CN101798358B - 从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 - Google Patents
从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101798358B CN101798358B CN2010101162344A CN201010116234A CN101798358B CN 101798358 B CN101798358 B CN 101798358B CN 2010101162344 A CN2010101162344 A CN 2010101162344A CN 201010116234 A CN201010116234 A CN 201010116234A CN 101798358 B CN101798358 B CN 101798358B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glucan
- beta
- sodium phosphate
- separating
- black fungus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。采用沸水浸提黑木耳中的多糖；用醇沉法初步纯化；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化黑木耳多糖精提物中的β-葡聚糖，其溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成。用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠使用量比为1∶3～3∶1；用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析后，得到β-葡聚糖水溶液，冷冻干燥获其粉末。本发明的方案成本较低、分离效率较高，分离所得β-葡聚糖纯度在86％以上。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，涉及黑木耳深加工技术，特别是从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。
技术背景
黑木耳具有清肺、益气补血等功效。现代医学证明黑木耳中的多糖具有增强人体免疫力，防癌抗癌和防止血栓的形成等功能。β-葡聚糖是多糖中的一种，其活性结构是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数通过β-1，3结合，这是葡萄糖链连接的方式。它能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系统。因此β-葡聚糖具有重要的应用价值。采用高速逆流色谱方法从黑木耳中分离制备β-葡聚糖高分子未见文献报道。
现有的关于β-葡聚糖的分离纯化方法主要是采用凝胶色谱，其局限性是分离成本高，分离速度慢。其次，凝胶色谱回收率低，再生使用相对困难，难以发展成为制备量大的分离技术。
发明内容
本发明的目的是提供一种成本较低、效率高的从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：采用热水(100℃)浸提黑木耳中的多糖成分；用醇沉的方法对浸提得到提取物进行初步纯化，得到黑木耳多糖粗提物；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化黑木耳多糖粗提物中的β-葡聚糖，其溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成。先将聚乙二醇1000的溶液达到饱和，再通过添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的用量重量比为1∶3～3∶1。上相做固定相，下相做流动相。用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液，冷冻干燥即得β-葡聚糖粉末。操作步骤如下：
(1)采用沸水浸提黑木耳干粉中的多糖，得到黑木耳多糖提取液；
(2)将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％；
(3)在上述浓缩液中加入5-10倍体积的无水乙醇，得到醇沉多糖，将其真空浓缩干燥，得到固体黑木耳多糖提物；
(4)采用逆流色谱方法分离纯化黑木耳多糖提取物；
(5)收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液；
(6)将β-葡聚糖水溶液真空浓缩至固形物质量分数达到60％以上，再采用冷冻干燥，得到纯化的β-葡聚糖粉末。
步骤(1)所述的浸提过程是：采用沸水浸提溶剂与黑木耳干粉的液料体积比为5～10∶1，条件为温度100℃，浸提时间2小时，浸提次数2～3次。
步骤(2)和步骤(3)所述真空浓缩的真空度低于0.09Mpa，温度为50～60℃。
步骤(4)所述逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成；先用水溶解聚乙二醇1000，使溶液达到饱和，再添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的使用重量比为1∶3～3∶1；上相做固定相，下相做流动相；用泵将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶剂系统的部分上相溶解固体黑木耳多糖提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；部分收集器收集流出组分，用薄层层析的方法检测各组分，并收集β-葡聚糖组分。
步骤(4)所述逆流色谱方法所用的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪HSCCC。
步骤(6)所述冷冻干燥的真空度低于50Pa，温度低于-35℃。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
图2为实施例1的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。
图3为实施例2的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。
图4为实施例3的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。
具体实施方式
实施例1
10kg黑木耳粉末，加80kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤；滤渣再加80kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤。合并两次滤液，得到黑木耳多糖提取液。将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％，加8倍体积无水乙醇沉淀多糖，过滤，沉淀物经真空干燥，得到固体黑木耳多糖提物。此木耳多糖提物含β-葡聚糖约6.9％，直接用于逆流色谱分离。
本实施例的溶剂系统采用在35℃下的聚乙二醇1000饱和溶液，磷酸氢二钠∶磷酸二氢钠＝1∶1，每1000毫升饱和液含盐量80克；逆流色谱仪为HSCCC-D800高速逆流色谱仪，黑木耳粗多糖中β-葡聚糖约占6.9％。
量取蒸馏水2000ml，加入聚乙二醇1000 265g，充分溶解后已经达到饱和，分别加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠240g，置于5000ml分液漏斗，充分摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速注入高速逆流色谱的色谱柱。称取黑木耳多糖粗提物2.0g溶于50ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至800rpm，然后以1.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以1.5ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用收集器收集洗脱组分，应用薄层色谱法检测黑木耳多糖组分。收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液。β-葡聚糖水溶液50℃减压浓缩至浆状(固形物含量约50％)，冷冻干燥得到黑木耳β-葡聚糖粉末93.2mg，纯度为90％以上。
实施例2
10kg黑木耳粉末，加50kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤；滤渣再加80kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤。合并两次滤液，得到黑木耳多糖提取液。将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％，加5倍体积无水乙醇沉淀多糖，过滤，沉淀物经真空干燥，得到黑木耳多糖提物。此木耳多糖提物含β-葡聚糖约6.9％，直接用于逆流色谱分离。
本实施例的溶剂系统采用在30℃下的聚乙二醇1000饱和溶液，磷酸氢二钠∶磷酸二氢钠＝3∶1，每1000毫升饱和液含盐量80克；逆流色谱仪为HSCCC-D800高速逆流色谱仪，黑木耳粗多糖中β-葡聚糖约占6.9％。
量取蒸馏水3000ml，加入聚乙二醇1000 375g，充分溶解后已经达到饱和，分别加入磷酸氢二钠180g，磷酸二氢钠60g，置于5000ml分液漏斗，充分摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以15ml/min的流速注入高速逆流色谱的色谱柱。称取黑木耳多糖粗提物2.5g溶于50ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至800rpm，然后以1.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以1.5ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用收集器收集洗脱组分，应用薄层色谱法检测黑木耳多糖组分。收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液。β-葡聚糖水溶液50℃减压浓缩至浆状(固形物含量约50％)，冷冻干燥得到黑木耳β-葡聚糖粉末110.7mg，纯度为86％。
实施例3
10kg黑木耳粉末，加100kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤；滤渣再加80kg水，煮至沸腾，并保持100℃2小时，压滤。合并两次滤液，得到黑木耳多糖提取液。将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％，加10倍体积无水乙醇沉淀多糖，过滤，沉淀物经真空干燥，得到黑木耳多糖提物。此木耳多糖提物含β-葡聚糖约6.9％，直接用于逆流色谱分离。
本实施例的溶剂系统采用在25℃下的聚乙二醇1000饱和溶液，磷酸氢二钠∶磷酸二氢钠＝1∶3，每1000毫升饱和液含盐量80克；逆流色谱仪为HSCCC-D800高速逆流色谱仪，黑木耳粗多糖中β-葡聚糖约占6.9％。
量取蒸馏水10L，加入聚乙二醇1000 1.2Kg，充分溶解后已经达到饱和，分别加入磷酸氢二钠200g，磷酸二氢钠600g，充分摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速注入高速逆流色谱的色谱柱。称取黑木耳多糖粗提物3.0g溶于60ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至800rpm，然后以1.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以1.5ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用收集器收集洗脱组分，应用薄层色谱法检测黑木耳多糖组分。收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液。β-葡聚糖水溶液50℃减压浓缩至浆状(固形物含量约50％)，冷冻干燥得到黑木耳β-葡聚糖粉末116.7mg，纯度为88％。
黑木耳中的β-葡聚糖具有抗肿瘤、提高人体免疫力等生物活性，本发明的方案提供了产品纯度高、成本较低、效率高的从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。解决了现有技术分离成本高，分离速度慢的问题，可以发展成大量制备的工业化生产技术。
Claims (6)
1.从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于以下步骤：
(1)采用沸水浸提黑木耳干粉中的多糖，得到黑木耳多糖提取液；
(2)将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％；
(3)在上述浓缩液中加入5-10倍体积的无水乙醇，得到醇沉多糖，将其真空浓缩干燥，得到固体黑木耳多糖提物；
(4)采用逆流色谱方法分离纯化黑木耳多糖提取物；
溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成；先用水溶解聚乙二醇1000，使溶液达到饱和，再添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的使用重量比为1∶3～3∶1；上相做固定相，下相做流动相；
(5)收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液；
(6)将β-葡聚糖水溶液真空浓缩至固形物质量分数达到60％以上，再采用冷冻干燥，得到纯化的β-葡聚糖粉末。
2.根据权利要求1所述从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于步骤(1)所述的浸提过程是：采用沸水浸提溶剂与黑木耳干粉的液料体积比为5～10∶1，条件为温度100℃，浸提时间2小时，浸提次数2～3次。
3.根据权利要求1所述从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于：步骤(2)和步骤(3)所述真空浓缩的真空度低于0.09Mpa，温度为50～60℃。
4.根据权利要求1所述从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于步骤(4)所述逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，用泵将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶剂系统的部分上相溶解固体黑木耳多糖提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；部分收集器收集流出组分，用薄层层析的方法检测各组分，并收集β-葡聚糖组分。
5.根据权利要求1所述从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于：步骤(4)所述逆流色谱方法所用的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪HSCCC。
6.根据权利要求1所述从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法，其特征在于：步骤(6)所述冷冻干燥的真空度低于50Pa，温度低于-35℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101162344A CN101798358B (zh) | 2010-03-02 | 2010-03-02 | 从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101162344A CN101798358B (zh) | 2010-03-02 | 2010-03-02 | 从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101798358A CN101798358A (zh) | 2010-08-11 |
| CN101798358B true CN101798358B (zh) | 2011-11-16 |
Family
ID=42594215
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101162344A Expired - Fee Related CN101798358B (zh) | 2010-03-02 | 2010-03-02 | 从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101798358B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102827302B (zh) * | 2012-09-07 | 2014-12-10 | 龙海市颖欣农业科技有限公司 | 一种木耳多糖的制备方法 |
| CN104387493B (zh) * | 2014-12-05 | 2016-04-27 | 江苏师范大学 | 一种采用逆流色谱技术一步纯化大蒜多糖的方法 |
| CN113214328B (zh) * | 2021-05-08 | 2022-06-28 | 宁波经济技术开发区弘翔生化科技有限公司 | 一种双水相体系以及基于双水相体系的单糖分离方法 |
| CN113549162A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-10-26 | 上海应用技术大学 | 一种柘木精制多糖的制备方法 |
| CN115363100B (zh) * | 2022-09-15 | 2023-08-04 | 草根知本集团有限公司 | 一种富含β-葡聚糖的植物蛋白饮料及其制备方法 |
| CN115413712B (zh) * | 2022-09-15 | 2023-08-04 | 草根知本集团有限公司 | 一种燕麦奶及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101235097A (zh) * | 2008-02-29 | 2008-08-06 | 武汉大学 | 一种从当归中提取多糖的方法及应用 |
| CN101514234A (zh) * | 2009-03-09 | 2009-08-26 | 王振宇 | 一种黑木耳多糖提取方法 |
-
2010
- 2010-03-02 CN CN2010101162344A patent/CN101798358B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101235097A (zh) * | 2008-02-29 | 2008-08-06 | 武汉大学 | 一种从当归中提取多糖的方法及应用 |
| CN101514234A (zh) * | 2009-03-09 | 2009-08-26 | 王振宇 | 一种黑木耳多糖提取方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101798358A (zh) | 2010-08-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101798358B (zh) | 从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法 | |
| CN102070690B (zh) | 一种同时制备腺苷、虫草素、n6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法 | |
| CN102846784B (zh) | 鸡矢藤水提取物、其制备方法和用途 | |
| CN105154478A (zh) | 一种高速逆流色谱和高效液相色谱联用制备高纯度羟基酪醇的方法 | |
| CN100528891C (zh) | 从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷的方法 | |
| CN104592323B (zh) | 一种双水相萃取苹果渣中根皮苷的方法 | |
| CN100439384C (zh) | 从桑椹中分离制备花色苷单体的方法 | |
| CN103044503A (zh) | 一种快速高效提取芍药苷和芍药内酯苷的方法 | |
| CN100439385C (zh) | 从杨梅中分离制备矢车菊色素-3-葡萄糖苷的方法 | |
| CN103130876A (zh) | 一种高纯度多粘菌素b的制备方法 | |
| CN103467618B (zh) | 一种虫草菌丝体多糖分离纯化的方法 | |
| CN100528892C (zh) | 从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷的方法 | |
| CN101337995A (zh) | 从大枣中提取低聚糖的方法 | |
| CN110051705A (zh) | 高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法 | |
| CN102040500B (zh) | 一种黄腐酚和黄酮类化合物的萃取分离方法 | |
| CN105055540B (zh) | 大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺 | |
| CN102532077B (zh) | 一种快速制备色谱分离制备丹酚酸b的方法 | |
| CN102234298A (zh) | 由桃仁中提纯苦杏仁苷的方法 | |
| CN101973990B (zh) | 一种应用pH-区带精制逆流色谱分离去氢紫堇碱的方法 | |
| CN102649824B (zh) | 应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法 | |
| CN103319546B (zh) | 一种从地黄中分离水苏糖的方法 | |
| CN104817569A (zh) | 一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法 | |
| CN105085588A (zh) | 一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法 | |
| CN102558257B (zh) | 新穿心莲内酯的分离纯化方法 | |
| CN102659583A (zh) | 从麻疯树种子中提取分离纯化佛波酯的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20111116 Termination date: 20120302 |