacidad de union al peptido beta-amiloide y sus aplicaciones.
UY29504A1 (es) 2005-04-29 2006-10-31 Rinat Neuroscience Corp Anticuerpos dirigidos contra el péptido amiloide beta y métodos que utilizan los mismos.
ATE535252T1 (de) 2005-05-05 2011-12-15 Merck Sharp & Dohme Peptid-konjugat-zusammensetzungen und -verfahren zur prävention und behandlung von alzheimer- krankheit
EA201100177A1 (ru) 2005-06-17 2011-06-30 Элан Фарма Интернэшнл Лимитед СПОСОБЫ ОЧИСТКИ АНТИТЕЛ К β-АМИЛОИДУ
US20090297534A1 (en) 2005-07-13 2009-12-03 Sudhir Paul Catalytic Immunoglobulins BBK32 and Uses Therefor
CN105017423B (zh) 2005-08-11 2019-06-04 阿皮·马托西安-罗杰斯 用于自身免疫性疾病治疗和诊断的TCR-V-β相关肽
WO2007022416A2 (en) 2005-08-18 2007-02-22 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Single chain antibodies against beta-amyloid peptide
JP2007077103A (ja) 2005-09-16 2007-03-29 Yokohama City Univ アルツハイマー病の予防又は治療剤
EP1940881B1 (en) 2005-10-11 2016-11-30 Amgen Research (Munich) GmbH Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
CA2626783A1 (en) 2005-10-21 2007-05-03 Merck & Co., Inc. Anti-addl monoclonal antibody and use thereof
AU2006318537A1 (en) 2005-11-22 2007-05-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antibody treatment of Alzheimer's and related diseases
MX2008006957A (es) 2005-11-30 2008-10-20 Abbott Lab Metodos para la preparacion de formas recombinantes de proteina beta-amiloide humana y usos de estas proteinas.
CN101432302A (zh) 2005-11-30 2009-05-13 艾博特公司 抗－Aβ球聚体抗体，其抗原结合部分，相应的杂交瘤、核酸、载体、宿主细胞，生产所述抗体的方法，包含所述抗体的组合物，所述抗体的应用以及使用所述抗体的方法
CA2631195C (en) 2005-11-30 2016-04-05 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
PT1960428E (pt) 2005-12-12 2011-10-07 Hoffmann La Roche Anticorpos glicosilados na região variável contra beta-amilóide 4
PT2361638E (pt) 2005-12-12 2014-04-17 Ac Immune Sa Anticorpos monoclonais específicos beta 1-42 com propriedades terapêuticas
ES2385054T3 (es) 2005-12-13 2012-07-17 Medimmune Limited Proteínas de unión específicas para factores de crecimiento de tipo insulina y usos de las mismas
PT1981540E (pt) 2006-01-30 2013-05-07 Grifols Therapeutics Inc Método de tratamento e profilaxia de doenças relacionadas com a deposição de amilóides utilizando igm
EP2325209A3 (en) 2006-03-23 2011-08-03 BioArtic Neuroscience AB Improved protofibril selective antibodies and the use thereof
CN103539857A (zh) 2006-03-30 2014-01-29 葛兰素集团有限公司 针对β-淀粉样蛋白肽的抗体
KR101132293B1 (ko) 2006-04-21 2012-04-05 주식회사 피플바이오 삼차원적 상호작용을 이용하여 멀티머-형성 폴리펩타이드의모노머로부터 멀티머를 분별 검출하는 방법
US7427342B2 (en) 2006-06-02 2008-09-23 General Electric Company Method and apparatus for shifting current distribution in electrodeionization systems
WO2008002893A2 (en) 2006-06-29 2008-01-03 Centocor, Inc. Anti-amyloid antibodies, compositions, methods and uses
WO2008008463A2 (en) 2006-07-14 2008-01-17 Trustees Of Columbia University In The City Of New York METHODS AND COMPOSITIONS FOR DETECTING AND QUANTIFYING SAPPβ
EP2046833B9 (en) 2006-07-14 2014-02-19 AC Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
ATE426174T1 (de) 2006-07-28 2009-04-15 Vista Ventures Gmbh Verfahren zum nachweis der amyloid-beta oligomere in kírperflussigkeiten
WO2008070229A2 (en) 2006-08-28 2008-06-12 Case Western Reserve University Detection of pathogenic aggregates of protein in a sample by homologous elisa
WO2008030251A1 (en) 2006-09-08 2008-03-13 Georgetown University Deglycosylated anti-amyloid beta antibodies
BRPI0719763A2 (pt) 2006-10-02 2014-01-28 Ac Immune Sa Anticorpo, molécula de ácido nucleico, vetor de expressão, célula, composição, mistura, uso de um anticorpo quimérico ou um fragmento do mesmo ou um anticorpo humanizado ou um fragmento do mesmo e/ou uma parte funcional e/ou uma composição farmacêutica ou uma mistura, métodos para a preparação de uma composição farmacêutica ou de uma mistura, para prevenir, tratar ou aliviar os efeitos de uma doença, de diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente e de determinação do grau da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou fluidos corporais, kits de teste para a detecção e diagnóstico de doenças e condições associadas com amilóide, região variável de cadeia leve, região variável de cadeia pesada, linhagem de célula, gene de anticorpo, e, métodos para desagregar fibras de beta-amilóide pré formadas, para prevenir a degradação de neurônio induzida por abeta, para diagnosticar uma predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, para monitorar doença residual mínima em um paciente, para prognosticar a responsividade de um paciente que é tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, para reduzir a carga de placa no cérebro de um animal, para reduzir a quantidade de placas no cérebro de um animal, para diminuir a quantidade total de abeta solúvel no cérebro de um animal e para reter ou aumentar a capacidade de memória cognitiva em um mamífero.
WO2008045962A2 (en) 2006-10-10 2008-04-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials related to anti-a (beta) antibodies
KR101450356B1 (ko) * 2006-11-24 2014-10-15 에이씨 이뮨 에스.에이. 알츠하이머와 같은 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질과 관련된 질환의 치료를 위한 ｎ-(메틸)-1ｈ-피라졸-3-아민, ｎ-(메틸)-피리딘-2-아민 및 ｎ-(메틸)-티아졸-2-아민 유도체
JP2008135645A (ja) 2006-11-29 2008-06-12 Toshiba Corp 多層プリント配線板および多層プリント配線板の層間接合方法
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008143708A2 (en) 2006-12-07 2008-11-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials related to anti-amyloid antibodies
PE20081477A1 (es) 2006-12-11 2008-10-18 Hoffmann La Roche Formulacion liofilizada mab abeta
WO2008104385A1 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
EP2124952A2 (en) 2007-02-27 2009-12-02 Abbott GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
US20090022728A1 (en) 2007-03-09 2009-01-22 Rinat Neuroscience Corporation Methods of treating ophthalmic diseases
JP2007238096A (ja) 2007-05-09 2007-09-20 Bridgestone Corp ランフラットタイヤ
US20090232801A1 (en) 2007-05-30 2009-09-17 Abbot Laboratories Humanized Antibodies Which Bind To AB (1-42) Globulomer And Uses Thereof
US20090175847A1 (en) 2007-05-30 2009-07-09 Abbott Laboratories Humanized antibodies to ab (20-42) globulomer and uses thereof
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
KR20160017126A (ko) * 2007-06-12 2016-02-15 에이씨 이뮨 에스.에이. 모노클로널 항 베타 아밀로이드 항체
PE20090766A1 (es) 2007-06-12 2009-07-09 Ac Immune Sa Anticuerpo igg1 humanizado
CA2701793C (en) 2007-10-05 2017-04-25 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
SG178809A1 (en) 2007-10-05 2012-03-29 Genentech Inc Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
CN105169388A (zh) 2007-10-05 2015-12-23 基因技术公司 人源化抗体
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
TWI388334B (zh) 2007-12-11 2013-03-11 Glaxo Group Ltd 抗原結合蛋白質
SG187173A1 (en) 2010-07-30 2013-02-28 Ac Immune Sa Safe and functional humanized anti beta-amyloid antibody

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1420032A1 (en) * 2001-08-03 2004-05-19 Medical &amp; Biological Laboratories Co., Ltd. Antibody recognizing gm1 ganglioside-bound amyloid beta-protein and dna encoding the antibody

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Jin-Dong Ding et al.Targeting age-related macular degeneration with Alzheimer’s disease based immunotherapies: Anti-amyloid-β antibody attenuates pathologies in an age-related macular degeneration mouse model.《Vision Research》.2007,第48卷339-345. *
Li Guo et al.Targeting amyloid-β in glaucoma treatment.《PNAS》.2007,第104卷(第33期),13444-13449. *

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Publication number Publication date
AU2008311367B2 (en) 2014-11-13
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